羅布麻黃酮純化樹脂的制備方法及應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種羅布麻黃酮純化樹脂的制備方法及應用，尤其是一種可以制備得 到高純度羅布麻黃酮的純化樹脂的制備方法及應用。
【背景技術】
[0002] 羅布麻是夾竹桃科植物。作為一種傳統中藥材，羅布麻的葉子可以用于治療高血 壓、心腦缺血等疾病。羅布麻葉中含有黃酮，有機酸及鞣質成分。由于黃酮和鞣質結構相近， 通常的提取方法無法將二者分離開。
[0003] 現代化的分離純化技術，如二氧化碳超臨界萃取技術、高速逆流色譜技術、工業制 備色譜技術、大孔吸附樹脂技術以及微波、超聲等輔助設備的開發，使得高純度有效成分提 取物的制備成為可能。
[0004] 在目前開發的分離方法中，適于大規模工業化制備的生產工藝的分離方法并不是 很多。大孔樹脂吸附分離法由于其低成本、無污染、操作簡便、易于工業化等優勢在天然植 物提取分離中占據重要地位。但是，大孔吸附樹脂具有廣譜吸附作用，使它對某一吸附質或 者對某一類吸附質的吸附選擇性并不好，這導致提取物的純度不高。例如，CN1385188A公開 了一種羅布麻有效部位的提取分離方法，包含羅布麻上柱液的制備步驟、由分離柱進行分 離的步驟、用洗脫劑對分離柱進行洗脫的步驟以及對洗脫液進行濃縮的步驟，其中分離柱 為大孔吸附樹脂柱，在洗脫步驟首先采用20-39%的乙醇水溶液洗脫，再用40-70%的乙醇 水溶液洗脫。該專利文獻聲稱可以獲得總黃酮含量達到50wt%以上的浸膏。但是該方法并 沒有給出總黃酮含量的測試方法。CN1634325A公開了一種羅布麻提取物及其提取方法，聲 稱其提取物中總黃酮含量35-90%。上述總黃酮含量是通過紫外光譜測定的，該方法并不適 合于總黃酮含量的測定，誤差非常大。本申請的發明人發現，液相色譜(HPLC)適合于總黃酮 含量的測定，測定的數據較為準確。本申請的發明人也發現，上述兩篇專利文獻的提取物中 總黃酮含量在50wt %以下。
[0005] 因此，迫切需要開發一種大孔吸附樹脂，其可以將羅布麻葉中的黃酮化合物和鞣 質分離。這將為羅布麻中兩類物質的分離提供更經濟、可大規模操作的方法。
[0006] 目前，關于中藥成分常用的除鞣質方法主要有熱處理冷置法、明膠沉淀法、酸性醇 沉法、堿性醇沉法和鉛鹽沉淀法等，但是，大多方法的選擇性差(廖學品等，中草藥提取物中 單寧(鞣質）的選擇性脫除，天然產物研究與開發，第16卷第1期，第10-15頁，2004年）。除鞣 質方法還包括聚酰胺法，但是這種方法存在不能用于酸性環境、流速慢和混入低分子雜質 等問題。因此，需要尋找一種簡單且易于工業化生產的方法，其可以將黃酮純化、并將鞣質 分離出來。

【發明內容】

[0007] 為克服現有技術的缺陷，本申請的發明人進行了深入研究。本發明的一個目的是 提供一種羅布麻黃酮純化樹脂的制備方法。該方法可以顯著提高羅布麻提取物中的總黃酮 含量，且可以將羅布麻粗提物中的一部分鞣質分離出來。
[0008] 本發明的另一個目的在于提供上述制備方法獲得羅布麻黃酮純化樹脂。
[0009] 本發明的再一個目的在于提供上述羅布麻黃酮純化樹脂的應用。本發明的樹脂可 以有效提高羅布麻葉中的總黃酮含量、并有效去除鞣質。
[0010] 本發明提供一種羅布麻黃酮純化樹脂的制備方法，包括如下步驟：
[0011] (1)將丙烯酸酯單體、二乙烯苯交聯劑、引發劑和致孔劑混合均勻形成油相，然后 將該油相加入到分散介質中，調節攪拌速度以使得分散介質中形成的油珠尺寸控制在0.4 ~0.8mm之間；保持該攪拌速度，并以0.1~0.6°C/min的第一速度升溫至65~80°C，保持3~ 6小時;繼續以0.1~0.6°C/min的第二速度升溫至85~90°C，并保持3~6小時以形成反應產 物，然后將所述的反應產物經過后處理，得到第一樹脂；
[0012] 其中，所述的二乙烯苯交聯劑用量為丙烯酸酯單體和二乙烯苯交聯劑總量的 15wt%~45wt%，所述的引發劑用量為丙稀酸酯單體和二乙稀苯交聯劑總量的1. lwt%~ 2.0wt%，所述的致孔劑用量為丙稀酸酯單體和二乙稀苯交聯劑總量的lOlwt%~150wt% ;
[0013] (2)將步驟(1)得到的第一樹脂烘干，然后采用溶脹試劑進行溶脹5~24小時，然后 與過量的胺解試劑在110~140°c下反應5~15小時，再用蒸餾水洗滌至中性，得到第二樹 脂；
[0014] (3)將步驟(2)得到的第二樹脂與過量的醋酸酐在80~90°C下反應5~15小時，得 到羅布麻黃酮純化樹脂。
[00? 5]根據本發明所述的制備方法，優選地，所述的油珠尺寸控制在〇. 5~0.7mm之間；所 述的第一速度為0.2~0.5°C/min;所述的第二速度為0.2~0.5°C/min。
[0016]根據本發明所述的制備方法，優選地，所述的丙烯酸酯單體選自丙烯酸甲酯、丙烯 酸乙酯、丙烯酸丙酯、丙烯酸丁酯的一種或多種；所述的致孔劑選自正庚烷、正辛烷、正壬 烷、液體石蠟、甲苯、乙酸丁酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯中的一種或多種;所述的引發劑選自偶 氮二異丁腈ABIN、偶氮二異庚腈ABVN、過氧化苯甲酰ΒΡ0、過氧化二(2,4_二氯苯甲酰）、過氧 化二乙酰、過氧化二辛酰、過氧化二月桂酰、二異丙苯過氧化物DCP或二叔丁基過氧化物 DTBP中的一種或多種。
[0017]根據本發明所述的制備方法，優選地，所述的致孔劑選自正庚烷、質量比為1~2:1 的液體石蠟與甲苯的混合物、或者質量比為1~2:1的正庚烷與乙酸丁酯的混合物。
[0018] 根據本發明所述的制備方法，優選地，在步驟（1)中，所述的后處理為將所述的反 應產物冷卻，再用50~80 °C的熱水洗滌，然后依次用蒸餾水、無水乙醇、丙酮洗滌和抽濾，再 用石油醚作為溶劑抽提5~10小時。
[0019] 根據本發明所述的制備方法，優選地，在步驟（1)中，所述的分散介質選自濃度為 1.0-1.5wt%的聚乙烯醇水溶液或濃度為1.0-1.5wt%的明膠水溶液。
[0020] 根據本發明所述的制備方法，優選地，在步驟(2)中，所述的烘干在60~75°C下進 行;所述的溶脹試劑選自N，N-二甲基甲酰胺或N，N-二甲基乙酰胺;所述的胺解試劑選自二 乙烯三胺、乙二胺或三乙烯四胺，所述的胺解試劑的用量為第一樹脂質量的1.5~3倍。
[0021] 根據本發明所述的制備方法，優選地，在步驟(3)中，醋酸酐的用量為第二樹脂質 量的2~6倍。
[0022] 本發明還提供一種羅布麻黃酮純化樹脂，所述的羅布麻黃酮純化樹脂通過前述的 制備方法制備得到。
[0023] 本發明也提供上述羅布麻黃酮純化樹脂的應用，將羅布麻黃酮純化樹脂用于純化 羅布麻粗提物，從而形成羅布麻提取物;其中，所述的羅布麻提取物的總黃酮含量在65wt% 以上，鞣質含量低于15wt%;所述的總黃酮含量采用液相色譜測定。
[0024] 根據本發明所述的應用，優選地，所述的應用包括如下具體步驟：
[0025] 0-)將羅布麻粗提物分散于第一乙醇水溶液中形成吸附液，所述吸附液中的羅布 麻粗提物濃度為5~10mg/ml;其中，所述羅布麻粗提物的總黃酮含量低于20wt%，縣質含量 在7wt%以上，所述的總黃酮含量采用液相色譜測定；
[0026] (2'）將上述羅布麻黃酮純化樹脂裝入吸附柱；
[0027] (3'）將1~2BV的所述吸附液加入步驟(2'）獲得的吸附柱中，以1~2BV/h的吸附速 率將所述吸附液通過所述吸附柱，吸附完畢后，用1~2BV的水洗滌所述吸附柱，再用第二乙 醇水溶液對所述吸附柱進行洗脫，收集解吸液，干燥后得到羅布麻提取物；
[0028] 其中，所述的BV表示柱體積單位。
[0029]根據本發明所述的應用，優選地，所述的第一乙醇水溶液含有5~20vt%的乙醇； 所述吸附柱的長徑比為5~20:1;所述的第二乙醇水溶液含有60~85vt%的乙醇。
[0030] 采用傳統方法獲得酰胺基樹脂并不能有效地提高羅布麻提取物中的總黃酮含量。 本發明的制備方法通過控制懸浮聚合過程中的油珠尺寸，調整升溫速率，調節二乙烯苯交 聯劑用量、引發劑用量以及致孔劑用量，從而獲得可以有效改善純化效果（即有效提高羅布 麻提取物中的總黃酮含量）、且有效去除鞣質的羅布麻黃酮純化樹脂。采用本發明的純化樹 月旨，可以將羅布麻提取物的總黃酮含量(采用液相色譜測定）提高至65wt%以上，鞣質含量 則低于15wt%。
【附圖說明】
[0031] 圖1為實施例3的酯基樹脂和酰胺基樹脂的紅外光譜圖。
[0032]圖2為槲皮素和山奈酚標準品的HPLC譜圖。
[0033]圖3為應用例3的羅布麻粗提物水解后的HPLC譜圖。
[0034]圖4為應用例3的羅布麻提取物水解后的HPLC譜圖。
【具體實施方式】
[0035]下面結合具體實施例對本發明作進一步的說明，但本發明的保護范圍并不限于 此。
[0036] 本發明中，"％"表示重量百分比，除非特別聲明或標注。
[0037] 在本發明中，"吸附柱"、"樹脂吸附柱"、"樹脂柱"具有相同的含義，均表示用于吸 附分尚的柱子。
[0038] 在本發明中，所述的BV表示柱體積單位。
[0039] 〈制備方法〉
[0040]