新橙皮苷二氫查二酮的新用圖
【技術領域】
[0001] 本發明屬于醫藥技術及保健品領域，具體涉及新橙皮苷二氫查二酮在防治爆發性 肝損傷中的應用。
【背景技術】
[0002] 爆發性肝損傷又叫急性壞死型肝炎，臨床上亦稱急性重型肝炎。是由多種原因引 起的大量肝細胞壞死及（或）嚴重的肝功能障礙，病人短期內發展至肝性腦病的一種綜合 征。爆發性肝損傷的發病非常迅速，病情重，死亡率高，目前仍然缺乏特異性的治療措施。由 病毒性肝炎、酗酒、服用肝毒性藥物或其它多種原因所致的肝功能衰竭是臨床常見危重癥， 每年發病數以百萬計。目前的綜合治療措施僅能使其病死率降至60%，而生物人工肝支持 系統和肝細胞移植的應用雖然能夠進一步提高患者的生存率，但肝移植仍然是目前唯一能 明顯改善患者預后的治療措施。由于供肝來源受限、手術費用昂貴以及術后須長期服用免 疫抑制劑等，大部分患者還無法接受肝移植治療，尋找新的肝衰竭防治方法勢在必行。
[0003] 由腸源性內毒素造成的急性肝損傷是臨床上常見的肝臟急性炎癥反應性疾病， 常發生嚴重肝壞死和重癥肝炎表現，也是導致急性肝功能衰竭的常見原因之一。肝臟是體 內解毒的主要器官，同時也是遭受內毒素攻擊的首要臟器。在臨床上，各種致病因素（例 如：肝炎病毒、酒精、藥物等）可以通過其特異性的致病機制對肝臟造成原發性損傷，在此 過程中，機體常出現腸源性內毒素血癥，內毒素激活枯否細胞釋放炎性遞質，使肝損傷不斷 加重，最終爆發肝功能衰竭，導致患者死亡。所以，探索內毒素性肝損傷的防治方法，對避免 各種致病因素引起的肝臟炎癥向惡性方向發展，預防肝功能衰竭的發生具有重要意義。目 前國內外學者多應用D-半乳糖胺（D-galactosamine，D_GalN)造成原發性肝損傷，結合腹 腔內或靜脈注射小劑量脂多糖（lipopolysaccharide,LPS)模擬腸源性內毒素血癥建立肝 衰竭模型，其與HBV所致肝功能衰竭有較高的臨床相關性，是目前比較公認的急性肝衰竭 動物模型之一。通過建立爆發性肝損傷動物模型，研究肝病的發生機制，篩選保肝藥物，探 索保肝作用原理，具有十分重要的現實意義。
[0004] D-GalN/LPS致爆發性肝損傷動物模型的機制是，D-GalN是肝細胞的磷酸尿嘧啶 核苷（UTP)的干擾劑，可造成肝細胞的彌漫性壞死和炎癥，與臨床病毒性肝炎的病理變化 相似。D-GalN進入體內后能與磷酸尿苷結合形成磷酸尿苷-半乳糖胺，致使磷酸尿苷耗竭， 使依賴其生物合成的核酸、糖蛋白、脂糖等物質合成受到抑制，并限制細胞器及酶的生成和 補充，使細胞器受損、膜損害、鈣離子內流入細胞，造成肝細胞損傷。LPS是G-細菌最重要的 致病物質，屬病原體相關分子模式（pathogenassociatedmolecularpattern,PAMP)，免 疫刺激作用強。通過激活單核-巨細胞系統（mononuclearphagacyticsystem,MPS)，弓丨 起TNF-a、IL-6、IL-1等大量炎癥介質釋放，導致全身過度炎癥反應及腦、心、腎、肝等重要 器官的衰竭。肝細胞彌漫性的損傷對細菌LPS的解毒能力大大降低，進而增強LPS的肝毒 性。有研究報道，應用D-GalN能使LPS的炎癥效應增加約104倍以上，微量LPS可以加重 D-GalN所致的急性肝損傷。D-GalN損傷僅限于肝臟，靶點明確，對其他臟器的影響不明顯。 所以常用D-GalN聯合小劑量的LPS建立爆發性肝損傷動物模型。
[0005] 新橙皮苷二氫查爾酮（NHDC)(附圖1)是將從天然柑橘植物中提取得到的新橙皮 苷氫化而成的黃酮類衍生物。早在1963年，Horowitz等人就發現新橙皮苷二氫查爾酮具 有強烈的甜味。其特點在于甜度大（蔗糖甜度的1500~1800倍），口感清爽，余味持久，并 具有極佳的屏蔽苦味的功效。與其它甜味劑相比，熱量較低，因此對人體血糖和血脂水平沒 有不良影響。目前人們已對它進行過毒理試驗，并在已有的毒理試驗的基礎上確立了它的 食品甜味劑地位。1997年，新橙皮苷二氫查爾酮被我國衛生部列入"食品添加劑使用衛生 標準"增補品種，可用于食品工業。但是目前，國內外對新橙皮苷二氫查爾酮的研究僅停留 在其作為食品添加劑的應用以及對柑橘類植物中黃烷酮的提取，而對其生理活性和合成研 究開展的較少。

【發明內容】

[0006] 有鑒于此，本發明的目的在于提供新橙皮苷二氫查二酮在防治爆發性肝損傷中的 應用，本發明研究表明新橙皮苷二氫查二酮具有良好的抗氧化和抗炎效果，因此，在制備保 肝藥物中具有良好的應用前景。
[0007] 本發明采取的技術方案如下：
[0008] 1、新橙皮苷二氫查二酮在制備預防或治療肝損傷的藥物中的應用。
[0009] 優選的，所述肝損傷為爆發性肝損傷。
[0010] 2、新橙皮苷二氫查二酮在制備保健品中的應用。
[0011] 優選的，所述保健品為護肝類保健品。
[0012] 優選的，所述保健品為對爆發性肝損傷有輔助保護作用的保健品。
[0013] 優選的，所述爆發性肝損傷為腸源性內毒素血癥所致的肝損傷。
[0014] 本發明的有益效果在于：本發明通過建立D-GalN/LPS誘導的爆發性肝損傷動物 模型，從抗氧化和抗炎兩方面研究新橙皮苷二氫查爾酮對爆發性肝損傷的預防性治療作 用，研究結果表明，新橙皮苷二氫查爾酮能顯著提高爆發性肝損傷小鼠的存活率，顯著降低 血清ALT和AST。因此，新橙皮苷二氫查爾酮在制備保肝，預防或治療爆發性肝損傷的藥物 中具有良好的應用前景。
【附圖說明】
[0015] 為了使本發明的目的、技術方案和有益效果更加清楚，本發明提供如下附圖：
[0016] 圖1新橙皮苷二氫查爾酮的結構式；
[0017] 圖2新橙皮苷二氫查爾酮對D-GalN/LPS誘導爆發性肝損傷小鼠存活率的影響結 果；
[0018] 圖3H&E染色檢測新橙皮苷二氫查爾酮對D-GalN/LPS誘導爆發性肝損傷小鼠病 理學變化的影響；
[0019] 圖4新橙皮苷二氫查爾酮對D-GalN/LPS誘導爆發性肝損傷小鼠促炎癥因子的影 響。
【具體實施方式】
[0020] 下面對本發明的優選實施例進行詳細的描述。實施例中未注明具體條件的實驗方 法，通常按照常規條件或按照制造廠商所建議的條件。
[0021] ALT、AST、MDA、GSH，CAT、GPx、SOD、iNOS和蛋白定量試劑盒均購于南京建成生物工 程研究所；N0試劑盒購于碧云天生物技術公司；C0X2和PGE2的ELISA試劑盒購于R&D公 司；TNF-a、IL-6的一抗均購于武漢三鷹生物技術有限公司；IL-10的一抗和二抗均購于 上海生工生物工程股份有限公司；新橙皮苷二氫查二酮（NHDC)購于阿拉丁；D-半乳糖胺 (D-GalN)購于阿拉丁，臨用前用生理鹽水配成40mg/mL;脂多糖（LPS)購于Sigma公司，使 用前用生理鹽水稀釋成10yg/kg;水飛薊素（Silymarin)購于Sigma公司。
[0022] 紫外分光光度儀（UV-2450,日本島津公司）；酶標儀（Bio-Tek，美國基因公司）； 電子天平（FA2004,上海舜恒平科學儀器有限公司）；高速臺式冷凍離心機（TGL-16M，長沙 湘儀離心機儀器有限公司）；三孔電熱恒溫水槽（DK-8D);高速分散器（XHF-P，寧波新芝生 物科技股份有限公司）。
[0023] 清潔級雄性昆明種小鼠，體重18_22g，由重慶中藥研究所提供。
[0024] 需要說明的是，新橙皮苷二氫查二酮和陽性藥物水飛薊素均在給藥前用質量分數 〇. 5%的羧甲基纖維素鈉溶液配成20mg/mL。
[0025] 實施例1新橙皮苷二氫查二酮對D-GalN/LPS誘導的爆發性肝損傷肝功能的保護 作用
[0026] 首先取體重18_22g的雄性昆明種小鼠，適應性喂養一周后，隨機分為10組，10組 均分兩批次處理，第一批次為造模后6h處理，第二批次為造模后24h處理。每批次分為5 組，對照組（Control，10只/組），D-GalN/LPS模型組（D-GalN/LPS，10只/組），新橙皮苷二 氫查二酮給藥組（NHDC，10只/組），新橙皮苷二氫查二酮預防給藥組（D-GalN/LPS+NHDC， 10 只 / 組），陽性對照組（D-GalN/LPS+Silymarin，10 只 / 組）。
[0027] 第一批次：新橙皮苷二氫查二酮單劑量給藥組與預防給藥組，灌胃給藥一天一次， 連續六天；陽性對照組同樣灌胃連續給藥六天；其余各組則灌胃〇. 5%羧甲基纖維素鈉溶 液連續六天。末次給藥后一小時，除對照組和NHDC組腹腔注射給予生理鹽水，其他組腹腔 注射給予10yg/kg的LPS和400mg/kg的D-GalN。造模六小時后，眼眶后靜脈叢采血，室溫 靜置30min后，室溫4000r/min，離心lOmin，取血清，測定血清中AST和ALT的含量，實驗結 果如表1所示。
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