一種混合型飼料添加劑中新甲基橙皮苷二氫查耳酮含量的檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于飼料添加劑中成分分析檢測技術領域，具體涉及一種混合型飼料添加 劑中新甲基橙皮苷二氫查耳酮含量的檢測方法。
【背景技術】
[0002] 高效液相色譜法是用高壓輸液栗將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合 溶劑、緩沖液等流動相栗入裝有固定相的色譜柱，經進樣閥注入待測樣品，由流動相帶入柱 內，在柱內各成分被分離后，依次進入檢測器進行檢測，從而實現對試樣的分析。這種方法 已成為化學、生化、醫學、工業、農業、環保、商檢和法檢等學科領域中重要的分離分析技術， 是分析化學、生物化學和環境化學工作者手中必不可少的工具。
[0003] 新甲基橙皮苷二氫查耳酮，簡稱NHDC，淡黃色粉末，是一種具有苦味抑制和風味改 良的功能性甜味劑。甜味來得慢，后味持續時間長，甜味清爽且愉快，能有效降低人體和動 物體對動物飼料中可能帶有的苦味的敏感程度。NHDC甜度達到最大值的時間要比糖精和蔗 糖都長，而且持續時間也較長。
[0004] 在飼料添加劑領域，可使飼料口味超甜，增大崽豬食欲，明顯促進其生長和降低每 千克增重的飼料消耗。新橙皮苷二氫查耳酮與別的甜味劑復配使用時，尤其是與糖精復配 時，能產生優良的協同作用，而糖精的金屬余味可能會造成嚴重的問題(特別是當其用于仔 豬日糧中時），足夠濃度的NHDC是提供余味掩蓋作用所必須的。然而，目前飼料添加劑中新 甲基橙皮苷二氫查耳酮含量的檢測沒有國家標準，也沒有現成的方法。

【發明內容】

[0005] 針對現有技術存在的上述不足，本發明所要解決的技術問題是：怎樣提供一種混 合型飼料添加劑中新甲基橙皮苷二氫查耳酮含量的檢測方法，用以彌補目前尚沒有相關檢 測方法的不足，使該方法能夠對混合型飼料添加劑中新甲基橙皮苷二氫查耳酮含量進行精 準定量，且具有無需進行復雜的前處理、檢測結果靈敏、準確、高效、穩定的特點。
[0006] 為了解決上述技術問題，本發明采用如下技術方案：一種混合型飼料添加劑中新 甲基橙皮苷二氫查耳酮含量的檢測方法，包括如下步驟：
[0007] 1)采用甲醇水溶液作為溶劑，配制梯度濃度的新甲基橙皮苷二氫查耳酮標準溶 液；
[0008] 2)采用液相色譜法對步驟1)配制的新甲基橙皮苷二氫查耳酮標準溶液進行檢測， 得到新甲基橙皮苷二氫查耳酮出峰的峰面積，以新甲基橙皮苷二氫查耳酮標準溶液的濃度 為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線;其中，色譜條件為采用C 18液相色譜柱、流動相為 甲醇水溶液、檢測波長為282nm;
[0009] 3)向混合型飼料添加劑中加入所述流動相，并進行超聲處理，得到樣品處理液；
[0010] 4)將步驟3)得到的樣品處理液在與步驟2)相同的液相色譜條件下進行檢測，得到 新甲基橙皮苷二氫查耳酮出峰的峰面積，根據步驟2)建立的標準曲線計算出樣品處理液中 的新甲基橙皮苷二氫查耳酮濃度，并結合所述樣品處理液的體積和樣品質量，計算出混合 型飼料添加劑中新甲基橙皮苷二氫查耳酮的含量。
[0011] 相比現有技術，本發明具有如下有益效果：
[0012] 1、為了彌補目前尚沒有針對混合型飼料添加劑中新甲基橙皮苷二氫查耳酮含量 檢測方法的不足，本發明考慮到新甲基橙皮苷二氫查耳酮難溶于水的特性，以甲醇水溶液 作為流動相，用該流動相對樣品中新甲基橙皮苷二氫查耳酮進行提取，并根據樣品中各成 分組成的性質，選擇C 18柱作為固定相，并通過創造性的研究得出適用于本發明混合型飼料 添加劑分離的色譜條件，使得各成分在該色譜條件下能充分分離開，在檢測波長282nm條件 下新甲基橙皮苷二氫查耳酮能夠穩定出峰，出峰時間在10~20分鐘之間，出峰不會拖尾、重 疊，不會有干擾峰出現，進而使本發明檢測結果精確，可靠性高。
[0013] 2、本發明先對不同濃度的新甲基橙皮苷二氫查耳酮標準溶液進行檢測，避免了單 點計算帶來的誤差，進而使檢測結果更加準確、可靠，制得的標準曲線相關系數更高，為后 續樣品的檢測奠定了可靠的定量基礎。
[0014] 3、本發明無需進行復雜的樣品前處理，只需采用甲醇水流動相對混合型飼料添加 劑中新甲基橙皮苷二氫查耳酮進行提取，前處理過程更加簡單，本發明還研究出提取過程 中最佳料液比和超聲時間，在此條件下新甲基橙皮苷二氫查耳酮提取最完全，能夠保證良 好的提取效果，進而使檢測結果更加準確。
[0015] 4、本發明檢測方法使用的設備和試劑均為通用設備，適用于飼料廠進行大批量自 檢，具有良好的應用推廣前景。
【附圖說明】
[0016] 圖1為本發明方法新甲基橙皮苷二氫查耳酮標準曲線圖。
【具體實施方式】
[0017] 下面結合具體實施例和說明書附圖對本發明作進一步詳細說明。本實施案例在以 本發明技術為前提下進行實施，現給出詳細的實施方式和具體的操作過程，來說明本發明 具有創造性，但本發明的保護范圍不限于以下的實施例。
[0018] 本實施例主要設備有分析天平、高效液相色譜和一些常見實驗室玻璃儀器;所用 的試劑有色譜級甲醇、二氫查耳酮標準品，所用的其它試劑均為色譜純級試劑，所用水為純 水。
[0019] -、本發明混合型飼料添加劑中新甲基橙皮苷二氫查耳酮含量的檢測方法，包括 如下步驟：
[0020] 1)采用甲醇水溶液作為溶劑，配制梯度濃度的新甲基橙皮苷二氫查耳酮標準溶 液；
[0021] 2)采用液相色譜法對步驟1)配制的新甲基橙皮苷二氫查耳酮標準溶液進行檢測， 得到新甲基橙皮苷二氫查耳酮出峰的峰面積，以新甲基橙皮苷二氫查耳酮標準溶液的濃度 為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線;其中，色譜條件為采用C 18液相色譜柱、流動相為 甲醇水溶液、檢測波長為282nm;
[0022] 3)向混合型飼料添加劑中加入所述流動相，并進行超聲處理，得到樣品處理液；
[0023] 4)將步驟3)得到的樣品處理液在與步驟2)相同的液相色譜條件下進行檢測，得到 新甲基橙皮苷二氫查耳酮出峰的峰面積，根據步驟2)建立的標準曲線計算出樣品處理液中 的新甲基橙皮苷二氫查耳酮濃度，并結合所述樣品處理液的體積和樣品質量，計算出混合 型飼料添加劑中新甲基橙皮苷二氫查耳酮的含量。
[0024] 上述步驟1)中為配制濃度依次為0 ·1、0·2、0·3、0· 4和0 · 5mg/mL的新甲基橙皮苷二 氫查耳酮標準溶液，這樣得到的標準曲線線性相關性更好，使得樣品的檢測計算結果更加 準確。
[0025] 上述甲醇水溶液中甲醇和水的體積比為40~60:60~40,過濾后備用。選擇這樣的 流動相，有利于樣品中各組分充分分離開，且新甲基橙皮苷二氫查耳酮的出峰時間合適，為 10~20分鐘。
[0026] 上述C18液相色譜柱規格為250mm長X 4.6mm內徑，填料粒度為5μπι。
[0027] 上述液相色譜檢測過程中控制柱溫為室溫，流動相流速為0.8~1.5mL/miη，進樣 量為20~30yL。
[0028] 上述步驟3)將混合型飼料添加劑與所述流動相按照3~5g:100mL的質量體積比混 合，并進行超聲處理20~60min，得到樣品處理液。這樣的提取條件，使得待檢測樣品中新甲 基橙皮苷二氫查耳酮提取更加完全，檢測結果更加真實可靠。
[0029] 上述混合型飼料添加劑為以二氧化硅和/或蛭石為載體的混合型飼料添加劑，特 別是指甜味劑。
[0030] 上述得到的樣品處理液如果經過本發明液相色譜方法檢測，檢測的282nm處吸光 度值最大大于〇. 8，則對樣品處理液進行一定的濃度稀釋后再重新進行檢測，這樣檢測結果 更加準確可靠。
[0031] 本發明檢測原理:采用新甲基橙皮苷二氫查耳酮標準品，用甲醇水流動相配制成 梯度濃度的二氫查耳酮標準溶液，用液相色譜儀在本發明設定的色譜條件下對各濃度的標 準溶液中新甲基橙皮苷二氫查耳酮含量進行測定，并得到新甲基橙皮苷二氫