一種田間侵染花生的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及農業技術領域，尤其涉及一種田間侵染花生的方法。
【背景技術】
[0002] 花生是我國主要的油料作物和經濟作物，我國花生單產、總產和出口量均居首位， 花生種植面積占世界種植總面積的19 %，居世界第二位，出口貿易占世界50 %，居世界主 要花生出口國之首，年均總產占世界總產的41%，我國是世界生產、出口花生最多的國家。
[0003] 黃曲霉，半知菌類，一種常見腐生真菌。多見于發霉的糧食、糧制品及其它霉腐的 有機物上。菌落生長較快，結構疏松，表面灰綠色，背面無色或略呈褐色。菌體有許多復雜 的分枝菌絲構成。營養菌絲具有分隔；氣生菌絲的一部分形成長而粗糙的分生孢子梗，頂端 產生燒瓶形或近球形頂囊，表面產生許多小梗（一般為雙層），小梗上著生成串的表面粗糙 的球形分生孢子。分生孢子梗、頂囊、小梗和分生孢子合成孢子頭，可用于產生淀粉酶、蛋白 酶和磷酸二酯酶等，也是釀造工業中的常見菌種。
[0004] 黃曲霉毒素（AFT)是一類化學結構類似的化合物，均為二氫呋喃香豆素的衍生 物。黃曲霉毒素是主要由黃曲霉（aspergillus flavus)寄生曲霉（a. parasiticus)產生 的次生代謝產物，在濕熱地區食品和飼料中出現黃曲霉毒素的機率最高。它們存在于土壤、 動植物、各種堅果中，特別是容易污染花生、玉米、稻米、大豆、小麥等糧油產品，是霉菌毒素 中毒性最大、對人類健康危害極為突出的一類霉菌毒素。
[0005] 花生黃曲霉毒素污染是比較復雜的問題，其中收獲前干旱或連續陰雨、收獲后干 燥時間長和脫殼損傷等是造成近年來黃淮海產區花生黃曲霉毒素污染的主要原因，但最關 鍵的原因是缺乏高抗乃至免疫黃曲霉侵染和鏟毒的花生品種。隨著針對黃曲霉毒素的研究 越來越深入，對田間侵染花生過程的研究與掌握是摸清該霉菌侵染的重要依據，據此探索 出一些較好的、比較適用的方法來控制和預防黃曲霉的侵染，據此探索出一些較好的、比較 適用的方法來控制和預防花生種子的黃曲霉侵染。
[0006] 因此，如何研究一種花生種子的高侵染率的田間侵染方法成為了亟待解決的重要 問題。

【發明內容】

[0007] 本發明提供一種花生種子的高侵染率的田間侵染方法，以便于后續探索出一些較 好的、比較適用的方法來控制和預防花生種子的黃曲霉侵染。
[0008] 為了解決上述技術問題，本發明采用的技術方案如下：一種田間侵染花生的方法， 其特征在于，包括如下步驟：
[0009] 1)將黃曲霉菌株進行培養，培養后配成濃度為0. 05-0. 5X 10s個/mL的孢子懸浮 液；
[0010] 2)將干燥健康的花生種子用質量濃度為0. 1 %的高錳酸鉀溶液浸泡5-15分鐘，浸 泡溫度為35-45°C，用蒸餾水沖洗干凈后，使種子含水量恢復至15-25% ;
[0011] 3)將花生種子以縱向間隔5-10cm、橫向間隔20-30cm在土壤中進行種植；
[0012] 4)將步驟1)中制得的孢子懸浮液按照100-200g/m2噴灑于步驟3)種植的花生種 子上，每日3次，時間為3-15天。
[0013] 進一步地，步驟1)的具體操作為：將核桃粉碎至直徑2-4mm的顆粒狀，再將黃曲霉 菌株在察氏培養基25-30 °C培養5天后，用無菌水配成質量濃度為0. 05-0. 5 X 10smg/mL的 溶液，按照每lmL黃曲霉菌株溶液噴灑于2g核桃顆粒上的量噴灑于適量的核桃顆粒上，產 生黃曲霉菌孢子后配成濃度為0. 05-0. 5X 10s個/mL的孢子懸浮液。
[0014] 進一步地，步驟2)所述的浸泡時間為8分鐘，浸泡溫度為40°C。
[0015] 進一步地，步驟3)中所述的縱向間隔為10cm、橫向間隔為25cm。
[0016] 進一步地，步驟4)中制得的孢子懸浮液按照150-170g/m2噴灑于步驟3)種植的 花生種子上，每日3次，時間為5-10天。
[0017] 再進一步地，步驟4)中制得的孢子懸浮液按照160g/m2噴灑于步驟3)種植的花 生種子上，每日3次，時間為9天。
[0018] 再進一步地，本發明使用的黃曲霉菌株為As 33. 2890(中國科學院微生物研究 所），使用的花生品種為黃淮海地區廣泛種植的魯花6號。
[0019] 本發明的有益效果：
[0020] 本發明的發明人經大量創造性勞動得到了一種花生種子的高侵染率的黃曲霉田 間侵染的方法，能夠便于后續探索出一些較好的、比較適用的方法來控制和預防花生種子 的黃曲霉侵染，可減少花生種子的黃曲霉侵染，有利于提高經濟作物的收益率。
【具體實施方式】
[0021] 下面結合實施例對本發明作進一步說明。實施例旨在對本發明進行舉例描述，而 非以任何形式對本發明進行限制。
[0022] 實施例1 :
[0023] 步驟1):將核桃粉碎至直徑2-4_的顆粒狀，再將黃曲霉菌株在察氏培養基30°C 培養5天后，用無菌水配成質量濃度為0. 25X 10smg/mL的溶液，按照每lmL黃曲霉菌株溶 液噴灑于2g核桃顆粒上的量噴灑于適量的核桃顆粒上，產生黃曲霉菌孢子后配成濃度為 0. 5 X 10s個/mL的孢子懸浮液；
[0024] 步驟2):將干燥健康的花生種子用質量濃度為0. 1 %的高錳酸鉀溶液浸泡5分鐘， 浸泡溫度為35 °C，用蒸餾水沖洗干凈后，使種子含水量恢復至20-25 % ;
[0025] 步驟3):將花生種子以縱向間隔5cm、橫向間隔20cm在土壤中進行種植；
[0026] 步驟4):將步驟1)中制得的孢子懸浮液按照100g/m2噴灑于步驟3)種植的花生 種子上，每日3次，時間為3天。
[0027] 實施例2 :
[0028] 步驟1):將核桃粉碎至直徑2-4mm的顆粒狀，再將黃曲霉菌株在察氏培養基30°C 培養5天后，用無菌水配成質量濃度為0. 25X 10smg/mL的溶液，按照每lmL黃曲霉菌株溶 液噴灑于2g核桃顆粒上的量噴灑于適量的核桃顆粒上，產生黃曲霉菌孢子后配成濃度為 0. 5 X 10s個/mL的孢子懸浮液；
[0029] 步驟2):將干燥健康的花生種子用質量濃度為0. 1 %的高錳酸鉀溶液浸泡15分 鐘，浸泡溫度為45 °C，用蒸餾水沖洗干凈后，使種子含水量恢復至20-25% ;
[0030] 步驟3):將花生種子以縱向間隔10cm、橫向間隔30cm在土壤中進行種植；
[0031] 步驟4):將步驟1)中制得的孢子懸浮液按照200g/m2噴灑于步驟3)種植的花生 種子上，每日3次，時間為15天。
[0032] 實施例3 :
[0033] 步驟1):將核桃粉碎至直徑2-4_的顆粒狀，再將黃曲霉菌株在察氏培養基30°C 培養5天后，用無菌水配成質量濃度為0. 25X 10smg/mL的溶液，按照每lmL黃曲霉菌株溶 液噴灑于2g核桃顆粒上的量噴灑于適量的核桃顆粒上，產生黃曲霉菌孢子后配成濃度為 0. 5 X 10s個/mL的孢子懸浮液；
[0034] 步驟2):將干燥健康的花生種子用質量濃度為0. 1 %的高錳酸鉀溶液浸泡8分鐘， 浸泡溫度為40 °C，用蒸餾水沖洗干凈后，使種子含水量恢復至20-25% ;
[0035] 步驟3):將花生種子以縱向間隔10cm、橫向間隔25cm在土壤中進行種植；
[0036] 步驟4):將步驟1)中制得的孢子懸浮液按照160g/m2噴灑于步驟3)種植的花生 種子上，每日3次，時間為9天。
[0037] 對比例1 :
[0038] 步驟1):將核桃粉碎至直徑8-10_的顆粒狀，再將黃曲霉菌株在察氏培養基30°C 培養5天后，用無菌水配成質量濃度為0. 25X 10smg/mL的溶液，按照每lmL黃曲霉菌株溶 液噴灑于2g核桃顆粒上的量噴灑于適量的核桃顆粒上，產生黃曲霉菌孢子后配成濃度為 0. 5 X 10s個/mL的孢子懸浮液；
[0039] 步驟2):將干燥健康的花生種子用質量濃度為0. 1 %的高錳酸鉀溶液浸泡15分 鐘，浸泡溫度為40 °C，用蒸餾水沖洗干凈后，使種子含水量恢復至20-25% ;
[0040] 步驟3):將花生種子以縱向間隔25cm、橫向間隔40cm在土壤中進行種植；
[0041] 步驟4):將步驟1)中制得的孢子懸浮液按照160g/m2噴灑于步驟3)種植的花生 種子上，每日3次，時間為10天。
[0042] 實施例4 :
[0043] 實施例1-3與對比例1得到的花生種子侵染率測定數據對比試驗：
[0044] 將花生種子取出用無菌水清洗并干燥，打碎，過20目篩，使用ELISA試劑盒進行檢 測，試驗結果如下表：
[0045] 表1花生種子侵染率
[0047] 由上表結果能夠看出，本發明通過大量創造性的勞動得到了高侵染率的花生種子 田間侵染方法及其具體參數，能夠方便高效的得到侵染黃曲霉菌的花生種子，能夠為后續 科學研究、鑒定提供便利，降低科研成本，減少科研人員的不必要的勞動，有利于
[0048] 上述實施例只是為了說明本發明的技術構思及特點，其目的是在于讓本領域內的 普通技術人員能夠了解本發明的內容并據以實施，并不能以此限制本發明的保護范圍。凡 是根據本
【發明內容】
的實質所作出的等效的變化或修飾，都應涵蓋在本發明的保護范圍內。
【主權項】
1. 一種田間侵染花生的方法，其特征在于，包括如下步驟： 1) 將黃曲霉菌株進行培養，培養后配成濃度為0. 05-0. 5X IO8個/mL的孢子懸浮液； 2) 將干燥健康的花生種子用質量濃度為0. 1 %的高錳酸鉀溶液浸泡5-15分鐘，浸泡溫 度為35-45 °C，用蒸餾水沖洗干凈后，使種子含水量恢復至20-25% ; 3) 將花生種子以縱向間隔5-10cm、橫向間隔20-30cm在土壤中進行種植； 4) 將步驟1)中制得的孢子懸浮液按照100_200g/m2噴灑于步驟3)種植的花生種子上， 每日3次，時間為3-15天。2. 如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1)的具體操作為：將核桃粉碎至直徑 2-4mm的顆粒狀，再將黃曲霉菌株在察氏培養基25-30°C培養5天后，用無菌水配成質量濃 度為0. 05-0. 5X 10smg/mL的溶液，按照每ImL黃曲霉菌株溶液噴灑于2g核桃顆粒上的量 噴灑于適量的核桃顆粒上，產生黃曲霉菌孢子后配成濃度為〇. 05-0. 5 X IO8個/mL的孢子 懸浮液。3. 如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)所述的浸泡時間為8分鐘，浸泡溫度 為 40°C。4. 如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3)中所述的縱向間隔為10cm、橫向間 隔為25cm。5. 如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟4)中制得的孢子懸浮液按照 150-170g/m2噴灑于步驟3)種植的花生種子上，每日3次，時間為5-10天。6. 如權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟4)中制得的孢子懸浮液按照160g/m2 噴灑于步驟3)種植的花生種子上，每日3次，時間為9天。
【專利摘要】本發明公開了一種田間侵染花生的方法。本發明將黃曲霉菌接種產生黃曲霉菌孢子，并使其侵染花生。本發明與現有技術相比，十分接近于田間花生生長環境，能夠真實的模擬花生種子在田間被黃曲霉侵染的環境，利于后續進行科學鑒定等研究工作，能夠提高鑒定結果的準確程度及其穩定性，對環境無污染。
【IPC分類】A01G7/06
【公開號】CN105230376
【申請號】CN201510771948
【發明人】不公告發明人
【申請人】青島友誠高新技術有限公司
【公開日】2016年1月13日
【申請日】2015年11月12日