本發(fa)明屬(shu)于中藥檢測，具(ju)體涉及一種桃(tao)膠的鑒別方法及其應用。

背景技術：

1、樹(shu)(shu)脂(zhi)類(lei)(lei)中(zhong)藥包(bao)括(kuo)乳香(xiang)(xiang)(xiang)、沒藥、桃膠、蘇合香(xiang)(xiang)(xiang)、蘆薈、安息(xi)香(xiang)(xiang)(xiang)、血竭、阿魏、兒茶等，多(duo)為(wei)植物體滲(shen)出(chu)的天(tian)然(ran)樹(shu)(shu)脂(zhi)或樹(shu)(shu)脂(zhi)加(jia)工品，這些樹(shu)(shu)脂(zhi)通(tong)常(chang)具有獨特的藥理作用,被(bei)廣泛應用于中(zhong)醫臨床，是中(zhong)藥的重要組成部(bu)分。滲(shen)出(chu)的樹(shu)(shu)脂(zhi)按是否經過人為(wei)加(jia)工可以分為(wei)天(tian)然(ran)樹(shu)(shu)脂(zhi)和(he)加(jia)工樹(shu)(shu)脂(zhi)兩(liang)大(da)(da)類(lei)(lei)，其(qi)中(zhong)加(jia)工樹(shu)(shu)脂(zhi)類(lei)(lei)中(zhong)藥外(wai)觀顏色一(yi)般比較均一(yi)，質量也相對穩定可控(kong)，不容(rong)(rong)易直(zhi)接摻假(jia)。而天(tian)然(ran)樹(shu)(shu)脂(zhi)受自(zi)然(ran)環(huan)境等因素影響，導(dao)致其(qi)本(ben)身(shen)外(wai)觀顏色、大(da)(da)小(xiao)、質地等往往存在很大(da)(da)差異，外(wai)觀非常(chang)不均一(yi)，容(rong)(rong)易出(chu)現(xian)直(zhi)接摻假(jia)問題(ti)。

2、桃(tao)膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)、乳香(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)和(he)沒(mei)(mei)(mei)藥(yao)(yao)(yao)(yao)均為天然樹脂，桃(tao)膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)的(de)(de)性狀(zhuang)包括外形、氣味和(he)大小等均與(yu)(yu)乳香(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)和(he)沒(mei)(mei)(mei)藥(yao)(yao)(yao)(yao)非(fei)常(chang)相(xiang)(xiang)(xiang)近(jin)，所以市場(chang)上常(chang)常(chang)會出(chu)現(xian)桃(tao)膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)假(jia)冒乳香(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)和(he)沒(mei)(mei)(mei)藥(yao)(yao)(yao)(yao)的(de)(de)情(qing)況(kuang)。乳香(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)和(he)沒(mei)(mei)(mei)藥(yao)(yao)(yao)(yao)價格相(xiang)(xiang)(xiang)近(jin)，在(zai)中(zhong)醫臨(lin)床及中(zhong)成藥(yao)(yao)(yao)(yao)生產方面兩者用(yong)量(liang)均比較大，全(quan)部依賴進(jin)口，故(gu)兩者價格相(xiang)(xiang)(xiang)對(dui)(dui)較高；而桃(tao)膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)產量(liang)較大，價格相(xiang)(xiang)(xiang)對(dui)(dui)便宜，僅(jin)為乳香(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)和(he)沒(mei)(mei)(mei)藥(yao)(yao)(yao)(yao)的(de)(de)1/4～1/3，面對(dui)(dui)利(li)益誘惑，有些(xie)不(bu)法(fa)商販會用(yong)桃(tao)膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)假(jia)冒乳香(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)和(he)沒(mei)(mei)(mei)藥(yao)(yao)(yao)(yao)，但目前缺乏(fa)有效(xiao)檢測手段，故(gu)無(wu)(wu)法(fa)對(dui)(dui)此(ci)假(jia)冒情(qing)況(kuang)進(jin)行檢測確認。桃(tao)膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)具有和(he)血(xue)(xue)養血(xue)(xue)的(de)(de)功效(xiao)，與(yu)(yu)乳香(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)和(he)沒(mei)(mei)(mei)藥(yao)(yao)(yao)(yao)的(de)(de)活血(xue)(xue)行氣功效(xiao)相(xiang)(xiang)(xiang)近(jin)，且桃(tao)膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)藥(yao)(yao)(yao)(yao)食兩用(yong)，合理使用(yong)對(dui)(dui)人體有益無(wu)(wu)害，但臨(lin)床上卻無(wu)(wu)法(fa)代替乳香(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)和(he)沒(mei)(mei)(mei)藥(yao)(yao)(yao)(yao)使用(yong)，桃(tao)膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)偏(pian)重于和(he)血(xue)(xue)，而乳香(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)和(he)沒(mei)(mei)(mei)藥(yao)(yao)(yao)(yao)偏(pian)重于活血(xue)(xue)，桃(tao)膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)與(yu)(yu)乳香(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)和(he)沒(mei)(mei)(mei)藥(yao)(yao)(yao)(yao)的(de)(de)功效(xiao)雖然有些(xie)相(xiang)(xiang)(xiang)近(jin)，但也存在(zai)差異，故(gu)臨(lin)床上不(bu)能混用(yong)。

3、因(yin)為(wei)(wei)乳香(xiang)(xiang)和沒藥(yao)的(de)(de)(de)質(zhi)量(liang)標準(zhun)存(cun)在(zai)明顯缺陷，所以(yi)(yi)無法(fa)(fa)(fa)對(dui)易混淆樣品桃膠(jiao)進行(xing)(xing)(xing)區別(bie)。現行(xing)(xing)(xing)2020年(nian)版(ban)《中國(guo)藥(yao)典(dian)》乳香(xiang)(xiang)的(de)(de)(de)專屬(shu)性的(de)(de)(de)鑒別(bie)方法(fa)(fa)(fa)為(wei)(wei)氣(qi)相(xiang)色譜(pu)法(fa)(fa)(fa)鑒別(bie)α-蒎烯，而α-蒎烯在(zai)其(qi)(qi)易混淆的(de)(de)(de)沒藥(yao)、桃膠(jiao)中普遍存(cun)在(zai)，所以(yi)(yi)該方法(fa)(fa)(fa)不具(ju)有(you)專屬(shu)性；現行(xing)(xing)(xing)2020年(nian)版(ban)《中國(guo)藥(yao)典(dian)》沒藥(yao)的(de)(de)(de)專屬(shu)性的(de)(de)(de)鑒別(bie)方法(fa)(fa)(fa)是用沒藥(yao)對(dui)照(zhao)藥(yao)材作為(wei)(wei)對(dui)照(zhao)物質(zhi)，薄層色譜(pu)法(fa)(fa)(fa)鑒別(bie)沒藥(yao)中所含(han)的(de)(de)(de)某些(xie)未知揮發(fa)(fa)性成分(fen)，但其(qi)(qi)主要的(de)(de)(de)揮發(fa)(fa)性成分(fen)在(zai)乳香(xiang)(xiang)和桃膠(jiao)中也普遍存(cun)在(zai)，所以(yi)(yi)該鑒別(bie)方法(fa)(fa)(fa)專屬(shu)性也不強。2020年(nian)版(ban)《中國(guo)藥(yao)典(dian)》雖沒有(you)收載桃膠(jiao)，但藥(yao)典(dian)中有(you)多種中成藥(yao)如參精止(zhi)渴丸(wan)、健(jian)腦丸(wan)等使(shi)用了桃膠(jiao)，均沒有(you)對(dui)桃膠(jiao)進行(xing)(xing)(xing)定性鑒別(bie)。故亟需建立一(yi)種桃膠(jiao)及含(han)桃膠(jiao)制劑的(de)(de)(de)專屬(shu)性鑒別(bie)方法(fa)(fa)(fa)，以(yi)(yi)控制相(xiang)關藥(yao)品的(de)(de)(de)質(zhi)量(liang)。

4、目(mu)前(qian)乳(ru)香(xiang)(xiang)和(he)(he)(he)沒藥(yao)(yao)的臨床應用研(yan)(yan)究(jiu)較(jiao)多，而關于乳(ru)香(xiang)(xiang)和(he)(he)(he)沒藥(yao)(yao)的質量(liang)控(kong)制方面(mian)研(yan)(yan)究(jiu)較(jiao)少，質量(liang)控(kong)制相(xiang)關研(yan)(yan)究(jiu)多集中在(zai)揮(hui)發油含量(liang)方面(mian)，而真(zhen)(zhen)偽(wei)鑒別研(yan)(yan)究(jiu)較(jiao)少，對(dui)桃膠(jiao)的相(xiang)關研(yan)(yan)究(jiu)更(geng)少。目(mu)前(qian)乳(ru)香(xiang)(xiang)和(he)(he)(he)沒藥(yao)(yao)的真(zhen)(zhen)偽(wei)鑒別方法(fa)(fa)主要有外觀性狀、薄層色(se)譜(pu)、氣相(xiang)色(se)譜(pu)、液相(xiang)色(se)譜(pu)和(he)(he)(he)紅外光譜(pu)法(fa)(fa)等，這些方法(fa)(fa)均(jun)缺乏專(zhuan)屬性。

技術實現思路

1、針對現(xian)有技術(shu)中鑒(jian)別桃膠專屬(shu)性差的(de)問題，本發明(ming)提(ti)供了(le)一種桃膠的(de)鑒(jian)別方法及其應(ying)用(yong)，能夠(gou)對乳香和沒藥中是否摻雜(za)桃膠進行鑒(jian)別，對含桃膠的(de)制劑中的(de)桃膠進行定性檢測，專屬(shu)性好。

2、本發明通過以下方法制備(bei)：

3、一種(zhong)桃膠的鑒別方(fang)法(fa)，包括以(yi)下步驟：

4、（1）制備待檢測樣品(pin)的供試品(pin)溶液，使用液相色(se)譜-高(gao)分辨(bian)質(zhi)譜聯用儀檢測，獲得負離子流圖(tu)；

5、（2）以 m/z=301.07±0.01單(dan)電荷為桃膠特(te)征離子(zi)提取步驟(zou)（1）中負離子(zi)流圖(tu)的離子(zi)圖(tu)，若檢(jian)測出該離子(zi)，則(ze)待檢(jian)測樣品(pin)中含有桃膠成分(fen)。 

6、進(jin)一步地(di)，步驟（1）中(zhong)供(gong)試品溶(rong)(rong)液(ye)的(de)制備方(fang)法為：取待(dai)檢測(ce)樣品粉末，加入甲醇溶(rong)(rong)液(ye)超聲溶(rong)(rong)解，離心后取上清(qing)液(ye)，過(guo)濾得供(gong)試品溶(rong)(rong)液(ye)。

7、進一步地(di)，步驟（1）中所述(shu)的甲醇溶(rong)液(ye)為體(ti)積濃度50%的甲醇溶(rong)液(ye)，超(chao)(chao)聲的條件為功(gong)率500～1000w、頻率40～50khz下超(chao)(chao)聲30min。

8、進一步地，步驟(zou)（1）中每(mei)20mg待檢測樣品粉末加入10ml甲(jia)醇溶(rong)液。

9、進一步地，步驟（1）中液相(xiang)色譜(pu)(pu)條件為(wei)(wei)：thermo?hypersil?gold?c18?色譜(pu)(pu)柱，100mm×2.1mm，3μm；柱溫(wen)30℃，流動相(xiang)a為(wei)(wei)0.1%甲酸水溶液，流動相(xiang)b為(wei)(wei)含有0.1%甲酸的乙(yi)腈，梯度洗脫，進樣量(liang)為(wei)(wei)5μl，流速0.3ml/min；

10、高分辨(bian)(bian)質譜條件(jian)為(wei)(wei)：qe-plus高分辨(bian)(bian)質譜儀，電噴霧離(li)子(zi)源，負離(li)子(zi)模式，噴霧電壓為(wei)(wei)3.5kv，離(li)子(zi)傳輸毛細管溫度為(wei)(wei)360℃，s-lens傳輸效率設置為(wei)(wei)50.0%，鞘氣(qi)(qi)流(liu)速35l/min，輔助(zhu)氣(qi)(qi)流(liu)速15l/min，輔助(zhu)氣(qi)(qi)加熱(re)溫度300℃。

11、進一步地，所述的梯度洗脫條件為(wei)：0～3min，5％b；3～10min，5％～9％b；10～32min，9％～21％b；32～40min，21％～30％b；40～48min，30％～80％b；48～50min，80％～90％b；50～52min，90％～100％b；52～55min，100％b；55～56min，100％～5％b；56～60min，5％b。

12、進一步地，所述的待檢測樣品為乳(ru)香、沒(mei)藥(yao)、桃(tao)膠或(huo)含乳(ru)香、沒(mei)藥(yao)、桃(tao)膠中任(ren)意一種(zhong)或(huo)多(duo)種(zhong)的中藥(yao)制劑。

13、本發明中(zhong)，所述的(de)桃膠的(de)鑒別(bie)方法(fa)在判斷乳香、沒(mei)藥或其(qi)中(zhong)藥制(zhi)劑中(zhong)是(shi)否摻(chan)雜桃膠中(zhong)的(de)應(ying)用。

14、離(li)子(zi)(zi)模(mo)(mo)式的(de)(de)(de)選擇及(ji)專屬(shu)(shu)的(de)(de)(de)特(te)征離(li)子(zi)(zi)選擇十分(fen)重要，經(jing)大量試驗(yan)(yan)，雖然采(cai)用電(dian)噴霧正(zheng)離(li)子(zi)(zi)模(mo)(mo)式可以(yi)(yi)得(de)到更豐富的(de)(de)(de)離(li)子(zi)(zi)峰(feng)，但經(jing)過(guo)驗(yan)(yan)證，響應(ying)較高的(de)(de)(de)離(li)子(zi)(zi)峰(feng)均缺乏專屬(shu)(shu)性，不(bu)能作(zuo)為專屬(shu)(shu)性特(te)征離(li)子(zi)(zi)，說明桃(tao)膠(jiao)(jiao)、乳香(xiang)和沒(mei)藥之間含有大量的(de)(de)(de)相(xiang)(xiang)同(tong)成(cheng)分(fen)，只是成(cheng)分(fen)的(de)(de)(de)相(xiang)(xiang)對含量存(cun)在一(yi)些(xie)差異，該大量的(de)(de)(de)相(xiang)(xiang)同(tong)成(cheng)分(fen)經(jing)質(zhi)譜(pu)數據(ju)判斷主(zhu)要是各(ge)種揮發性成(cheng)分(fen)。而(er)采(cai)用電(dian)噴霧負離(li)子(zi)(zi)模(mo)(mo)式進行(xing)離(li)子(zi)(zi)化(hua)，通過(guo)分(fen)析(xi)采(cai)集的(de)(de)(de)巨量離(li)子(zi)(zi)信息(xi)，確認 m/z=301.07（z=1）為桃(tao)膠(jiao)(jiao)的(de)(de)(de)特(te)征離(li)子(zi)(zi)，可以(yi)(yi)用于鑒定桃(tao)膠(jiao)(jiao)的(de)(de)(de)真偽、桃(tao)膠(jiao)(jiao)是否假冒(mao)乳香(xiang)和沒(mei)藥以(yi)(yi)及(ji)麻黃止嗽丸中桃(tao)膠(jiao)(jiao)的(de)(de)(de)鑒別。

15、本發明取(qu)得的(de)有(you)益效果

16、（1）本發明桃膠的鑒別方法通過對桃膠特征離子的檢測實(shi)現了(le)對桃膠的定性鑒別，可實(shi)現對桃膠假冒乳香和沒藥的真偽(wei)鑒別；

17、（2）本發明桃膠(jiao)的鑒別方法專屬性(xing)好，重(zhong)現性(xing)好，通(tong)過對桃膠(jiao)特征離子(zi)的檢測實現對含桃膠(jiao)中藥制劑的定性(xing)檢測，且該方法無需對照樣(yang)品，成(cheng)本低。

技術特征：

1.一種桃(tao)膠(jiao)的鑒別方法，其特征在于，包括(kuo)以下步(bu)驟(zou)：

2.根據權利要求1所述的桃(tao)膠的鑒別(bie)方(fang)法，其特(te)征在于(yu)，步驟（1）中供(gong)試品(pin)(pin)溶(rong)液(ye)的制備方(fang)法為：取待(dai)檢測樣品(pin)(pin)粉(fen)末(mo)，加入(ru)甲醇溶(rong)液(ye)超聲(sheng)溶(rong)解，離(li)心后取上清(qing)液(ye)，過(guo)濾得供(gong)試品(pin)(pin)溶(rong)液(ye)。

3.根據(ju)權利要求(qiu)2所述(shu)的(de)(de)桃膠的(de)(de)鑒別方法(fa)，其特征在于，步(bu)驟（1）中所述(shu)的(de)(de)甲醇溶(rong)液為(wei)體(ti)積濃度50%的(de)(de)甲醇溶(rong)液，超(chao)聲的(de)(de)條(tiao)件為(wei)功(gong)率(lv)(lv)500～1000w、頻率(lv)(lv)40～50khz下超(chao)聲30min。

4.根(gen)據(ju)權利要求2所(suo)述的桃(tao)膠的鑒別方法，其特征(zheng)在于，步驟（1）中(zhong)每20mg待檢(jian)測樣品粉(fen)末加入10ml甲醇溶液。

5.根據權利要(yao)求1所述的桃膠(jiao)的鑒別方(fang)法，其特征在于，步驟（1）中液相色(se)譜條件為(wei)：thermo?hypersil?gold?c18?色(se)譜柱(zhu)，100mm×2.1mm，3μm；柱(zhu)溫30℃，流動相a為(wei)0.1%甲酸水溶(rong)液，流動相b為(wei)含有0.1%甲酸的乙腈(jing)，梯度(du)洗脫，進樣量為(wei)5μl，流速0.3ml/min；

6.根據權利要求(qiu)5所述(shu)的(de)桃膠(jiao)的(de)鑒(jian)別方(fang)法，其特征在于，所述(shu)梯度洗脫的(de)條件為：0～3min，5％b；3～10min，5％～9％b；10～32min，9％～21％b；32～40min，21％～30％b；40～48min，30％～80％b；48～50min，80％～90％b；50～52min，90％～100％b；52～55min，100％b；55～56min，100％～5％b；56～60min，5％b。

7.根據權利要求1所述的(de)(de)桃(tao)膠的(de)(de)鑒別方法，其特征(zheng)在于，所述的(de)(de)待檢測樣品為乳香、沒(mei)藥(yao)、桃(tao)膠或含乳香、沒(mei)藥(yao)、桃(tao)膠中任意一(yi)種(zhong)(zhong)或多種(zhong)(zhong)的(de)(de)中藥(yao)制劑(ji)。

8.一(yi)種權利要(yao)求1～7任(ren)一(yi)項所述(shu)的桃(tao)膠的鑒別方法(fa)在判斷乳(ru)香、沒藥或其中(zhong)藥制劑中(zhong)是否(fou)摻(chan)雜桃(tao)膠中(zhong)的應用(yong)。

技術總結
本發明公開了一種桃膠的鑒別方法及其應用，屬于中藥檢測技術領域。制備待檢測樣品的供試品溶液，使用液相色譜?高分辨質譜聯用儀檢測，獲得負離子流圖；以m/z=301.07±0.01單電荷為桃膠特征離子提取負離子流圖的離子圖，若檢測出該離子，則待檢測樣品中含有桃膠成分。本發明桃膠的鑒別方法通過對桃膠特征離子的檢測實現了對桃膠的定性鑒別，可實現對桃膠假冒乳香和沒藥的真偽鑒別；本發明桃膠的鑒別方法專屬性好，重現性好，通過對桃膠特征離子的檢測實現對含桃膠中藥制劑的定性檢測，且該方法無需對照樣品，成本低。

技術研發人員：王作承,張丹,王玉團,隋曉慧,王坤
受保護的技術使用者：山東中醫藥大學
技術研發日：
技術公布日：2024/9/29