一種hla-dqbi常規基因剔除實驗小鼠模型的建立方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及到基因剔除研宄的新用途，特別是一種HLA-DQBI基因剔除實驗小鼠模型的建立方法。
【背景技術】
[0002]基因剔除提出技術既可以細胞水平上進行，從而建立新的細胞系，也可以在整體水平行以建立基因剔除動物，通過觀察個體的表型變化，推測基因在體內的可能功能，HLA-DQBI基因剔除動物模型，不僅為變應性鼻炎、支氣管哮喘、精神分裂癥、擴張型心肌病、多發性硬化癥、孕婦反復流產、慢性乙型肝炎、肺結核等免疫性疾病及宮頸癌等惡性腫瘤相關疾病闡明發病機制、同時也為相關疾病發病機制的闡明提供了良好的途徑。為闡明以上疾病的發病機制和對以上疾病的基因治療和發展特異性藥物療法提供一定基礎，也有報道指出有些疾病與種族遺傳有關，進而闡明疾病臨床表型多樣性的本質，為臨床個體化治療提供一定依據，同時也為我國群體多態性研宄、人類學研宄、疾病相關性研宄等提供有價值的科學遺傳依據。
【發明內容】
[0003]為了克服以上技術缺陷，本發明提供一種HLA-DQBI常規基因剔除動物模型的建立方法。
[0004]本發明解決其技術問題所采用的技術方案為，一種HLA-DQBI常規基因剔除實驗小鼠模型的建立方法，包括以下步驟:
[0005](I)通過對129/SV種系小鼠進行基因型鑒定；
[0006](2)應用PCR和Southern-bloting對提取的DNA進行測序和篩選，確定實驗小鼠；
[0007](3)采用Neo Cassette基因替換與ES細胞基因剔除技術結合進行目的常規基因剔除；
[0008](4)構建HLA-DQBI基因剔除小鼠模型。
[0009]所述129/SV種系小鼠是在所有小鼠飼養于下述SPF環境中，室內溫度控制在22°C?26°C，濕度50%?65%，光照控制12h明/12h暗；小鼠籠盒、墊料、飲用水均經高溫高壓滅菌處理；飼料為經印Co輻照滅菌的全營養飼料。飼養過程中，每天進入動物房I次，觀察小鼠生長情況并記錄小鼠的質量變化情況；每周更換兩次墊料并補充食物和水。采用H2-ebl+/_雄性小鼠與雌性小鼠按1:1比例間歇同籠兄妹近親繁殖方法繁殖，連續生產3-4胎，子鼠3周后離乳，離乳后種鼠亦同籠交配，H2-ebl基因剔除小鼠采用純合子交配繁殖。
[0010]所述常規基因剔除是通過基因打靶，把需要剔除的基因的幾個重要的外顯子或者功能區域用Neo Cassette替換掉，這樣的小鼠其全身所有的組織和細胞中都不表達該基因產物。此類基因剔除鼠一般用于研宄某個基因在對小鼠全身生理病理的影響，而且這個基因沒有胚胎致死性。
[0011]本發明所帶來的的有益效果是:本發明在研宄疾病發病機制中主要是應用基因剔除技術，HLA-DQBl位于人類白細胞抗原(human lymphocyte antigen，HLA) II類基因DQ座位點，屬于經典的HLAII類基因范疇，具基因多態性，與抗原處理和提呈有關。研宄發現，HLA-DQBl與變應性鼻炎、支氣管哮喘、精神分裂癥、擴張型心肌病、多發性硬化癥、孕婦反復流產、慢性乙型肝炎、肺結核等免疫性疾病及宮頸癌等惡性腫瘤相關，具體機制仍未闡明，因而構建HLA-DQB1，不僅為闡明AR發病機制、同時也為相關疾病發病機制的闡明提供了良好的途徑。
【具體實施方式】
[0012]—種HLA-DQBI常規基因剔除實驗小鼠模型的建立方法，包括以下步驟:
[0013](I)通過對129/SV種系小鼠進行基因型鑒定；
[0014](2)應用PCR和Southern-bloting對提取的DNA進行測序和篩選，確定實驗小鼠；
[0015](3)采用Neo Cassette基因替換與ES細胞基因剔除技術結合進行目的常規基因剔除；
[0016](4)構建HLA-DQBI基因剔除小鼠模型。
[0017]所述129/SV種系小鼠是在所有小鼠飼養于下述SPF環境中，室內溫度控制在22°C?26°C，濕度50%?65%，光照控制12h明/12h暗；小鼠籠盒、墊料、飲用水均經高溫高壓滅菌處理；飼料為經印Co輻照滅菌的全營養飼料。飼養過程中，每天進入動物房I次，觀察小鼠生長情況并記錄小鼠的質量變化情況；每周更換兩次墊料并補充食物和水。采用H2-ebl+/_雄性小鼠與雌性小鼠按1:1比例間歇同籠兄妹近親繁殖方法繁殖，連續生產3-4胎，子鼠3周后離乳，離乳后種鼠亦同籠交配，H2-ebl基因剔除小鼠采用純合子交配繁殖。
[0018]所述常規基因剔除是通過基因打靶，把需要剔除的基因的幾個重要的外顯子或者功能區域用Neo Cassette替換掉，這樣的小鼠其全身所有的組織和細胞中都不表達該基因產物。此類基因剔除鼠一般用于研宄某個基因在對小鼠全身生理病理的影響，而且這個基因沒有胚胎致死性。
[0019]本發明在研宄疾病發病機制中主要是應用基因剔除技術，HLA-DQBl位于人類白細胞抗原(human lymphocyte antigen，HLA) II類基因DQ座位點，屬于經典的HLA II類基因范疇，具基因多態性，與抗原處理和提呈有關。研宄發現，HLA-DQBl與變應性鼻炎、支氣管哮喘、精神分裂癥、擴張型心肌病、多發性硬化癥、孕婦反復流產、慢性乙型肝炎、肺結核等免疫性疾病及宮頸癌等惡性腫瘤相關，具體機制仍未闡明，因而構建HLA-DQBl，不僅為闡明AR發病機制、同時也為相關疾病發病機制的闡明提供了良好的途徑。
[0020]本發明不局限于上述實施方式，任何人應得知在本發明啟示下做出的結構變化所得出的相同或相近的技術方案，均落入本發明的保護范圍之內。
[0021]本發明未詳細描述的技術、形狀、構造部分均為公知技術。
【主權項】
1.一種HLA-DQBI常規基因剔除實驗小鼠模型的建立方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)通過對129/SV種系小鼠進行基因型鑒定； (2)應用PCR和Southern-bloting對提取的DNA進行測序和篩選，確定實驗小鼠； (3)采用NeoCassette基因替換與ES細胞基因剔除技術結合進行目的常規基因剔除； (4)構建HLA-DQBI基因剔除小鼠模型。
2.如權利要求1所述的HLA-DQBI常規基因剔除實驗小鼠模型的建立方法，其特征在于，所述129/SV種系小鼠是在所有小鼠飼養于下述SPF環境中，室內溫度控制在22°C?26°C，濕度50%?65%，光照控制12h明/12h暗；小鼠籠盒、墊料、飲用水均經高溫高壓滅菌處理；飼料為經印Co輻照滅菌的全營養飼料；飼養過程中，每天進入動物房I次，觀察小鼠生長情況并記錄小鼠的質量變化情況；每周更換兩次墊料并補充食物和水；采用H2-ebl+/_雄性小鼠與雌性小鼠按1:1比例間歇同籠兄妹近親繁殖方法繁殖，連續生產3-4胎，子鼠3周后離乳，離乳后種鼠亦同籠交配。
3.如權利要求1所述的HLA-DQBI常規基因剔除實驗小鼠模型的建立方法，其特征在于，所述常規基因剔除是通過基因打靶，把需要剔除的基因的幾個重要的外顯子或者功能區域用Neo Cassette替換掉，這樣的小鼠其全身所有的組織和細胞中都不表達該基因產物。
【專利摘要】本發明公開了一種HLA-DQBI常規基因剔除實驗小鼠模型的建立方法，包括以下步驟：(1)通過對129/SV種系小鼠進行基因型鑒定；(2)應用PCR和Southern-bloting對提取的DNA進行測序和篩選，確定實驗小鼠；(3)采用Neo？Cassette基因替換與ES細胞基因剔除技術結合進行目的常規基因剔除；(4)構建HLA-DQBI基因剔除小鼠模型。本發明所帶來的有益效果是：不僅為闡明AR發病機制、同時也為相關疾病發病機制的闡明提供了良好的途徑。
【IPC分類】A01K67-027, C12N15-873
【公開號】CN104561100
【申請號】CN201410811894
【發明人】張華 , 李林格, 呂靚
【申請人】張華 , 李林格, 呂靚
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2014年12月24日