一種治療股骨頭壞死藥物的檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種用于治療股骨頭壞死的中藥藥物，特別是涉及該藥物的檢測方 法。
【背景技術】
[0002] 股骨頭壞死的癥狀主要有髖骨疼痛，入夜尤甚，屈伸不利，腰膝酸軟。治療股骨頭 壞死的中藥顆粒劑，用于淤血阻滯、腎虛骨蝕，具有活血化瘀，補腎強骨之功。
[0003] 治療股骨頭壞死的中藥藥物由三七、淫羊藿、丹參、骨碎補、紅花、牛膝、續斷、延胡 索為原料制備獲得。而中藥制劑質量穩定、可控和具有生產可重復性是藥物具有藥理和臨 床結果可重復性的前提保證，中藥質量能否得到控制以及中藥質量標準是否科學化，是影 響中藥產業化的重要制約因素。
[0004] 質量可控性是藥品評價的重要指標，質量標準則是藥品質量可控性的具體體現。 所以，為了能生產出合格、質量穩定、均一的質量股骨頭壞死的藥物，有必要提供一種科學 合理的藥物質量控制方法。

【發明內容】

[0005] 本發明的目的是提供一種治療股骨頭壞死藥物的檢測方法，以確保生產的藥品質 穩定可控。
[0006] 本發明提供的治療股骨頭壞死藥物的檢測方法適合于由以下原料藥制備而成的 藥物：三七、淫羊藿、丹參、骨碎補、紅花、牛膝、續斷、延胡索，所述檢測方法包括鑒別方法和 含量測定方法。
[0007] 其中，所述鑒別方法包括如下鑒別： (1) 三七、續斷的薄層鑒別：取所述藥物6g，加甲醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液 蒸干，殘渣加水50ml使溶解，用乙醚振搖提取3次，每次50ml，棄去乙醚液，水層再用水飽和 的正丁醇振搖提取3次，每次50ml，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌2次每次50ml，再用 正丁醇飽和的水洗滌2次，每次50ml，分取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇lml使溶解，作為供 試品溶液；另分別取三七、續斷對照藥材各0. 5g，同法制成對照藥材溶液；再取三七皂苷札 對照品、人參皂苷Rgl對照品、人參皂苷Rb i對照品、川續斷皂苷VI對照品加甲醇分別制成每 lml分別含lmg、2. 5mg、2. 5mg、lmg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述 供試品溶液3 y 1、對照品溶液各5 y 1、對照藥材溶液2 y 1，分別點于同一硅膠G薄層板上， 以正丁醇-乙酸乙酯-丁酮-水=2:2:1:4的上層溶液為展開劑，展開，展距15cm，取出，晾 干，噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰； (2) 淫羊藿的薄層鑒別：取所述藥物2g，研細，乙酸乙酯回流提取1小時，濾過，濾液蒸 干，殘渣加甲醇lml使其溶解，作為供試品溶液；另取淫羊藿對照藥材0. 2g，同法制成對照 藥材溶液；再取淫羊藿苷對照品lmg，加甲醇溶解，制成0. 5mg/ml對照品溶液；取淫羊藿陰 性樣品1. 2g，再按供試品溶液制備方法制備成陰性對照溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供 試品溶液，陰性溶液，對照品溶液各5 y 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲 醇-水=12:7:3為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鋁溶液，在105°C加熱2min，置 365nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品、對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色 的斑點，而陰性無此斑點； (3) 丹參中丹酚酸B的薄層鑒別：取本品lg，加水50ml，加鹽酸0. lml，超聲處理30分 鐘，濾過，濾液用乙酸乙酯振搖提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加無水乙 醇lml使溶解，作為供試品溶液；另取丹參對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液；再取丹酚 酸B對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取 上述溶液各5 y 1點于同一硅膠G薄層版上，以甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸 =2:3:4:0. 5:2為展開劑，展開，展距15cm，取出，晾干，噴以5%三氯化鐵乙醇溶液，加熱至 斑點清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜、對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑 占. (4) 骨碎補的薄層鑒別：取本品2g，加乙酸乙酯30 ml，加熱回流1小時，濾過，濾液蒸 干，殘渣加甲醇lml使其溶解，作為供試品溶液；另取骨碎補對照藥材0. 5g，同法制成對照 藥材溶液；另取柚皮苷對照品適量，加甲醇制成每1 ml含lmg的溶液，作為對照品溶液；照 薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液5 y 1、對照藥材溶液和對照品溶液各2 y L，點于同一硅 膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水=1:12:2. 5:3取上層液為展開劑，展開，取出， 晾干，噴以2%三氯化鋁乙醇試液，在105°C加熱約5分鐘，置365nm紫外燈下檢視，供試品色 譜中，與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點； (5) 延胡索的薄層鑒別：取本品5g，加濃氨試液3ml，加乙醚30ml，超聲處理20分鐘，濾 過，濾液蒸干，殘渣加甲醇lml使溶解，作為供試品溶液；另取延胡索對照藥材lg，同法制成 對照藥材溶液；再取延胡索乙素對照品，加甲醇制成每lml含0. 5mg的溶液，作為供試品溶 液；照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各2 y L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己 烷-三氯甲烷-甲醇=15:8:2為展開劑，展開，取出，晾干，置碘缸中約3分鐘后取出，揮盡 板上吸附的碘后，置365nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜 相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點； 所述含量測定方法包括淫羊藿苷、丹酚酸B含量的測定方法： 以下所述為淫羊藿苷的含量測定： (1) 色譜條件：色譜柱為phenomenex Luna C1S250 mmX 4. 6 mm，5 y m，流動相為乙 腈一水=25:75,波長為270 nm，流速為1. 0 ml/min，柱溫為25°C，進樣量為對照品溶液5 y 1 和供試品溶液10 y 1，理論板數按淫羊藿苷峰計算應不低于4000 ; (2) 對照品溶液的制備：取淫羊藿苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含80 y g 的溶液； (3) 供試品溶液的制備：取本品約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇 50ml，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過， 取續濾液，即得； (4) 淫羊藿苷含量測定：分別精密吸取對照品溶液5 y 1，供試品溶液10 y 1，注入液相 色譜儀，按上述色譜條件測定，以外標一點法計算樣品中淫羊藿苷的含量； 以下所述為丹參中丹酚酸B的含量測定： (1) 色譜條件：色譜柱Kromasil C1S250謹X4.6謹，5 ym，流動相為甲醇-乙腈-1.7% 甲酸水=20:11:69,流速為1. 0 ml/min，檢測波長286nm，進樣量為對照品溶液、供試品溶液 各進10 y 1，理論板數按丹酚酸B峰計算應不低于6000 ; (2) 對照品溶液的制備：取丹酚酸B對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含80 y g 的溶液，即得； (3) 供試品溶液的制備：取本品研細，取0. 4g，精密稱定，置50ml量瓶中，加75%甲醇約 45ml，超聲處理功率200W，頻率40kHz，30分鐘，放冷，加75%甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾 液，即得； (4) 丹酚酸B含量的測定：分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液各10 y 1，按上述色譜 條件測定，以外標一點法計算樣品中丹酚酸B的含量。
[0008] 本發明建立了治療股骨頭壞死的藥物的質量控制方法，所建立的方法中，藥材的 鑒別方法成熟可行，專屬性強，陰性無干擾，含量測定方法操作容易，精密度高，重現性好， 使用本發明的質量控制方法能夠精確、穩定地控制質量股骨頭壞死的藥物質量，以適應藥 物的工業化穩定生產。
【具體實施方式】
[0009] 以下結合實施例對本發明作進一步說明。
[0010] 實施例1三七、續斷的薄層鑒別 取所述藥物6g，加甲醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水50ml使溶 解，用乙醚振搖提取3次，每次50ml，棄去乙醚液；水層再用水飽和的正丁醇振搖提取3次， 每次50ml，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌2次每次50ml，再用正丁醇飽和的水洗滌2 次，每次50ml，分取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇lml使溶解，作為供試品溶液；另分別取 三七、續斷對照藥材各0. 5g，同法制成對照藥材溶液；再取三七皂苷&對照品、人參皂苷 Rgl對照品、人參皂苷Rb i對照品、川續斷皂苷VI對照品加甲醇分別制成每lml分別含lmg、 2. 5mg、2. 5mg、lmg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄 VI B)試驗，吸取上述供試品溶液3 y 1、對照品溶液各5 y 1、對照藥材溶液2 y 1，分別點于 同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-乙酸乙酯-丁酮-水（2:2:1:4)的上層溶液為展開劑，展 開，展距15cm，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰。結果效果良好，斑 點清晰，耐用性及重現性好，陰性無干擾。
[0011] 實施例2淫羊藿的薄層鑒別 供試品溶液制備方法：取所述藥物2g，研細，乙酸乙酯回流提取1小時，濾過，濾液蒸 干，殘渣加甲醇lml使其溶解，作為供試品溶液；另取淫羊藿對照藥材0. 2g，同法制成對照 藥材溶液；再取淫羊藿苷對照品lmg，加甲醇溶解，制