體液增菌培養瓶及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及臨床微生物檢測技術領域，具體說，是一種體液增菌培養瓶及其制備 方法。
【背景技術】
[0002] 體液培養是用于檢測人體樣本中有無微生物存在的一種微生物學檢測方法，包括 血培養、疲培養、尿培養W及其他體液(胸水、腹水、腦脊液等)培養。對于快速檢測臨床上嚴 重危及患者生命的敗血癥、菌血癥，患者體液中是否有微生物生長W明確診斷有十分重要 的作用，是臨床有效治療的關鍵。所W體液或類似物中致病微生物的檢測應當在盡可能短 的時間內進行。近年來，隨著科技進步，微生物學、計算機學和工程學的結合，已經創造出許 多自動化的培養系統。
[0003] 自動化的體液微生物培養一般包括兩部分，自動化檢測設備和體液增菌培養瓶。 自動化檢測設備提供特定培養環境的解育箱和檢測系統，體液增菌培養基提供微生物的生 長環境和供檢測的傳感器。將體液樣本接種到體液增菌培養瓶內，在自動化體液培養儀中 進行微生物培養，檢測系統通過體液增菌培養瓶中傳感器產生的變化，自動檢測，給出培養 結果，提供給臨床診斷的依據。
[0004] 現有的培養瓶多為血液培養瓶，專利號2004200480078中描述一種血液培養瓶，該 瓶不具有負壓，不易于臨床樣本的注入，使用不慎時會造成污染，并且使用玻璃瓶體，具有 安全風險，不慎跌落時會導致破碎，使使用者暴露在碎玻璃，并有感染的可能。另一種使用 塑料材質，例如聚碳酸醋，運種材料的瓶體可W解決安全風險，但是其具有透氣性，會導致 培養瓶內的負壓變化，在有效使用期間不能保證順利注入樣本。另一方面如果外界氣體進 入到培養瓶內，會導致培養瓶內內置氣體成分改變，而影響微生物的生長，例如厭氧培養瓶 內進入空氣之后，會導致厭氧菌無法生長，而造成臨床誤判。
[0005] 培養瓶底部的傳感器由高分子聚合物和指示劑組成，現有技術中傳感器的透過性 由分子大小決定，如專利號20中描述的，高分子半透膜能阻擋分子量300W上 的物質，實際液體培養基中存在小分子，水、氨離子等，運些小分子如果透過半透膜都會對 傳感器產生影響，引起顏色變化，而本質不是微生物生長產生的變化。并且依據現有技術中 描述的傳感器具有透光性，而自動化檢測設備使用的檢測原理為光電檢測原理，采集光信 號，然后轉化為電信號傳輸到控制系統中，此時如果傳感器具有透光性，將影響光信號的采 集。
[0006] 另外，在現有技術中，傳感器的制備和固化所耗費的時間都較長，一般在24小時- 48小時，嚴重影響了生產效率。

【發明內容】

[0007] 本發明所要解決的技術問題是，提供一種雙層的塑料材質的體液增菌培養瓶及其 制備方法，不易破碎，不透氣性，透明，熱穩定性好，制造工藝簡單，減少生產過程步驟，降低 生產成本。
[0008] 為了解決上述技術問題，本發明采用的技術方案是:一種體液增菌培養瓶，包括瓶 體、瓶塞、瓶蓋、傳感器、液體培養基，培養瓶瓶體為圓柱形，傳感器貼于瓶底內部底部，瓶塞 和瓶蓋起到密封和機械保護作用，體液增菌培養瓶的密封空間為負壓的無菌環境，體液增 菌培養瓶的瓶體為雙層塑料瓶體，一層為具有強度支撐的塑料材料，另一層為具有氣體屏 障作用的塑料材料。
[0009] 所述具有強度支撐的塑料材料為尼龍、聚碳酸醋PC或聚丙締 PP，所述雙層瓶體的 外層或內層為具有氣體屏障作用的塑料材料，所述具有氣體屏障作用的塑料材料為聚糞二 甲酸乙二醇醋、聚對苯二甲酸乙二醋、聚醋或聚氯乙締。
[0010] 所述體液增菌培養瓶的傳感器為選擇性半透膜，其能透過非極性分子而阻擋極性 分子，保證二氧化碳能夠透過半透膜而阻擋培養基中的其他分子和/或離子。
[0011] 所述體液增菌培養瓶的傳感器為高分子娃橡膠材料聚甲基硅氧烷及其固化劑。
[0012] 所述體液增菌培養瓶的傳感器含有遮光劑、酸堿指示劑和巧光指示劑，酸堿指示 劑能根據培養基中微生物生長產生的二氧化碳而發生顏色變化，巧光指示劑指示劑能根據 培養基中微生物生長產生的二氧化碳而發生巧光反應。
[0013] 所述的酸堿指示劑為漠百里酪藍、漠甲酪紫、漠甲酪綠或二甲苯酪藍;所述巧光指 示劑為巧光素、副玫瑰紅、橫基羅丹明B、羅丹明B、酸性品紅、茜素紅或酸性紅;所述遮光劑 為鋒白、鐵白、鋒領白或鐵領白。
[0014] 所述傳感器材料配方為： 高分子廷橡膠材料 7 0%-9扭％ 高分子廷橡膠材料的固化劑 7%-9% 酸堿指示劑 0. 1%-10%
[0015] 遮光劑 ：0. 1嘴-9% 菱光指示劑 0. 1%-10% 其他
[0016] W上百分比為體積百分比，其中酸堿指示劑為質量百分比濃度0.1%-10%的水溶 液，遮光劑為質量百分比濃度10%-80%的懸濁水溶液，巧光指示劑為質量百分比濃度0.1- 10 %的水溶液，其他成分為水和/或乙醇。
[0017] 優選，所述傳感器材料配方為： Sy 1 gard 184磕橡膠基本組分 70%-9Ο騎 Sylgai-d 184廷橡膠的固化劑 7%-夢％ 漠育里驗藍 0.
[001 引 辭白 0. ?%-9% 羅丹巧Β 0. 其他 V!廣m
[0019] W上百分比為體積百分比，其中漠百里酪藍為質量百分比濃度〇.1%-1〇%的漠百 里酪藍水溶液，鋒白為質量百分比濃度10%-80%的鋒白懸濁水溶液，羅丹明B為質量百分 比濃度0.1 -10 %的羅丹明B水溶液，其他成分為水和/或乙醇。
[0020] 所述液體培養基包括膜酶大豆肉湯、腦屯、浸液、酵母提取物、糖類，并含有對微生 物起修復作用的維生素站矣和/或維生素 K族和/或維生素 E族。
[0021] 所述液體培養基還包括促進厭氧微生物生長的構祿酸鋼、硫乙醇酸鋼、巧樣酸鋼、 巧樣酸鐵、亞硫酸鋼α-半脫氨酸鹽酸鹽中的一種或多種;包括減少樣本中其他物質干擾， 促進微生物生長的乙二胺四乙酸鹽、對氨基苯甲酸、聚茵香橫酸鋼、葡萄糖氧化酶、氯化血 紅素中的一種或多種。
[0022] 所述液體培養基中添加有質量百分比2%-20%的吸附樹脂，吸附樹脂為一種或多 種非離子吸附樹脂和陽離子交換樹脂，W減弱樣本中抗生素對樣本培養的干擾。
[0023] 所述的體液增菌培養瓶的內部密閉空間含有內置氣體，所述的內置氣體包括氧 氣、氮氣、二氧化碳、氨氣、空氣中的一種或多種氣體。
[0024] -種體液增菌培養瓶的制備方法，包括W下步驟：
[0025] (1)雙層培養瓶的制備：先形成雙層型巧，再進行吹塑，吹塑的溫度在25攝氏度到 150攝氏度；
[0026] (2)傳感器材料制備:將巧光指示劑和酸堿指示劑用純化水溶解，遮光劑用純化水 配制成懸濁水溶液，按照比例混合后，加入含有銷系催化劑的娃橡膠材料、固化劑，在真空 條件下攬拌脫泡，攬拌均勻的同時完成脫泡工作；
[0027] (3)傳感器添加及固化:使用均勻分裝設備將傳感器材料引入到瓶體內，在底部鋪 平，形成2-lOmm厚度的傳感器;將引入傳感器材料的瓶體在溫度45-85°C環境下固化，在1-2 小時內完成固化；
[002引（4)培養基制備：將液體培養基組分按比例添加到純化水中，溶解，攬拌均勻，除 菌；
[0029] (5)灌裝:將滅菌的液體培養基和滅菌的吸附樹脂通過灌裝-