一種牛奶和奶粉中三聚氰胺的檢測方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種檢測方法，具體涉及一種牛奶和奶粉中三聚氰胺的檢測方法。
【背景技術】
[0002]自2008年的“三鹿嬰幼兒奶粉事件”起，人們對乳制品安全問題產生了極大的關注，但牛奶和奶粉中的三聚氰胺事件仍頻頻發生、屢禁不止。因此，迫切需要發展簡便、高效的檢測方法，以滿足日益嚴峻的牛奶和奶粉制品中三聚氰胺檢測要求。目前，國內外關于三聚氰胺的檢測方法，主要有高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜法、離子色譜法、氣質聯用(GC-MS)以及液質聯用(LC-MS)等，雖然這些方法可以準確地檢測出牛奶和奶粉制品中的三聚氰胺，但都存在操作復雜、樣品處理時間長、無法快速篩查、檢測工作量大以及價格昂貴等問題。
[0003]咖啡環效應是由Deegan等人率先提出的一種分離富集新現象,具有簡單、高效等特點。咖啡環效應不僅僅局限于咖啡溶液，還廣泛地存在于多種溶液體系中，通過咖啡環效應的分離富集，可極大提高后續檢測的靈敏度到lmg/L甚至更高。
[0004]共聚焦顯微拉曼光譜是一種具有高分辨、高通量等優點的微區分析技術，其光譜峰的位置、數量和強度信息直接反映了分子的構成及構象信息，可直接對不同形態的微區樣品進行測試。通過有機結合咖啡環效應的分離富集特性及拉曼光譜的精確檢測，可高通量檢測牛奶和奶粉制品中低濃度的三聚氰胺，因此具有十分廣闊的應用前景。
【發明內容】
[0005]為解決上述問題，本發明提供了一種牛奶和奶粉中三聚氰胺的檢測方法，操作簡便、快速且結果準確，重現性好；可大大簡化檢測步驟，降低檢測成本，對提高監管部門的工作效率、實現牛奶和奶粉的高通量檢查具有重大的社會效益。
[0006]為實現上述目的，本發明采取的技術方案為:
[0007]—種牛奶和奶粉中三聚氰胺的檢測方法，包括如下步驟:
[0008]S1、用蒸餾水或純水配制不同濃度的三聚氰胺儲備液；
[0009]S2、將步驟SI制備的不同濃度的三聚氰胺儲備液分別加入本身不含三聚氰胺的牛奶或奶粉溶解液中，充分振蕩混勻得到混合液；
[0010]S3、將步驟S2所得的混合液與無水乙醇以適當比例混合，振蕩均勻后，離心得到上層澄清提取液；
[0011]S4、將步驟S3所得的澄清提取液滴在基底上，室溫蒸發后得到咖啡環；
[0012]S5、對三聚氰胺進行共聚焦顯微拉曼光譜檢測，得到其拉曼光譜；
[0013]S6、對步驟S4形成的咖啡環物質進行共聚焦顯微拉曼光譜檢測，得到其拉曼光譜圖；
[0014]S7、對比分析咖啡環物質的拉曼譜峰位置及三聚氰胺的拉曼譜峰位置，判斷有無三聚氰胺存在。
[0015]所述的奶粉溶解液為奶粉的取樣量為Ig,放入25ml的燒杯中用蒸餾水或純水定容至1ml并磁力攪拌混勻得到溶解液。
[0016]所述步驟S2中所配置的混合液中三聚氰胺濃度分別為0mg/kg、lmg/kg、5mg/kg、10mg/kg、50mg/kg、100mg/kg、500mg/kg 和 1000mg/kg。
[0017]所述步驟S3中所用無水乙醇為99.7%，所述混合液與無水乙醇混合比例為1:2。
[0018]所述步驟S3可替換為取步驟S2所得的混合液加酸調節PH至蛋白質變性析出。
[0019]所用酸為濃度為lmol/L的鹽酸,調節PH為4.7。
[0020]所述步驟S4中的基底為金屬片或金屬鍍膜玻璃。
[0021]本發明具有以下有益效果:
[0022]本發明充分結合了咖啡環效應的分離富集特性和共聚焦顯微拉曼光譜的高分辨檢測，提供了一種簡便快捷、成本低且結果準確的牛奶和奶粉中低濃度三聚氰胺的檢測新方法，只需通過正常蒸發過程即可實現低成本檢測。該方法有利于實現大批量低成本的快速篩查，為牛奶和奶粉制品中三聚氰胺的檢測提供了一種新技術手段。
【具體實施方式】
[0023]為了使本發明的目的及優點更加清楚明白，以下結合實施例對本發明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。
[0024]本發明的檢測原理為:
[0025]三聚氰胺具有不飽和鍵結構，拉曼信號強度大，且特征譜峰尖銳，通過咖啡環效應，可以使牛奶或奶粉制品中的物質得到分離富集。用共聚焦顯微拉曼光譜判斷咖啡環上待測物質的位置，并測定其拉曼光譜，通過與三聚氰胺標準樣品的譜峰比較判斷待測樣品中是否含有三聚氰胺。
[0026]本具體實施所使用的儀器設備為:
[0027]磁力攪拌器，離心機，pH計，共聚焦顯微拉曼光譜儀。可調移液器(1-50 μ L, 20-200 μ L, 100-1000 μ L)，移液器頭 20-200 μ L 和 100-1000 μ L, 25ml 燒杯，1ml
離心管。
[0028]所用試劑如下:
[0029](I)三聚氰胺粉末標準品，市售。
[0030](2)無水乙醇，99.7%，市售；鹽酸，11.9mol/L，市售。
[0031](3)金屬片，市售；鍍膜玻璃，自制。
[0032](4)蒸餾水或純水，市售。
[0033]實施例1
[0034]SI 1、牛奶處理方法如下:
[0035]分別取2ml含不同濃度三聚氰胺(l、5、10、50、100、500、1000mg/kg)的牛奶樣品至1ml離心管中，準確加入無水乙醇4ml，充分振蕩混勻得到混合液。將混合液在離心機中離心5min后，取上層澄清提取液。
[0036]本方法的檢出限是lmg/kg。
[0037]S12、樣品咖啡環的制備
[0038]用移液器吸取得到的澄清提取液，滴于金屬基底或鍍膜玻璃基底上，室溫條件下蒸發后，得到待測樣品所形成的咖啡環。
[0039]S13、咖啡環物質的共聚焦顯微拉曼光譜檢測
[0040]將得到的待測樣品所形成的咖啡環，置于共聚焦顯微拉曼光譜儀的顯微鏡下，觀察咖啡環物質的分布，對咖啡環物質進行拉曼光譜檢測，得到咖啡環上不同區域的拉曼光譜圖。對比標準三聚氰胺樣品的共聚焦顯微拉曼光譜，根據譜峰位置找出三聚氰胺在咖啡環上的位置，并判斷三聚氰胺是否存在。
[0041]實施例2
[0042]S21、牛奶處理方法如下:
[0043]取1ml含不同濃度三聚氰胺(l、5、10、50、100、500、1000mg/kg)的牛奶樣品至25ml燒杯中。配制lmol/L的鹽酸(蒸餾水或純水稀釋)，向牛奶樣品中加入適量鹽酸，調節PH至4.7，使蛋白質變性析出，充分振蕩混勻得到混合液。取混合液5ml置于1ml離心管中，離心機離心5min后，取上層澄清提取液。
[0044]本方法的檢出限是lmg/kg。
[0045]S22、樣品咖啡環的制備
[0046]用移液器吸取得到的澄清提取液，滴于金屬基底或鍍膜玻璃基底上，室溫條件下蒸發后，得到待測樣品所形成的咖啡環。
[0047]S23、咖啡環物質的共聚焦顯微拉曼光譜檢測
[0048]取得到的待測樣品所形成的咖啡環，置于共聚焦顯微拉曼光譜儀的顯微鏡下，觀察咖啡環物質的分布，對咖啡環物質進行拉曼光譜檢測，得到咖啡環上不同區域的拉曼光譜圖。對比標準三聚氰胺樣品的共聚焦顯微拉曼光譜，根據譜峰位置找出三聚氰胺在咖啡環上的位置，并判斷三聚氰胺是否存在。
[0049]實施例3
[0050]S31、奶粉處理方法如下:
[0051]取Ig奶粉樣品至25ml燒杯中，準確加入蒸餾水或純水9ml，磁力攪拌得到溶解液。將不同濃度的三聚氰胺儲備液加入溶解液中，使其中三聚氰胺的濃度為1、5、10、50、100、500、1000mg/kg。配制lmol/L的鹽酸(蒸餾水或純水稀釋)，向含三聚氰胺的奶粉溶解液中加入適量鹽酸，調節PH至4.7，使蛋白質變性析出，充分振蕩混勻得到混合液。取混合液5ml置于1ml離心管中，離心機離心5min，取上層澄清提取液。
[0052]本方法的檢出限是lmg/kg。
[0053]S32、樣品咖啡環的制備
[0054]用移液器吸取得到的澄清提取液，滴于金屬基底或鍍膜玻璃基底上，室溫條件下蒸發后，得到待測樣品所形成的咖啡環。
[0055]S33、咖啡環物質的共聚焦顯微拉曼光譜檢測
[0056]取得到的待測樣品所形成的咖啡環，置于共聚焦顯微拉曼光譜儀的顯微鏡下，觀察咖啡環物質的分布，對咖啡環物質進行拉曼光譜檢測，得到咖啡環上不同區域的拉曼光譜圖。對比標準三聚氰胺樣品的共聚焦顯微拉曼光譜，根據譜峰位置判斷三聚氰胺在咖啡環上的位置，并判斷三聚氰胺的存在。
[0057]綜上所述，本具體實施充分結合了咖啡環效應的分離富集特性和共聚焦顯微拉曼光譜的高分辨檢測，提供了一種簡便快捷、成本低且結果準確的牛奶和奶粉中低濃度三聚氰胺的檢測新方法，只需通過正常蒸發過程即可實現低成本檢測。該方法有利于實現大批量低成本的快速篩查，為牛奶和奶粉制品中三聚氰胺的檢測提供了一種新技術手段。
[0058]以上所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對于本技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明原理的前提下，還可以作出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發明的保護范圍。
【主權項】
1.一種牛奶和奶粉中三聚氰胺的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟: 51、用蒸餾水或純水配制不同濃度的三聚氰胺儲備液； 52、將步驟SI制備的不同濃度的三聚氰胺儲備液分別加入本身不含三聚氰胺的牛奶或奶粉溶解液中，充分振蕩混勻得到混合液； 53、將步驟S2所得的混合液與無水乙醇以適當比例混合，振蕩均勻后，離心得到上層澄清提取液； 54、將步驟S3所得的澄清提取液滴在基底上，室溫蒸發后得到咖啡環； 55、對三聚氰胺進行共聚焦顯微拉曼光譜檢測，得到其拉曼光譜； 56、對步驟S4形成的咖啡環物質進行共聚焦顯微拉曼光譜檢測，得到其拉曼光譜圖； 57、對比分析咖啡環物質的拉曼譜峰位置及三聚氰胺的拉曼譜峰位置，判斷有無三聚氰胺存在。2.根據權利要求1所述的一種牛奶和奶粉中三聚氰胺的檢測方法，其特征在于，所述的奶粉溶解液為奶粉的取樣量為lg，放入25ml的燒杯中用蒸餾水或純水定容至1ml并磁力攪拌混勻得到溶解液。3.根據權利要求1所述的一種牛奶和奶粉中三聚氰胺的檢測方法，其特征在于，所述步驟S2中所配置的混合液中三聚氰胺濃度分別為0mg/kg、lmg/kg、5mg/kg、10mg/kg、50mg/kg、100mg/kg、500mg/kg 和 1000mg/kg。4.根據權利要求1所述的一種牛奶和奶粉中三聚氰胺的檢測方法，其特征在于，所述步驟S3中所用無水乙醇為99.7%，所述混合液與無水乙醇混合比例為1:2。5.根據權利要求1所述的一種牛奶和奶粉中三聚氰胺的檢測方法，其特征在于，所述步驟S3可替換為取步驟S2所得的混合液加酸調節PH至蛋白質變性析出。6.根據權利要求5所述的一種牛奶和奶粉中三聚氰胺的檢測方法，其特征在于，所用酸為濃度為111101/1的鹽酸，調節？!1為4.7。7.根據權利要求1所述的一種牛奶和奶粉中三聚氰胺的檢測方法，其特征在于，所述步驟S4中的基底為金屬片或金屬鍍膜玻璃。
【專利摘要】本發明公開了一種牛奶和奶粉中三聚氰胺的檢測方法，本發明充分結合了咖啡環效應的分離富集特性和共聚焦顯微拉曼光譜的高分辨檢測，提供了一種簡便快捷、成本低且結果準確的牛奶和奶粉中低濃度三聚氰胺的檢測新方法，只需通過正常蒸發過程即可實現低成本檢測。該方法有利于實現大批量低成本的快速篩查，為牛奶和奶粉制品中三聚氰胺的檢測提供了一種新技術手段。
【IPC分類】G01N21/65
【公開號】CN105628669
【申請號】CN201410591241
【發明人】陳達, 閆孟雨
【申請人】河北伊諾光學科技有限公司
【公開日】2016年6月1日
【申請日】2014年10月28日