專利名稱：：五味子作為飼料添加劑的應用方法
技術領域：
：本發明屬于農業畜牧獸醫應用領域，具體涉及一種飼料添加劑技術。(二)
背景技術：
：中草藥作為飼料添加劑使用，在我國已有幾千年的悠久歷史，如我國最早的藥書《神農草木經》就有"桐葉飼豬，肥大三倍，且易養"的記載。中草藥飼料添加劑依據我國中醫中藥理論，科學組方配伍，不僅具有扶正祛邪、健脾開胃、抗菌促生長、增強動物免疫機能、改善動物產品品質等效果，而且來源廣泛、無毒副作用、無殘留、無抗藥性，引起了國內外學者的廣泛興趣，祖國這一寶貴遺產因而得以不斷發掘。《中國詞料工業19962020年發展戰略》中提出"應該繼續努力發掘我國中草藥方面的遺產，特別是當今世界'回歸'自然聲浪日高的情況下，用中草藥替代化學合成物、抗生素類添加劑有著廣闊的前景"。因此，全面啟動天然中草藥添加劑的現代化研究和產業化開發，替代傳統的抗生素添加劑，對于提高我國畜牧生產水平、增加畜禽產品出口份額，促進國民經濟的發展，無疑具有重大的實踐意義，不僅勢在必行，而且迫在眉睫。目萍，關于中草藥作添加劑使用尚不廣泛，這方面的研究也多局限于中草藥單劑或組方對動物生產性能的影響，并未深入探討其作用機理。(三)
發明內容本發明的目的在于提供一種制備工藝簡單、使用過程方便，在畜禽生產中規模使用能夠代替或部分代替抗生素用以防病、治病、改善肉品質的五味子作為飼料添加劑的應用方法。本發明的是這樣實現的首先將五味子置于6(TC-7(TC烘箱中烘至恒重，加工粉碎為細末，過40目篩制成五味子原粉，經提取得到黃色黏稠液態提取物，按0.1%~0.4%的比例作為飼料添加劑添加到畜禽飼料中。本發明還有這樣一些技術特征1、所述的提取方法為用醇提取，即采用8倍量體積比80%的乙醇回流提取，2h次；2、所述的提取方法為用C02超臨界提取，即在30MPa、45'C下用超臨界C02提取設備提取2.5h;3、所述的黃色黏稠液態提取物采用高效液相色譜法測定其五味子甲素含量為0.354%，五味子乙素含量為0.664%，具體色譜條件為色譜柱C18Symmetry;流動相甲醇-水75:25;流速l.Oml/min;檢測波長254nm;柱溫25°C;進樣量10^1;4、所述的畜禽飼料包括肉仔雞、蛋雛雞、產蛋雞、熱應激產蛋雞及斷奶仔豬日糧；5、所述的應用方法為將五味子置于65。C烘箱中烘至恒重，加工粉碎為細末，過40目篩制成五味子原粉，經用醇提取8倍量80%乙醇回流提取，2h次，得到黃色黏稠液態提取物，以高效液相色譜法測定其五味子甲素含量為0.354%，五味子乙素含量為0.664%，按0.1%的比例添加到肉仔雞、蛋雛雞、產蛋雞、熱應激產蛋雞日糧中；6、所述的應用方法為將五味子置于65'C烘箱中烘至恒重，加工粉碎為細末，過40目篩制成五味子原粉，經用C02超臨界提取，在30MPa、45'C下用超臨界C02提取設備提取2.5h，得到黃色黏稠液態提取物，以高效液相色譜法測定其五味子甲素含量為0.354%，五味子乙素含量為0.664%,按0.15%的比例添加到斷奶仔豬日糧中。本發明人在前人研究的基礎上，擬通過對五味子有效成分提取、鑒定后，將其添加至肉仔雞口糧中，更為系統、深入地研究五味子粗多糖和五味子素對肉仔雞生產性能的作用、肉質的改善通過免疫接種等方式探討五味子粗多糖和五味子素的免疫促進作用與抗病毒作用；并對其作用的分子機理進行深入的研究。此外，還對其抗熱應激作用與作用的分子機理進行了深入的研究。在畜禽生產中規模使用五味子作為飼料添加劑代替或部分代替抗生素用以防病、治病、改善肉品質。由于單胃動物無法有效分解植物細胞壁，通過多種方法，將五味子原粉中的有效成分提取出來，并利用高效液相色譜技術測定其有效成分的含量。通過比較水提取法，乙醇提取法，索氏提取法，從而確定最佳提取工藝。結果表明以五味子乙素含量為考察指標，最佳提取工藝為8倍量的乙醇，回流提取2次，每次2h，所得提取物中五味-了乙素含量為,1.84%。另外還采用超臨界C02萃取工藝提取五味子有效成分，經高效液相色譜測定，五味子甲素、五味子乙素含量如表l所示。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>本發明方法提取的五味子原粉對豬源大腸桿菌和霍亂沙門氏桿菌在高濃度下(lg/ml)有-定抑菌效果。隨濃度降低，抑菌效果不明顯或無抑菌效果(見表2)。五味子超臨界C02提取物在濃度達到0.313g/ml時對豬源大腸桿菌和豬霍亂沙門氏桿菌出現抑菌效果，對豬霍亂沙門氏桿菌的體外抑菌效果優于對豬源大腸桿菌(見表3)。五味子醇提取物對雞常見病原菌(雞大腸桿菌、雞白痢沙門氏桿菌、金黃色葡萄球菌)均具有抑制作用，其中對金黃色葡萄球菌的抑制作用最強(見表4)。五味子超臨界C02提取物對金黃色葡萄球菌和雞白痢沙門氏桿菌都有較強的抑制作用(見表5)。表2不同濃度的五味子原粉對仔豬常見病原菌的抑菌直徑(mm)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>表3不同濃度的五味子超臨界C02提取物對仔豬常見病原菌的抑菌直徑(mm)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>表4<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>表5不同濃度的五味子超臨界C02提取物對肉仔雞常見病原菌的抑菌直徑(mm)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>發明人經過一定階段的飼養試驗，通過測定五味子對肉仔雞、蛋雛雞、產蛋雞、熱應激產蛋雞及斷奶仔豬生產性能、養分利用、神經內分泌功能、抗氧化功能、免疫功能、血液生化指標、腸道微生態和肝臟HSP70基因表達水平后，發現五味子作為飼料添加劑具有1)提高肉仔雞、蛋雛雞、產蛋雞、熱應激產蛋雞及斷奶仔豬抗氧化功能(通過清除雞體內過量的脂質過氧化物和提高雞血清與組織中抗氧化酶的活性實現)的作用；2)增強肉仔雞、蛋雛雞、產蛋雞、熱應激產蛋雞及斷奶仔豬免疫功能(特異性免疫、非特異性免疫、腸道免疫);3)具有提高熱應激產蛋雞的生產性能的作用；4)提高熱應激產蛋雞肝臟HSP70基因表達的作用；5)調節常溫下產蛋雞和熱應激產蛋雞神經內分泌的作用。其中仔豬添加0.15%的五味子，肉仔雞添加0.1%五味子，蛋雞添加0.1%五味子效果最佳。本發明產品具有天然的抗氧化活性，作為詞料添加劑應用于豬、雞日糧中，能夠有效地清除機體內過量的脂質過氧化物，提高機體內抗氧化酶的活性，改善雞體的脂質穩定性，并能促進機體的免疫功能，改善腸道內環境，此外，還能夠顯著提高熱應激產蛋雞的生產性能、免疫功能的脂質穩定性。本發明的有益效果有1.來源于天然植物，無污染，無殘留，對環境無不良影響。2.促生長作用作為詞料添加劑應用于仔豬日糧中，可以提高斷奶仔豬的日增重和日采食量，并且能降低斷奶仔豬的料重比，降低斷奶仔豬的腹瀉率。3.抗氧化作用作為飼料添加劑應用于蛋雞和肉仔雞日糧中，可以提高雞體內的抗氧化酶活性，清除雞體內過量脂質過氧化物，改善雞的脂質穩定性。作為伺料添加劑應用于仔豬日糧中，可以提高仔豬體內的抗氧化酶活性，清除仔豬體內過量脂質過氧化物，改善仔豬的脂質穩定性。4.免疫促進作用作為詞料添加劑應用于蛋雞和肉仔雞日糧中，可以提高蛋雞和肉仔雞免疫功能。作為飼料添加劑應用于仔豬日糧中，可以提高仔豬免疫功能。5.調節腸道平衡作為飼料添加劑應用于雞和豬日糧中，可以調節豬、雞盲腸內環境，抑制有害菌生長，促進有益菌生長，并可斷奶仔豬小腸黏膜形態。6.抗熱應激作用作為飼料添加劑應用于熱應激產蛋雞日糧中，能提高產蛋雞生產性能和免疫功能，并改善雞體的脂質穩定性。具體實施例方式下面結合具體實施例對本發明作進一步的說明實施例l:本實施例將五味子置于65'C烘箱中烘至恒重，加工粉碎為細末，過40目篩制成五味子原粉，經用醇提取(8倍量80%乙醇回流提取，2h次)，以高效液相色譜法測定其五味子甲素含量為0.354%，五味子乙素含量為0.664%，具體色譜條件為色譜柱(C18Symmetry);流動相甲醇-水(75:25);流速l.Oml/min;檢測波長254nm;柱溫25。C;進樣量1CM。按0.1%0.3%的比例添加到肉仔雞、蛋雛雞、產蛋雞、熱應激產蛋雞及斷奶仔豬日糧中。經實驗證明，本實施例添加五味子醇提取物各組對血清中超氧化物歧化酶(SOD)的活性無顯著影響，添加五味子醇提取物0.3。/。能顯著提高6周肝臟和腎臟中超氧化物歧化酶(SOD)的活性(見表6、7)。表6五味子醇提取物對肉仔雞血清中SOD活性的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表9五味子醇提取物對肉仔雞組織中MDA含量的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>添加五味子醇提取物0.3%能顯著降低能顯著提高6周心臟GR活性。添加五味子醇提取物各組對血清GR活性無顯著影響(見表IO)。56日齡時，添加0.2%五味子提取物可顯著提高肝臟和腎臟GR活性，并且作用效果好于黃霉素組(見表ll)。表IO五味子醇提取物對肉仔雞血清中GR活性的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>實施例2:本實施例基本過程同實施例1，不同在于采用C02超臨界提取，即在30MPa、45'C下用超臨界C02提取2.5h，超臨界C02提取設備采用HA221-40-48SFE裝置，江蘇南通華安超臨界萃取有限公司，最后得到黃色黏稠液態提取物，產率為12.5%。本實施例將五味子超臨界<202提取物以按0.1%0.4%的比例作為飼料添加劑添加到畜禽飼料中。試驗證明35日齡時，添加0.2%、0.4。/。五味子超臨界C02提取物組可顯著提高肉仔雞腎臟總抗氧化能力。56円齡時，五味子超臨界C02提取物可顯著提高心臟總抗氧化能力(見表14)。表14五味子超臨界C02提取物對肉仔雞血清和組織中總SOD活性的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>添加五味子超臨界C02提取物可顯著降低35日齡肉仔雞血清和56日齡心臟MDA含量，說明五味子提取物具有抑制MDA生成的作用(見表15)。表15五味子超臨界C02提取物對肉仔雞血清和組織中MDA含量的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>添加五味子超臨界C02提取物可顯著提高35日齡血清和肝臟GR活性，并且作用效果好于黃霉素組。56日齡時，添加0.2。/。五味子提取物可顯著提高肝臟和腎臟GR活性，并且作用效果好于黃霉素組(見表16)。表16五味子超臨界C02提取物對肉仔雞血清和組織中GR活性的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>權利要求1、一種五味子作為飼料添加劑的應用方法，其特征在于首先將五味子置于60℃-70℃烘箱中烘至恒重，加工粉碎為細末，過40目篩制成五味子原粉，經提取得到黃色黏稠液態提取物，按0.1％～0.4％的比例作為飼料添加劑添加到畜禽飼料中。2、根據權利要求1所述的五味子作為飼料添加劑的應用方法，其特征在于所述的提取方法為用醇提取，即采用8倍量體積比80%的乙醇回流提取，2h次。3、根據權利要求1所述的五味子作為飼料添加劑的應用方法，其特征在于所述的提取方法為用C02超臨界提取，即在30MPa、45t:下用超臨界C02提取設備提取2.5h。4、根據權利要求1或2或3所述的五味子作為飼料添加劑的應用方法，其特征在于所述的黃色黏稠液態提取物采用高效液相色譜法測定其五味子甲素含量為0.354%，五味子乙素含'量為0.664%，具體色譜條件為色譜柱C18Symmetry;流動相甲醇-水75:25;流速l.Oml/min;檢測波長254nm;柱溫25°C;進樣量1(^1。5、根據權利要求1所述的五味子作為飼料添加劑的應用方法，其特征在于所述的畜禽詞料包括肉仔雞、蛋雛雞、產蛋雞、熱應激產蛋雞及斷奶仔豬日糧。6、根據權利要求5所述的五味子作為飼料添加劑的應用方法，其特征在于所述的應用方法為將五味子置于65'C烘箱中烘至恒重，加工粉碎為細末，過40目篩制成五味子原粉，經用醇提取8倍量80%乙醇回流提取，2h次，得到黃色黏稠液態提取物，以高效液相色譜法測定其五味子甲素含量為0.354%,五味子乙素含量為0.664%，按0.1%的比例添加到肉仔雞、蛋雛雞、產蛋雞、熱應激產蛋雞日糧中。7、根據權利要求5所述的五味子作為飼料添加劑的應用方法，其特征在于所述的應用方法為將五味子置于65'C烘箱中烘至恒重，加工粉碎為細末，過40目篩制成五味子原粉，經用C02超臨界提取，在30MPa、45'C下用超臨界C02提取設備提取2.5h，得到黃色黏稠液態提取物，以高效液相色譜法測定其五味子甲素含量為0.354%,五味子乙素含量為0.664%，按0.15%的比例添加到斷奶仔豬日糧中。全文摘要本發明提供了一種五味子作為飼料添加劑的應用方法，首先將五味子置于60℃-70℃烘箱中烘至恒重，加工粉碎為細末，過40目篩制成五味子原粉，經提取得到黃色黏稠液態提取物，按0.1％～0.4％的比例作為飼料添加劑添加到畜禽飼料中。本發明產品具有天然的抗氧化活性，作為飼料添加劑應用于豬、雞日糧中，能夠有效地清除機體內過量的脂質過氧化物，提高機體內抗氧化酶的活性，改善雞體的脂質穩定性，并能促進機體的免疫功能，改善腸道內環境，此外，還能夠顯著提高熱應激產蛋雞的生產性能、免疫功能的脂質穩定性。文檔編號A23K1/16GK101411394SQ200810209619公開日2009年4月22日申請日期2008年12月4日優先權日2008年12月4日發明者單安山,石莉莎,裴文芳申請人:東北農業大學