生芪消渴膠囊的質量控制方法
【專利摘要】本發明公開了一種生芪消渴膠囊的質量控制方法，其通過采用薄層色譜法（TLC）對生芪消渴膠囊中地黃進行定性鑒別并結合采用超高效液相色譜（UHPLC）對生芪消渴膠囊中毛蕊異黃酮葡萄糖苷、丹酚酸B、丹酚酸A、丹參素鈉、迷迭香酸和和原兒茶醛進行含量測定，從而能夠更加科學評價生芪消渴膠囊的質量，保證其質量的穩定性，提升產品技術水平，從而實現利用現代分析手段全面提升生芪消渴膠囊的質量標準。
【專利說明】
生芪消渴膠囊的質量控制方法
技術領域
[0001] 本發明涉及一種治療糖尿病的中藥制劑的質量控制方法，屬于藥品的技術領域。
【背景技術】
[0002] 生芪消渴膠囊是由黃芪、地黃、丹參三種藥味制成的中藥復方制劑，具有益氣生 津，活血化瘀的功效，臨床主要用于氣陰兩虛證糖尿病的治療，可改善倦怠，乏力，多食易 饑，口渴多飲，小便量多等癥狀，主要適用于II型糖尿病患者，臨床應用多年，療效確切。
[0003] 生芪消渴膠囊現行質量標準較為簡單，只對黃芪藥材中的黃芪甲苷進行了薄層鑒 定和浸出物的檢查，而含量測定只測定了單一指標成分原兒茶醛，存在"特征鑒別不全面、 含量測定專屬性差、未對處方主藥"地黃"進行質量控制"等問題，難以科學評價其內在質 量。因而，為保證生芪消渴膠囊質量的穩定性，提升產品技術水平，利用現代分析手段全面 提升生芪消渴膠囊的質量標準尤為關鍵。

【發明內容】

[0004] 本發明的目的是提供一種生芪消渴膠囊的質量控制方法，以解決現有的生芪消渴 膠囊的質量控制方法存在的指標成分單一、特征鑒別不全面、含量測定專屬性差等問題，從 而能夠科學評價生芪消渴膠囊的質量。
[0005] 本發明的技術方案如下： 本發明首先提出了生芪消渴膠囊的質量控制方法，該方法包括如下步驟:采用薄層色 譜法(TLC)對生芪消渴膠囊中地黃進行定性鑒別;采用超高效液相色譜(UHPLC)對生芪消渴 膠囊中毛蕊異黃酮葡萄糖苷、丹酚酸B、丹酚酸A、丹參素鈉、迷迭香酸和和原兒茶醛進行含 量測定。
[0006] 其中，采用薄層色譜法(TLC)對生芪消渴膠囊中地黃進行定性鑒別時先制備供試 品溶液、陰性對照溶液、梓醇對照品溶液和回香醛試液;然后吸取供試品溶液、陰性對照溶 液和梓醇對照品溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水為展開劑，展開， 取出，晾干，噴以回香醛試液，加熱至斑點顯色清晰，觀察供試品色譜中在與梓醇對照品色 譜相應的位置上是否顯相同顏色的斑點以鑒別供試品的性狀。其中，展開劑三組分中三氯 甲烷、甲醇和水的質量比為14:6:1。
[0007] 其中，進行含量測定時分別取混合對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液，按色 譜條件測定，得色譜圖，根據色譜參數計算系統適用性，觀察6種被測化合物與其他物質峰 分離情況以測定6種成分的含量。其色譜條件為:色譜柱:Agilent Eclipse Plys C18 RRHD (150謹X2.1 mm，1.8 μπι);流動相:A:0.1%甲酸水溶液、B:0.1%甲酸甲醇溶液;檢測波長： 280 nm;流速:0.25 ml/min;柱溫:45 °C;進樣量:2 μ1〇
[0008] 本發明通過采用薄層色譜法(TLC)對生芪消渴膠囊中地黃進行定性鑒別并結合采 用超高效液相色譜（MHPLC)對生芪消渴膠囊中毛蕊異黃酮葡萄糖苷、丹酚酸B、丹酚酸A、丹 參素鈉、迷迭香酸和和原兒茶醛進行含量測定，從而能夠更加科學評價生芪消渴膠囊的質 量，保證其質量的穩定性，提升產品技術水平，從而實現利用現代分析手段全面提升生芪消 渴膠囊的質量標準。
【附圖說明】
[0009] 圖1是生芪消渴膠囊薄層鑒別示意圖；圖1中：對照品：梓醇；陰性:缺地黃陰性對照樣 品；S1-S10:10批生芪消渴膠囊樣品； 圖2是系統適用性實驗混合標準品(對照品)UHPLC色譜圖； 圖3是系統適用性實驗供試品UHPLC色譜圖； 圖4是系統適用性實驗陰性樣品UHPLC色譜圖； 圖2-圖4中，1.丹參素鈉;2.原兒茶醛;3.毛蕊異黃酮葡萄糖苷;4.迷迭香酸;5.丹酚酸； 6.丹酚酸A。
【具體實施方式】
[0010]下面結合附圖和實施例對本發明作進一步的詳細說明。
[0011] 實施例1:生芪消渴膠囊中地黃的定性鑒別 1.1儀器 DK-98-11恒溫水浴鍋(天津市泰斯特儀器有限公司），超純水機(SC-080160,四川沃特 爾科技發展有限公司），電子天平(METTLER AE-240，梅特勒-托利多儀器上海有限公司），電 熱恒溫鼓風干燥箱(上海博訊有限公司醫療器械廠）。
[0012] 1.2試劑與試藥 梓醇對照品（四川省維克奇生物科技有限公司，批號141104,純度多98%)，茴香醛（國藥 集團化學試劑有限公司，批號20150312)，硅膠G板(200X200 mm，青島海洋化工廠分廠），甲 醇(上海振興化工一廠，分析純），正丁醇(上海振興化工一廠，分析純）。
[0013] 1.3溶液的制備 1.3.1供試品溶液的制備 取生芪消渴膠囊粉末2 g，加甲醇20 mL，加熱回流1小時，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加 水5 mL使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次10 mL，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲 醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。
[0014] 1.3.2陰性對照溶液的制備 按生芪消渴膠囊生產方法制備缺地黃陰性對照樣品，取陰性對照粉末2 g，加甲醇20 mL，加熱回流1小時，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加水5 mL使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提 取4次，每次10 mL，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為陰性對照溶液。
[0015] 1.3.3對照品溶液的配制 精密稱取梓醇對照品0.00500 g于10 mL容量瓶中，加甲醇制成0.5 mg/mL的溶液，作 為對照品溶液。
[0016] 1.3.4回香醛試液的配制 取茴香醛0.5 mL，加醋酸50 mL使溶解，加硫酸1 mL，搖勻，即得。
[0017] 1.4薄層鑒別 吸取供試品溶液、陰性對照溶液和梓醇對照品溶液各2 yL，分別點于同一硅膠G薄層板 上，以三氯甲烷-甲醇-水（14:6:1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以回香醛試液，在105 °C 加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與梓醇對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑 點。
[0018] 實施例2:生芪消渴膠囊中6種主要成分的含量測定 2.1實驗儀器 Agilent 1290 Infinity UHPLC，美國Agilent，包括自動進樣器、二元栗、DAD二極管陣 列檢測器、柱溫箱;TGL-16G高速離心機(上海安亭科學儀器廠）;AE240十萬分之一電子天平 (梅特勒-托利多儀器上海有限公司）;超純水機（四川沃特爾科技發展有限公司）;DK-98-ll 恒溫水浴鍋(天津市泰斯特儀器有限公司）;EL204萬分之一電子天平(梅特勒-托利多儀器 上海有限公司）;CQ250A-TS超聲波清洗機(上海躍進醫用光學器械廠）。
[0019] 2.2實驗試劑及試藥 毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品、丹酚酸B對照品、丹酚酸A對照品、丹參素鈉對照品、迷迭 香酸對照品和和原兒茶酸對照品（四川省維克奇生物科技有限公司，批號140504、150427、 140625、140510、MMST-10120901、110306，純度彡98%);甲酸（優級純，FS0630-020,美國 TEDIA有限公司），甲醇(分析純，200909061，上海振興化工一廠），乙醇(分析純，10009164， 國藥集團化學試劑有限公司），蒸餾水(廣州屈臣氏食品飲料有限公司）2.3色譜條件的選 擇 2.3色譜條件 色譜柱：Agilent Eclipse Plys Ci8 RRHD (150 mmX2.1 mm, 1.8 ym) 流動相:A: 0.1%甲酸水溶液B: 0.1%甲酸甲醇溶液 梯度洗脫程序見表1; 檢測波長:280 nm;流速:0.25 ml/min;柱溫:45 °C;進樣量:2 μL。
[0020] 表1流動相梯度洗脫表 2.4對照品和供試品溶液制備
2.4.1對照品溶液制備 分別精密稱取毛蕊異黃酮葡萄糖苷、丹酚酸Β、丹酚酸Α、丹參素鈉、迷迭香酸和和原兒 茶醛對照品10.5011^、10.2211^、11.4011^、10.0411^、10.4011^、11.6011^于10 1111容量瓶中，加甲 醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。制得毛蕊異黃酮葡萄糖苷、丹酚酸Β、丹酚酸Α、丹參素鈉、迷迭 香酸和和原兒茶醛對照品儲備液的濃度分別為1.050 mg/ml、l .022 mg/ml、l. 140 mg/ml、 1.004 mg/ml、l .040 mg/ml、l. 160 mg/ml，備用。
[0021] 2.4.2供試品溶液制備 取裝量差異項下生芪消渴膠囊內容物2 g，精密稱定，置50 ml圓底燒瓶中，加甲醇25 ml回流提取1 h，冷卻，補重，過濾，取續濾液微孔濾膜(0.45 μπι)濾過，取續濾液，即得。 [0022] 2.4.3陰性對照溶液制備 按處方比例制備不含黃芪、丹參的陰性樣品，再按供試品溶液的制備方法制備陰性對 照溶液。
[0023] 2.5方法學考察 2.5.1系統適應性考察 分別取混合對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各2 μL，按"2.3"項下的色譜條件 測定，得色譜圖，根據色譜參數計算系統適用性。結果表明，6種被測化合物與其他物質峰分 離完全，分離度大于1.5,見圖2、圖3和圖4。
[0024] 2.5.2線性關系考察 分別精密量取"2.4. Γ項下毛蕊異黃酮葡萄糖苷、丹酚酸Β、丹酚酸Α、丹參素鈉、迷迭香 酸和和原兒茶醛對照品儲備液1.0 mL、5.0 mL、2.0 mL、5.0 mL、1.0 mL、1.0 mL于10 mL量 瓶中。混合，甲醇定容至刻度線。逐步稀釋得七個系列濃度的工作液，濃度見表2。
[0025]表2 6種成分的線性濃度(ug/mL)
按擬定的色譜條件測定，將測定結果以進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制工作曲 線，計算回歸方程，結果見表3。實驗結果表明：6個被測物質在擬定的色譜條件下，線性關系 良好。
[0026]表3各成分的回歸方程
2.5.3精密度實驗 取同一供試品溶液，連續進樣6次，測定峰面積，結果6次峰面積RSD在0.50%~2.6%之 間，說明精密度良好。結果見表4。
[0027] 表4含量測定精密度實驗結果
2.5.4重復性實驗 取同一批號生芪消渴膠囊共6份，精密稱定，按"2.4.2.4"項下方法制備供試品溶液，分 別測定，計算各指標含量及RSD。實驗結果表明，6份供試品溶液中6個成分含量結果RSD(/3 = 6)均小于3.0%，說明此方法的重復性良好，實驗結果見表5。
[0028] 表5含量測定重復性實驗結果(含量%)
2.5.5穩定性實驗 取同一供試品溶液，于〇 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h分別進樣，進樣量為2 yL，測定各指 標成分峰面積。結果表明供試品在10 h內穩定。結果見表6。
[0029] 表6含量測定穩定性實驗計算結果(mg/mL)
2.5.6回收率實驗 分別稱取已測定含量的生芪消渴膠囊6份，精密加入6種被測成分(丹參素鈉、原兒茶 醛、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A)混合對照品甲醇溶液適量，按供試 品溶液制備方法制備后按擬定的色譜條件測定，實驗結果見表7~表12。實驗結果表明，6個 待測成分回收率良好。
[0030]表7丹參素鈉回收率實驗結果
表8原兒茶醛回收率實驗結果 表9毛蕊異黃酮葡萄糖苷回收率實驗結果

表10迷迭香酸回收率實驗結果
表11丹酚酸B回收率實驗結果
表12丹酚酸A回收率實驗結果
2.6樣品含量測定 將10批生芪消渴膠囊，按"供試品溶液"項下方法操作，按擬定的色譜條件下進行分析， 測定10批制劑中6個指標性成分的含量。含量測定結果見表13。結果表明，10批生芪消渴膠 囊中6個被測成分的含量波動相對較小，它們的RSD值介于3.17%~5.07%之間。測定的指標成 分丹參素鈉、原兒茶醛、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A的RSD分別為 4.75%、4.21%，5.07%、4.53%、3.17%、4.28%，含量較均一。說明不同批次的生芪消渴膠囊中各 含量均一"性良好。
[0031] 表13 10批生芪消渴膠囊含量測定結果(％)
2.7小結 從10批生芪消渴膠囊的含量測定結果顯示，6個主要成分占生芪消渴膠囊總含量的 1.59%~44.95%，其中生芪消渴膠囊中丹參素鈉的含量為0.63%~0.73%，RSD為4.75%;原兒茶 醛的含量為〇. 10%~〇. 13%，RSD為4.21%;毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量為0.024%~0.029，RSD 為5.07%;迷迭香酸的含量為0.074%~0.087%，RSD為4.53%;丹酚酸B的含量為0.42%~ 0.46%，RSD為3.17%;丹酚酸A的含量為0.20%~0.24%，RSD為4.28%; 6個測定成分總量在 1.26%~1.65%，RSD為3.63%。含量較高的丹參素鈉、原兒茶醛、丹酚酸8、丹酚酸4的1^0為 4.75%、4.21%、3.17%、4.28%，含量較為穩定;6個測定成分的含量也較為穩定(RSD為3.63%)， 表明十批生芪消渴膠囊含量差別不大。該藥企生產的生芪消渴膠囊6個指標成分的總含量 一致性較好。
[0032] 當然，以上只是本發明的具體應用范例，本發明還有其他的實施方式，凡采用等同 替換或等效變換形成的技術方案，均落在本發明所要求的保護范圍之內。
【主權項】
1. 生芪消渴膠囊的質量控制方法，其特征在于該方法包括如下步驟:采用薄層色譜法 (TLC)對生芪消渴膠囊中地黃進行定性鑒別;采用超高效液相色譜(UHPLC)對生芪消渴膠囊 中毛蕊異黃酮葡萄糖苷、丹酚酸B、丹酚酸A、丹參素鈉、迷迭香酸和和原兒茶醛進行含量測 定。2. 根據權利要求1所述的生芪消渴膠囊的質量控制方法，其特征在于:采用薄層色譜法 (TLC)對生芪消渴膠囊中地黃進行定性鑒別時，先制備供試品溶液、陰性對照溶液、梓醇對 照品溶液和回香醛試液;然后吸取供試品溶液、陰性對照溶液和梓醇對照品溶液，分別點于 同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以回香醛試液，加 熱至斑點顯色清晰，觀察供試品色譜中在與梓醇對照品色譜相應的位置上是否顯相同顏色 的斑點以鑒別供試品的性狀。3. 根據權利要求2所述的生芪消渴膠囊的質量控制方法，其特征在于:展開劑三組分中 三氯甲烷、甲醇和水的質量比為14:6:1。4. 根據權利要求1所述的生芪消渴膠囊的質量控制方法，其特征在于:進行含量測定時 分別取混合對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液，按色譜條件測定，得色譜圖，根據色 譜參數計算系統適用性，觀察6種被測化合物與其他物質峰分離情況以測定6種成分的含 量。5. 根據權利要求4所述的生芪消渴膠囊的質量控制方法，其特征在于:含量測定時色譜 條件為：色譜柱:Agilent Eclipse Plys Ci8 RRHD (150 mmX2.1 mm，1.8 ym);流動相：A: 0.1%甲酸水溶液、B: 0.1%甲酸甲醇溶液；檢測波長：280 nm;流速:0.25 ml/min;柱溫:45 °C ;進樣量:2 μ 1。
【文檔編號】G01N30/02GK106018661SQ201610252854
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年4月22日
【發明人】郭兵, 王永林, 李勇軍, 黃勇, 王愛民, 蘭燕宇, 鄭林, 陸苑
【申請人】貴州醫科大學