利用復合修飾劑負載熱解石墨電極電致化學發光行為測定藥物中苦參堿含量的方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及一種測定藥物中苦參堿含量的方法，特別設及一種利用復合修飾劑負 載熱解石墨電極電致化學發光行為測定藥物中苦參堿含量的方法。
【背景技術】
[0002] 苦參堿是由豆科植物苦參的根、株及果實經乙醇等有機溶劑提取制成的，是生物 堿。苦參堿具有清熱、利尿、殺蟲、桂濕等功效，同時還具有抗病毒、抗腫瘤、抗過敏等多種作 用，各類制劑已被廣泛用于臨床，因此測定藥物中苦參堿的含量，對臨床用藥安全具有重要 意義。目前，有關苦參堿的測定方法主要有高效液相色譜法（胖LC)、高效液相-質譜法 (HPLC-MS)、反相高效色譜法(RP-HPLC)、離子對色譜法、毛細管電泳法、薄層掃描法、氣相色 譜法(GC)、氣相色譜-質譜法、巧光澤滅法等。但運些方法或操作煩瑣或使用貴重的儀器設 備或靈敏度不高，不能完全滿足臨床痕量分析的要求。因此，建立簡單、快速、靈敏的分析新 方法具有重要的意義。
[0003] 目前公開的文獻中，W下2篇論文是本發明最接近的現有技術： (1)李利軍，羅應，李彥青等前期關于"聯化晚釘體系電化學發光法測定苦參堿的研究" 中，采用裸電極(金電極)為工作電極，在聯化晚釘濃度為4.0Xl(T4mol/L的苦參堿測定體系 中，其線性范圍為1.5 X 10-7~1.5 X l(T4mol/L，檢出限為7.3X l(T9mol/L。該技術不足之處 一方面在于每次測定均需要添加昂貴的聯化晚釘，測量成本高，同時易造成環境污染;另一 方面與修飾電極體系相比，苦參堿測定操作相對復雜，且易造成因操作引起測量誤差。
[0004] (2)羅應，李利軍，李彥青等在"娃溶膠-納米金修飾金電極電化學發光法測定苦參 堿的研究"中，采用W納米金為增敏材料，通過聯化晚釘固定技術，實現了聯化晚釘的高效 利用，但娃溶膠成膜時易龜裂，需添加合適的助膜劑聚乙締醇和心半脫氨酸，而該成膜技術 相對傳統，所W在電極修飾技術方面缺乏足夠創新，且在苦參堿檢出限方面也較本技術處 于劣勢。

【發明內容】

[0005] 本發明要解決的技術問題是:提供一種利用復合修飾劑負載熱解石墨電極電致化 學發光行為測定藥物中苦參堿含量的方法，該方法利用娃溶膠(Silica sol)、二氧化鐵溶 膠(Ti〇2 sol)的成膜性、納米氧化鋒-銀(Zn@Ag)的大比表面積及碳納米管(MWCNTs)良好的 電學性能，制備了Silica sol / MWCNTs- ZnO@Ag / Ti〇2 sol復合修飾劑，并通過傳感器 修飾技術將聯化晚釘(Ru(bpy)32+)負載在熱解石墨電極表面，制備出穩定性好、靈敏度高的 用于測定苦參堿的電致化學發光傳感器，實現了對苦參堿的簡單、快速測定，該方法用于苦 參堿栓的測定具有較高的選擇性和靈敏度，且實現了聯化晚釘的重復使用。
[0006] 解決上述技術問題的技術方案是:一種利用復合修飾劑負載熱解石墨電極電致化 學發光行為測定藥物中苦參堿含量的方法，包括W下步驟： A、 將純化后的多壁碳納米管配制成0.001mol/l~1.0mol/L的多壁碳納米管溶液； B、 納米二氧化鐵溶膠的制備:將Tick通入乙醇中配制體積分數為3.5~4.5%的TiCU- 化OH溶液，取Tick-化OH溶液并用氨水調節pH=8.5~9.0，抽濾，濾餅用去離子水洗涂至中 性，用出化溶解，再加入娃溶膠和水，于92~98°C回流3.5~4.化得到納米二氧化鐵溶膠； 此〇2、娃溶膠、水的用量按Tick-化0H溶液:此〇2:娃溶膠：水的體積比為1:1.4~1.6:0.2~ 0.3:3.2 ~3.4 計算； C、 納米氧化鋒-銀核殼量子點的制備： C-1、按0.1 g硝酸銀:28~32mL乙醇計，將硝酸銀加入快速攬拌的乙醇溶液中，并在38~ 43 °C下分散5~15min，得到硝酸銀溶液； C-2、按Ig聚乙締化咯燒酬:48~53mL乙醇計，將聚乙締化咯燒酬加入乙醇中并于58~ 63 °C溶解5~15min，得到聚乙締化咯燒酬溶液； C-3、將硝酸銀溶液逐滴加入到聚乙締化咯燒酬溶液中，硝酸銀溶液與聚乙締化咯燒酬 溶液的體積比為1:1~1.1，反應1.8~2.化得銀溶膠； C-4、按O.Olg NaOH:22~28mL乙醇計，將化0H在48~53°C下加入乙醇中分散15~ 25min，得到NaOH溶液； C-5、按0.1 g無水醋酸鋒:20~25mL乙醇計，將無水醋酸鋒加入乙醇中，在58~63°C下持 續攬拌15~25min溶解，得到無水醋酸鋒溶液； C-6、將無水醋酸鋒溶液和銀溶膠混合均勻得混合溶液，無水醋酸鋒溶液與銀溶膠體積 比為1:1.9~2.2,混合溶液由最初的黃色逐步變為深灰色，最終穩定在灰色，此時加入混合 溶液體積分數3.0~3.6%的聚乙二醇，在48~53 °C條件下攬拌5~15min后，于30s內迅速加 入步驟C-4制備好的化0田容液，化0H溶液的加入量為混合溶液體積分數64~70%，在38~43 °C下反應0.8~1.化，得到^@Ag核殼量子點； D、 傳感器的制備： D-1、熱解石墨電極經過打磨、拋光、清洗后，室溫驚干待用； 0-2、將0.001111〇1/1~1.0111〇1/1的多壁碳納米管溶液與0.0025 111〇1/1的化0@4旨核殼量 子點按體積比為1:19~21超聲分散25~35min，制備出MWCNTs-化0@Ag復合材料，再與娃溶 膠、納米二氧化鐵溶膠按MWCNTs-ZnO@Ag復合材料:娃溶膠:納米二氧化鐵溶膠體積比1:1:2 超聲混合均勻得到均一、穩定的Silica sol / MWCNTs-化0@Ag / Ti化sol復合溶液，按 聯化晚釘溶液:娃溶膠:MWCNTs-ZnO@Ag復合材料:納米二氧化鐵溶膠體積比為1:1:1:2向該 Silica sol / MWCNTs- ZnO@Ag / Ti〇2 sol復合溶液中加入O.OOlmol/L聯化晚釘溶液，超 聲振蕩使其混勻，然后取1~4化加入聯化晚釘溶液的Silica sol / MWCNTs- ZnO@Ag / Ti化sol復合溶液，滴加在步驟D-1得到的熱解石墨電極表面，于23~28°C下驚干，即可得 至化ilica sol / MWCNTs-ZnO@Ag / Ti〇2 sol - Ru(bpy)32+修飾的熱解石墨電極； E、 測定藥物中苦參堿含量:使用步驟D制備得到的Silica sol /麗CNTs-ZnO@Ag / TiO2 sol - Ru(bpy)32+修飾的熱解石墨電極，按照常規方法測定藥物中苦參堿含量。
[0007]本發明的進一步技術方案是:步驟A的具體操作為:取部分多壁碳納米管置于濃硫 酸與濃硝酸體積比為3:1的溶液中，于60°C回流反應12h，使用0.22μπι微孔濾膜過濾，濾餅用 去離子水洗涂至中性，烘干后W二甲基甲酯胺為溶劑配制成Imol/L多壁碳納米管溶液。
[000引所述聚乙二醇為PEG200的聚乙二醇。
[0009] 步驟A配制的多壁碳納米管溶液和步驟D-2所述的多壁碳納米管溶液的濃度為 0.008mol/X~0.012mol/L。
[0010] 電致化學發光(Electrochemiluminescence，E化)分析法具有線性范圍寬、靈敏度 高及儀器簡單、可控性強、便于檢測等優點，已被廣泛應用于藥物檢測、分析，而化學修飾電 極技術因可通過改變電極表面微結構，改善電化學發光分析特性，提高修飾電極表面對測 定物質的選擇性和儀器檢測的靈敏度，所W將化學修飾電極技術與電化學發光分析方法相 結合，有利于拓寬電致化學發光法在藥物分析、測定中的研究深度和應用范圍。
[0011] 納米氧化鋒(ZnO)因具有獨特的表面效應、體積效應、量子尺寸效應和宏觀隧道效 應，在催化、磁學、光學等方面展現出許多特殊功能。而金屬Ag納米粒子具有等離子體共振 效應，當與ZnO結合為超微小ZnO@Ag核殼量子點時，能夠直接影響界面電子的轉移，使Zn0@ Ag具有獨特的電學、催化等性能。同時，利用多壁碳納米管(麗CTs)良好的導電性能和特殊 的電學性質，將MWCTs與化0@Ag復合制備出高活性復合修飾劑MWCTs-ZnO@Ag。而在成膜劑方 面，娃溶膠(Silica sol)為二氧化硅膠體粒子在水中均勻擴散形成Ξ維網絡結構的乳白色 半透明膠體溶液，具有較高的粘結性、吸附性、化學惰性W及較好的生物相容性、催化活性 及在水中幾乎不溶脹等特點，已成為重要的電極修飾成膜劑，