專利名稱:生物除臭劑及其制備方法
本發明是關于生物除臭劑及其制備方法，更具體的說，是關于含有某種乳桿菌屬菌種和糞鏈球菌的混合物的一種除臭劑。
使用各種微生物以去除分解物及其類似物的臭味，或者降低或去除由分解物或其類似物所產生的討厭氣味，這都是已知的。某些細菌性的已用于體內，而某些細菌則以分散體形式用于環境。例如，日本書7297/83和英國專利1584693認為以分散體用于環境的細菌是有除臭功能的。此外，在體內有除臭功能的微生物已由有關發明者進行了研究。(例如，參閱美國專利№4345032，英國專利№.1584694等)。
在這些除臭劑中，提及選用于體內的微生物有除臭乳桿菌(Lactobacillus dedorans)，清除乳桿菌(Lactobacillus clearans)，硫酸乳桿菌(Lactobacillus sulfurica)，亞硝酸乳桿菌(Lactobacillus nitrous)，等等。
可是，這些除臭劑微生物是有缺點的，當給與人和動物使用時，所得的除臭效果往往是不一樣的，甚至當給與同樣菌種，同樣劑量時，也會因個人、或動物品種和給藥條件的不同而不同。因此要求進一步改進、以使得在將這些微生物給與人和動物時，可以不考慮個人或動物的類別，而能得到確切的和固定的效果。
在這種情況下，進行了各種研究以提高除臭乳桿菌，清除乳桿菌、硫酸乳桿菌和亞硝酸乳桿菌的除臭效果，并克服上述缺點，而本發明在這方面已經完成。
發明的概要因而，本發明的一個目的是提供一種新的生物除臭劑及其制備方法。
本發明的另一個目的是提供一種用于人和動物，不用考慮個人和動物的類別以及給藥條件而具有固定除臭作用的新的生物除臭劑及其制備方法。
本發明還有一個目的是提供一種給與人和動物使用的，不用考慮個人和動物類別以及給藥條件而具有優良和持久除臭效果的生物除臭劑及其制備方法。
本發明的再一個目的是提供給與人和動物使用的一種生物除臭劑，不用考慮個人和動物類別以及給藥條件，在給藥不久就顯示除臭效果并且在中止給藥后長時間內持續有效，以及該除臭劑的制備方法。
在認真研究以后，現在發現，將上述微生物與另外某種微生物結合使用，可以達到上述目的，比改善微生物本身更好。
將(a)至少有一種選自全部屬于除臭的乳酸桿菌的除臭乳桿菌、清除乳桿菌、和硫酸乳桿菌與亞硝酸乳桿菌的混合培養物的乳桿菌菌種，與(b)具有產生抗菌能力的糞鏈球菌相結合而使用，能達到本發明上述的目的。
因而，本發明提供一種生物除臭劑，該劑包括(a)至少選自除臭乳桿菌、清除乳桿菌、和硫酸乳桿菌與亞硝酸乳桿菌的混合菌種中的一種與(a)具有產生抗菌能力的糞鏈球菌。
本發明提供一種制備生物除臭劑的方法，方法是將(a)至少選自除臭乳桿菌、清除乳桿菌和硫酸乳桿菌與亞硝酸乳桿菌的混合菌種中的一種菌種和(b)具有產生抗菌能力的糞鏈球菌進行混合。
本發明還提供一種生物除臭劑，該劑是由(a)至少選自除臭乳桿菌、清除乳桿菌和硫酸乳桿菌與亞硝酸乳桿菌的混合菌種中的一種菌種，(b)具有產生抗菌能力的糞鏈球菌和還有(c)一種雙歧桿菌菌種和/或一種芽胞桿菌菌種所組成的一種復合物。
本發明提供一種制備生物除臭劑的方法，該法是將(a)至少選自除臭乳桿菌、清除乳桿菌和硫酸乳桿菌與亞硝酸乳桿菌的混合菌種中的一種菌種，(b)具有產生抗菌能力的糞鏈球菌和(c)一種雙歧桿菌菌種和/或一種芽胞桿菌菌種進行混和。
發明的詳述在本發明中所使用的除臭乳桿菌的特性和其分離方法都描述于日本書49193/82中，除臭乳桿菌具有以下的性質(1)a)含硫原的臭味化合物(如Na2S·9H2O)和含氮原子的有臭味化合物(如NH2)是使除臭乳桿菌生長的主要物質。例如，甚至當除臭乳桿菌在單獨的Stephanson-Whetham(S-W)培養基中不能生長時，在有含硫原子的有臭味化合物和/或含氮原子的有臭味化合物存在時，就變成能夠生長。
b)如果除臭乳桿菌在按本發明所使用的培養基中培養，例如，加有酪蛋白氨基酸和維生素的Stephansen-Whetham培養基，則在對數級生長期，在培養基中加入含硫原子的有臭味化合物、含氮原子的臭味化合物和/或含碳原子的臭味化合物會促進或加速生長。
c)如果在培養基中，有含硫原子的臭味化合物、含氮原子的臭味化合物和/或含碳原子的臭味化合物存在時，則除臭乳桿菌繼續生長直到這些化合物全部消耗或吸收。
(2)、除臭乳桿菌具有低的營養缺陷性(auxotrophy)并能在含有無機鹽和糖的Stephansen-Whetham培養基中或在加有酪蛋白氨基酸或維生素的Stephanson-Whetham培養基中生長。
(3)、除臭乳桿菌對分解物具有高的消化能力和強的內部穩定能力。就是說，它在體內有強的清潔能力。
(4)、除臭乳桿菌是一種非病原菌種。
(5)、為了保持除臭乳桿菌的強除臭能力，要求在營養培養基中摻入含硫原子的氨基酸和/或含硫原子、氮原子或碳原子的臭味化合物。
(6)、為了貯存細胞體，要求將上述的物質和/或甘氨酸、谷氨酸、賴氨酸、丙氨酸、苯基丙氨酸、藻蛋白堿、天門冬氨酸等等放置在除臭乳桿菌細胞體的周圍。
按照上述分離方法制備的或具有上述性質的除臭乳桿菌的任何菌種都可以用于本發明。
能用于本發明的除臭乳桿菌的最好菌種是保藏在日本工業科學和技術公司，發酵研究所〔Agency of Industrial Science and Technology，Fermentation Research Institute(Japan)〕的那些菌種，其國家登記號是FERM-P 1946，2742，2779，2780，2781和2782。
用于本發明的清除乳桿菌的性質和其分離方法描述于日本專利申請(OPI)11177/84，美國專利申請511805中。清除乳桿菌具有以下的性質。
(1)a)含硫原子的臭味化合物(如Na2S·9H2O)，含氮原子的臭味化合物(如NH3)和/或含碳原子的臭味化合物(如低脂肪酸)對清除乳桿菌的生長不是主要的。在清除乳桿菌不能生長的培養基中，甚至加入上述物質也不能變成清除乳桿菌能生長的培養基。
b)在對數級生長階段在清除乳桿菌的培養基中加入含硫原子的臭味化合物，含氮原子的臭味化合物和/或含碳原子的臭味化合物不能導致促進或加速生長。
c)清除乳桿菌對含有硫原子的臭味化合物和含氮原子的臭味化合物都多少有些利用或吸收。(許多菌種約利用其30～90%)。可是，清除乳桿菌不能完全利用這些物料。(注意到除臭乳桿菌完全吸收這些化合物)。
(2)、清除乳桿菌的營養缺陷性是低的。在Stephansen-Whetham培養基中僅加入酪蛋白氨基酸和維生素后，它就能生長。
(3)、清除乳桿菌在肉浸膏bauillon培養基中的繁殖能力，與大腸桿菌比較，是在0.9～1.1倍的范圍之內。清除乳桿菌使用分解物雖然不完全，但將它引入體內后，一般2-3天在體內多少有些清潔能力，最多約有二個星期。
(4)、清除乳桿菌，在一切性質方面與乳桿菌屬相符。但是，與以前已知的菌種相比，就利用或吸收含有硫原子的臭味化合物(如Na2S·9H2O)和含有氮原子的臭味化合物(如NH3)的能力而論，如上所述是十分不相同的。(除除臭乳桿菌以外，以前已知的菌種都不利用這些類型的化合物)。其營養缺陷性是低的。
(5)、清除乳桿菌的內部穩定能力是低于除臭乳桿菌，雖然它比以前已知的乳桿菌菌種為強)。
(6)、用于本發明的清除乳桿菌是非病原菌種。
(7)、要保持用于本發明的清除乳桿菌的強除臭能力，要求在營養介質中摻入含硫原子的氨基酸和/或含硫原子、氮原子和/或碳原子的臭味化合物。
(8)、為了貯存細胞體，要求將上述用于除臭乳桿菌的物質放置在清除乳桿菌的細胞體周圍。
按照上述分離方法制備的或具有上述性質的清除乳桿菌的任何菌種都可以用于本發明。
能用于本發明的清除乳桿菌的最好菌種是保藏在日本工業科學和技術公司，發酵研究所的那些菌種，其國家登記號是FERM-P 6587，6588，6589和6590。在這些菌種中，登記號為FERM-P 6587和6590的菌種也保藏在日本、大阪、發酵學院(Institute of Fermen-tation，Osaka，Japen)其國際登記號為IFO 14253和14254。
用于本發明的硫酸乳桿菌和亞硝酸乳桿菌的性質和其各自分離方法描述于日本專利申請4923/84和美國專利申請511805中。
用于本發明的硫酸乳桿菌，僅利用含硫原子的臭味化合物，而亞硝酸乳桿菌僅利用含氮原子的臭味化合物，雖然利用不完全，但是在所有情況下保持在90%或更少些。可是，除了這性質以外，它們具有與清除乳桿菌同樣的性質。所以在體內用硫酸乳桿菌和亞硝酸乳桿菌進行除臭不能得到滿意的效果，除非兩者結合使用。
按照上述分離方法制備的或具有上述性質的硫酸乳桿菌和亞硝酸乳桿菌的任何菌種，都可以用于本發明。
最好的硫酸乳桿菌的菌種是保藏在日本工業科學和技術公司、發酵研究所的那些菌種，其國家登記號是FERM-P 7383和7384，該菌種也保藏在日本、大阪、發酵學院，其國際登記號是IFO 14255和14256，最好的亞硝酸乳桿菌是保藏在日本工業科學和技術公司，發酵研究所的那些菌種，其國家登記號是FERM-P 7385和7386，該菌種也保藏在日本、大阪、發酵學院，其國際登記號各為IFO 14257和14258。
上述乳桿菌的四種類型與過去已知的乳桿菌的不同點是(1)、過去已知的乳桿菌菌種在其生長期不需要含硫原子的臭味化合物和含氮原子的臭味化合物作為主要物質。甚至當這些化合物加入到已知乳桿菌不能生長的培養基中，菌種也不會開始生長。此外，當這些化合物在已知菌種的對數生長期時加入，也不會引起促進或加速生長。以前已知的乳桿菌菌種完全不消耗這些化合物，所以最后留存的化合物量就是原來的加入量。
(2)、過去已知的乳桿菌菌種是按其營養缺陷性分組在Stephansen-Whetham培養基中加入酪蛋白氨基酸和維生素能生長的菌種組和除了加入酪蛋白氨基酸和維生素外如果不再加入其他配料，在Stephansen-Whetham培養基中不能生長的菌種組。
(3)、過去已知的乳桿菌菌種在一般培養基中的繁殖能力，與大腸桿菌等比較是較差的。(如，是大腸桿菌的0.5倍)。它們內部的穩定能力是在1或2天。對含碳原子的臭味化合物的清除能力是未知的。
四種乳桿菌菌種全部具有以下的乳桿菌性質就是，它們是革蘭氏陽性，厭氧或微需氧的，成桿狀無芽胞的，并取決于菌種，可以是球形桿狀，彎曲桿狀，棍棒狀或線狀。它們是不動的，對過氧化氫酶是負性，并且不還原硝酸鹽。它們不分解明膠和不產生吲哚或硫化氫。其中有些是雙極染色。它們分解蛋白質和脂肪的能力即使有也是很弱的。它們在缺氧或微需氧條件下生長，比在有氧條件下生長最好。它們具有強的分解糖的能力并且是耐酸的。如果用于葡萄糖發酵，則產生乳酸，產量大于50%。在加入醋酸時，促使其生長。對動物和植物來說，它們不是病原的。
清除乳桿菌，如果口服大量，其作用非常緩和并降低在糞便中的臭味物質，在繼續服用時，沒有不舒服的感覺。可是，當服用停止，則在短期內該菌株通過腸胃道排泄而失去其在體內的除臭劑。
除臭乳桿菌的除臭能力，與清除乳桿菌相比，要高幾十倍或更多，而且它除臭完全，就是說，它完全降解有臭味的物質。例如在使用除臭乳桿菌的培養液的十分之一(按重量計算)時，則人糞在48小時內完全沒有臭味。
用于本發明的除臭乳桿菌是由乳酸乳桿菌(Lactobacillus lactis)的培養制得的，該乳酸乳桿菌在示于下表的任一最小營養培養基中，在不影響這些菌種的性質和以后分離的培養基中，繁殖并能夠或不能夠產生抗菌素。
類別 最小營養培養基(a)葡萄糖或淀粉，無機鹽和水(b)在(a)中加入糞便中存在的含硫、氮或碳的臭味化合物(c)在(a)中單獨地加入維生素或組合地加入(d)在(a)中單獨地加入氨基酸或組合地加入(e)在(a)中單獨地加入特定的維生素或組合地加入(f)在(a)中單獨地加入特定的氨基酸或組合地加入(g)在(a)中單獨地加入含硫氨基酸或組合地加入。
如有必要，最好給與抗性以抵抗抗菌劑，這樣得到的乳酸乳桿菌能按常規方法加工成制劑。不影響乳酸乳桿菌性質的上述培養基是如本發明所述的各最小營養培養基，其結合體或其類似的瓊脂培養基。視情況而定，一般瓊脂培養基可以在中間使用。
此外，分離清除乳桿菌要使用比分離除臭乳桿菌營養素更高的培養基。例如，分離清除乳桿菌的培養基含有肉浸膏、胨、Na2S·9H2O、乳酸鈉、葡萄糖和瓊脂。對亞硝酸乳桿菌最好的培養基含有肉浸膏，胨、MH3、乳酸鈉、葡萄糖和瓊脂。用于硫酸乳桿菌的最好培養基包含肉浸膏、胨、Na2S·9H2O、乳酸鈉、葡萄糖、Caco3、和瓊脂。
在這樣呈現的菌落中，將邊緣是透明的菌落進行篩選，并進行氣體產生試驗，保留不產生氣體的細胞。然后，這樣得到的細胞進行溶血試驗以得到不溶血的細胞，以后在LBS培養基中培養。當確證細胞是屬乳桿菌后，則檢測Na2S·9H2O和NH2降低的程度和檢測乳桿菌菌種加速成長的程度，并分為除臭乳桿菌、清除乳桿菌、硫酸乳桿菌和亞硝酸乳桿菌。對每種乳桿菌，凡高于μ值的都收集。
用于本發明的乳酸乳桿菌，例如，可按下法分離
在培養基(A)〔Stephansen Wetham培養基S-W〕+維生素+瓊脂(其中〔S-W〕含有1克KH2PO4，0.7克MgSO4·7H2O，1克Nacl，4克(NH4)2HPO4，0.03克FeSO4·7H2O和5克葡萄糖)或培養基(B)〔S-W〕+酪蛋白氨基酸+瓊脂中，用糞的無氧培養形成菌落。然后，將菌落在LBS培養基〔用于乳酸乳桿菌的選擇培養基，含有胰蛋白酶解酪蛋白10克，5克酵母浸膏，10克肉浸膏、6克KH2PO4、2克酒石酸氫銨、20克葡萄糖、1克吐溫80(聚氧化乙烯山梨聚糖單油酸的商用名)、40克醋酸鈉，15毫升溶液B和3.7毫升冰醋酸(99.5%)，該培養基不用調節PH值也不用消毒，溶液B是由0.5克MgSO4·7H2O、2.47克MnSO4·nH2O、0.5克Nacl、10克MgSO4·7H2O和250毫升水組成〕中培養，收集生長在培養基上的細菌細胞。將細胞在正常的瓊脂培養基中培養，其中只將生長準確符合乳酸乳桿菌定義的那種菌種保留。
然后，將菌種按營養缺陷性的不同分類，用以下幾種營養培養基(a)葡萄糖或淀粉，無機鹽和水;
(b)在(a)中加入在糞中限于含有一種的，含硫、氮或碳的臭味化合物;
(c)在(a)中單獨加入維生素或組合加入;
(d)在(a)中單獨別加入氨基酸或組合地加入;
(e)在(a)中單獨加入特定維生素或組合加入;
(f)在(a)中單獨加入特定的氨基酸或組合加入;
(g)在(a)中單獨加入含硫氨基酸或組合加入;
在上述培養基中，維生素包括維生素A、維生素B1、維生素B2、維生素B6、維生素B12、尼克酰胺、泛酸鈣、維生素C、維生素D12，等等，特定的維生素包括除上述維生素以外的維生素，如維生素、維生素等。氨基酸包括除特定氨基酸以外的氨基酸和含硫氨基酸，如甘氨酸、谷氨酸、賴氨酸、丙氨酸、苯基丙氨酸、藻蛋白堿、天冬氨酸等等，而特定氨基酸包括色氨酸。
含硫氨基酸包括胱氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、氨基乙磺酸、等。
用于本發明的糞鏈球菌是常常加在家畜飼料中的那種。然而，它必需是能產生抗菌素的菌種，因為所產生的抗菌素抑制內部腐生生物的生長和繁殖并間接幫助用于本發明的乳酸桿菌的繁殖。
為了分離這種糞鏈球菌，使用人或家畜的糞便作為分離源，并將它們在用于糞鏈球菌的選擇培養基中，如含有20克蛋白胨、5克葡萄糖、4克K2HPO4、15克KH3PO4、0.5克NaNO3、5克Nacl、0.032克BCP(溴甲酚紫)、15克瓊脂和1升水并有6.9～7.2的PH值的SF培養基中在有氧的條件下，溫度約為34～39℃時進行培養。將所得的糞鏈球菌進行溶血試驗以保留不溶血的菌種，從中將具有產生抗菌素能力的菌種繼續保存。將這樣保存的菌種接種到含有脫脂牛奶和蔗糖的培養基中。從產生的細菌細胞中，選出具有好氣味和好味道的細胞并用于本發明。
一種測定菌種是否產生抗菌素的代表性試驗方法包括在含有糖類和CaCO3的瓊脂培養基上涂上一層直徑為10毫米量的糞鏈球菌，在37℃時培養48-72小時，在培養基上，從所培養的糞鏈球菌中心以輻射狀劃線培養病菌，并繼續培養24～48小時，以測試糞鏈球菌產生抗菌素。
由糞鏈球菌形成的抗菌素是耐熱的氨基葡糖苷，并從一種菌種中形成4～5種具有狹的抗微生物活性譜的抗菌素。具有狹的抗微生物活性譜的四、五種抗菌素全體呈現出同樣的性質，猶如具有很廣的抗微生物活性譜的單一抗菌素。
關于毒性，與總共達1000億的其他內部細菌的活性和代謝比較，糞鏈球菌的毒性是低的。至于產生抗菌素的不溶血的糞鏈球菌，認為這樣的菌種十分有利于乳桿菌和雙歧桿菌的活性并抑制病原細菌的活性。
糞鏈球菌的最好菌種是保藏在日本發酵研究所的那些菌種，其國家登記號是FERM-P 2082和7382。
如上所述，按本發明在除臭乳桿菌、清除乳桿菌和硫酸乳桿菌和亞硝酸乳桿菌的混合菌種中至少有一種菌種與上述糞鏈球菌混合使用。乳酸桿菌對糞鏈球菌的組合比例，按重量計，為150～0.01∶1，較好的是100～0.01∶1，最好的是30～0.03∶1。首先，常常使用的比例是約10∶1，這是腸微生物區系的比例。直接用于皮膚粘膜的，則乳桿菌的用量少于鏈球菌，即，乳桿菌對鏈球菌的比例，按重量計，最好是1～0.03∶1。另外，為了在使用硫酸乳桿菌和亞硝酸乳桿菌時達到與清除乳桿菌同樣效果，則使用硫酸乳桿菌和亞硝酸乳桿菌的混合物就夠了，其每種用量與清除乳桿菌相同。
為了制備這種乳桿菌和糞鏈球菌的干細菌制劑，如需要還可以加入雙歧桿菌和芽胞桿菌，最好的加入比，按重量計，為5～15分乳桿菌，10～100分的雙歧桿菌，0.05～0.15分的芽胞桿菌對1分糞鏈球菌，將它們一起混和就可以。
按本發明，在上述四種乳桿菌菌種和糞鏈球菌組合使用時，在其組合中，也可以用雙歧桿菌，芽胞桿菌或雙歧桿菌和芽胞桿菌的混合物。在停止服用后，雙歧桿菌對仍然保持除臭效果是有效的。而芽胞桿菌對提高乳桿菌和鏈球菌在消化臭味物質以除臭的能力是有效的。
在本發明所用的雙歧桿菌可以是常用于生產酸乳酪的雙歧桿菌，也可以是用于飼料或食品的雙歧桿菌。在本發明中是使用保藏在ATCC中的菌種。
在本發明中作為芽胞桿菌使用的最好是在酸乳酪中用作種菌最好的凝固桿菌菌種，在用于生產發酵大豆最好的枯草桿菌菌種，及其類似菌種。其他的用于飼料和食品的芽胞桿菌菌種也可以使用。
雙歧桿菌的用量按重量計，最好是本發明所用的乳桿菌量的1～10倍，而芽胞桿菌的用量，按重量計，為本發明所用乳桿菌的1～0.01倍。
發現本發明所用菌種在培養后，所得到的各菌種之比相當于原來在培養基中加入的各菌種之比。然而，要培養包括雙歧在內的幾種菌種，要求選擇一種培養基，在該培養基中，雙歧桿菌的生長良好并和同時培養它們的培養基一樣，這樣，具有低生長速率的雙歧桿菌可以比其他菌種早些開始繁殖。
本發明的除臭劑主要是制成活的細菌制劑，例如，按下面的方法一種方法是(1)、其中將用于本發明的乳桿菌和用離心法收集的糞鏈球菌的濕細胞的水分降低(最好按重量)，將細胞與賦形劑混和并在真空中干燥(最好到水分含量，按重量計約為2%)。另一種方法是(2)、其中將本發明所用的乳桿菌和用離心法收集的糞鏈球菌的濕細胞分散在賦形劑的溶液中，將所得溶液冷凍，干燥并再與干賦形劑混和。此外，還有方法(3)，其中將由上述方法(1)和(2)所制備的含單菌種或多菌種的制劑混和以獲取含有適量各菌種的制劑。
合適的賦形劑，包括淀粉、乳糖、蔗糖、脫脂的牛奶、糊精、明膠、碳酸鈣和含硫的氨基酸，可以單獨使用也可以將其中二種或更多種混合使用。賦形劑的用量，按重量計，最好是每分濕細胞使用1～50分賦形劑。如果要求將雙歧桿菌和/或芽胞桿菌與上述濕細胞一起使用，則將雙歧桿菌和/或芽胞桿菌混入以便形成一種乳化液，該乳化液得出一種具有各菌種有效比的干的細菌制劑。最好是按重量計，每一分糞鏈球菌使用5～100分在本發明中所用的乳桿菌和0.05～0.15分雙歧桿菌和/或芽胞桿菌。
在上面方法(2)中所用的合適賦形劑溶液包括乳糖溶液、蔗糖溶液、脫脂的牛奶溶液、淀粉溶液及其類似的溶液。
在上面方法(1)到(3)中，至少有一種化合物是選自含硫氨基酸，如胱氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、氨基乙磺酸等等，特定的氨基酸，如谷氨酸、谷氨酸鈉、甘氨酸、丙氨酸、組氨酸、酪氨酸等等，或含氮原子、硫原子或碳原子的臭味化合物，其含量最好為0.1～10的重量百分數。含硫氨基酸、特定氨基酸或臭味化合物，在阻止除臭劑在培養或貯存時引起的除臭能力的降低中是有效的。由效果看來，含硫氨基酸是最好的，在特定氨基酸中，其效果是按谷氨酸，谷氨酸鈉、甘氨酸、丙氨酸、組氨酸和酪氨酸的次序而降低。
本發明的除臭劑能用于栓劑、外科用脫脂棉的制劑。另外最好使用予先將乳桿菌和糞鏈球菌轉變成對滅菌劑有抗性的菌種。將乳桿菌和糞鏈球菌與等滲氯化鈉溶液按所要求比例，如，10∶1混和，將混合物放置適當時間，例如，5分鐘到2小時，用溶液吸滿棉條而制成栓劑。為制備外科用脫脂棉，將兩種菌種分別干燥并相繼粘結到棉花上，或者將兩種菌種與等滲氯化鈉溶液混合，將棉花浸入所得的混合物中并干燥。當然制備栓劑或外科用脫脂棉的方法是不限于上述這些方法。就是說，除臭劑最好是在干燥的條件下以保持其能力。
本發明的除臭劑能用作飼料及類似物的有價值的添加劑。
為添加到飼料中，將乳桿菌和糞鏈球菌在一個培養基中按所要求的比例，如，10∶1，同時培養，離心后，將培養溶液干燥并用作飼料的添加劑，或者將乳桿菌和糞鏈球菌分開培養而制成干細胞，將兩種干細胞按所要求的比例，如，10∶1的比例，混合而用作飼料的添加劑。因為在乳桿菌和糞鏈球菌之間的耐熱性是不同的(后者比前者更為耐熱)，所以為增加生產制劑使用后面的方法更為經濟。
一般說來，當考慮進入粘膜的穩定能力，是使用需氧菌種還是使用厭氧菌種，這決定于加上菌種的粘膜是在有氧條件下存在還是在無氧條件下存在。雖然乳桿菌和鏈球菌是對粘膜具有很好親和力的細菌代表，喜歡有氧條件的鏈球菌適宜用于嘴的粘膜，而甚至在缺氧條件還有活性的乳桿菌適宜用于陰道區域的粘膜。
然而，如果諸如腐生生物和病原體之類的污染細菌存在于陰道區和有關陰道的部位(尤其是陰部)，在許多情況下只使用乳桿菌要達到予期效果是困難的。雖然為降低這些污染細菌予先用消毒劑并使用抗消毒劑的乳桿菌進行，要得到予期的效果還是困難的，因為消毒劑的作用并不長期持續。
本發明的除臭劑特別在這種部位是有效的。由于由糞鏈球菌所形成的抗菌素作用和糞鏈球菌在有氧條件下對粘膜的高親合力的作用，乳桿菌能有效地顯示其遺傳性質。這樣，本發明的除臭劑在用作栓劑和其他外用藥中是有價值的。最好予先使用消毒劑，然后使用已有抗消毒劑的本發明的栓劑或外用藥。
這樣，本發明的除臭劑顯示有優良的作用，不僅是在腸內，而且也在其他粘膜處尤其是在陰部。
下面，詳細說明在本發明中所用的鏈球菌的分離方法。但是，不能認為發明是限于這種方法。
糞鏈球菌的分離方法(1)、SF培養基(含有20克胨，5克葡萄糖、4克K2HPO4、1.5克KH2PO4、0.5克NaNO3、5克Nacl、0.032克BeP、15克瓊脂和1升水，其PH值為6.9～7.2)是糞鏈球菌的選用培養基，將該培養基用作培養基。將人和動物糞便懸浮在SF培養基中，在有氧條件下，在37℃培遍48小時。
(2)用分類識別是糞鏈球菌的細胞進行溶血試驗，并保留非溶血的細胞。
(3)測試產生抗菌素的能力，保留具有產生抗菌素能力的菌種。
(4)然后，將所保留的菌種接種到酸乳酪的培養基(含有100克的脫脂牛奶和100克蔗糖)中，并在37℃培養48小時以制備酸乳酪。將酸乳酪進行氣味和味道的試驗，將具有好的氣味和味道的細胞保留。
從培養基溶液中收集細胞在本發明所用的清除乳桿菌、除臭乳桿菌、硫酸乳桿菌和亞硝酸乳桿菌、糞鏈球菌和芽胞桿菌的情況中，將每種菌種單獨接種到上述MRS-乳糖培養基中，即含有10克肉浸膏、10克
、5克酵母浸膏，20克乳糖、1毫升吐溫80.2克KH2PO4、5克醋酸鈉、2克酒石酸銨、0.2克MgSO4·7H2O和0.05克MnSO4·4H2o的培養基，在37℃培養72小時，用冷凍的離心機收集細胞。
在雙歧細胞的情況中，菌種是接種到加有1毫克維生素B2、8毫泛酸鈣和0.1毫克生物素的MRS-乳糖培養基中，在37℃培養96小時，用冷凍的離心機收集細胞。
給出下面的實例以更詳細地闡述本發明，在這里，除了另有指明，全部分量、百分率、比率及類似量度都是按重量計。
例1用乳桿菌屬菌種和糞鏈球菌的混合物檢測對Na2S·9H2O和NH3的除臭程度。
將下面的乳桿菌屬菌種和糞鏈球菌，接種在含有5克肉浸膏，5克胨，1克葡萄糖，1克CaCO3和1克糞便，并含有0.5克Na2S·9H2O或0.5克的培養基中，并培養以檢測對Na2S·9H2O和NH3的減小程度。其結果示于表1。
為了比較，除了單獨使用下面的乳桿菌來代替上面的乳桿菌和糞鏈球菌的混合物之外，其他都重復同樣的方法。其結果示于表2。
由表明顯看到，與單獨使用乳桿菌相比較，混合使用乳桿菌和糞鏈球菌的結果，增加吸收能力達10%到20%。
在吸收能力方面，除臭乳桿菌比清除乳桿菌為更強。前者在72小時內完全吸收Na2S·9H2O和NH3，而后者在這個時間內不能完全吸收而有剩余，亞硝酸乳桿菌和硫酸乳桿菌也不能完全吸收它們。
用于試驗的菌種示于表3表1Na2S·9H2O 500ppm NH3500ppm乳桿菌屬 糞鏈球菌24 48 72小時 24 48 72小時清除乳桿菌6587
390 280 220ppm 400 280 225ppm6588
300 225 180 300 225 1806589
300 225 180 330 225 1906590
250 110 90 300 135 110亞硝酸乳桿菌7385
510 510 530 400 280 2257386
515 515 520 400 280 225硫酸乳桿菌7383
400 280 220 520 580 6107384
400 280 220 520 580 620
續表1除臭乳桿菌1946
180 30 0 180 40 02742
140 20 0 140 40 02779
225 80 0 225 90 02780
225 80 0 225 90 02781
180 60 0 180 70 02782
225 70 0 225 85 0表2Na2S·9H2O 500ppm NH2500ppm乳桿菌屬24 48 72小時 24 48 72小時清除乳桿菌 6587 400 300 250ppm 400 300 250ppm6588 300 250 200 350 250 2006589 300 250 200 350 250 200亞硝酸乳 6950 250 125 100 300 150 125桿菌 7385 510 515 525 400 300 2507386 515 520 525 400 300 250硫酸乳桿菌 7383 400 300 250 515 590 6257384 400 300 250 530 650 650除臭乳桿菌 1946 200 50 0 200 50 02742 150 30 0 150 50 02779 250 100 0 250 100 0
續表2除臭乳桿菌 2780 250 100 0 250 100 02781 200 70 0 200 80 02782 250 90 0 250 100 0表3用于試驗的菌種寄存發酵研究所 大阪發酵學院 美國標準菌庫(ATCC)種類 國內登記號 國際登記號 國際登記號FERM-P FERM-BP IFO清除乳桿菌 № 6587 № 14253№ 6588№ 6589№ 6590 № 14254除臭乳桿菌 № 1946№ 2742№ 2779№ 2780№ 2781№ 2782亞硝酸乳桿菌 № 7385 № 14257№ 7386 № 14258
續表3硫酸乳桿菌 № 7383 № 14255№ 7384 № 14256糞鏈球菌 № 2082(b菌種)№ 7382(a菌種)№ 6569(
菌種)№ 14506(
菌種)雙歧桿菌 № 11146(
菌種)№ 11863(
菌種)芽胞桿菌 № 2930(A菌種)№ 3335(B菌種)(注)在同一線上給與的登記號表示同一菌種。用于類別的縮寫名寫在登記號后面的園括號內。
糞鏈球菌的
菌種和
菌種產生抗菌素。
糞鏈球菌的
菌種和
菌種不能產生抗菌素。桿菌屬的A菌種為用于酸乳酪(凝固桿菌)的種子細胞。桿菌屬的B菌種是用于發酵大豆(枯草桿菌)的種子細胞。
例2除臭試驗是用FERM-P № 7382菌種(在下面稱
菌種)作為糞鏈球菌進行的。
在1克新鮮的人糞中加入9毫升等滲性的氯化鈉溶液。在這樣取得的一組混合物(1)中，加入1毫升的清除乳桿菌培養細胞液，而另一組混合物(2)中加入1毫升的清除乳桿菌培養細胞液和0.5毫升的
菌種培養細胞液，然后把這些混合物在37℃放置48小時。
通過氣味的判斷，注意到混合物(2)的試驗組其除臭程度較高，并且沒有除臭的糞便量與混合物(1)的相比較減小到一半，而后者的試驗情況下，十例中有二例的糞便沒有除臭。
通過只口服清除乳桿菌和口服清除乳桿菌加上
菌種，對其排泄糞便除臭程度的檢測情況下看到，其中服用清除乳桿菌加上
菌種的情況，除臭作用較高，并且沒有除臭的實例少些。
這些試驗(在體內)表示，清除乳桿菌和清除乳桿菌加上
菌種一樣，在有糞便的腸內(含有生腐菌，其中大部易是厭氧的，數量相當于1.5×1011細胞/克糞便)是有效的。
盡管注意到，雖然在接觸清除乳桿菌和清除乳桿菌加上
菌種時都有相當好的效果，但正如所料到的，與單獨清除乳桿菌相比較，清除乳桿菌加上
菌種的結合使用更為有效。這里有效，其意思是指達到高的除臭程度并且沒有除臭的實例減少。
雖然上述試驗是關于清除乳桿菌的，但對除臭乳桿菌和硫酸乳桿菌加上亞硝酸乳桿菌也進行了同樣的比較試驗。那就是說，除臭乳桿菌同除臭乳桿菌加上
菌種之間，硫酸乳桿菌加上亞硝酸乳桿菌同硫酸乳桿菌加上亞硝酸乳桿菌加上
菌種之間，進行比較試驗。
在硫酸乳桿菌加上亞硝酸乳桿菌中觀察到和清除乳桿菌同樣的傾向。
在除臭乳桿菌的情況中，
菌種的作用更大，并且更顯著。即，約用
菌種，產生抗菌素的糞鏈球菌，顯示出對臭味有非常顯著的作用，不僅口服，而且也可應用于婦女陰部。
所得的結果示于表6。
例3(生物除臭劑的制備)酸乳酪的制備(1)、通過清除乳桿菌和糞鏈球菌的發酵，制備酸乳酪將用于種子細胞的培養基(含有脫脂乳30克和氧化鈣3克，并且PH值為7.0)分成2分，并滅菌。然后將上述的菌種分別接種在每一個培養基上，在37℃培養24小時，得到清除乳桿菌的種子細胞和糞鏈球菌的種子細胞。(清除乳桿菌的細胞數目為1.5×109細胞/毫升，而糞鏈球菌的細胞數目為2×109細胞/毫升)。
另一方面，將由脫脂乳100克，蔗糖100克和瓊脂2克組成的酸乳酪培養基200毫升滅菌。
對這樣獲得的培養基中，加入10毫升的清除乳桿菌種子細胞和0.8毫升的糞鏈球菌。然后，在37℃培養24小時，以制備酸乳酪。
制成的酸乳酪含有清除乳桿菌2.5×109細胞/毫升和糞鏈球菌2.5×108細胞/毫升。清除乳桿菌與糞鏈球菌之比為10∶1(以重量計)。這種酸乳酪用于人和動物。
(2)、以清除乳桿菌，糞鏈球菌和雙歧桿菌的發酵，制備酸乳酪清除乳桿菌和糞鏈球菌的種子細胞是通過制備種子細胞培養基，把每個菌種接種在培養基上，并在37℃培養24小時的方法得到。雙歧桿菌另外接種在由脫脂乳30克，半胱氨酸1克，維生素B2l克，泛酸鈣8克和生物素0.1毫克組成的種子細胞培養基上，并在37℃培養72小時。
另一方面，將由脫脂乳100克，蔗糖100克，瓊脂2克和半胱氨酸1克組成的酸乳酪培養基200毫升滅菌，并進行滅菌過濾。然后在培養基中加入維生素B2l毫克，泛酸鈣8毫克，生物素0.1毫克。
對如此制得的培養基中，加入10毫升的雙歧桿菌的種子細胞，并在37℃培養36小時而完成。
然后，在培養基中再同時加入清除乳桿菌種子細胞10毫升和糞鏈球菌種子細胞0.8毫升，并在37℃再繼續培養36小時制備酸乳酪。
這樣制得的酸乳酪，含有2×109細胞/毫升的清除乳桿菌，2×108細胞/毫升的糞鏈球菌和3×109細胞/毫升的雙歧桿菌。清除乳桿菌∶糞鏈球菌∶雙歧桿菌之比＝10∶1∶15(以重量計)。
例4(生物除臭劑的制備)濕細胞制劑的制備由肉浸膏10克，胨10克，酵母浸膏5克，乳糖20克，吐溫801毫升，KH2PO42克，乙酸鈉5克，檸檬酸銨2克，MgSO2·7H2O0.2克和MnSO4·4H2O 0.05克組成的MRS-乳糖培養基中分別接種清除乳桿菌，糞鏈球菌和芽孢桿菌，并將每個菌種在37℃，純粹培養72小時。完成培養后，通過離心分離收集細胞。(每1000毫升的產額為，清除乳桿菌1克，糞鏈球菌1.2克，芽孢桿菌1克。)在雙歧桿菌的情況下，將1克半胱氨酸，1毫克維生素B2，8毫克泛酸鈣以及0.1毫克生物素加入到MRS-乳糖培養基中，并在37℃培養96小時。培養結束后，以離心分離收集細胞。(每1000毫升的產量為0.5克)。
(a)含有清除乳桿菌和糞鏈球菌的制劑將上面收集的清除乳桿菌細胞10克與糞鏈球菌細胞1克相混合做成制劑。將該制劑與飼料混和。(用于雞的，在1公斤飼料中加入0.5克制劑，而用于豬的，在1公斤飼料中加入0.8克制劑)。
(b)含有清除乳桿菌，糞鏈球菌和芽孢桿菌的制劑將上面收集的清除乳桿菌細胞10克，糞鏈球菌細胞1克和雙歧桿菌細胞100克一起混合做成制劑。將該制劑與飼料混和(例如，用于雞的每公斤飼料中混和量為0.5克，而用于豬的，每公斤中混和量為1克)。
(c)含有清除乳桿菌，糞鏈球菌，雙歧桿菌和芽孢桿菌的制劑將上面收集的清除乳桿菌細胞10克，糞鏈球菌細胞1克，雙歧桿菌細胞100克以及芽孢桿菌細胞0.5克一起混合做成制劑。在飼料中加入該制劑(例如，用于雞的，每公斤飼料中的制劑量為0.6克，而用于豬的，每公斤飼料中制劑量為1克)。
干的細胞制劑的制備(1)、半干性細胞制劑在上述的MRS-乳糖培養基和上述的用于雙歧桿菌，清除乳桿菌，糞鏈球菌和雙歧桿菌(原文可能有誤，估計是“芽胞桿菌”)的培養基中分別接種并完成每個菌種的純粹培養。
在用離心分離收集的每種濕細胞10克中加入300克的，加熱到濕度為0.12%的干淀粉和加入1克胱氨酸并混合成最終濕度為2%或更小的濕的制劑。
(a)含有清除乳桿菌和糞鏈球菌的制劑將如此干燥和封口的清除乳桿菌10克和定樣干燥和封口的糞鏈球菌1克相混合，做成半干制劑。將該制劑放入小瓶，在氮氣下密封并存放在陰涼暗處。
(b)含有清除乳桿菌，糞鏈球菌和雙歧桿菌的制劑將如此干燥和封口的清除乳桿菌10克，如此干燥并封口的糞鏈球菌1克和如此干燥并封口的雙歧桿菌100克一起混合，做成半干制劑。將該制劑放入小瓶，在氮氣下密封并存放在陰涼暗處。
(2)、干的細胞制劑在上述MRS-乳糖培養基和上述用于雙歧桿菌，清除乳桿菌，糞鏈球菌和雙歧桿菌(原文可能有誤，估計是“芽孢桿菌”)的培養基上分別接種，并完成純粹培養每種菌種。將通過離心分離所收集的每種濕細胞10克分散在含1%乳糖和0.1%胱氨酸的溶液100毫升中，然后將溶液冷凍干燥。
(a)含有清除乳桿菌和糞鏈球菌的制劑將這樣獲得的清除乳桿菌活細胞制劑10克與這樣獲得的糞鏈球菌1克相混合，做成干細胞制劑。將該制劑裝在膠囊中保存。
(b)含有清除乳桿菌，糞鏈球菌和雙歧桿菌的制劑將上面得到的清除乳桿菌10克，上面得到的糞鏈球菌1克和在上面得到的雙歧桿菌100克一起混合，做成干細胞制劑。將該制劑加工成藥片，并貯藏在小瓶內。
例5方法(1)、清除乳桿菌，除臭乳桿菌或硫酸乳桿菌和亞硝酸乳桿菌的等量混合菌種和/或芽胞桿菌的菌種的混合培養，可以使用由脫脂乳100克，蔗糖100克和瓊脂2克組成的培養基來實現。首先，將該培養基在三天內間隙地滅菌30分鐘。然后，將上面的菌種以所要求的細胞數的比例，同時接種在培養基上，并在37℃培養24小時以制備產品。
(2)、用于上面(1)中的菌種與雙歧桿菌的混合培養，是在無菌條件下，在加有1克胱氨酸，1毫克維生素B2，8毫克泛酸鈣和0.1毫克生物素的上述培養基中實現的，雙歧桿菌是在37℃下予先培養36小時，然后同時接種其他菌種，并在37℃，再繼續培養36小時，以制備產品。
(3)、這樣制備的產品，病人一天早、晚用二次，連續四天。
除臭試驗的結果示于表4，表5和表6。表4表示以清除乳桿菌用作乳桿菌屬菌種的試驗結果。表5表示用除臭乳桿菌的試驗結果。而表6表示用等量混合的硫酸乳桿菌和亞硝酸乳桿菌作為乳桿菌屬菌種的試驗結果。
除臭效果表4、5、和6所示的除臭效果按下面四項予與評價1)除臭作用是否迅速，即速率2)除臭能力強還是不強，即強度3)除臭效果能維持多少天，即有效期4)排泄感覺是否正常，即感覺對于上面每一項，若接受治療的病人中有一半以上認為其效果顯著，就在該項上注◎符號表示。若半數以上病人認為是有效果的，就在該項上符號○。若一半以上病人認為沒有效果，就在該項上打符號△表示。
表4的說明清除乳桿菌和其它菌種結合使用的效果。
Ⅰ、兩種菌種結合使用雖然
菌種和
菌種生長速率不同，
菌種比
菌種在生長速率方面更優越，但是不論
菌種和
菌種都可以產生很好的復合抗菌素。僅管
菌種和
菌種在生長速率和繁殖方面比
菌種更為優越，但是不論
菌種還是
菌種都不能產生抗菌素。
實驗1清除乳桿菌加
菌種的除臭效果比單獨使用清除乳桿菌更快、更強。而且比單獨使用的除臭有效期也更長;并且有三分之二的病人表示排泄感覺良好。
實驗2清除乳桿菌加
菌種的除臭效果比單獨使用清除乳桿菌更強。然而，這種結合使用并沒有使有效期延長。
實驗3和4清除乳桿菌加
菌種或清除乳桿菌加
菌種的除臭效果幾乎和清除乳桿菌單獨使用相同。
從實驗1-4明顯看出，清除乳桿菌的除臭效果可以用與能產生抗菌素的糞鏈球菌結合使用的方法進行改進。可是，清除乳桿菌與不能產生抗菌素的糞鏈球菌結合使用，其除臭效果得不到任何改進。
(2)實驗5和6對于清除乳桿菌加
菌種或清除乳桿菌加
菌種的情況，有三分之一接受實驗的病人注意到除臭有效期比單獨使用清除乳桿菌時有所延長。然而，還有三分之二的病人沒有意識到這種延長。
按照生物學實驗的已有經驗，一般認為有30%左右達到效果，就表示其結合是相當有益的。
(3)A菌種是凝固桿菌，它的一個極好的性質是作為酸乳酪的種子細胞(參見US專利號4、210，672)。B菌種是枯草桿菌，它的一個極好性質是用作發酵大豆的種子細胞。它易于從市場買到。
實驗7和8對于清除乳桿菌加A菌種或清除乳桿菌加B菌種的使用情況，沒有收到其除臭效果或除臭有效期比單獨使用清除乳桿菌更強或更長的反映。用氣相層析方法檢測，也沒有顯于出與單獨使用清除乳桿菌有什么顯著區別。
Ⅱ、三種菌種的結合使用(1)與產生抗菌素的糞鏈球菌和雙歧桿菌結合使用。以實驗結果可以看到，使用
菌種所獲得的效果幾乎和使用
菌種的效果一致(雖然
菌種比
菌種更為優越。因此，考慮到所獲得的實驗結果，將使用
菌種在下文中略去。
實驗9和10對于清除乳桿菌與
菌種和
菌種或
菌種的結合使用，有大約70%病人的除臭效果比單獨使用清除乳桿菌更強，有效期更長，也沒有令人不快的排泄感覺。在認識到該效果的病人中，20%反映三種菌種結合使用比實驗1(清除乳桿菌加
菌種)的結合使用更為有效，30%反映與實驗1的結合使用沒有差別，剩下的60%反映三種菌種結合使用比實驗1的結合使用要差些。它效果柔和而且有效期長。
實驗17、18、21和22對于清除乳桿菌與
菌種或
菌種和
菌種或
菌種的結合使用，其效果與實驗3和4的情況相同。沒有接到有關除臭效果增強或除臭有效期加長的反映。
按上面所述的實驗結果，50%接受實驗的患者反映向清除乳桿菌和產生抗菌素的糞鏈球菌中加入雙歧桿菌，其除臭效果要優于單獨使用清除乳桿菌。另外，50%接受試驗的患者反映這三種菌種結合使用的效果和清除乳桿菌與產生抗菌素的糞鏈球菌結合使用的效果相同或更好些。僅有15%接受試驗的患者反映兩種菌種的結合使用比三種菌種的結合使用更好。
一般認為與不產生抗菌素的糞鏈球菌的結合使用沒有這樣的效果。
(2)與產生抗菌素的糞鏈球菌和芽孢桿菌的結合使用實驗11和12對于清除乳桿菌與@菌種和A菌種或B菌種的結合使用，有50%以上患者認為其除臭效果比單獨使用清除乳桿菌要強些。然而對有些患者，除臭效果比清除乳桿菌和@菌種的結合使用或清除乳桿菌和@菌種和@或@菌種的結合使用要差些。
實驗19和20不結合是有效的從上面的實驗結果可以看出，在清除乳桿菌和產生抗菌素的糞鏈球菌中添加一種助消化桿菌(digestive Bacillus)所得的除臭效果與不做此添加的效果相似。
而且發現與不產生抗菌素的糞鏈球菌結合使用并沒有如此效果。
(3)與雙歧桿菌和芽孢桿菌結合使用實驗25、26、27和28對于它們之間任意結合中，大約有40%的患者認為除臭有效期延長了。在認為有效期延長的人中，約有20%認為其強度比單獨使用清除乳桿菌要弱。
Ⅲ、四種菌種的結合使用(1)與糞鏈球菌、雙歧桿菌和芽孢桿菌的結合使用
實驗29、30、31和32對于清除乳桿菌與
菌種、
菌種或
菌種和A菌種或B菌種的結合使用，其除臭效果有時比清除乳桿菌和
菌種結合使用的情況要差的多。然而，當四種菌種結合使用時，除臭有效期是最長的。
實驗37、38、39、40、41、42、43和44在清除乳桿菌與不產生抗菌素的糞鏈球菌，雙歧桿菌和芽孢桿菌的結合使用時，其除臭效果不及單獨使用清除乳桿菌。從這些實驗結果可以發現，在清除乳桿菌和產生抗菌素的糞鏈球菌中添加雙歧桿菌和芽孢桿菌時，與不做此添加比較，在其它方面沒有明顯變化，卻可獲得柔和的除臭效果和最長的有效期。
結論綜合由清除乳桿菌與各種菌種結合使用所得的效果，由上面的結果明顯看到，與單獨使用清除乳桿菌比較，以下結合1、清除乳桿菌和產生抗菌素的糞鏈球菌。
2、清除乳桿菌和產生抗菌素的糞鏈球菌和雙歧桿菌。
3、清除乳桿菌和產生抗菌素的糞鏈球菌和芽孢桿菌和。
4、清除乳桿菌和產生抗菌素的糞鏈球菌、雙歧桿菌和芽孢桿菌。
具有更好的和/或更長的除臭效果。
表5和表6的解釋表5表示用除臭乳桿菌代替清除乳桿菌的除臭試驗結果，表6表示用硫酸乳桿菌和亞硝酸乳桿菌的混合菌種代替清除乳桿菌的除臭試驗結果。
用除臭乳桿菌代替清除乳桿菌的試驗結果幾乎與表4中所示結果的趨勢相同。
這里要指出，在糞便的除臭程度方面，在使用乳桿菌加上
菌種的情況中，是由附號◎表示除臭效果不同于在使用清除乳桿菌加上
菌種的情況中，由相同附號◎表示的除臭效果。例如，如果在停止單獨使用清除乳桿菌時，則已經減少到原來一半的臭味立刻就恢復，而當清除乳桿菌與
菌種結合使用時，則臭味恢復到原來四分之一時就停止，使用的作用在臭味停止后持續三天。相反，如果單獨使用除臭乳桿菌，則臭味暫時完全除去。可是，如果除臭乳桿菌與
菌種結合使用，則縮短了完全除臭所需的時間，并且在許多情況下，在使用停止后效果持續6～10天。
關于糞便臭味的恢復檢測了試驗對象的腸細菌狀態，如果使用清除乳桿菌或硫酸乳桿菌和亞硝酸乳桿菌的混合菌種，則觀察到腸細菌沒有變化。即使當清除乳桿菌或硫酸乳桿菌和亞硝酸乳桿菌的混合菌種與
菌種結合使用時，腸細菌大約在5天內恢復到原來狀態。可是，如果使用除臭乳桿菌，則一般大約需要15天才恢復，多數情況下，該腸菌時而表現出有改變(減少)，這時，在某些情況，恢復是不完全的。由清除乳桿菌和除臭乳桿菌在腸細菌上所產生的不同效果是由于這些桿菌的特性不同。
表7表明如果使用硫酸乳桿菌和亞硝酸乳桿菌的混合菌種，在關于除臭效率的周期和強度方面得到比使用清除乳桿菌幾乎同樣的結果。
例6正如表4～6所示，根據本發明，當兩種、三種或四種菌種以組合物形式給予人體時，在上文提到的判斷標準中，有許多實驗部分幾乎判斷不出明顯的差異，因此，也試驗了雞和豬的生長程度。
按如下加入量將菌種加到飼料中對于雞每1公斤雞的普通混合飼料中，以含有填充劑的無水細胞形式，加入0.2克各種菌種。
對于豬每1公斤豬的普通混合飼料中，以含有填充劑的無水細胞形式，加入0.4克的各種菌種。
主要是通過比較使用前和使用后雞肉或豬肉的重量與狀態來完成試驗的。
于是發現與除臭乳桿菌、清除乳桿菌或硫酸乳桿菌和亞硝酸乳桿菌的混合菌種單獨加入飼料中的情況進行比較，在除臭乳桿菌，清除乳桿菌或硫酸乳桿菌和亞硝酸乳桿菌的混合菌種與雙歧桿菌(
菌種或
菌種)結合使用，或者與芽胞桿菌(A菌種或B菌種)結合使用的實驗部分中;以及在除臭乳桿菌，清除乳桿菌或硫酸乳桿菌和亞硝酸乳桿菌的混合菌種與糞鏈球菌和雙歧桿菌或芽胞桿菌結合使用，或者與糞鏈球菌、雙歧桿菌和芽胞桿菌結合使用的實驗部分中，飼料效果都改善了約10%。
例7將在250毫升水的5毫克鹽酸洗必太溶液中浸泡好的脫脂棉每15分鐘三次插入病人的陰道，在該病人陰道中乳桿菌減少到百分之一或低于正常值，然后，將在清除乳桿菌，清除乳桿菌加上
菌種，除臭乳桿菌，和除臭乳桿菌加上
菌種的各種培養液中浸泡好的另一個棉桿，(這些對5γ洗必太溶液具有抗藥性的)插入上述病人的陰道，每隔1小時更換一次新脫脂棉共5次，每種試驗由15人來進行。
同時，將病人陰部用消毒劑處理三次以控制所污染的細菌，然后在陰道使用在上述菌種的各種培養液中浸泡好的脫脂棉。
以上處理過程持續一周，2天后，毫無例外地在陰道中觀察到有許多乳桿菌存在，然而，再過5天后，盡管在用清除乳桿菌處理的某些病人中，觀察到所提及的實驗開始前乳桿菌有減少，但在清除乳桿菌與
菌種結合使用的實驗部分的乳桿菌殘存率比不與
菌種結合使用的乳桿菌殘存率要高。
關于除去臭味的速率，認識到在與
菌種結合使用的實驗部分和不與
菌種結合使用的實驗部分之間存在明顯的差異，(前者比后者除臭效率高)。
然而，本發明已詳細描述并具有特殊方案的參考例，只要不違背本發明的精神和范圍，對于技術熟練的人顯然可以進行各種變化和更改的。
權利要求
1.一種生物除臭劑，含有(a)至少選自除臭乳桿菌、清除乳桿菌和硫酸乳桿菌與亞硝酸乳桿菌的混合菌種之中的一種菌種，和(b)具有產生了抗生素能力的糞鏈球菌。
2.權利要求
1的生物除臭劑，其中乳桿菌對糞鏈球菌的比例約為150∶1到0.01∶1。
3.權利要求
1的生物除臭劑，另外還含有(c)雙歧桿菌和/或芽胞桿菌。
4.權利要求
3的生物除臭劑，其中生物除臭劑，按重量計，按每分糞鏈球菌，含有約5-15分乳桿菌，約10-100分雙歧桿菌和約0.05-0.15分芽胞桿菌。
5.權利要求
4的生物除臭劑，其中所述的芽胞桿菌是凝固桿菌或枯草桿菌。
6.權利要求
1的生物除臭劑，其中所說的生物除臭劑是一種活的細菌制劑。
7.權利要求
1的生物除臭劑，其中所說的生物除臭劑另外含有一種藥物上可接受的賦形劑。
8.一種活性飼料，含有飼料和權利要求
1的除臭劑。
9.權利要求
1的除臭劑，是成栓劑型的。
10.權利要求
1的除臭劑，是成脫脂棉型的。
11.一種生物除
劑的制備方法，其中包括混合的(a)至少一種菌種是選自除
乳桿菌，清除乳桿菌和硫酸乳桿菌與亞硝酸乳桿菌的混合菌種，和(b)具有產生抗生素能力的糞鏈球菌。
12.權利要求
11的方法，其中乳桿菌對糞鏈菌的比例約為150∶1到0.01∶1。
13.權利要求
11的方法，另外還含有(c)雙岐桿菌和/或芽胞桿菌。
14.權利要求
3的方法，其中生物除
劑包括按重量計，每份糞鏈球菌中含有約5-15份乳桿菌，約10-100份雙岐桿菌和約0.05-0.15份芽胞桿菌。
15.權利要求
14的方法，其中所述的芽胞桿菌是凝固桿菌或枯草桿菌。
16.權利要求
11的方法，其中所說的生物除
劑是一種活的細菌制劑。
17.權利要求
11的方法，其中所說的生物除
劑另外含有一種藥物上可接受的賦形劑。
18.權利要求
11的方法，其中所說的除
乳桿菌、清除乳桿菌，硫酸乳桿菌和硝酸乳桿菌是選自至少在一種有氣味的化合物存在下養成，該化合物包括含硫原子的化合物、含氮原子的化合物，含碳原子化合物和含硫的氨基酸。
19.一種生物除
劑的制備方法，包括降低濕細胞的水份，將該細胞與賦形劑混和并在真空中干燥，而濕細胞(a)至少一種菌種是選自除
乳桿菌，清除乳桿菌和硫酸乳桿菌與亞硝乳桿菌的混合菌種，和(b)由離心分離法所收集的具有產生抗生素能力的糞鏈球菌。
20.一種生物除
劑的制備方法，將濕細胞分散在賦形劑的溶液中并凍干所獲得的分散體，而濕細胞(a)至少一種菌種是選自除
乳桿菌，清除乳桿菌和硫酸乳桿菌與亞硝酸乳桿菌的混合菌種和(b)由離心分離法所收集的具有產生抗生素能力的糞鏈球菌。
21.一種生物除
劑的制備方法，包括由權利要求
19和20的方法而得到的混合菌種。
22.在體內除
的方法，所提供的一種生物除
劑包括(a)至少一種菌種選自除
乳桿菌，清除乳桿菌和硫酸乳桿菌與亞硝酸乳桿菌的混合菌種，和(b)具有產生抗生素能力的糞鏈菌。
專利摘要
本發明論述了一種生物除臭劑及其制備方法，其生物除臭劑，含有(a)至少選自除臭乳桿菌，清除乳桿菌和硫酸乳桿菌與亞硝酸乳桿菌的混合菌種之中的一種菌種，和(b)具有產生抗生素能力的糞鏈球菌。
文檔編號A61K45/00GK85106098SQ85106098
公開日1987年1月14日 申請日期1985年7月15日
發明者秦興世, 丸岡俊之 申請人:財團法人成研會導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan