小鼠燙傷模型的建立方法
【專利摘要】本發明屬于病理學【技術領域】，具體涉及小鼠燙傷模型的建立方法。本發明要解決的技術問題是為小鼠燙傷模型的建立提供一種新方法。本發明的技術方案是小鼠燙傷模型的建立方法，包括如下步驟：將小鼠麻醉，采用恒溫恒壓燙傷儀，在50～90℃的燙傷溫度對小鼠燙傷3s，燙傷壓力為500g。本發明簡單易行的建立了各種燙傷深度模型，為燒傷創面的治療提供了新的研究平臺。
【專利說明】小鼠燙傷模型的建立方法
【技術領域】[0001]本發明屬于病理學【技術領域】，具體涉及小鼠燙傷模型的建立方法。
【背景技術】
[0002]在燒傷創面感染和疤痕增生防治藥物的應用中，促進創面愈合非常關鍵，也是燒傷創面愈合的研究重點。燒傷創面修復的研究中，首先須建立一個穩定、規范的燒傷創面治療藥物藥效學評價的動物燙傷模型。一個理想、規范的燙傷模型有助于準確的研究燙傷后機體各系統及局部創面的發生、發展演變規律，探索針對性的治療措施。目前多采用恒溫水浴鍋、各種火焰、各種蒸汽制備燒(燙)傷創面模型，但存在諸多缺點，如致傷溫度不精確、燙傷深度不易控制、無法控制致傷壓力、致傷面積不易精確、致傷深度不均勻等，對于燒傷創創面修復相關研究影響極大，相關報道燙傷的實驗條件差異較大，穩定性差，不能作為通用標準。有關燒傷動物模型的制作，文獻報道有多種致傷方法，如輻射法、燃燒法和熱水燙傷法等。輻射法優點是簡易且清潔，致傷所需時間較短；若嚴格控制致傷條件，重復性較好，但該法易受擬燒傷區是否平坦、電壓是否恒定及實驗動物在非麻醉狀態下所致的體位改變等因素的影響，創面深度可出現深淺不一。燃燒法簡單易行，將燃料如凝固汽油，無水酒精等涂布于擬致傷區域；燃燒一段時間后滅火。由于其在實驗動物的非麻醉狀態下實行，可增加由于動物掙扎而產生的意外，同時引發休克；由于操作不當可導致創面感染及創面摩擦而創面加深。熱水燙傷法大都采用恒溫恒壓水浴鍋，但其缺點為致傷面積不易精確；致傷溫度不易精確；無法控制致傷壓力，致傷深度不均勻。

【發明內容】

[0003]本發明要解決的技術問題是為小鼠燙傷模型的建立提供一種新方法。
[0004]本發明的技術方案是小鼠燙傷模型的建立方法，包括如下步驟:將小鼠麻醉，采用恒溫恒壓燙傷儀，在50~90°C的燙傷溫度對小鼠燙傷3s，燙傷壓力為500g。
[0005]具體的，燙傷面積<小鼠體表面積的5%，選擇小鼠兩后腿中間部背部皮膚為燙傷創面。
[0006]具體的，小鼠背部脫毛采用8%的硫化鈉，脫毛后24小時進行燙傷。
[0007]具體的，小鼠麻醉方法為，用1%戊巴比妥鈉按60mg/kg體重進行腹腔注射。
[0008]其中，所述的燙傷溫度為55°C，得到I度燙傷模型。
[0009]其中，所述的燙傷溫度為60-65°C，得到淺II度燙傷模型。
[0010]其中，所述的燙傷溫度為70-75°C，得到深II度燙傷模型。
[0011]其中，所述的燙傷溫度為80-90°C，得到III度燙傷模型。
[0012]本發明的有益效果:本發明方法具有燙傷面積、深度控制準確，操作簡便、重復性好的優點，簡單易行的建立了各種燙傷深度模型。本發明為燒傷創面的治療提供了新的研究平臺，具有廣闊的應用前景。【專利附圖】

【附圖說明】
[0013]圖1YLS-5Q臺式超級控溫燙傷儀示意圖；
[0014]圖2成年健康小鼠背部正常皮膚組織切片HE染色示意圖。圖片放大倍數為200倍。
[0015]圖3燙傷溫度為50°C時表皮層細胞核無明顯嗜堿性改變，蘇木素染色均一，細胞膜完整，細胞無明顯腫脹、溶解現象，創周無明顯炎癥反應。燙傷溫度為55°C時表皮層細胞核嗜堿性改變，與真皮層比較表皮層HE染色偏弱，表皮層細胞細胞膜不完整，部分細胞出現溶解現象，部分生發層無明顯損傷表現，符合I度燙傷模型。圖片放大倍數為200倍。
[0016]圖4燙傷溫度為60°C時整個表皮層和部分真皮乳頭層細胞核嗜堿性改變，細胞膜不完整，部分細胞出現溶解現象，細胞死亡明顯；燙傷溫度為65°C時損傷深度加深，侵及毛囊、汗腺等皮膚附件，但仍殘余部分毛囊、汗腺等皮膚附件無明顯損傷；因此燙傷溫度為60~65°C時燙傷符合淺II度燙傷模型。圖片放大倍數為200倍。
[0017]圖5燙傷溫度為70~75°C時皮膚組織層次性稍紊亂，毛囊及汗腺等皮膚附件大部分損傷，但仍可見局部殘留部分網狀層及部分毛囊組織，符合深II度燙傷模型。圖片放大倍數為200倍。
[0018]圖6燙傷溫度為80~90°C時皮膚組織層次性紊亂，毛囊及汗腺等皮膚附件組織損傷殆盡，無明顯殘留，發生嚴重炎癥反應，炎癥細胞侵蝕，部分皮膚組織缺失，符合III度燙傷模型。圖片放大倍數為200倍。
【具體實施方式】·
[0019]本發明中，采用超衡溫燙傷儀建立成年C57bl/6小鼠燙傷模型，通過溫度和時間兩個因素控制燙傷的深度，進行病理切片做組織學檢查，判定燙傷的深度。經研究發現，在相同燙傷時間為3秒不同燙傷溫度下，隨著燙傷溫度的增加，24h取材HE切片中表皮細胞細胞核嗜堿性改變，發生細胞核溶解現象，細胞核由深藍色逐漸變淺，高溫時表皮壞死，毛囊鞘上皮細胞破壞；真皮深層血管擴張明顯，真皮深層膠原纖維明顯腫脹，真皮層大量淋巴及單核細胞浸潤。采用現國內普遍使用的中國九分法估計燒傷深度，結果表明:采用臺式超級控溫燙傷儀在相同燙傷時間下，I度燙傷模型的燙傷溫度以55°C為佳；淺II度燙傷模型的燙傷溫度優選為60~65°C ;深II度燙傷模型的燙傷的優選溫度為70~75°C JII度燙傷模型的燙傷溫度以80~90°C為佳。
[0020]實驗性燒/燙傷的損傷程度主要取決于致傷溫度、致傷面積、致傷壓力，為此本發明采用恒溫恒壓燙傷儀，其特點是:1、溫度控制:該燙傷儀具有精確的控溫系統，將儀器燙頭的表面溫度控制在±0.1度；最大限度地提高燙頭的容溫性，保證燙頭接觸動物皮膚后溫降達到最小值；2、時間控制，儀器計時精確到0.01s，并有了自動開始計時和計時結束自動報警提示功能；3、燙頭觸壓力控制:該燙傷儀器設計了觸壓力調整結構，可根據動物的不同，選擇不同的觸壓力。該儀器達到了制作理想燙傷制模較理想的要求，在實際的使用中也確實達到了燙傷深度的可控性和燙傷模型的一致性。本發明采用恒溫恒壓燙傷儀下以相同燙傷時間及壓力，控制燙傷溫度來觀察燙傷創面深度，以建立各種燙傷深度模型；具有燙傷面積、深度控制準確，操作簡便、重復性好的優點。
[0021]下述實施例中使用的主要的儀器見表1。[0022]表1下述實施例使用的主要儀器
[0023]
【權利要求】
1.小鼠燙傷模型的建立方法，其特征在于:包括如下步驟:將小鼠麻醉，采用恒溫恒壓燙傷儀，在50~90°C的燙傷溫度對小鼠燙傷3s，燙傷壓力為500g。
2.根據權利要求1所述的小鼠燙傷模型的建立方法，其特征在于:燙傷面積<小鼠體表面積的5%，選擇小鼠兩后腿中間部背部皮膚為燙傷創面。
3.根據權利要求1或2所述的小鼠燙傷模型的建立方法，其特征在于:小鼠背部脫毛采用8%的硫化鈉，脫毛后24小時進行燙傷。
4.根據權利要求1~3任一項所述的小鼠燙傷模型的建立方法，其特征在于:小鼠麻醉方法為，用1%戊巴比妥鈉按60mg/kg體重進行腹腔注射。
5.根據權利要求1~4所述的小鼠燙傷模型的建立方法，其特征在于:所述的燙傷溫度為55°C，得到I度燙傷模型。
6.根據權利要求1~4所述的小鼠燙傷模型的建立方法，其特征在于:所述的燙傷溫度為60~65°C，得到淺II度燙傷模型。
7.根據權利要求1~4所述的小鼠燙傷模型的建立方法，其特征在于:所述的燙傷溫度為70~75°C，得到深II度燙傷模型。
8.根據權利要求1~4所述的小鼠燙傷模型的建立方法，其特征在于:所述的燙傷溫度為80~90°C，得到III度 燙傷模型。
【文檔編號】A61D1/00GK103735334SQ201410033402
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2014年1月24日 優先權日:2014年1月24日
【發明者】詹日興, 羅高興, 吳軍 申請人:中國人民解放軍第三軍醫大學第一附屬醫院