一種皮革奶水解蛋白l-羥脯氨酸的快速檢測方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于分光光度技術領域，涉及一種檢測方法，特別涉及到一種皮革奶水解蛋白L-羥脯氨酸的快速檢測方法。
【背景技術】
[0002]所謂“皮革水解蛋白”，就是利用皮革下腳料或是動物的皮毛、臟器等，經水解技術而生成的一種蛋白粉。和三聚氰胺一樣，把它摻入牛奶或奶粉中可提高蛋白質的含量。農業部對生鮮乳制品中是否含有“皮革水解蛋白質”的檢測并非今年才開始的。“三聚氰胺奶”事件后，農業部于2009年開始在全國范圍內進行生鮮乳質量安全監測工作，監測的內容包括三聚氰胺、皮革水解蛋白質”和堿類物質。2011年I月5日，農業部下發了《2011年度生鮮乳制品質量安全監測計劃》，其中要求監測的項目并無變化。其檢測方法包括比色法、電泳法高效液相色譜法等。目前常用的比色法(colorimetry)是通過比較或測量有色物質溶液顏色深度來確定待測組分含量的方法。比色法檢測試劑毒性高，操作相對繁瑣。
【發明內容】
[0003]針對上述不足，本發明的目的在于提供一種避免使用毒性高的試劑，將繁瑣操作簡單化，能有效快速的檢測出樣品的含量，該項目檢測方法取樣量少，檢測時間不長，工藝簡單。
[0004]為解決上述技術問題，本發明提供的技術方案是這樣的:
[0005]—種皮革奶水解蛋白L-羥脯氨酸的快速檢測方法，依次包括下述步驟:
[0006]I)對需檢測的產品加前處理試劑處理；
[0007]2)取步驟I)中的上清溶液，加入氧化緩沖溶液及顯色劑顯色；
[0008]3)將步驟2)中溶液放入比色皿中，采用比色法對其中的L-羥脯氨酸進行測定從而獲得相關結果。
[0009]進一步地，步驟I)所述的前處理試劑為219g/L乙酸鋅+30mL/L冰乙酸和106g/L亞鐵氰化鉀。
[0010]進一步地，所述的氧化緩沖溶液為PBS和氯胺T，氯胺T濃度為1.2?1.7g/100mL。
[0011]進一步地，所述顯色劑為對二甲氨基苯甲醛。
[0012]本發明的有益效果是:提供一種避免使用毒性高的試劑，將繁瑣操作簡單化，能有效快速的檢測出樣品的含量，該項目檢測方法取樣量少，檢測時間不長，工藝簡單。
【具體實施方式】
[0013]實施例
[0014]本實施例重點介紹本發明中用到的溶液和試劑的配制方法以及檢測操作的流程方法。
[0015]I)、配制前處理試劑:準確稱取219g乙酸鋅和30mL冰乙酸，用蒸餾水定容到lOOOmL，攪拌溶解。準確稱取106g亞鐵氰化鉀，用蒸餾水定容到lOOOmL，攪拌溶解。
[0016]2)、配制氧化緩沖液:分別稱取6.95g無水磷酸氫二鈉、8g磷酸二氫鈉二水、7.05g氯胺T，用蒸餾水定容到500mL，攪拌溶解。
[0017]3)、配制顯色劑:準確量取10mL濃鹽酸緩慢加入10mL水中；稱取50g對二甲氨基苯甲醛，量取上述稀釋后的175mL濃鹽酸溶液，攪拌溶解，然后再加入325mL異丙醇，攪拌使其混勻。此試劑易氧化，需密閉低溫保存。
[0018]4)、標準溶液配制:取0.1g的L-羥脯氨酸于10mL的容量瓶中加蒸餾水溶解，滴加一滴3mol/L的硫酸溶液混勻，用蒸餾水定容到lOOmL，為100ppm的標液。(此標液應放在4°C冷藏保存)
[0019]5)、檢測方法:取2-5g樣品加入30mL /K，60°C水浴加熱20min ;冷卻至室溫；分別加入ImL乙酸鋅溶液和ImL亞鐵氰化鉀溶液，用水定容至50mL，離心，取上清液待測(若溶液渾濁，過濾后取濾液待測)。取一個2mL的離心管，加入ImL樣品液。加入500 μ L氧化緩沖液，蓋蓋上下顛倒三次使其均勻，反應2min后再加入500 μ L顯色劑，蓋蓋搖勻。在70°C水浴中加熱7分鐘，取出后冷卻至室溫。以蒸餾水為空白，536nm測定吸光度。將吸光度代入回歸方程求出羥脯氨酸含量。
[0020]最后說明的是，以上實施例僅用以說明本發明的技術方案而非限制，盡管參照較佳實施例對本發明進行了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可以對本發明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發明技術方案的宗旨和范圍，其均應涵蓋在本發明的權利要求范圍當中。
【主權項】
1.一種皮革奶水解蛋白L-羥脯氨酸的快速檢測方法，其特征在于，依次包括下述步驟: 1)對需檢測的產品加前處理試劑處理； 2)取步驟I)中的上清溶液，加入氧化緩沖溶液及顯色劑顯色； 3)將步驟2)中溶液放入比色皿中，采用比色法對其中的L-羥脯氨酸進行測定從而獲得相關結果。2.根據權利要求1所述的一種皮革奶水解蛋白L-羥脯氨酸的快速檢測方法，其特征在于，步驟I)所述的前處理試劑為219g/L乙酸鋅、30mL/L冰乙酸和106g/L亞鐵氰化鉀。3.根據權利要求1所述的一種皮革奶水解蛋白L-羥脯氨酸的快速檢測方法，其特征在于，所述的氧化緩沖溶液為PBS和氯胺T，氯胺T濃度為1.2?1.7g/100mL。4.根據權利要求1所述的一種皮革奶水解蛋白L-羥脯氨酸的快速檢測方法，其特征在于，所述顯色劑為對二甲氨基苯甲醛。
【專利摘要】本發明公開一種皮革奶水解蛋白L-羥脯氨酸的快速檢測方法，特別是一種牛奶中非法添加皮革奶水解蛋白L-羥脯氨酸的快速檢測方法，旨在提供一種使用方便，快速簡便，靈敏度高的檢測牛奶中非法添加皮革奶水解蛋白L-羥脯氨酸的快速檢測方，其技術要點：1)對需檢測的牛奶及奶制品加入試劑，水浴加熱，對牛奶及奶制品中蛋白質進行沉淀處理，靜置分層；2)將步驟1)收集的上層溶液加入氧化劑及顯色劑，反應一定時間后采用比色法對其中的L-羥脯氨酸進行測定從而獲得相關結果。
【IPC分類】G01N21/31, G01N1/28, G01N1/38
【公開號】CN105203478
【申請號】CN201510585318
【發明人】劉海靜, 李濤, 馬魁, 喬蓉霞, 林芳, 王宇, 馮潤東, 裴小龍, 王一欣
【申請人】陜西省食品藥品檢驗所, 西安中潤生物科技有限公司
【公開日】2015年12月30日
【申請日】2015年9月15日