混合，于 75°C下攪拌至溶解完全，得水相；于75°C下將水相緩慢滴加至油相中，攪拌10分鐘，之后于 10000rmp/min下高剪切12分鐘，得初乳；將初乳于1000帕的高壓微射流均質機中進行均 質，循環3次，得成品即所述甲潑尼龍固態脂質納米粒。隔天觀察并測定分析成品，結果如 下：成品穩定性良好、無沉淀；測定粒徑為133. 3nm、F>DI 0. 241、電位-38. 7mv，且含量測定 為 107. 6%〇
[0033] 實施例3
[0034] 稱取12克雙硬脂酸甘油酯和1. 0克大豆磷脂并混合，于75°C下熔融完全，再加入 〇. 18克甲潑尼龍，攪拌分散均勻，得油相；稱取7. 0克泊洛沙姆407和578. 82克純水并混 合，于75°C下攪拌至溶解完全，得水相；于75°C下將水相緩慢滴加至油相中，攪拌10分鐘， 之后于l〇〇〇〇rmp/min下高剪切12分鐘，得初乳；將初乳于1000帕的高壓微射流均質機中 進行均質，循環3次，得成品即所述甲潑尼龍固態脂質納米粒。隔天觀察并測定分析成品， 結果如下：成品穩定性良好、無沉淀；測定粒徑為53. 53nm、0. 226、電位-27. 8mv，且含 量測定為100. 4%。
[0035] 由實施例1-3可知，本發明制備所得的甲潑尼龍固態脂質納米粒經測定具有如下 的特點：穩定性好，粒徑大于4-5nm，相對分子質量在5000以上，多分散指數（PDI)〈0. 3,電 位波動于-40--10mv之間，含量高（>95%);而需要說明的是，淋巴管外大分子物質和粒徑 大于4-5nm、相對分子質量在5000以上的微粒可以通過淋巴管內皮細胞間隙和內皮細胞的 胞飲作用進入淋巴系統，在淋巴結的竇間隙內被攝取或被網狀內皮系統主動吞噬，親淋巴 物質注射5分鐘后即可在相應區域淋巴結檢測到注射物質，并持續48h以上，停留如此長的 時間，為藥物與淋巴內的細胞長時間接觸提供了良好的條件，因此，本發明制得的甲潑尼龍 固態脂質納米粒不僅可實現淋巴道靶向，且具有更高的生物利用度、更好的靶向性與緩控 釋性。
[0036] 實施例4甲潑尼龍固態脂質納米粒的淋巴道靶向試驗
[0037] 同位素標記本發明制備所得的甲潑尼龍固態脂質納米粒，以SnC12為還原劑、采 用99mTc04-標記，即得99mTc-甲潑尼龍固態脂質納米粒；兔下肢局部注射99mTc-甲潑 尼龍固態脂質納米粒，經SPECT淋巴顯影，前60min采用動態顯影，后8小時內不同時間 采用靜態顯影并探測各淋巴結區的閃爍計數率。試驗結果：動態示蹤、靜態監測見注射區 99mTc-甲潑尼龍固態脂質納米粒經淋巴道緩慢靶向流至局部淋巴結，而其余組織濃度很 低；注射局部淋巴結的閃爍計數率明顯高于其它組織；從而說明本發明甲潑尼龍固態脂質 納米粒具有淋巴道靶向富集性能，并不直接通進入血液循環，在淋巴道內發揮抑制炎癥和 免疫作用，對治療自身免疫病有潛在價值。
[0038] 實施例5甲潑尼龍固態脂質納米粒的療效試驗
[0039] 采用卵清蛋白誘導建立兔類風濕性關節炎動物模型，同時設置空白對照組（模型 組等量生理鹽水）、標準對照組（甲潑尼龍組1. 〇mg/kg ?(!)、及試驗組，即共設置三個組，且 每組隨機取10只類風濕性關節炎兔動物疾病模型；試驗組每2天每只注射0. 3mg本發明甲 潑尼龍固態脂質納米粒，即注射量為0. 3mg/2d ;空白對照組注射注射生理鹽水，注射量與 試驗組一致；標準對照組注射甲潑尼龍，注射量為1. 〇mg/kg ? d，即每天每kg注射1. Omg甲 潑尼龍。研究甲潑尼龍固態脂質納米粒皮下注射后，對類風濕性關節炎兔模型及正常家兔 免疫功能的影響，通過觀察每天的一般情況，查血常規、血生化每周1次，查血清白介素-1、 腫瘤壞死因子、抗0VA抗體，每周1次，并經過對關節的X線影像表現（每月1次），實驗觀 察8周。
[0040] 試驗結果顯示，標準對照組與試驗組療效相當；8周時，標準對照組的數據如 下：血清白介素-186. 49 ± 13. 43ng/L、腫瘤壞死因子350. 04±43. 72ng/L、抗0VA抗體 152. 21±18. 95ng/L，試驗組的數據如下：血清白介素-183. 52±15. 20ng/L、腫瘤壞死因子 335 ± 55. 68ng/L、抗0VA抗體145. 47 ± 25. 24ng/L，但試驗組的甲潑尼龍用量要明顯小于標 準對照組，從而說明本發明甲潑尼龍固態脂質納米粒對治療類風濕性關節炎具有顯著的優 勢。
[0041] 另外，甲潑尼龍固態脂質納米粒治療兔類風濕性關節炎動物模型無全身、局 部明顯不良反應，8周時，標準對照組的家兔體重為（2. 32±0. 30) kg/只，試驗組則為 (1. 80±0. 31)kg/只，空白對照組為（1. 80±0. 31)kg/只，從而表明本發明甲潑尼龍固態脂 質納米粒致家兔內分泌失調表現的柯興氏體態要優于標準對照組。
[0042] 綜上，本發明甲潑尼龍固態脂質納米粒可以降低給藥的毒副作用，通過在淋巴管 內發揮作用，提高甲潑尼龍的治療指數，即具有更高的生物利用度、更好的靶向性與緩控釋 性；此外，該甲潑尼龍固態脂質納米粒的制備過程過程簡單、易于操作，且材料成本低，便于 工業生產。
【主權項】
1. 一種甲潑尼龍固態脂質納米粒，其特征在于：該甲潑尼龍固態脂質納米粒由以下質 量百分比的組分組成： 曱潑尼龍 0.03%; 固態脂質 液態脂質 0% ~ 0.3%; 乳化劑 U5%~1J%; 余量為純水； 其中，固態脂質為雙硬脂酸甘油酯；液態脂質為大豆磷脂；乳化劑為泊洛沙姆188、泊 洛沙姆407中的一種或兩種。2. -種甲潑尼龍固態脂質納米粒的制備方法，其特征在于：該制備方法包括如下具體 操作： (1) 按照權利要求1所述的質量百分比準確稱取該甲潑尼龍固態脂質納米粒的各組 分，即甲潑尼龍、固態脂質、液態脂質、乳化劑及純水，備用；其中，固態脂質為雙硬脂酸甘油 酯；液態脂質為大?憐脂；乳化劑為泊洛沙姆188、泊洛沙姆407中的一種或兩種； (2) 將稱取好的固態脂質與液態脂質混合，并于75°C下熔融完全，再加入稱取好的甲 潑尼龍攪拌分散均勻，得油相； (3) 將稱取好的乳化劑加至稱取好的純水，并于75°C下攪拌至溶解完全，得水相； (4) 于75°C下將所得水相緩緩滴加至油相中，攪拌10分鐘，之后于lOOOOrmp/min下高 剪切12分鐘，得初乳； (5) 將所得初乳置于1000帕的高壓微射流均質機中進行均質，循環3次，得成品即所述 甲潑尼龍固態脂質納米粒。
【專利摘要】本發明提供一種甲潑尼龍固態脂質納米粒，其由以下質量百分比的組分組成：甲潑尼龍0.03％；固態脂質1.9％～2.5％；液態脂質0％～0.3％；乳化劑1.25％～1.8％；余量為純水；其中，固態脂質為雙硬脂酸甘油酯；液態脂質為大豆磷脂；乳化劑為泊洛沙姆188、泊洛沙姆407中的一種或兩種。同時揭露了該甲潑尼龍固態脂質納米粒的制備方法；該甲潑尼龍固態脂質納米粒不僅可以降低給藥的毒副作用，而且通過在淋巴管內發揮作用提高甲潑尼龍的治療指數，即具有更高的生物利用度、更好的靶向性與緩控釋性；此外，其制備方法過程簡單、易于操作，且材料成本低，便于工業生產。
【IPC分類】A61K31/573, A61K9/51, A61P29/00, A61P37/08
【公開號】CN105168182
【申請號】
【發明人】黃金棋, 林素霞, 吳弘
【申請人】莆田學院附屬醫院
【公開日】2015年12月23日
【申請日】2015年10月10日