本發明涉(she)(she)及(ji)核酸(suan)片段分析，特(te)別是涉(she)(she)及(ji)一種染料-無膠(jiao)篩(shai)分介質預混組合物及(ji)其制備方法、應用。

背景技術：

1、電泳(yong)(yong)技(ji)(ji)(ji)術是(shi)一種在電場(chang)的(de)(de)作(zuo)用(yong)下，依據分子(zi)(zi)的(de)(de)電荷、大小(xiao)和形狀(zhuang)對生物分子(zi)(zi)（如(ru)蛋白質、核(he)酸）進(jin)行分離和分析的(de)(de)技(ji)(ji)(ji)術。隨著時間的(de)(de)推移，電泳(yong)(yong)技(ji)(ji)(ji)術經歷了從傳(chuan)統的(de)(de)平板凝膠(jiao)電泳(yong)(yong)到(dao)更(geng)先進(jin)的(de)(de)毛細管電泳(yong)(yong)，再到(dao)高(gao)度集(ji)成化的(de)(de)芯片電泳(yong)(yong)的(de)(de)發展。

2、平板凝(ning)膠(jiao)(jiao)電(dian)泳(yong)(yong)是(shi)(shi)最經(jing)典的(de)(de)電(dian)泳(yong)(yong)技術(shu)之一，包括聚丙烯(xi)酰胺凝(ning)膠(jiao)(jiao)電(dian)泳(yong)(yong)（page）、瓊脂糖凝(ning)膠(jiao)(jiao)電(dian)泳(yong)(yong)等。這些技術(shu)利用(yong)凝(ning)膠(jiao)(jiao)作(zuo)為支持介(jie)質(zhi)，通過施(shi)加電(dian)場使帶有電(dian)荷的(de)(de)分(fen)(fen)子在(zai)凝(ning)膠(jiao)(jiao)孔隙中遷移(yi)。平板凝(ning)膠(jiao)(jiao)電(dian)泳(yong)(yong)具有直觀、操作(zuo)簡單(dan)的(de)(de)特點，廣泛應用(yong)于(yu)實(shi)驗(yan)室(shi)中的(de)(de)常規分(fen)(fen)析(xi)。然而(er)，這種方法存在(zai)一些局限性(xing)，例(li)如分(fen)(fen)離效(xiao)率(lv)相(xiang)對較低，分(fen)(fen)析(xi)時(shi)間較長，且難以實(shi)現(xian)高通量和(he)自動(dong)化(hua)處(chu)理。毛(mao)細(xi)(xi)管電(dian)泳(yong)(yong)（ce）是(shi)(shi)在(zai)一根細(xi)(xi)長的(de)(de)毛(mao)細(xi)(xi)管中進行(xing)的(de)(de)電(dian)泳(yong)(yong)過程(cheng)。與平板凝(ning)膠(jiao)(jiao)電(dian)泳(yong)(yong)相(xiang)比，毛(mao)細(xi)(xi)管電(dian)泳(yong)(yong)能夠提供更高的(de)(de)分(fen)(fen)離效(xiao)率(lv)和(he)更快(kuai)的(de)(de)分(fen)(fen)析(xi)速(su)度，這是(shi)(shi)因(yin)為毛(mao)細(xi)(xi)管內的(de)(de)流體動(dong)力學效(xiao)應和(he)較小的(de)(de)熱擴散。然而(er)毛(mao)細(xi)(xi)管電(dian)泳(yong)(yong)的(de)(de)樣(yang)品(pin)消(xiao)(xiao)耗(hao)(hao)量大，測試耗(hao)(hao)時(shi)久，通量較低。隨著微全(quan)分(fen)(fen)析(xi)系統的(de)(de)建立(li)以及(ji)(ji)芯(xin)片(pian)實(shi)驗(yan)室(shi)的(de)(de)發展，根據毛(mao)細(xi)(xi)管中的(de)(de)電(dian)泳(yong)(yong)理論及(ji)(ji)技術(shu)發展了(le)一種微流控芯(xin)片(pian)電(dian)泳(yong)(yong)（mce）技術(shu)，它將電(dian)泳(yong)(yong)通道微型化(hua)并集(ji)(ji)成(cheng)在(zai)一塊芯(xin)片(pian)上(shang)。mce的(de)(de)樣(yang)品(pin)消(xiao)(xiao)耗(hao)(hao)量少、分(fen)(fen)析(xi)速(su)度快(kuai)，分(fen)(fen)離效(xiao)率(lv)高，且樣(yang)品(pin)制備和(he)檢測集(ji)(ji)成(cheng)在(zai)微芯(xin)片(pian)上(shang)，適用(yong)于(yu)快(kuai)速(su)分(fen)(fen)析(xi)和(he)現(xian)場檢測，近(jin)年來在(zai)生物(wu)、食品(pin)、環境(jing)、臨床醫學、藥(yao)學等領域得到了(le)廣泛應用(yong)。

3、然而，以往(wang)常(chang)用(yong)的(de)(de)凝(ning)(ning)(ning)膠(jiao)篩(shai)(shai)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)介(jie)質(zhi)(zhi)無(wu)(wu)法滿足芯片(pian)(pian)電(dian)(dian)泳的(de)(de)應用(yong)需求，芯片(pian)(pian)電(dian)(dian)泳分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)通(tong)(tong)道極細(xi)，常(chang)規凝(ning)(ning)(ning)膠(jiao)溶(rong)液在(zai)高(gao)(gao)(gao)溫(wen)下才會(hui)(hui)呈現液態(tai)，常(chang)溫(wen)時則會(hui)(hui)逐(zhu)漸(jian)凝(ning)(ning)(ning)固，難以灌(guan)注(zhu)到芯片(pian)(pian)通(tong)(tong)道內(nei)。因(yin)此，芯片(pian)(pian)電(dian)(dian)泳為了(le)(le)(le)(le)實(shi)(shi)現更(geng)高(gao)(gao)(gao)效、簡便和(he)靈活的(de)(de)生物(wu)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)子(zi)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)析，一般(ban)均會(hui)(hui)采用(yong)無(wu)(wu)膠(jiao)篩(shai)(shai)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)介(jie)質(zhi)(zhi)。無(wu)(wu)膠(jiao)篩(shai)(shai)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)通(tong)(tong)過(guo)使(shi)用(yong)非交聯、粘度(du)低的(de)(de)線(xian)性(xing)高(gao)(gao)(gao)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)子(zi)聚合物(wu)溶(rong)液作為篩(shai)(shai)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)介(jie)質(zhi)(zhi)，替代了(le)(le)(le)(le)傳統凝(ning)(ning)(ning)膠(jiao)電(dian)(dian)泳中的(de)(de)固體凝(ning)(ning)(ning)膠(jiao)，從而極大地簡化了(le)(le)(le)(le)樣(yang)品處理和(he)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)過(guo)程，避免(mian)了(le)(le)(le)(le)凝(ning)(ning)(ning)膠(jiao)制備的(de)(de)繁瑣步驟(zou)和(he)潛在(zai)的(de)(de)通(tong)(tong)道堵塞(sai)問題。這種方(fang)法不僅顯著加快(kuai)了(le)(le)(le)(le)電(dian)(dian)泳速度(du)，提高(gao)(gao)(gao)了(le)(le)(le)(le)實(shi)(shi)驗通(tong)(tong)量，而且由于所需的(de)(de)樣(yang)品和(he)試劑體積(ji)大幅(fu)減少，極大地降(jiang)低了(le)(le)(le)(le)成本。同(tong)時，無(wu)(wu)膠(jiao)系統的(de)(de)高(gao)(gao)(gao)度(du)可調性(xing)允許研究者通(tong)(tong)過(guo)改變篩(shai)(shai)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)介(jie)質(zhi)(zhi)的(de)(de)種類和(he)濃度(du)來優化分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)條件，滿足不同(tong)生物(wu)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)子(zi)的(de)(de)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)析需求，增強了(le)(le)(le)(le)實(shi)(shi)驗的(de)(de)靈活性(xing)和(he)適用(yong)范圍。目前常(chang)用(yong)的(de)(de)無(wu)(wu)膠(jiao)篩(shai)(shai)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)介(jie)質(zhi)(zhi)主要有(you)：線(xian)形(xing)均聚物(wu)，如線(xian)形(xing)聚丙烯(xi)酰胺（lpa）、聚n，n-二甲(jia)基丙烯(xi)酰胺（pdma）、聚氧化乙(yi)烯(xi)（peo）、聚乙(yi)烯(xi)吡咯烷酮（pvp）、纖(xian)維素及其(qi)衍生物(wu)等。

4、芯片電(dian)泳(yong)結合激(ji)(ji)(ji)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)誘導熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)（lif）檢(jian)測是一(yi)種高(gao)靈(ling)敏度的(de)(de)(de)(de)分(fen)(fen)(fen)(fen)析(xi)技術，它(ta)利用(yong)微(wei)(wei)流控芯片進(jin)行生物分(fen)(fen)(fen)(fen)子的(de)(de)(de)(de)快速分(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)，并通過lif技術實現(xian)對(dui)目(mu)標(biao)分(fen)(fen)(fen)(fen)子的(de)(de)(de)(de)精確(que)檢(jian)測。在這一(yi)過程中(zhong)，樣品在電(dian)場驅動下(xia)通過芯片內(nei)的(de)(de)(de)(de)微(wei)(wei)通道，根(gen)據分(fen)(fen)(fen)(fen)子的(de)(de)(de)(de)大(da)小、形(xing)狀和(he)(he)電(dian)荷差(cha)異進(jin)行高(gao)效分(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)。隨(sui)后(hou)，利用(yong)激(ji)(ji)(ji)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)照射(she)激(ji)(ji)(ji)發樣品中(zhong)的(de)(de)(de)(de)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)標(biao)記分(fen)(fen)(fen)(fen)子，產(chan)(chan)生的(de)(de)(de)(de)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)信號被(bei)檢(jian)測器捕捉，從而(er)實現(xian)對(dui)特定(ding)(ding)(ding)分(fen)(fen)(fen)(fen)析(xi)物的(de)(de)(de)(de)定(ding)(ding)(ding)性(xing)及定(ding)(ding)(ding)量分(fen)(fen)(fen)(fen)析(xi)。其(qi)中(zhong)，熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)染料(liao)扮演(yan)著至關重(zhong)要的(de)(de)(de)(de)角(jiao)色，它(ta)們用(yong)于標(biao)記待分(fen)(fen)(fen)(fen)析(xi)的(de)(de)(de)(de)生物分(fen)(fen)(fen)(fen)子，如(ru)dna、rna或蛋白質等。這些(xie)染料(liao)在激(ji)(ji)(ji)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)照射(she)下(xia)能夠產(chan)(chan)生明(ming)亮且特征鮮明(ming)的(de)(de)(de)(de)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)信號，從而(er)在微(wei)(wei)流控芯片的(de)(de)(de)(de)高(gao)速分(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)過程中(zhong)實現(xian)對(dui)目(mu)標(biao)分(fen)(fen)(fen)(fen)子的(de)(de)(de)(de)實時、高(gao)靈(ling)敏度檢(jian)測。熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)染料(liao)的(de)(de)(de)(de)選擇需考慮其(qi)激(ji)(ji)(ji)發和(he)(he)發射(she)波長(chang)、量子產(chan)(chan)率、化學(xue)穩定(ding)(ding)(ding)性(xing)和(he)(he)生物兼容性(xing)等因素(su)，以確(que)保(bao)最佳(jia)的(de)(de)(de)(de)信號強度和(he)(he)最小的(de)(de)(de)(de)背景干(gan)擾。常(chang)見的(de)(de)(de)(de)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)染料(liao)包括cy5、gelgreen、sybrgreen、碘化丙啶(ding)（pi）等，它(ta)們各自擁有獨特的(de)(de)(de)(de)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)學(xue)特性(xing)，適用(yong)于不同(tong)的(de)(de)(de)(de)分(fen)(fen)(fen)(fen)析(xi)需求。然而(er)，這些(xie)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)染料(liao)通常(chang)均(jun)需在低溫條件下(xia)保(bao)存(cun)以延長(chang)其(qi)穩定(ding)(ding)(ding)性(xing)和(he)(he)保(bao)質期，且溶劑存(cun)儲體系一(yi)般都為(wei)dmso，水(shui)溶性(xing)較差(cha)，而(er)無膠篩分(fen)(fen)(fen)(fen)介(jie)質中(zhong)大(da)部分(fen)(fen)(fen)(fen)均(jun)為(wei)水(shui)系條件，一(yi)些(xie)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)(guang)染料(liao)甚至無法與無膠篩分(fen)(fen)(fen)(fen)介(jie)質相兼容。

5、市面上常用的(de)基(ji)于(yu)(yu)芯片電泳(yong)原(yuan)理開發的(de)核酸片段分(fen)(fen)析儀（如labchip??gxtouch）配套試(shi)(shi)劑中，染(ran)料與膠(jiao)液均需分(fen)(fen)開存(cun)放(fang)于(yu)(yu)4℃冰(bing)箱中，用戶(hu)使用時(shi)需提前半小時(shi)將試(shi)(shi)劑從冰(bing)箱中取出恢(hui)復至(zhi)室溫(wen)(wen)，還(huan)需花費大量的(de)時(shi)間自(zi)行配置膠(jiao)-染(ran)試(shi)(shi)劑并加入到芯片中，測試(shi)(shi)過程(cheng)耗(hao)時(shi)耗(hao)力。常規(gui)無膠(jiao)篩(shai)(shai)分(fen)(fen)介質（cn?117264268a，cn?105367693a）大多應用于(yu)(yu)毛細管電泳(yong)中，檢測速度(du)慢、通量低(di)、靈敏度(du)差。因此，迫切的(de)需要篩(shai)(shai)選出一種(zhong)能夠與無膠(jiao)篩(shai)(shai)分(fen)(fen)體系完美兼容且具有良好室溫(wen)(wen)穩定(ding)性的(de)熒(ying)光染(ran)料。

技術實現思路

1、鑒于以上所述現有(you)技術的(de)缺(que)點(dian)，本(ben)發明的(de)目的(de)在于提供(gong)一種染料(liao)-無(wu)(wu)膠篩分介質預混組合(he)物(wu)及其制備方法、應用，用于解(jie)決(jue)現有(you)熒光染料(liao)通常需低溫保存，水(shui)溶(rong)性較差，無(wu)(wu)法與無(wu)(wu)膠篩分介質相(xiang)兼容的(de)問題(ti)。

2、為實現上(shang)述(shu)(shu)目的(de)及其他相關目的(de)，本(ben)發明提供一種染(ran)料-無(wu)膠(jiao)篩(shai)分(fen)介質(zhi)預混組合(he)物，包括無(wu)膠(jiao)篩(shai)分(fen)介質(zhi)、核(he)(he)酸(suan)熒(ying)(ying)光染(ran)料和電解質(zhi)緩沖液：所述(shu)(shu)無(wu)膠(jiao)篩(shai)分(fen)介質(zhi)選(xuan)自線(xian)性(xing)聚(ju)(ju)丙(bing)(bing)(bing)烯酰胺、甲基纖維素、羥(qian)(qian)丙(bing)(bing)(bing)基甲基纖維素、羥(qian)(qian)丙(bing)(bing)(bing)基纖維素、羥(qian)(qian)乙基纖維素、聚(ju)(ju)乙烯醇和聚(ju)(ju)環氧乙烷中的(de)一種或多種；所述(shu)(shu)核(he)(he)酸(suan)熒(ying)(ying)光染(ran)料為藍光激發的(de)核(he)(he)酸(suan)熒(ying)(ying)光染(ran)料；所述(shu)(shu)核(he)(he)酸(suan)熒(ying)(ying)光染(ran)料的(de)熱穩定溫度為10~30℃。

3、更優選地，所述藍光(guang)激發(fa)的核(he)酸熒光(guang)染料的激發(fa)波(bo)長為(wei)488?nm。

4、更優選地，所述核(he)(he)酸(suan)熒光染(ran)(ran)料(liao)選自(zi)evagreen核(he)(he)酸(suan)染(ran)(ran)料(liao)、rtgreen核(he)(he)酸(suan)染(ran)(ran)料(liao)、sybrgreen核(he)(he)酸(suan)染(ran)(ran)料(liao)、sybr?gold核(he)(he)酸(suan)染(ran)(ran)料(liao)、yeagreen核(he)(he)酸(suan)染(ran)(ran)料(liao)、gelgreen核(he)(he)酸(suan)染(ran)(ran)料(liao)和(he)genegreen核(he)(he)酸(suan)染(ran)(ran)料(liao)中的一種或多(duo)種。

5、本(ben)技(ji)術(shu)(shu)的(de)(de)(de)染料-無(wu)(wu)膠(jiao)(jiao)(jiao)篩(shai)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)介質(zhi)預(yu)混組合物中加入(ru)電(dian)解質(zhi)緩沖液的(de)(de)(de)作用是確保其導電(dian)性(xing)(xing)，芯(xin)片內凝膠(jiao)(jiao)(jiao)的(de)(de)(de)制備難度(du)(du)極大(da)(da)(da)，本(ben)技(ji)術(shu)(shu)采用無(wu)(wu)膠(jiao)(jiao)(jiao)篩(shai)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)介質(zhi)，主要是親水線性(xing)(xing)或枝狀的(de)(de)(de)高分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)子(zi)(zi)，如線性(xing)(xing)聚丙烯酰胺等(deng)，其篩(shai)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)原理主要基(ji)于(yu)(yu)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)子(zi)(zi)尺寸排阻和(he)立(li)體(ti)(ti)化學效應(ying)。這(zhe)(zhe)些物質(zhi)溶(rong)解于(yu)(yu)水中后(hou)，當濃度(du)(du)大(da)(da)(da)到一(yi)(yi)定值(zhi)(zhi)時，體(ti)(ti)系(xi)的(de)(de)(de)粘度(du)(du)會(hui)發生驟變(bian)，此時對應(ying)的(de)(de)(de)濃度(du)(du)即為糾纏閾值(zhi)(zhi)，體(ti)(ti)系(xi)內的(de)(de)(de)高分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)子(zi)(zi)會(hui)自(zi)動形成動態網(wang)絡。當不同(tong)大(da)(da)(da)小的(de)(de)(de)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)子(zi)(zi)通過這(zhe)(zhe)一(yi)(yi)網(wang)絡時，較小的(de)(de)(de)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)子(zi)(zi)能夠進入(ru)并穿行于(yu)(yu)這(zhe)(zhe)些微孔(kong)中，而較大(da)(da)(da)的(de)(de)(de)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)子(zi)(zi)則由(you)于(yu)(yu)尺寸限(xian)制無(wu)(wu)法完全進入(ru)，只能沿著纖維素網(wang)絡的(de)(de)(de)外表面移(yi)動。這(zhe)(zhe)一(yi)(yi)過程(cheng)使(shi)得大(da)(da)(da)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)子(zi)(zi)的(de)(de)(de)路徑變(bian)長(chang)，遷移(yi)速(su)度(du)(du)減(jian)慢，從而與小分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)子(zi)(zi)在(zai)時間上產(chan)生分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)(li)，實現基(ji)于(yu)(yu)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)子(zi)(zi)尺寸的(de)(de)(de)篩(shai)選和(he)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)(li)。這(zhe)(zhe)一(yi)(yi)特性(xing)(xing)使(shi)無(wu)(wu)膠(jiao)(jiao)(jiao)篩(shai)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)介質(zhi)特別適用于(yu)(yu)快(kuai)速(su)、高效的(de)(de)(de)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)子(zi)(zi)篩(shai)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)，尤其在(zai)生物分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)子(zi)(zi)如蛋白質(zhi)、核(he)酸(suan)等(deng)的(de)(de)(de)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)(li)純化中展現出顯著優勢，無(wu)(wu)需傳統凝膠(jiao)(jiao)(jiao)的(de)(de)(de)復雜制備過程(cheng)，提高了實驗的(de)(de)(de)便捷性(xing)(xing)和(he)效率。本(ben)技(ji)術(shu)(shu)所加入(ru)的(de)(de)(de)核(he)酸(suan)熒光染料均在(zai)常溫條件下可以保存，水溶(rong)性(xing)(xing)較好，與無(wu)(wu)膠(jiao)(jiao)(jiao)篩(shai)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)介質(zhi)相兼容。

6、在(zai)芯片電(dian)泳技術中(zhong)，核酸熒(ying)光(guang)染(ran)(ran)料(liao)的作用原理是(shi)基于熒(ying)光(guang)標(biao)記(ji)與光(guang)學檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)的結合。當樣(yang)品(pin)中(zhong)的生物分(fen)(fen)子(zi)(zi)，如dna、rna或蛋白質(zhi)，被(bei)核酸熒(ying)光(guang)染(ran)(ran)料(liao)特(te)異性(xing)地(di)標(biao)記(ji)后，這些分(fen)(fen)子(zi)(zi)在(zai)電(dian)泳過(guo)程中(zhong)通(tong)過(guo)芯片上的微通(tong)道時，會(hui)在(zai)外部施加的電(dian)場作用下(xia)按其分(fen)(fen)子(zi)(zi)大小(xiao)(xiao)、形狀和電(dian)荷分(fen)(fen)布進行分(fen)(fen)離。當帶有熒(ying)光(guang)標(biao)記(ji)的分(fen)(fen)子(zi)(zi)經過(guo)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)點時，由激光(guang)或紫外光(guang)對其進行激發，熒(ying)光(guang)染(ran)(ran)料(liao)隨(sui)即發射(she)出特(te)定波(bo)長(chang)的熒(ying)光(guang)信(xin)號(hao)。這些熒(ying)光(guang)信(xin)號(hao)被(bei)高靈(ling)敏度(du)(du)的檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)器捕(bu)獲(huo)并轉換為電(dian)子(zi)(zi)信(xin)號(hao)，隨(sui)后通(tong)過(guo)數據分(fen)(fen)析系統(tong)解析，從而實現對樣(yang)本分(fen)(fen)子(zi)(zi)的定性(xing)和定量分(fen)(fen)析。核酸熒(ying)光(guang)染(ran)(ran)料(liao)的使用極大地(di)提升了芯片電(dian)泳的檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)精度(du)(du)和靈(ling)敏度(du)(du)，允許在(zai)極小(xiao)(xiao)體積(ji)的樣(yang)本中(zhong)對微量生物分(fen)(fen)子(zi)(zi)進行高效、準確(que)的分(fen)(fen)析。

7、優選地，所述電解質緩沖(chong)液為2-(n-嗎啡啉）乙磺酸和三(san)羥甲基氨基甲烷(wan)的混(hun)合溶(rong)液。

8、優選地，所述(shu)電解質緩沖液的溶劑選自水、甲(jia)醇(chun)、乙醇(chun)、甲(jia)酰胺和(he)二甲(jia)基亞砜中的一(yi)種或多種，且至少包含水。

9、電解質緩沖液一般用(yong)水配制(zhi)，但可加入少量(liang)的(de)(de)有(you)機溶劑，以改善分離或分離選擇性(xing)，并使許多誰難容的(de)(de)樣品得以用(yong)芯片(pian)電泳(yong)分析，常(chang)用(yong)的(de)(de)有(you)機溶劑添加劑主(zhu)要是揮(hui)發性(xing)較小的(de)(de)極性(xing)有(you)機物，如甲醇、乙醇、甲酰胺、二甲基亞砜(feng)（dmso）。

10、優選(xuan)地(di)，所述電解質(zhi)緩沖液的(de)ph為4.0~9.0。

11、本(ben)技術電解質(zhi)緩沖(chong)(chong)溶液(ye)的(de)(de)(de)選用主要由ph決定，mes為2-(n-嗎啡啉）乙(yi)磺酸，tris為三(san)羥甲(jia)(jia)基(ji)氨基(ji)甲(jia)(jia)烷，mes-tris是(shi)一種很好的(de)(de)(de)生物(wu)緩沖(chong)(chong)液(ye)體系，ph可調節范圍廣，可以(yi)從4.0到9.0，且具有(you)(you)很好的(de)(de)(de)生物(wu)相容(rong)性(xing)。緩沖(chong)(chong)液(ye)一般用水配制，但可加入少量(liang)的(de)(de)(de)有(you)(you)機(ji)溶劑，以(yi)改善分(fen)離(li)(li)或分(fen)離(li)(li)選擇性(xing)，并(bing)使許多(duo)誰難容(rong)的(de)(de)(de)樣品得以(yi)用芯片電泳(yong)分(fen)析，常用的(de)(de)(de)有(you)(you)機(ji)溶劑添加劑主要是(shi)揮發性(xing)較小的(de)(de)(de)極性(xing)有(you)(you)機(ji)物(wu)，如甲(jia)(jia)醇(chun)(chun)、乙(yi)醇(chun)(chun)、甲(jia)(jia)酰胺、dmso。

12、優選地，所(suo)述電解質緩沖液(ye)中(zhong)2-(n-嗎啡(fei)啉）乙磺酸(suan)的(de)(de)濃度為(wei)10~400?mmol/l，三羥(qian)甲基氨(an)基甲烷(wan)的(de)(de)濃度為(wei)10~400?mmol/l。電解質緩沖液(ye)的(de)(de)濃度和淌度，會影響分離效果(guo)，具有需根據樣品選用，但(dan)在上述范圍內可以產(chan)生較好的(de)(de)分離效果(guo)。

13、優選(xuan)地，所(suo)述染(ran)料-無膠篩分介質(zhi)預混組合物中無膠篩分介質(zhi)的濃度為0.01~10%（m/v）。

14、優選(xuan)地，所述染料-無(wu)膠篩分介質預混組合物(wu)中核酸熒光染料的濃度為0.2~60nmol/l。

15、優選地，所述染料-無膠篩分介(jie)質(zhi)預混組(zu)合(he)物還包(bao)括添加劑。

16、優(you)選地(di)，所述(shu)添加(jia)劑選自葡萄(tao)糖(tang)、甘油、甘露醇和殼聚糖(tang)的(de)一(yi)種或多(duo)種；所述(shu)染料(liao)-無(wu)膠篩分介(jie)質預混(hun)組合(he)物中(zhong)添加(jia)劑的(de)濃度為(wei)0.01~10%（m/v）。

17、本發明還提供了一種染料(liao)(liao)-無(wu)膠(jiao)篩(shai)分(fen)介(jie)質(zhi)預(yu)混組(zu)合物(wu)的(de)制備方法，在電解質(zhi)緩沖液中(zhong)依次加入無(wu)膠(jiao)篩(shai)分(fen)介(jie)質(zhi)、核酸熒光(guang)染料(liao)(liao)，混合均(jun)勻后制得的(de)染料(liao)(liao)-無(wu)膠(jiao)篩(shai)分(fen)介(jie)質(zhi)預(yu)混組(zu)合物(wu)。

18、本發明(ming)還(huan)提供了一種染料-無膠篩(shai)分介質(zhi)(zhi)預混(hun)(hun)組(zu)合(he)(he)物(wu)在(zai)芯片電泳結合(he)(he)激(ji)光誘(you)導熒光檢測中(zhong)的(de)應(ying)用(yong)(yong)，本發明(ming)的(de)染料-無膠篩(shai)分介質(zhi)(zhi)預混(hun)(hun)組(zu)合(he)(he)物(wu)在(zai)應(ying)用(yong)(yong)于芯片電泳結合(he)(he)激(ji)光誘(you)導熒光檢測時具有高(gao)分辨率、檢測快速、室溫穩定的(de)特點，具有廣泛的(de)應(ying)用(yong)(yong)前景(jing)。

19、如上所(suo)述，本發明具(ju)有以下有益效(xiao)果(guo)：采用(yong)(yong)無膠(jiao)篩(shai)(shai)分(fen)(fen)介質(zhi)，基于(yu)分(fen)(fen)子(zi)尺寸排阻和立體化學(xue)效(xiao)應(ying)，適用(yong)(yong)于(yu)快速、高效(xiao)的分(fen)(fen)子(zi)篩(shai)(shai)分(fen)(fen)，尤其(qi)在(zai)(zai)生物分(fen)(fen)子(zi)如蛋白質(zhi)、核酸等(deng)的分(fen)(fen)離純化中展現出顯著優勢，無需傳統凝(ning)膠(jiao)的復雜制備過程(cheng)，提高了實驗(yan)的便捷性(xing)和效(xiao)率(lv)；所(suo)采用(yong)(yong)的核酸熒光(guang)染料(liao)均在(zai)(zai)常溫(wen)條件下可以保存，水溶(rong)性(xing)較好，與無膠(jiao)篩(shai)(shai)分(fen)(fen)介質(zhi)相兼容(rong)在(zai)(zai)應(ying)用(yong)(yong)于(yu)芯片電(dian)泳(yong)結合激光(guang)誘導熒光(guang)檢測時具(ju)有高分(fen)(fen)辨率(lv)、檢測快速、室(shi)溫(wen)穩定的特點，具(ju)有廣(guang)泛(fan)的應(ying)用(yong)(yong)前(qian)景。