專利名稱：一種抗癌藥物新制劑——紫杉醇微乳的制作方法
紫杉醇(paclitaxel，商品名taxol)是Wani等最早從短葉紅豆杉(Taxus bravifolia Nutt.)的樹皮中提取的一種二萜類化合物，具有穩定微管并促進其聚合和組裝的獨特作用，成為對實體瘤和白血病單用或聯合用藥時顯示良好前景的新抗癌藥。由于紫杉醇不溶于水，現行的注射制劑采用聚氧乙基蓖麻油和無水乙醇(50∶50)作為助溶載體，前者易導致組織胺釋放，引起嚴重的過敏反應。本發明涉及的紫杉醇o/w微乳，具有良好的水化性，粒徑小于100nm，是一種控釋緩釋劑型，對腫瘤組織具有靶向作用。不僅靜脈注射具有更好的生物利用度，并且口服用藥的生物利用度也有所提高。
微乳的組成中因含有兩親性聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺的交聯物(PEG-DSPE)，經高壓勻質器器處理，使得微乳粒徑≤100nm。小于100nm的粒子不易被網狀內皮系統(RES)捕獲。另外，微乳中的PEG-DSPE可以在微乳表面形成位阻層，阻止血漿蛋白的吸附，因而影響了網狀內皮系統對微乳的識別和結合，逃避網狀內皮系統對其捕獲和吞噬，延長血循環時間，有利于靶向到癌組織，增強抗癌活性。實施例2形態觀察、粒徑及其分布測定取樣品溶液經超速冷凍離心分離后，取沉淀物，加蒸餾水少量使分散，滴于鍍膜后的電鏡抽樣銅網上，自然干燥后，放入電鏡中，觀察形態并拍照。
取制備的微乳樣品適量，稀釋至主藥濃度為0.5mg·ml-1，用粒徑測定儀經亂反射測定微乳粒徑及分布。
電鏡下觀察紫杉醇微乳呈均勻規則的球形粒子。
實驗測得的紫杉醇微乳粒徑分布均勻，平均直徑為(80±14)nm，在50～100nm范圍內的微乳占總數93.55％以上。依據乳劑分散相液滴的大小，該乳劑屬于微乳。粒徑小于100nm的乳劑有較好的穩定性和生物利用度。
按Bliss法軟件程序計算紫杉醇微乳LD50和95％可信限為706.6mg(含藥33.21mg)·kg-1·d-1(紫杉醇27.21～39.21mg·kg-1·d-1)。在泰素注射液臨床前的紫杉醇急性毒性實驗中，CD2F1小鼠的LD50為82mg·m-1·d-1，按實驗動物體表面積換算體重，其LD50為24.6mg·kg-1·d-1。實驗表明，紫杉醇微乳比泰素配方的急性毒性降低了10％～60％。微乳中含有的聚乙二醇修飾的二硬酯酰磷脂酰乙醇胺，不但使得微乳能部份逃避網狀內皮系統的捕獲和吞噬，同時在某些組織如心臟組織攝取量顯著低于游離型藥物，從而減低了對心臟的毒性作用。
給藥及采樣 取日本大耳白兔15只，♀，體重(4.5±0.25)kg，隨機分為3組靜注組、口服組和以泰素為參比標準的對照組，每組5只，按4mg·kg-1劑量單次耳緣靜脈和口服給藥。分別于給藥后不同時間白兔另一耳緣靜脈取血1ml，于2000～3000r·min-1離心10min，分離血漿。取血漿300μl，以地西泮為內標，用叔丁基甲醚兩步提取，常溫下氮氣吹干，殘渣用移動相溶解，進樣20μl。
標準曲線制作 精密稱取紫杉醇標準品，用空白血漿分別制作濃度為0.03，0.10，0.50，1.00，2.00，3.00，5.00mg·L-1的標準系列，其操作同血漿標本處理方法。以紫杉醇濃度c為橫坐標，紫杉醇峰高與內標峰高之比為縱坐標繪制標準曲線。
本分析方法和標準曲線在16.4～3500ng·ml-1血漿濃度范圍內呈良好的線性關系，最低檢測濃度為10mg·ml-1，回收率88.1％～91.8％。
數據處理方法 血藥濃度數據用中國藥理學會數學藥理委員會編制的3P87藥動學程序進行處理。藥-時曲線下面積(AUC0～∞)由梯形法求得的AUC0～tz和ctz/λ(AUCtz～∞)這和求得，并經對數轉換后進行方差分析。
本實驗采用兔以泰素靜脈注射制劑為參比標準，測得靜注和口服紫杉醇微乳的絕對生物利用度分別為(107±2)％和22.4％，但口服吸收機制尚不清楚，有待進一步進行藥代動力學的研究。紫杉醇屬一種水不溶性藥物，單純口服其生物利用度幾近于零。微乳作為藥物載體，兔口服生物利用度達到22.4％。
權利要求
1 一種抗癌藥物新制劑—紫杉醇微乳，其特點為采用兩親性聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)作為表面活性劑和以蛋黃磷脂酰膽堿(EPC)作為乳化劑，制成O/W微乳劑型。
2 根據權利要求1，該種微乳的粒徑小于100nm。
3 根據權利要求2，采用超聲和高壓勻質器處理，使紫杉醇微乳的粒徑達到100nm以下。
4 根據權利要求1，紫杉醇微乳可以作為靜脈注射制劑，也可以口服。
全文摘要
本發明提供一種抗癌藥物的新制劑紫杉醇微乳的制備方法及其穩定性和靜注、口服生物利用度的測定。蛋黃磷脂(EPC)，紫杉醇和PEG－DSPE的氯仿溶液在氮氣流下減壓成膜，加入經水化超聲處理的玉米油，進一步超聲處理后，通過高壓勻質器使其微乳化。所得微乳粒徑50～100nm，包封率≥99.2％，免絕對生物利用度靜注107.7％，口服22.4％。
文檔編號A61P35/00GK1416810SQ0215367
公開日2003年5月14日 申請日期2002年12月5日 優先權日2002年12月5日
發明者閻家麒 申請人:閻家麒