專利名稱：一種油茶籽中多糖含量的測定方法
技術領域：
本發明涉及一種多糖含量的測定方法，特別涉及一種油茶籽中多糖含量的測定方法。
背景技術：
油茶，俗稱苦茶、建茶、白花茶，因能從其籽中榨取不飽和脂肪酸含量高達93%的茶油而成為優秀的食用植物油之一。同時，研究表明，油茶籽中還含有多糖、茶皂素、黃酮甙及咖啡堿等具有生物活性的有效成分，有很高的研究和應用價值。植物水溶性多糖是從天然產物中分離出的天然有效成分，具有多種多樣的生物活性及藥理作用，主要包括增強免疫、抗腫瘤、降血壓、降血脂、降血糖、抗衰老、增強骨髓造血機能、抗輻射、對肝腎等主要臟器的保護作用等，已在保健、疾病治療等領域廣泛使用。因 此，植物中的水溶性多糖的含量常用來作為評價一些藥用植物質量的指標之一，其含量的測定可以為天然生物資源的開發利用和研究提供有效參考數據，因此如何定量判斷油茶籽中茶多糖的含量是人們所關注的。目前油茶籽多糖含量的測定尚無國家標準，有關油茶籽多糖含量的測定方法鮮有報道，植物水溶性多糖的測定都是沿用粗多糖的測定方法。硫酸-苯酚法是測定多糖含量的經典方法，其原理為用水提取植物中的多糖類組分，在硫酸作用下，水解成單糖，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后和苯酚縮合成有色化合物，用分光光度法于適當波長測定其多糖含量。在油茶籽多糖含量測定中，油茶籽多糖在濃硫酸作用下轉化為單糖，進而可測定單糖含量。然而由于油茶籽中還含有茶油、茶皂素、黃酮類化合物等其他多種活性成分，因此加大了從油茶籽中有效提取純度較高的多糖的難度，并且影響了多糖含量測定的精確度。而油茶籽中多糖含量的定量測定成為多糖產品開發、生產以及質量控制中的關鍵技術問題，因此鑒于現有方法的不足，找到一種如何能精確測定油茶籽中多糖含量的方法成為目前亟待解決的問題。

發明內容
本發明的目的是針對目前油茶籽中多糖含量測定方法所存在的不足，提供一種精確定量測定油茶籽中多糖含量的方法，該方法具有可操作性強、測定結果準確、重現性高、在一般常規實驗室即可進行測量的優點，并為其他天然產物的多糖含量的精確測定提供了可靠參考依據。本發明的目的通過以下技術方案實現—種油茶籽中多糖含量的測定方法，包括以下步驟(I)稱取烘干磨碎的待測油茶籽，用低極性溶劑對所述油茶籽進行提取，得油茶籽I和低極性溶劑提取液；(2)用質量百分含量為70 85%的乙醇溶液對油茶籽I進行提取，得油茶籽II和乙醇溶液提取液；
(3)用水對油茶籽II進行提取，得水提取液，將所得水提取液定容，作為多糖待測溶液；(4)采用硫酸-苯酚法測定上述待測溶液中多糖的含量，具體步驟如下吸取多糖樣品溶液，用蒸餾水稀釋，得多糖待測溶液，吸取2. Oml多糖待測溶液于試管中，加入5% 10%苯酚試劑I. 0ml，搖勻，迅速滴加濃硫酸5. 0ml，迅速搖勻，靜置后，置于沸水浴中加熱，取出后迅速冷卻，另以2ml蒸餾水做空白對照，按紫外分光光度法在490nm處測定吸光度，根據標準曲線得出待測液中多糖的質量。本發明步驟(I)的目的是去除油茶籽中脂溶性成分，如茶油，步驟(2)的目的是去除油茶籽中可溶性甙類物質，如油茶籽皂素、黃酮甙等化合物，由于油茶籽中一些可溶性甙類組分在硫酸作用下也會水解產生單糖，因此采用傳統方法測定多糖含量時，這些被水解的單糖也會被當成多糖來定量，因此測定的多糖含量遠高于實際值，從而影響定量測定的準確性，所以本發明采用提取的方法先去除油茶籽中脂溶性物質和可溶性甙類物質，不僅能保證有效地提取純度較高的多糖，而且避免了這些物質對多糖含量測定精確度的影響。優選地，步驟(I)、步驟(2)和步驟(3)中的提取方法為索氏提取或多次浸提的方法。優選地，所述低極性溶劑為石油醚、正戊烷、正己烷、環己烷中的一種或幾種混合。優選地，在步驟(I)、步驟(2)和步驟(3)中，提取時間為2 6h。優選地，步驟(I)中的提取溫度為60 80°C，步驟(2)中的提取溫度為80 100°C，步驟(3)中的提取溫度為100 120°C。優選地，步驟(3)中水提取液的定容體積為100 250ml。優選地，步驟(4)中多糖樣品溶液的吸取量為O. I 15ml。優選地，步驟(4)中置于沸水浴中的加熱時間為12 18min。優選地，在步驟(4)中，所述多糖樣品溶液用蒸餾水稀釋的體積倍數為10 1000。本發明與現有技術相比具有以下優點本發明的方法，具有可操作性強、測定結果準確、重現性高、在一般常規實驗室即可進行測量的優點，為其他天然產物的多糖含量的精確測定提供了可靠參考依據。另外，本發明為油茶籽多糖產品開發、生產以及質量控制提供了有效的保證。
具體實施例方式本發明所使用的索氏提取或多次浸提的方法均按照本領域常規的實驗操作步驟進行。下面將對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有作出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發明保護的范圍。實施例I一種油茶籽中多糖含量的測定方法，包括以下步驟(I)準確稱量油茶籽樣品5g，用雙層濾紙包好，置于索氏提取器中，在圓底燒瓶加入80ml石油醚，在溫度為70°C的油浴鍋中加熱回流，抽提4小時，得油茶籽I和石油醚提取液，保留油茶籽I，棄去石油醚提取液；(2)向裝有上述油茶籽I的圓底燒瓶中加入70%乙醇80ml，在溫度為90°C的油浴鍋中加熱回流，抽提4小時，得油茶籽II和乙醇提取液，棄去乙醇提取液，將所述油茶籽II取出，在避光通風處自然晾干；(3)將步驟(2)中干燥后的油茶籽II用雙層濾紙包好，置于索氏提取器中，在圓底燒瓶加入80ml蒸餾水，在溫度為110°C的油浴鍋中加熱回流，抽提4小時，待冷卻后移入250ml容量瓶中，用蒸餾水稀釋至 250ml，得到多糖樣品溶液。(4)采用硫酸-苯酚法測定上述待測溶液中多糖的含量4. I標準曲線的繪制4. I. I苯酚溶液的配制稱取IOg苯酹,加水150ml充分溶解后轉移至棕色瓶中，置于冰箱備用。4. I. 2葡萄糖儲備液的配制準確稱取105°C干燥至恒重的標準葡萄糖lOOmg，加適量水使之溶解，置于IOOml容量瓶中，加水定容至IOOml,均勻混合后置于冰箱備用。4. I. 3葡萄糖使用液的配制準確吸取葡萄糖儲備液10ml，置于IOOml容量瓶中，用水稀釋至100ml，得到
O.lmg/ml的葡萄糖使用液。均勻混合后置于冰箱備用。4. I. 4標準曲線的繪制準確吸取葡萄糖使用液O. Iml,O. 2ml,O. 3ml,O. 4ml,O. 5ml,O. 6ml,0. 7ml,0. 8ml,分別置于IOml試管中，向每支試管中補加蒸餾水至2. 0ml，再分別向每支試管中加入所配置的苯酚試劑I. Oml，搖勻，迅速滴加濃硫酸5. Oml，搖勻，放置5min，置于沸水浴中加熱15min,取出，用冷水迅速冷卻至室溫；另以2. Oml蒸懼水重復上述操作,做空白對照。在Icm比色皿中按紫外分光光度法在490nm波長處測定吸光光度值，如表I所示。表I葡萄糖濃度在490nm波長處的吸光光度值
權利要求
1.一種油茶籽中多糖含量的測定方法，其特征在于，包括以下步驟(1)稱取烘干磨碎的待測油茶籽，用低極性溶劑對所述油茶籽進行提取，得油茶籽I和低極性溶劑提取液；(2)用質量百分含量為70 85%的乙醇溶液對油茶籽I進行提取，得油茶籽II和乙醇溶液提取液；(3)用水對油茶籽II進行提取，得水提取液，將所得水提取液定容，作為多糖樣品溶液；(4)采用硫酸-苯酚法測定上述待測溶液中多糖的含量，具體步驟如下吸取多糖樣品溶液，用蒸餾水稀釋，得多糖待測溶液，吸取2ml多糖待測溶液于試管中，加入5 10重量％的苯酚試劑I. 0ml，搖勻，迅速滴加濃硫酸5. 0ml，迅速搖勻，靜置后，置于沸水浴中加熱，取出后迅速冷卻，另以2ml蒸餾水做空白對照，按紫外分光光度法在490nm處測定吸光度，根據標準曲線得出待測液中多糖的質量。
2.如權利要求I所述的油茶籽中多糖含量的測定方法，其特征在于，步驟(I)、步驟(2)和步驟(3)中的提取方法為索氏提取或多次浸提的方法。
3.如權利要求I所述的油茶籽中多糖含量的測定方法，其特征在于，所述低極性溶劑為石油醚、正戊烷、正己烷、環己烷中的一種或幾種混合。
4.如權利要求I所述的油茶籽中多糖含量的測定方法，其特征在于，在步驟(I)、步驟(2)和步驟(3)中，提取時間為2 6h。
5.如權利要求I所述的油茶籽中多糖含量的測定方法，其特征在于，步驟(I)中的提取溫度為60 80°C，步驟(2)中的提取溫度為80 100°C，步驟(3)中的提取溫度為100 120。。。
6.如權利要求I所述的油茶籽中多糖含量的測定方法，其特征在于，步驟(3)中水提取液的定容體積為100 250ml。
7.如權利要求I所述的油茶籽中多糖含量的測定方法，其特征在于，步驟(4)中多糖樣品溶液的吸取量為O. I 15ml。
8.如權利要求I所述的油茶籽中多糖含量的測定方法，其特征在于，步驟(4)中置于沸水浴中的加熱時間為12 18min。
9.如權利要求I所述的油茶籽中多糖含量的測定方法，其特征在于，在步驟(4)中，所述多糖樣品溶液用蒸餾水稀釋的體積倍數為10 1000。
全文摘要
本發明提供了一種油茶籽中多糖含量的測定方法，包括以下步驟，先依次用低極性溶劑和乙醇提取油茶籽，去除油茶籽中含有的脂溶性物質和可溶性甙類物質，再用水提取油茶籽中的多糖，而后采用硫酸-苯酚法測定油茶籽中多糖的含量。本發明的方法，具有可操作性強、測定結果準確、重現性高、在一般常規實驗室即可進行測量的優點，為多糖產品開發、生產以及質量控制提供了有效的保證。
文檔編號G01N21/31GK102914508SQ20121040166
公開日2013年2月6日 申請日期2012年10月19日 優先權日2012年10月19日
發明者伊國群, 孟慶華 申請人:伊國群