并且兩條試紙條的結構組成和制作過程相同。
[0024]實施例:
[0025]1.膠體金的制備
[0026]將0.01%氯金酸溶液加熱煮沸，之后迅速加入2%的檸檬酸三鈉950uL;
[0027]溶液的顏色由淺藍色變為深藍，繼續加熱出現櫻桃紅色，繼續加熱1min;出現透明的櫻桃紅色，停止加熱，繼續攪拌至室溫。這樣就制備了40nm的膠體金溶液。用電鏡鏡檢制備膠體金溶液的質量，確保制備的金顆粒大小一致、均勻，顆粒直徑在40nm左右。
[0028]2.肌紅蛋白(Myo)、心型脂肪酸結合蛋白(h-FABP)膠體金試紙條的制備
[0029]取I mL膠體金溶液，向其中加入適量0.2M碳酸鉀溶液，震蕩混勻，測定pH將pH值調節為7.8左右;加入lmg/mL的肌紅蛋白(Myo)抗體1uL然后混勾，于振蕩器上振蕩30 min ；再加入10 uL的20%BSA，混勾，振蕩15 min;于離心機中10000 rpm，離心10 min，輕輕吸除上清；用ImL洗滌液重懸膠體金沉淀，用移液器輕輕吸打幾次;于離心機中10000 rpm，離心10min，輕輕吸除上清;再洗滌一次，離心，去除上清。用同樣的方法將心型脂肪酸結合蛋白(h-FABP)抗體標記在膠體金顆粒表面，然后將兩種膠體金免疫復合物按1:1的比例混合，再用復溶液稀釋，使稀釋后的膠體金免疫復合物在530nm處OD(吸光度)值為1.2-1.5;在無紡布上點樣，均勻涂布，形成膠金墊，真空凍干3小時，制成金標結合墊。
[°03°]分別將lmg/mL和1.5mg/mL的與標記的肌紅蛋白(Myo)抗體、心型脂肪酸結合蛋白(h-FABP)抗體相配對的抗體劃在硝酸纖維素膜的檢測線(T線)上，將1.0mg/mL羊抗鼠多克隆抗體劃在質控線(C線)上。然后將硝酸纖維素膜置于烘箱中37°C干燥2天。
[0031]將制備好的金標結合墊和包被好的硝酸纖維素膜按圖1組裝，將以上粘貼好的試紙條板，用切條機進行切條，條寬設為3.5mm。
[0032]3.肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌鈣蛋白I(cTnI)膠體金試紙條
[0033]以和肌紅蛋白(Myo)、心型脂肪酸結合蛋白(h-FABP)膠體金試紙條相同的方法制備肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌鈣蛋白I(cTnl)膠體金試紙條。其中肌酸激酶同工酶(CK-MB)抗體的標記量為1ug/ml，肌I丐蛋白I(cTnl)抗體的標記量為20ug/ml;肌酸激酶同工酶(CK-MB )抗體的包被量為1.5mg/ml，肌|丐蛋白I(cTnl)抗體的包被量為2mg/ml。
[0034]4.組裝
[0035]將制備好的肌紅蛋白(Myo)、心型脂肪酸結合蛋白(h-FABP)膠體金試紙條和肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌鈣蛋白I(cTnl)膠體金試紙條，分別裝入卡殼中的對應位置，將組裝好的檢測卡，裝入鋁箔袋同時放入干燥劑密封保存。
[0036]5.試紙條的使用及結果判讀
[0037]檢測前，先將樣本血清/血漿和檢測卡置于室溫下平衡I小時。
[0038]然后把檢測卡平放，將樣品滴入到檢測卡的加樣孔中，加入3-4滴樣本，由于毛細效應，液體向上層析，與固定在T線、C線上的抗體和二抗結合而被截留，顯色。20min后，根據T、C線的顯色情況判定陰陽性結果或者配合讀數儀準確測定結果。使用讀數儀測定結果時，將儀器的相關參數設定好后，將試紙條放入讀取位置進行測定，儀器將顯示出樣品濃度測定結果。
[0039]以上對本實用新型做了詳細的描述，其目的是讓熟悉本領域的人士能夠更全面的了解本實用新型的內容并加以實施，并非對本實用新型的實施方式的限定。
【主權項】
1.一種定量聯合檢測心肌梗塞的試劑盒，其包括檢測卡和讀數儀，其中檢測卡由塑料卡殼和并排置于其中的兩條膠體金試紙條組成，塑料卡殼正面設有兩個加樣孔和兩個觀察窗，兩條膠體金試紙條其中一條為肌紅蛋白(Myo)和心型脂肪酸結合蛋白(h-FABP)試紙條，另外一條為肌酸激酶同工酶(CK-MB)和肌鈣蛋白I(cTnl)試紙條，2條試紙條均由樣品墊、金標結合墊、NC膜和吸水濾紙依次順序相接黏貼在底板上組成。2.根據權利要求1所述的一種定量聯合檢測心肌梗塞的試劑盒，其特征在于所述肌紅蛋白(Myo)和心型脂肪酸結合蛋白(h-FABP)試紙條的金標結合墊上固相了肌紅蛋白(Myo)抗體和心型脂肪酸結合蛋白(h-FABP)抗體標記的膠體金顆粒。3.根據權利要求1所述的一種定量聯合檢測心肌梗塞的試劑盒，其特征在于肌紅蛋白(Myo)和心型脂肪酸結合蛋白(h-FABP)試紙條的硝酸纖維素膜上包被的與肌紅蛋白(Myo)抗體相匹配的抗體濃度為1.0mg/mL，與心型脂肪酸結合蛋白(h-FABP )抗體相匹配的抗體濃度為1.5mg/mL。4.根據權利要求1所述的一種定量聯合檢測心肌梗塞的試劑盒，其特征在于肌酸激酶同工酶(CK-MB)和肌鈣蛋白I (cTnl)試紙條的金標結合墊上固相了肌酸激酶同工酶(CK-MB)抗體和肌鈣蛋白I (cTnl)抗體標記的膠體金顆粒。5.根據權利要求1所述的一種定量聯合檢測心肌梗塞的試劑盒，其特征在于肌酸激酶同工酶(CK-MB)和肌鈣蛋白I(cTnl)試紙條的硝酸纖維素膜上包被的與肌酸激酶同工酶(CK-MB)抗體相匹配的抗體濃度為1.5mg/mL，與肌I丐蛋白I(cTnl)抗體相匹配的抗體濃度為.2.0mg/mL
【專利摘要】本實用新型涉及一種定量聯合檢測心肌梗塞的試劑盒，能同時定量檢測肌紅蛋白（Myo）、心型脂肪酸結合蛋白（h-FABP）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）和肌鈣蛋白I（cTnI）四項心肌指標，包含檢測卡和讀數儀，其中檢測卡由外部的塑料卡殼和置于內部的2條膠體金試紙條組成，一條為肌紅蛋白（Myo）、心型脂肪酸結合蛋白（h-FABP）試紙條，另一條為肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌鈣蛋白I（cTnI）試紙條。本實用新型試劑盒具有檢測速度快，操作簡潔，成本低，重復性好，適用性強的特點。
【IPC分類】G01N33/558, G01N33/68
【公開號】CN205374466
【申請號】CN201521060175
【發明人】司英杰, 殷娟娟, 李梅, 劉琳, 向榮, 王昊, 張賢剛, 張賢強, 朱正宇, 李亞峰
【申請人】德康潤生物科技（天津）有限公司
【公開日】2016年7月6日
【申請日】2015年12月18日