專利名稱：一種可用于人體補鐵的鐵蛋白及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種可用于人體補鐵的鐵蛋白及其制備方法和應用。
人體容易缺鐵，目前醫藥上用無機鐵補充人體，以減少因缺鐵而引起貧血癥，但效果很差，因無機鐵不易吸收，且口感不好，易引起惡心和降低食欲，國際上都正在以鐵蛋白補鐵為研究方向，鐵蛋白是植物中廣泛存在的一種蛋白質，在它的每個分子中含有4個鐵原子，其分子量是12000，鐵在這一蛋白中稱非血晶質的鐵。
本發明目的是提供一種可用于人體補鐵的鐵蛋白及其制備方法和應用，該方法獲得的鐵蛋白表達量高，含鐵量多。
為達到上述目的，本發明采用以下技術方案這種可用于人體補鐵的鐵蛋白包括蛋白質和鐵，其中含鐵2-5％，其余為蛋白質。
一種可用于人體補鐵的鐵蛋白的制備方法，其特征包括以下幾個步驟①工程菌高密度培養；②鐵蛋白的制備。
實施例1.
1.工程菌高密度培養含鐵蛋白基因的工程菌為大腸桿菌BL21(DE3)，載有鐵蛋白基因的載體為pSE280。大腸桿菌工程菌通過三級培養，一級和二級在200轉/分搖床上，在37℃下用三角形在LB培養基上培養，各培養6-8小時，依1％的接種量三級上罐培養，發酵罐為20升，罐培養時用高密度培養基，37℃培養，約培養5小時后OD600值為13-15時，用IPTG(異丙基硫代半乳糖苷)誘導，每升加入0.5mol/L IPTG溶液0.5毫升。誘導3-4小時后放罐。最終菌液OD600值約為18。檸檬酸鐵銨開始加入0.1克/升，當用IPTG化學誘導表達后，依菌體重逐漸增加投入量至不影響菌體生長的最大量。最終加至每升菌液為0.35克。獲得濕菌體量為60-70克/升。
所用的高密度培養基配方為硫酸銨5.0克/升，磷酸氫二鉀6.0克/升，磷酸二氫鉀3.0克/升，硫酸鎂1.5克/升，胰蛋白胨10-20克/升，酵母提取物2-10克/升，葡萄糖80-100克/升，微量元素(銅、鈷、鈣、鋅、鉬、錳)各10-5-10-4克分子/升。
2.產品制備罐中培養后用連續離心機12000轉/分離心收集菌體，濕菌體如不馬上處理可放在-20℃下保存。
濕菌體用5倍蒸餾水懸浮，在1000Psi壓力下破碎細胞(或用超聲波破碎儀破碎)，在10000轉/分下離心15分鐘，上清液用5倍體積的分析純乙醇沉淀蛋白，測定物在40℃減壓干燥，產品再研磨成粉，即得鐵蛋白制品。此種鐵蛋白制品的含鐵量約為2-5％。
3.產品的急性毒性實驗、藥效實驗和含鐵量測定如下，并可詳見附件1、2、3。
1、產品的急性毒性實驗使蛋白粉劑小鼠灌胃給藥的最大耐受量為8000mg/kg，在連續7天觀察中動物一般狀況良好，行為等未見異常，無死亡動物，且體重增長。
2、藥效實驗經口灌服160mg/kg和80mg/kg，鐵蛋白對氛鐵貧血大鼠具有明顯抑制貧血形成的作用。
3、含鐵量測定Fe含量為5.23％。
本發明優點1.本方法獲得的產品含鐵量高，約2-5％，副件實驗證明可用于人體補鐵，用于治療因缺鐵引起的血色素缺乏癥；2.用高密度培養基可增加濕菌體生產量和產物生產量；3.產品可用于正常人體的鐵的補充，也可用于缺鐵病人補鐵。
權利要求
1.一種可用于人體補鐵的鐵蛋白，其特征在于它包括蛋白質和鐵，其中含鐵2-5％，其余為蛋白質。
2.一種可用于人體補鐵的鐵蛋白的制備方法，其特征包括以下幾個步驟①工程菌的高密度培養；②鐵蛋白的制備方法。
3.按權利要求2所述的鐵蛋白制備方法，其特征在于①所用的高密度培養基配方為硫酸銨5.0克/升，磷酸氫二鉀6.0克/升，磷酸二氫鉀3.0克/升，硫酸鎂1.5克/升，胰蛋白胨10-20克/升，酵母提取物2-10克/升，葡萄糖80-100克/升，微量元素(銅、鈷、鈣、鋅、鉬、錳)各10-5-10-4克分子/升。
4.一種含有權利要求1所述的可用于人體補鐵的鐵蛋白的制劑，其特征在于它含有鐵蛋白。
全文摘要
一種可用于人體補鐵的鐵蛋白及其制備方法和應用方法包括:工程菌的高密度培養;鐵蛋白的制備二大步驟,所述的高密度培養采用培養基為碳酸銨5.0克/升,磷酸氫二鉀6.0克/升,磷酸二氫鉀3.0克/升,硫酸鎂1.5克/升,胰蛋白胨10—20克/升,酵母提取物2—10克/升,葡萄糖80—100克/升,微量元素(銅、鈷、鈣、鋅、鉬、錳)各10
文檔編號C12P21/00GK1257931SQ98125609
公開日2000年6月28日 申請日期1998年12月18日 優先權日1998年12月18日
發明者吳光耀, 趙進東, 劉迎芳, 王春霞 申請人:吳光耀