一種雞脾臟水解液、其制備方法及應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于生物技術領域，具體設及一種通過酶法水解得到的雞脾臟水解液、其 制備方法及應用。 技術背景
[0002] 中國是家禽養殖大國，2014年禽肉產量達1751萬噸（中國統計局）。雞脾臟是雞的 免疫器官，約占雞體重的0.2%，每年產量達3.5萬噸。雞脾臟一般與雞腸道、膜腺等共同作為 下腳料低價處理。傳統制法是將雞脾臟下腳料加熱加壓處理，制成動物源性飼料，飼喂動 物，補充粗蛋白和微量元素。但是，傳統制法獲得的飼料產品功能單一、附加值低，不利于雞 脾臟的開發利用。
[0003] 早在20世紀50年代，國外研究發現，動物脾臟含有大量的免疫活性物質，具有免疫 增效作用，因此，W牛脾臟、豬脾臟為原料，通過反復凍融、低溫透析或超濾工藝，人們獲得 了具有免疫增效活性的轉移因子溶液，作為生物制品應用于人醫領域。獸醫領域也開展了 相關研究，主要是利用動物脾臟制備轉移因子，生產周期一般為5天，生產周期長，目前，W 豬脾臟為原料制備的轉移因子口服溶液已獲得新獸藥注冊并上市銷售，實現了豬脾臟的 "二次"開發。然而，對于雞脾臟的開發利用，將雞脾臟水解成小分子蛋白，制備成雞脾臟水 解液飼料，并對其功能進行研究，國內還未見有報道。

【發明內容】

[0004] 針對現有技術存在的問題，本發明的目的是提供一種通過酶法制備雞脾臟水解 液，解決了傳統方法附加值低、功能單一，制作周期長、步驟繁瑣、成本高等問題。
[0005] 本發明還提供了所述雞脾臟水解液的制備方法。
[0006] 本發明還提供了所述雞脾臟水解液在動物飼養中的應用。
[0007] 本發明為了實現上述目的所采用的技術方案為： 本發明提供了一種雞脾臟水解液的制備方法，包括W下步驟： (1) 將去除外表脂肪、表皮及皮下筋膜的雞脾臟，用純化水清洗干凈，按照重量比1:1 比例加入生理鹽水，然后加入占雞脾臟重量0.12%的古爾膠和明膠，倒入膠體磨，剪切研磨， 得勻漿液； (2) 取勻漿液至反應器中，按體積比1:1加入純化水混合均勻，得混合液，每16ml勻漿液 中加入3000-6000U蛋白酶，水解，得水解液； (3) 將水解液離屯、，上清液過IOKDa中空纖維超濾柱除去蛋白酶，得提取液，加入山梨酸 鐘，即得雞脾臟水解液。
[000引進一步的，步驟(1)中，所述古爾膠和明膠的質量比為1:3。
[0009] 進一步的，步驟(1)中，所述剪切研磨的條件為:轉速為3900r/min，研磨時間為30-60s。
[0010] 進一步的，本發明所使用的蛋白酶為復合蛋白酶、木瓜蛋白酶中的一種或兩種。
[0011] 上述制備方法中，所述蛋白酶為復合蛋白酶時，調節混合液的PH值為6.8-7.0，水 解時間為3.化;所述蛋白酶為木瓜蛋白酶時，調節混合液的PH值為6.0-6.2，水解時間為4h; 所述蛋白酶為復合蛋白酶及木瓜蛋白酶兩種時，混合液中先加入木瓜蛋白酶，調節pH值為 6.0，水解1小時，再加入復合蛋白酶，調節pH值為6.6，繼續水解2小時，收集水解液;所述水 解的溫度均在47.5-52.5°C ;本發明所述PH值的調節采用PH值為3.2-4.0巧樣酸-巧樣酸鋼 緩沖液或PH值為9.0-9.4甘氨酸-氨氧化鋼緩沖液。
[0012] 進一步的，所述蛋白酶為兩種時，所述木瓜蛋白酶同復合蛋白酶的質量比為2:1。
[0013] 進一步的，步驟（3)中，所述離屯、的條件為：在3000-400化/min的轉速下離屯、5-10min〇
[0014] 進一步的，步驟(3)中，所述山梨酸鐘的加入量占提取液質量的0.01-0.02%。
[0015] 根據上述制備方法制備的雞脾臟水解液也在本發明的保護范圍之內。
[0016] 本發明還提供了一種利用上述制備方法制備的雞脾臟水解液在動物飼養中的應 用。
[0017] 本發明利用復合蛋白酶、木瓜蛋白酶對雞脾臟進行水解，獲得產品的主要成分是 小分子多膚、游離氨基酸、核酸、微量元素等，與傳統飼料相比，蛋白的消化吸收率顯著提 高，而且具有提高細胞免疫和體液免疫的功能，附加值高；與雞脾臟轉移因子相比，蛋白含 量高20倍、生產周期縮短60%W上、制作工藝簡單、成本低;本發明通過加入適量的古爾膠及 明膠，能夠通過底物競爭，使水解機制向著有利于生成無苦味產物方向轉變，同時起到一定 的掩蓋作用，制備的產物無苦味，蛋白含量為2.5%-5%。
[001引本發明的有益效果為： (1)本發明使用膠體磨進行細胞破碎，可W將95%的細胞破碎，細胞內容物充分釋放，提 高了蛋白水解效率，比常規方法的單位時間水解度提高20-30%; (2 )本發明采用木瓜蛋白酶或雙酶水解法，水解度高達60%-75%，氮回收率達90% W上， 聯合添加適量的古爾膠及明膠，獲得的蛋白水解液無苦味，分散性好，適合動物口服使用； (3)本發明采用了超濾方法去除蛋白酶，與傳統加熱方法相比，保護了小分子蛋白的免 疫活性;生產周期短，僅需1-2天即可完成一批次生產。
【具體實施方式】
[0019] 為了更好的理解本發明，下面結合具體實施例來進一步說明。
[0020] 本發明所使用的復合蛋白酶(20萬U/g)及木瓜蛋白酶（10萬U/g)均購自山東西唐 生物科技有限公司。本發明制備過程中，PH值的調節采用PH值為3.2-4.0巧樣酸-巧樣酸鋼 緩沖液或PH值為9.0-9.4甘氨酸-氨氧化鋼緩沖液。
[0021] 實施例1 一種雞脾臟水解液的制備方法，包括W下步驟： (1) 將去除外表脂肪、表皮及皮下筋膜的雞脾臟，用純化水清洗干凈，按照重量比1:1 比例加入生理鹽水，然后加入占雞脾臟重量0.12%的古爾膠和明膠(古爾膠和明膠的質量比 為1:3)，倒入膠體磨，W3900r/min剪切研磨30s，得勻漿液； (2) 取勻漿液至反應器中，按體積比1:1加入純化水混合均勻，得混合液，按每16ml勻漿 液中加入4000U復合蛋白酶，調節混合液的PH值至6.2，在50°C下水解3.5小時，得水解液； (3)將水解液在3000r/min條件下離屯、10分鐘，上清液過IOKDa中空纖維超濾柱除去復 合蛋白酶，得提取液，加入占提取液重量0.01%的山梨酸鐘，即得雞脾臟水解液。
[0022] 實施例2 一種雞脾臟水解液的制備方法，包括W下步驟： (1) 將去除外表脂肪、表皮及皮下筋膜的雞脾臟，用純化水清洗干凈，按照重量比1:1 比例加入生理鹽水，然后加入占雞脾臟重量0.12%的古爾膠和明膠(古爾膠和明膠的質量比 為1:3)，倒入膠體磨，W3900r/min剪切研磨30s，得勻漿液； (2) 取勻漿液至反應器中，按1:1加入純化水混合均勻，得混合液，按每16ml勻漿液中加 入3000U的木瓜蛋白酶，調節混合液的pH值為6.2，50°C水解4小時，收集水解液； (3) 將水解液在4000r/min條件下離屯、5分鐘，上清液過IOKDa中空纖維超濾柱除去木瓜 蛋白酶，得提取液，加入占提取液重量0.01 %的山梨酸鐘，即得雞脾臟水解液。
[0023] 實施例3 一種雞脾臟水解液的制備方法，包括W下步驟： (1) 將去除外表脂肪、表皮及皮下筋膜的雞脾臟，用純化水清洗干凈，按照重量比1:1 比例加入生理鹽水，然后加入占雞脾臟重量0.12%的古爾膠和明膠(古爾膠和明膠的質量比 為1:3)，倒入膠體磨，W3900r/min剪切研磨30s，得勻漿液； (2) 取勻漿液至反應器中，按1:1加入純化水混合均勻，得混合液，按每16ml勻漿液中加 入木瓜蛋白酶4000U、復合蛋白酶2000U的比例，先加入木瓜蛋白酶，調節混合液pH值為6.0， 50°C水解1小時，再加入復合蛋白酶，調節混合液的pH值為6.6,繼續水解2小時，收集水解 液； (3) 將水解