專利名稱：一種人干細胞的免疫缺陷鼠移植模型的構建方法
技術領域：
本發明涉及一種生物技術方法，尤其是一種提高人的干細胞(HSCs)在免疫缺陷鼠移植模型中植入率的人干細胞的免疫缺陷鼠移植模型的構建方法。
背景技術：
NOD/SCID (Non-obese diabetic severe combined immunodeficiency)即非肥胖型糖尿病/重癥聯合免疫缺陷鼠，是SCID (重癥聯合免疫缺陷)鼠與NOD (非肥胖性糖尿病)鼠反交產生的免疫缺陷鼠。是目前最為普遍使用的免疫缺陷鼠模型，該鼠既擁有SCID鼠的特征，缺乏功能性的T、B淋巴細胞，細胞和體液雙重免疫缺陷，同時又擁有NOD鼠具備的多種固有免疫缺陷，包括NK細胞及補體活性低下，髓系細胞的發展和功能受限等特點，因此適宜人源細胞的移植。N0D/SCID小鼠模型在人類血液病以及干細胞移植研究中發揮了重要的作用，通過將人的干細胞移植于經過預處理的N0D/SCID小鼠體內，來檢測移植成功與否，為臨床和科學研究提供了重要依據。但是，N0D/SCID鼠也有許多缺點(1)仍有低水平的NK細胞活性，不同的主要組織相容性位點，完整的融細胞功能如NK細胞穿孔素分子的功能表達，不到10%的N0D/SCID鼠會發生免疫逃逸，產生B淋巴細胞和T淋巴細胞，這些殘存的免疫反應將不利于人細胞的植入；(2)N0D/SCID小鼠中人造血干細胞移植的微環境并不清楚，大部分為小鼠源性的，人干細胞由于缺乏對小鼠細胞因子的交叉反應不能利用小鼠的造血細胞因子，同時缺乏與合適的黏附分之間的相互作用將繼續阻礙人造血干細胞的植入和生存。這些因素都使得該小鼠模型中人干細胞的植入率較低，使其應用受到了很多的局限性。近年來，為了提高人干細胞的植入率，研究者們做出了很多努力，包括(1)給受體小鼠注射CD122抗體減少N0D/SCID小鼠體內殘留的NK細胞活性；(2)將較大劑量的人骨髓細胞和細胞因子同時移植；(3)采用髓腔移植的方法進行移植。但是這些方法除了對小鼠的創傷較大以外，所用的抗體和細胞因子的價格都比較昂貴，僅能局限于一些科研實驗室的研究，不適宜臨床和科研實驗的廣泛應用。通過流式細胞儀檢測發現，N0D/SCID小鼠與其它普通品系的小鼠相比，骨髓細胞中的活性氧(Reactive Oxygen Species,R0S)水平較高(如圖I所示)。活性氧是氧的某些代謝產物和一些反應的含氧物，是體內重要的自由基，主要包括超氧陰離子(O2-)、羥自由基(0H ·)和過氧化氫(H2O2)等。在細胞內的一系列生理活動如調控細胞的增殖、分化、衰老及凋亡中發揮信號分子的作用。近年來，大量的研究結果表明，過多聚積的活性氧可通過多途徑誘發膜脂質過氧化鏈式反應，造成生物膜和DNA的損傷，從而誘導細胞凋亡。HSCs能夠維持在細胞周期的靜止期(G0期)，保持其非分裂狀態，與其所處的微環境(niche)有重要的聯系。最近的研究報道顯示，HSCs大都位于低氧的微環境中，這對于·HSCs各種功能(如自我更新、GO期的維持)至關重要。N0D/SCID小鼠骨髓微環境中過多聚積的ROS不利于人HSCs的植入，因此，本發明在移植前對受體小鼠進行抗氧化處理，降低其體內的ROS水平，給人的HSCs的植入提供更多和更適宜的微環境以提高HSCs的植入率。

發明內容
本發明針對移植的受體小鼠(N0D/SCID)骨髓微環境中氧代謝的特征，采用抗氧化的方法建立了一種提高人干細胞在免疫缺陷鼠移植模型中植入率的人干細胞的免疫缺陷鼠模型的構建方法，這種方法明顯的提高了人HSCs的植入率，成功率高，小鼠受創較小，費用低廉，簡單易實施，降低了 N0D/SCID廣泛應用于移植實驗的各種障礙，為提高人造血干細胞移植的臨床效果提供了新的思路。本發明采用的技術方案是一種人干細胞的免疫缺陷鼠(N0D/SCID)移植模型的構建方法，包括如下步驟移植前采用抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸對受體小鼠(N0D/SCID)進行腹腔注射，同時給予受體小鼠含N-乙酰半胱氨酸(NAC)的飲水，將人的干細胞移植后，繼續給予受體小鼠含N-乙酰半胱氨酸的飲水，即得該人干細胞的免疫缺陷鼠移植模型。優選地，所述對受體小鼠進行腹腔注射的抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸的使用濃度·為 50-200mg/kg，更優選為 100mg/kg。優選地，所述抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸腹腔注射處理的時間點為移植前14天，方
式為每隔一天一次。優選地，所述含N-乙酰半胱氨酸的飲水中N-乙酰半胱氨酸的濃度為O. 5-5mg/ml,更優選為lmg/ml。優選地，所述的干細胞移植為將人的干細胞通過受體小鼠的尾靜脈或脛骨的髓腔進行移植。更具體地，該人干細胞的免疫缺陷鼠(N0D/SCID)移植模型的構建方法，包括如下步驟在移植人的干細胞前14天用抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸對受體小鼠(N0D/SCID)進行腹腔注射，N-乙酰半胱氨酸使用濃度為100mg/kg，每隔一天一次，同時給予受體小鼠含N-乙酰半胱氨酸lmg/ml的飲水，以降低受體小鼠骨髓中的活性氧水平；對受體小鼠進行137Cs源亞致死劑量照射，劑量2. OGy，劑量率為0. 7Gy/min，照射后24小時內將人的干細胞通過受體小鼠的尾靜脈或脛骨的髓腔進行移植，移植后繼續給予受體小鼠含N-乙酰半胱氨酸lmg/ml的飲水，即得該人干細胞的免疫缺陷鼠移植模型。本發明還提供了應用上述方法構建的人干細胞的免疫缺陷鼠移植模型，該模型應屬于本發明的保護范圍之內。本發明還提供了上述人干細胞的免疫缺陷鼠移植模型在人干細胞移植研究中的應用。本發明的有益效果是本發明針對移植的受體小鼠(N0D/SCID)骨髓微環境中氧代謝的特征(R0S水平較高)，采用抗氧化的方法優化人干細胞植入的微環境，方法新穎，有針對性；采用的腹腔注射抗氧化劑和在小鼠飲水中加入抗氧化劑的方法降低小鼠體內的活性氧水平，改善了以往人們為提高人HSCs植入率使用的一些過程比較復雜的方式。本發明成功建立了 N0D/SCID小鼠移植的優化模型，通過本發明的方法，使用抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸適度清除N0D/SCID小鼠體內的ROS，無論是在尾靜脈還是髓腔移植時都有效的提高了人干細胞的植入率，移植過程中小鼠死亡率低，狀態佳，可以長期存活。該方法簡單，新穎，易實施，對小鼠的創傷小，且該方法使用的抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸價格低廉，該方法把人的造血干細胞的研究引入了更深的層次，從而更快的促進人的造血干細胞移植方面的研究，也為今后NOD/SCID小鼠移植模型廣泛的應用于臨床和科學研究提供了新的思路。


圖I是實施例4中N0D/SCID小鼠經NAC處理組與對照組N0D/SCID小鼠未經NAC處理組、普通品系的小鼠B6. SJL和BALB/C，檢測到的小鼠骨髓細胞中的活性氧水平的對比圖。圖2是本發明采用尾靜脈移植的方法，對使用抗氧化劑處理后(NAC+)和不使用抗氧化劑處理(NAC-)的N0D/SCID小鼠檢測到的人干細胞在小鼠骨髓和脾臟中的植入率的流式圖。圖3是本發明采用髓腔移植的方法，對使用抗氧化劑處理后(NAC+)和不使用抗氧化劑處理(NAC-)的N0D/SCID小鼠檢測到的人干細胞在小鼠注射側脛骨骨髓(IT)，對側骨髓(BM)和脾臟(SP)中的植入率的流式圖。圖4是本發明采用極限稀釋的方法，在使用抗氧化劑處理N0D/SCID小鼠后檢測到的人干細胞在小鼠骨髓和脾臟中的植入率的結果圖。
具體實施例方式下面結合附圖和具體實施例對本發明作進一步詳細說明，但不限定本發明的保護范圍。實施例I一種人干細胞的免疫缺陷鼠(N0D/SCID)移植模型的構建方法(提高人干細胞在免疫缺陷鼠移植模型中植入率的方法)，包括如下步驟I)取N0D/SCID小鼠8周齡，雌性，飼養于SPF級無菌室內，飼料、飲水及墊料均高壓滅菌，移植前14天用抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸(100mg/kg)對實驗組小鼠進行腹腔注射，每隔一天一次，同時在實驗組小鼠的飲水中加入N-乙酰半胱氨酸，N-乙酰半胱氨酸的濃度為lmg/ml，以降低小鼠骨髓中的活性氧水平，對受體小鼠進行137Cs源亞致死劑量照射，劑量2. OGy，劑量率為O. 7Gy/min,小鼠照射后24小時內將收集到的人⑶34+細胞通過小鼠的尾靜脈移植，移植細胞數量為5. 0-6.7X105個/只。移植后繼續給予實驗組小鼠含N-乙酰半胱氨酸lmg/ml的飲水；即得人干細胞的免疫缺陷鼠(N0D/SCID)移植模型。移植后12至14周用流式細胞術檢測小鼠骨髓和脾臟中人⑶45+、⑶45+⑶33+、⑶45+⑶19+細胞的百分比。對比例I實施例I的對照組N0D/SCID小鼠在移植前14天，腹腔注射磷酸鹽緩沖液，每隔一天一次，同時給予普通無菌水飲水，人干細胞移植后，仍給予普通無菌水飲水。其他條件同實施例I的條件。實施例I、對比例I尾靜脈移植后的檢測方法及結果如下移植后12至14周，將小鼠脫頸處死，分別收集小鼠骨髓和脾臟細胞I X IO6個，用染色緩沖液洗滌后重懸，加入人抗體CD45-PE-Cy7，CD33-Percp-Cy5. 5，CD19_PE，4°C避光孵育30分鐘，用2ml染色緩沖液洗滌I遍，用流式細胞術檢測并比較兩組小鼠骨髓和脾臟中人⑶45+、⑶45+⑶33+、⑶45+⑶19+細胞的百分比。結果如圖2所示，從圖2中可以看出，實施例I實驗組(NAC+)小鼠骨髓和脾臟中人干細胞的植入率較對比例I對照組(NAC-)明顯提高骨髓(NAC-組11. 04±3· 11%, NAC+ 組23. 21 ±4. 0%, ρ=0· 0224 ；η=20);脾臟(NAC-組2. 63±0· 74%,NAC+:8. 56±1· 82%,ρ=0. 0055 ;η=20)，實驗組小鼠骨髓和脾臟的植入率較對照組分別高2. I和3. 3倍，各組移植的人⑶34+細胞植入受體小鼠后均能夠多向分化為髓系細胞(⑶45+⑶33+)和淋巴系細胞(⑶45+⑶19+)，且大部分偏向B淋巴系分化。實施例2一種人干細胞的免疫缺陷鼠(N0D/SCID)移植模型的構建方法(提高人干細胞在免疫缺陷鼠移植模型中植入率的方法)，包括如下步驟I)取N0D/SCID小鼠8周齡，雌性，飼養于SPF級無菌室內，飼料、飲水及墊料均·高壓滅菌，移植前14天用抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸(100mg/kg)對實驗組小鼠進行腹腔注射，每隔一天一次，同時在實驗組小鼠的飲水中加入N-乙酰半胱氨酸，N-乙酰半胱氨酸的濃度為lmg/ml，以降低小鼠骨髓中的活性氧水平，對受體小鼠進行137Cs源亞致死劑量照射，劑量2. OGy,劑量率為O. 7Gy/min,小鼠照射后24小時內采用腹腔注射戊巴比妥鈉(50mg/kg)的方法麻醉小鼠，將流式分選的人Lin-CDSA+CDSS-aMSRA-CDgO+aMgf+Rho1 干細胞通過小鼠的脛骨進行髓腔移植，移植細胞數量為100，50，20，10個/組。移植后繼續給予小鼠N-乙酰半胱氨酸飲水(lmg/ml)，即得人干細胞的免疫缺陷鼠(N0D/SCID)移植模型。移植后12至14周用流式細胞術檢測檢測小鼠骨髓和脾臟中人CD45+、CD45+CD33+、CD45+CD19+ 細胞的百分比。對比例2實施例2的對照組N0D/SCID小鼠在移植前14天，腹腔注射磷酸鹽緩沖液，每隔一天一次，同時給予普通無菌水飲水，人干細胞移植后，仍給予普通無菌水飲水。其他條件同實施例2的條件。實施例2、對比例2髓腔移植后的檢測方法及結果如下移植后12至14周，將小鼠脫頸處死，分別收集小鼠注射側脛骨骨髓(IT)，對側骨髓(BM)和脾臟(SP)細胞I X IO6個，用染色緩沖液洗滌后重懸，加入人抗體⑶45-PE-Cy7，CD33-Percp-Cy5. 5，CD19_PE，4°C避光孵育30分鐘，用2ml染色緩沖液洗滌I遍，用流式細胞術檢測并比較兩組小鼠中人⑶45+、⑶45+⑶33+、⑶45+⑶19+細胞的百分比。結果如圖3所示，從圖3中可以看出，采用髓腔移植的方法移植人的Lin-⑶34+⑶38-⑶45RA-⑶90+⑶49f+Rh01<)W干細胞，實施例2實驗組(NAC+)小鼠注射側脛骨骨髓(IT)，對側骨髓(BM)和脾臟(SP)中人干細胞的植入率較對比例2的對照組(NAC-)明顯提高IT(NAC-組2. 3±0· 89 %，NAC+ 組5· 85±1· 48 %，p=0. 0436 ；n=29) ；BM(NAC-組0· 78±0· 4 %，NAC+組2· 75±0· 8 %，ρ=0. 0352 ；n=29) ；SP(NAC-組0· 17±0· 11 %，NAC+ 組0· 96±0· 34 %，P=O. 0317 ;η=29)，實施例2實驗組小鼠IT，BM和SP中的植入率分別較對比例2對照組高2.5，3. 5 和 5. 7 倍，各組移植的人 Lin-CD34+CD38-CD45RA-CD90+CD49f+RholOT干細胞植入受體小鼠后均能夠多向分化為髓系細胞(⑶45+⑶33+)和B淋巴系細胞(⑶45+⑶19+)，且大部分偏向B淋系分化。實施例3 采用極限稀釋的方法，改變實施例2、對比例2中的移植細胞數量，其他條件不變，移植細胞數量為100，50，20，10個/組。如圖4所示，根據泊松分布的原理計算出在使用抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸處理后，N0D/SCID小鼠注射側脛骨骨髓(IT)，對側骨髓(BM)和脾臟(SP)中人SCID再植細胞(SCID-repopulating cell, SRC)出現的概率分別為1/36，1/50，1/57 ;對照組分別為1/108，1/203，1/448。說明在使用抗氧化劑處理后的N0D/SCID小鼠對于檢測人SCID再植細胞的敏感度分別提高3. 0,4. I和7. 9倍。實施例4 N0D/SCID小鼠骨髓細胞活性氧水平檢測NOD/SCID、B6. SJL和BALB/C小鼠8周齡，雌性，飼養于SPF級無菌室內，飼料、飲水及墊料均高壓滅菌。實驗組(NOD/SCID NAC處理組)用抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸(100mg/kg)對NOD/SCID小鼠進行腹腔注射，每隔一天一次，同時在小鼠的飲水中加入N-乙酰半胱氨酸(lmg/ml)，以降低小鼠骨髓中的活性氧水平。對照組包括三組B6.SJL、BALB/C、NOD/SCID。對照組小鼠腹腔注射PBS緩沖液，每隔一天一次，小鼠給予普通無菌水作為飲水。兩周后將小鼠脫頸處死，沖出骨髓細胞，收集IXlO6細胞用PBS洗滌后，加入雙氫-乙酰乙酸二氯熒光黃(DCFH-DA)液，終濃度5 μ M，37°C避光孵育20分鐘，PBS洗滌3次，用流式細胞儀檢測，DCFH-DA自由擴散進入細胞后被酯酶催化變成DCFH，在活性氧存在的情況下被氧化成DCF，DCF的熒光強度與細胞內的活性氧水平成正比，因此各組小鼠骨髓細胞中DCF的平均熒光強度，即為活性氧水平，DCF激發波長488nm，吸收波長525nm。 如圖I所示，在同等實驗條件下，與B6. SJL和BALB/C小鼠相比，N0D/SCID小鼠骨髓細胞中的 ROS 水平要高(B6. SJL 38. 49±2. 78，BALB/C 55. 42±3. 26，N0D/SCID 566. 5±32· 47，N=6 ；p < O. 0001)。NOD/SCID小鼠用NAC處理后，N0D/SCID小鼠骨髓細胞中ROS水平明顯降低(對照組566. 5±32. 47，NAC 處理組:108. 2±7. 85，n=6 ；p < O. 0001)。實施例5人⑶34+細胞富集方法健康妊娠新生兒臍血，取自天津中心婦產醫院，無菌操作采集，方法如下(I).將新鮮臍血分裝于無菌的血漿瓶中，以臍血HES(羥乙基淀粉)= (5:1)的體積比加入HES，充分混勻，室溫靜置40分鐘以沉降紅細胞。(2).將去除紅細胞的臍血液體30ml緩慢加到15ml的Ficoll液上，不要破壞界面,盡量多加。離心，20°C,2000rpm，20分鐘,去剎閘。(3).吸棄一部分上清后小心收集單個核細胞層(白膜層)于含有IOml的緩沖液(PBS+0. 2mM-EDTA+0. 5% FBS)的離心管中，充分混勻，離心，20°C，1600rpm，10 分鐘。(4).棄上清,每管用40ml的緩沖液重懸,充分混勻后計數。離心,20°C, 1200rpm,10分鐘。(5).棄上清，每IO8細胞用300 μ I的緩沖液重懸。
(6).每IO8細胞加入100 μ I的Fc-R阻斷劑，避光。(7).每IO8細胞再加入100 μ I的CD34+Microbeads，充分混勻后4°C避光孵育30分鐘。(8).孵育結束后，每IO8細胞用40ml緩沖液洗一遍，1500rpm, 10分鐘。(9).棄上清，每IO8細胞用500 μ I緩沖液重懸。安裝LS柱，3ml緩沖液潤柱，3遍。(10).逐滴加入細胞懸液，梯度磁場中通過,用3ml緩沖液洗柱，3遍。(11).將柱子移除磁場，放在收集管上，加入5ml緩沖液，用活塞快速推出細胞，計數，調整細胞濃度為I X 106/ml，凍存。實施例6 人 Lin-CD34+CD38-CD45RA-CD90+CD49f+Rhol231(W 干細胞的富集健康妊娠新生兒臍血，取自天津中心婦產醫院，無菌操作采集，方法如下·(I).將新鮮臍血分裝于無菌的血漿瓶中，以臍血HES(羥乙基淀粉)= (5:1)的體積比加入HES，充分混勻，室溫靜置40分鐘以沉降紅細胞。(2).將去除紅細胞的臍血液體30ml緩慢加到15ml的Ficoll液上，不要破壞界面,盡量多加。離心，20°C,2000rpm，20分鐘,去剎閘。(3).吸棄一部分上清后小心收集單個核細胞層(白膜層)于含有IOml的緩沖液的離心管中，充分混勻，離心，20°C，1600rpm，10分鐘。(4).棄上清，每管用40ml的緩沖液重懸，充分混勻后計數。離心，20°C，1200rpm，10分鐘。(5).棄上清，每IO8細胞用400 μ I的緩沖液重懸。(6).每 IO8 細胞加入 100 μ I 的 Biotin-Antibody Cocktail,充分混勻后 4°C避光
孵育10分鐘。(7).孵育結束后，每IO8細胞用IOml的緩沖液洗一遍，離心，1500rpm, 10分鐘。(8).棄上清，每IO8細胞用800μ I緩沖液重懸。每IO8細胞加入200 μ I的Anti-Biotin Microbeads,充分混勻后4°C避光孵育15分鐘。(9).孵育結束后，每IO8細胞用IOml緩沖液洗一遍，1500rpm, 10分鐘。(10).每IO8細胞用500 μ I緩沖液重懸，安裝LS柱，3ml緩沖液潤柱，3遍。逐滴加入細胞懸液，梯度磁場中通過,3ml緩沖液洗柱，3遍，收集Lin-細胞計數。(11).將分離好的人Lin-細胞進行抗體標記，方法如下收集Lin-細胞用500 μ I的緩沖培養基(MEM+20% FBS)重懸，加入500 μ I羅丹明(Rho, O. 2 μ g/ml) 37°C，避光孵育30分鐘。加入15ml預冷的培養基終止反應，離心1500rpm，5分鐘。再加入15ml緩沖培養基，37°C，避光孵育15分鐘，離心1500rpm，5分鐘，用100 μ I的染色緩沖液(PBS+0. 2mM-EDTA+2% FBS)重懸，加入如下抗體
權利要求
1.一種人干細胞的免疫缺陷鼠(NOD/SCID)移植模型的構建方法，其特征在于包括如下步驟移植前采用抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸對受體小鼠(NOD/SCID)進行腹腔注射，同時給予受體小鼠含N-乙酰半胱氨酸(NAC)的飲水，將人的干細胞移植后，繼續給予受體小鼠含N-乙酰半胱氨酸的飲水，即得該人干細胞的免疫缺陷鼠移植模型。
2.根據權利要求I所述的構建方法，其特征在于所述對受體小鼠進行腹腔注射的抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸的使用濃度為50-200mg/kg。
3.根據權利要求2所述的構建方法，其特征在于所述對受體小鼠進行腹腔注射的抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸的使用濃度為100mg/kg。
4.根據權利要求1-3任一項所述的構建方法，其特征在于所述抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸腹腔注射處理的時間點為移植前14天，方式為每隔一天一次。
5.根據權利要求1-4任一項所述的構建方法，其特征在于所述含N-乙酰半胱氨酸的飲水中N-乙酰半胱氨酸的濃度為O. 5-5mg/mL·
6.根據權利要求5所述的構建方法，其特征在于所述含N-乙酰半胱氨酸的飲水中N-乙酰半胱氨酸的濃度為lmg/ml。
7.根據權利要求1-6任一項所述的構建方法，其特征在于所述的干細胞移植為將人的干細胞通過受體小鼠的尾靜脈或脛骨的髓腔進行移植。
8.根據權利要求I所述的構建方法，其特征在于該人干細胞的免疫缺陷鼠(NOD/SCID)移植模型的構建方法，包括如下步驟在移植人的干細胞前14天用抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸對受體小鼠(N0D/SCID)進行腹腔注射，N-乙酰半胱氨酸使用濃度為100mg/kg，每隔一天一次，同時給予受體小鼠含N-乙酰半胱氨酸lmg/ml的飲水，以降低受體小鼠骨髓中的活性氧水平；對受體小鼠進行137Cs源亞致死劑量照射，劑量2. OGy,劑量率為O. 7Gy/min,照射后24小時內將人的干細胞通過受體小鼠的尾靜脈或脛骨的髓腔進行移植，移植后繼續給予受體小鼠含N-乙酰半胱氨酸lmg/ml的飲水，即得該人干細胞的免疫缺陷鼠移植模型。
9.用權利要求1-8任一項所述構建方法構建的人干細胞的免疫缺陷鼠移植模型。
10.權利要求9所述人干細胞的免疫缺陷鼠移植模型在人干細胞移植研究中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種人干細胞的免疫缺陷鼠移植模型的構建方法，包括如下步驟移植前采用抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸對受體小鼠(NOD/SCID)進行腹腔注射，同時給予受體小鼠含N-乙酰半胱氨酸(NAC)的飲水，將人的干細胞移植后，繼續給予受體小鼠含N-乙酰半胱氨酸的飲水，即得該人干細胞的免疫缺陷鼠移植模型。本發明成功建立了NOD/SCID小鼠移植的優化模型，通過本發明的方法，無論是在尾靜脈還是髓腔移植時都有效的提高了人干細胞的植入率，移植過程中小鼠死亡率低，狀態佳，可以長期存活。該方法簡單，新穎，易實施，對小鼠的創傷小，且該方法使用的抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸價格低廉。
文檔編號A61D1/00GK102920522SQ20121036927
公開日2013年2月13日 申請日期2012年9月27日 優先權日2012年9月27日
發明者程濤, 胡林萍, 高瀛岱 申請人:中國醫學科學院血液病醫院(血液學研究所)