一種采用逆流色譜技術分離大蒜中含硫化合物的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種分離大蒜中含硫化合物的方法，特別是一種采用逆流色譜技術分離大蒜中含硫化合物的方法。
【背景技術】
[0002]大蒜的主要功效成分是大蒜素，被稱為天然廣譜抗生素。一般認為大蒜素是一類有活性的含硫化合物，主要包括二烯丙基二硫醚、二烯丙基三硫醚和二烯丙基硫代亞磺酸酯等烯丙基硫醚、硫酯化合物。
[0003]大蒜中大蒜素的含量很低，若要達到藥用效果需要使用的量卻很大，因此大蒜素的提取與合成是一個重要的研究方向。目前，大蒜素的提取方法主要有有機溶劑提取、水蒸氣蒸餾、超聲波輔助提取、超臨界萃取及納濾提取法。有溶劑提取法是利用大蒜素易溶于有機溶劑的性質，以有機溶劑浸泡大蒜泥來提取大蒜素的方法。該法不需要加壓、蒸餾，具有能耗小的優點，但是容易引入雜質，提取效率低，提取時間長。水蒸氣蒸餾法是將水蒸氣通入搗碎經酶解的大蒜中，因大蒜素較難溶于水且具有一定的揮發性，便可隨水蒸氣一起被蒸出，再進一步萃取得到大蒜素，但這種方法得到的并不是純的大蒜精油，而是大蒜中植物混合油。超聲波輔助提取法是利用超聲波能打破細胞邊界層，使擴散速度增大，提高提取效率，但是這種方法易使穩定性差的大蒜含硫活性成分分解，同時還易引入過多雜質，后續處理麻煩。超臨界流體萃取技術就是利用超臨界條件下的氣體作萃取劑，從液體或固體中萃取出某些成份并進行分離的技術，該技術高效節能、工藝簡單、安全可靠，但因其對設備要求較高，不易普及。納濾是介于超濾和滲透之間的膜分離技術，能有效地分離小分子有機物納濾提取法操作程序簡單、操作條件溫和、提取效率高，但這種方法也存在時提取時間長，不易擴大產量等瓶頸問題亟待解決。因此，開發高效的大蒜中含硫化合物的提取方法是非常必要的。
[0004]高速逆流色譜技術(high-speedcounter-current chromatography, HSCCC)是一種連續高效的無固相載體的液-液分配色譜技術，最初由美國國立健康研究院Ito教授研制開發。由于不需要固相載體，物質的分離依據其在互不相溶的兩相液體中的分配系數的差異而實現，因而避免了物質在固定相不可逆吸附而引起的樣品損失、失活、變性等問題，分離到的樣品更能反映其本來的特性，特別適合于天然產物中有效成分的分離。高速逆流色譜因其不使用固體固定相，不存在不可逆吸附現象，并且有廣泛的溶劑體系可供選擇。從理論上講HSCCC可以適用于任何極性范圍樣品的分離，甚至可以分離多糖和蛋白之類物質，因此應用范圍很廣，具有很好的適應性，在分離天然化合物方面有其獨到之處。但是，尚未有關于應用此技術進行大蒜素提取方法的研究報道。

【發明內容】

[0005]發明目的:為了克服現有技術中存在的不足，針對目前大蒜素提取過程中的工藝時間長、價格較高、條件比較苛刻或提取效率較低的問題，本發明提供一種采用逆流色譜技術分離大蒜中含硫化合物的方法，采用逆流色譜技術提取大蒜中的含硫化合物，實現了提取效率高、操作簡單、價格低廉的目標，為規模化生產大蒜含硫化合物提供了技術支持，有很好的推廣應用價值。
[0006]技術方案:為實現上述目的，本發明采用的技術方案為:
[0007]—種采用逆流色譜技術分離大蒜中含硫化合物的方法，包括如下步驟:
[0008]1)洗滌去雜:將新鮮大蒜去皮，洗去雜質；
[0009]2)破碎酶解:將洗凈的大蒜破碎打漿，酶解；
[0010]3)漿料過濾:將步驟2)所得漿料加入水，混合并過濾，得澄清大蒜汁；
[0011]4)大孔樹脂吸附:用D101大孔樹脂對所述澄清大蒜汁進行吸附，過濾后將吸附有大蒜汁的樹脂裝柱，用95%乙醇淋洗，得淋洗液；
[0012]5)逆流色譜技術純化大蒜含硫化合物:逆流色譜溶劑系統為正丁醇、乙醇、水，體積百分含量分別為40?45 %、9 %?11 %、50 %;所述溶劑系統靜置后，取上相作為固定相，下相作為流動相，逆流色譜條件為:柱溫為25°C，轉速為800-1000r/min，轉向為正向；
[0013]將所述淋洗液作為樣品，上樣體積為柱體積的1/10?1/20，進行收集含硫化合物溶液。收集過程按定時或定量進行，根據上樣量及保留體積而定。
[0014]6)溶劑揮發后得大蒜含硫化合物。
[0015]進一步的，在本發明中，所述步驟2)中，所述酶解條件為:35?40°C下酶解30?60mino此處保溫放置的作用是利用大蒜本身所含有的酶進行酶解將大蒜中蒜氨酸轉化為大蒜素，我們平時吃蒜說搗碎后放一會再吃營養高就是這個過程。
[0016]進一步的，在本發明中，所述步驟2)中打漿時大蒜與水的質量比為1:1。
[0017]進一步的，在本發明中，所述含硫化合物溶液收集后，采用分光光度法在412nm處測定含硫化合物含量。
[0018]進一步的，在本發明中，所述含硫化合物溶液收集后，采用高效液相色譜法進行檢測，色譜條件為:
[0019]0DS 色譜柱:4.6mm*250mm、5 μ m,
[0020]流動相:體積比為50:50的甲醇-1 %甲酸，
[0021]流速:1.0mL/min,
[0022]柱溫:25°C，
[0023]檢測波長:240nm，
[0024]進樣量:20μ L。
[0025]進一步的，在本發明中，收集到的所述含硫化合物為包括至少四種含硫化合物的混合物，包括二烯丙基硫代亞磺酸酯、二甲基硫代亞磺酸酯和甲基烯丙基硫代亞磺酸酯。還包括相應的同分異構體。
[0026]有益效果:本發明提供的采用逆流色譜技術分離大蒜中含硫化合物的方法，是一種新的分離提取方法，采用逆流色譜技術分離大蒜中含硫化合物實現了操作簡單、效率高、價格低廉的目的，為規模化分離純化大蒜含硫化合物提供了技術支持，有很好的推廣應用價值。
【附圖說明】
[0027]附圖1為本發明分離所得含硫化合物的高效液相色譜法檢測結果圖。
【具體實施方式】
[0028]下面結合具體的實施例對本發明進行進一步的闡述。
[0029]實施例1
[0030]A.洗漆去雜:將新鮮大蒜去皮，洗去雜質。
[0031 ] B.破碎酶解:將洗凈的大蒜破碎打漿，打漿時蒜:水=1:1，35°C下酶解30min。
[0032]C.漿料過濾:將得到的漿料加入一倍體積的水，充分攪勻，過濾，得澄清大蒜汁。
[0033]D.大孔樹脂吸附:用D101大孔樹脂對澄清大蒜汁進行充分吸附，過濾后將吸附了樣品的樹脂裝柱，用適量的95 %的乙醇淋洗，得淋洗液。
[0034]E.逆流色譜技術純化大蒜含硫化合物:逆流色譜溶劑系統為正丁醇:乙醇:水體積比為40:10:50 ;配置好的溶劑放入分液漏斗中，靜止過夜，取上相作為固定相，下相作為流動相；逆流色譜儀柱溫為25°C，轉速為800-1000r/min，轉向為正向；將得到的淋洗液作為樣品，上樣體積為柱體積的1/10，定時收集，對收集到的各管采用分光光度法測定含硫化合物