離子配位沉淀法純化蘋果多酚的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種Mn+離子配位沉淀法純化蘋果多酚的方法。
【背景技術】
[0002] 蘋果多酸（Apple Polyphenols，AP)是一種天然活性多酸，也是一種天然抗氧化 劑，屬于植物多酚的一種，AP存在于蘋果的各個部位中，它不是一種單一的物質，而是蘋果 內所含有的所有酚類物質的總稱。天然活性多酚的純化方法主要有：溶劑萃取法、樹脂吸 附法、柱層析法、膜分離技術、高速逆流色譜法等。蘋果多酚作為一種天然活性多酚，它的純 化方法也離不開上述幾種。研究表明實驗室針對于蘋果多酚的純化，大多都先采用不同的 方法進行初步提取，然后在得到的蘋果多酚粗提液的基礎上進行進一步純化，例如首先通 過超聲波提取法初步提取國光蘋果中的蘋果多酚，然后通過研究AB-8大孔樹脂對蘋果多 酚的吸附特性，找出適合于蘋果多酚分離純化的條件（金瑩，2006)。通過四元二次通用旋 轉設計輔助微波法確定了蘋果渣中多酚的最佳提取工藝；針對蘋果多酚粗提物，利用大孔 吸附樹脂S印hadex LH-20脂對蘋果多酚進行純化（郭娟，2006)。應用超聲波輔助乙醇初 提蘋果皮渣多酚然后通過選取NKA-9大孔樹脂法繼續純化得到純度為72%蘋果皮渣多酚 粉末（李珍，2014)。同樣通過對大孔樹脂靜態吸附和解析綜合研究，在16種樹脂中選擇 NKA-9大孔樹脂來純化蘋果多酚粗提液，近年來脂吸附純化法慢慢開始走出實驗室朝著工 業化進行發展（王育紅，2007)。此外在其他技術的應用上，利用膜分離技術研究了煙臺紅 富士蘋果多酚氧化酶的分離純化條件（劉芳，2015)。研究了固相萃取法，從四種固相萃取 小柱中篩選出分離效果較好的Waters Oasis HLB固相萃取小柱對蘋果多酚進行純化（賀 金娜，2014)。樹脂吸附法及柱層析吸附分離法因材料價格高，材料再生存在一定問題，因此 鮮少應用于工業化生產；膜分離技術和高速逆流色譜法等新方法近年仍處于實驗室研究階 段，實現工業化尚有一定困難。

【發明內容】

[0003] 本發明要解決現有純化蘋果多酚的方法存在成本高、蘋果多酚提取率低的問題， 而提供了一種M n+離子配位沉淀法純化蘋果多酚的方法。
[0004] 本發明一種Mn+離子配位沉淀法純化蘋果多酚的方法是通過以下步驟進行的：
[0005] -、原料預處理：將新鮮的蘋果切成Im3~3m3的小塊，在溫度為70°C~80°C的水 中漂燙8s~IOs后破碎得到勻漿；
[0006] 二、微波輔助粗提取：將步驟一得到的勻漿加入到質量濃度為50%的乙醇中，然 后在微波功率為640W的條件下進行粗提取，粗提取的時間為70s，得到蘋果多酚粗提取液； 所述步驟一得到的勾衆的質量與質量濃度為50%的乙醇的體積比為lg: 14mL ;所述蘋果多 酚粗提取液中蘋果多酚的含量為8. 93mg/g~9. 92mg/g ;
[0007] 三、將步驟二得到的蘋果多酚粗提取液采用質量濃度為1%~5%的氨水將pH值 從3. 8~4. 5調整至5~9,得到調節后的蘋果多酚粗提取液；向調節后的蘋果多酚粗提取 液中投加Mn+離子，然后在離心轉速為500rpm~4000rpm、離心時間為IOmin~70min和pH 值為5~9的條件下進行離心，靜置lOmin，得到純化后的蘋果多酚沉淀物；所述Mn+離子 由Mn+金屬鹽提供的；所述M n+金屬鹽的質量與步驟二得到的蘋果多酚粗提取液的體積比為 Ig:(35 ~500)mL ;
[0008] 四、沉淀物轉溶提取：將步驟三得到的純化后的蘋果多酚沉淀物加入到濃度為 lmol/L的鹽酸中至沉淀物完全溶解，得到轉溶后的蘋果多酚樣液，然后再向轉溶后的蘋果 多酚樣液中加入乙酸乙酯萃取，冷凍干燥得到棕紅色粉末狀蘋果多酚；所述轉溶后的蘋果 多酚樣液與乙酸乙酯的體積比為1:1。
[0009] 本發明的有益效果在于：
[0010] 本發明采用金屬離子純化粗提液中的蘋果多酚，首先環保節能，降低成本；其次， 方法安全快捷可操控；更重要的是，該方法得到的蘋果多酚沉淀率高，純化后所得到的蘋果 多酚色澤棕紅，略帶果香。蘋果多酚沉淀率可達93. 98%。
【附圖說明】
[0011] 圖1為不同ZnCl3添加量與蘋果多酚沉淀率的關系曲線；
[0012] 圖2為不同pH值與蘋果多酚沉淀率的關系曲線；
[0013] 圖3為不同離心轉速與蘋果多酚沉淀率的關系曲線；
[0014] 圖4不同離心時間與蘋果多酚沉淀率的關系曲線。
【具體實施方式】
【具體實施方式】 [0015] 一：本實施方式一種Mn+離子配位沉淀法純化蘋果多酚的方法是通 過以下步驟進行的：
[0016] -、原料預處理：將新鮮的蘋果切成Im3~3m3的小塊，在溫度為70°C~80°C的水 中漂燙8s~IOs后破碎得到勻漿；
[0017] 二、微波輔助粗提取：將步驟一得到的勻漿加入到質量濃度為50%的乙醇中，然 后在微波功率為640W的條件下進行粗提取，粗提取的時間為70s，得到蘋果多酚粗提取液； 所述步驟一得到的勾衆的質量與質量濃度為50%的乙醇的體積比為lg: 14mL ;所述蘋果多 酚粗提取液中蘋果多酚的含量為8. 93mg/g~9. 92mg/g ;
[0018] 三、將步驟二得到的蘋果多酚粗提取液采用質量濃度為1%~5%的氨水將pH值 從3. 8~4. 5調整至5~9,得到調節后的蘋果多酚粗提取液；向調節后的蘋果多酚粗提取 液中投加Mn+離子，然后在離心轉速為500rpm~4000rpm、離心時間為IOmin~70min和pH 值為5~9的條件下進行離心，靜置lOmin，得到純化后的蘋果多酚沉淀物；所述M n+離子 由Mn+金屬鹽提供的；所述Mn+金屬鹽的質量與步驟二得到的蘋果多酚粗提取液的體積比為 Ig:(35 ~500)mL ;
[0019] 四、沉淀物轉溶提取：將步驟三得到的純化后的蘋果多酚沉淀物加入到濃度為 lmol/L的鹽酸中至沉淀物完全溶解，得到轉溶后的蘋果多酚樣液，然后再向轉溶后的蘋果 多酚樣液中加入乙酸乙酯萃取，冷凍干燥得到棕紅色粉末狀蘋果多酚；所述轉溶后的蘋果 多酚樣液與乙酸乙酯的體積比為1:1。
[0020] 本實施方式步驟一中所述新鮮的蘋果為市售的紅富士，因為蘋果多酚存在于蘋果 中的各個部位，紅富士蘋果體積大，果肉多，果皮厚，其蘋果多酚含量高于其他常見蘋果種 類。
[0021] 本實施方式步驟二中所述蘋果多酚粗提取液中蘋果多酚的含量是通過福林酚 法進行測量的；其方法如下：首先以沒食子酸（C 7H6O5)標準品為對照品，稱取IOmg C7H6O5 用蒸餾水定容至IOmL容量瓶；其次分別吸取0mL、0. lmL、0. 2mL、0. 3mL、0. 4mL、0. 5mL和 0. 6mLC7H605溶液定容到IOmL容量瓶，所得溶液的質量濃度分別為10mg/L、20mg/L、30mg/L、 40mg/L、50mg/L和60mg/L ;然后取37. 5g無水Na2CO3用250mL溫蒸餾水溶解于500mL燒杯 中，用玻璃棒不停攪拌，冷卻后定容至500mL容量瓶；
[0022] 線性回歸方程：再次分別吸取ImL不同質量濃度的(：71160 5溶液至IOmL容量瓶內， 依次加入5mL蒸餾水和ImL福林-式劑，4min后加入3mL 150g/L的Na2CO3溶液，顯色2h， 并用紫外分光光度計測定A765nni的值。最后進行3組平行試驗。以沒食子酸含量為橫坐標， 吸光度為縱坐標，得回歸方程為Y = 0. 0126X-0. 0236, r2= 0. 9952,由此可知橫縱坐標在一 定范圍內線性相關且相關性顯著。所述蘋果多酚粗提取液中蘋果多酚的含量為T，其計算公
式中：C為沒食子酸的含量，單位為y g/mL ;V為濃度為50%的 乙醇，單位為mL ;M為步驟一得到的勻漿質量，單位為g ;N為稀釋倍數，是稀釋前溶液濃度， 除以稀釋后的溶液濃度所得的商。
[0023] 本實施方式步驟四中所述棕紅色粉末狀蘋果多酚的沉淀率的計算公式為：
;式中
1為沉淀前AP浸提液體積（mL)，V 2為調PH之后，沉淀浸提 液的體積（mL) ;A#沉淀前AP浸提液測得的吸光度；A AAP沉淀后上清液測得的吸光度。
[0024] 本實施方式步驟三中調節pH時所用的試劑是氨水，氨水濃度不可太高，因為步驟 二得到的蘋果多酚粗提取液本身PH值3. 8~4. 5,過高濃度氨水不易調節步驟二得到的蘋 果多酚粗提取液PH值，所以氨水濃度控制在1 %~5%之間便于調節步驟二得到的蘋果多 酚粗提取液PH值。
【具體實施方式】 [0025] 二：本實施方式與一不同的是：步驟三中所述Mn+離子 為Ca 2+離子、Mg 2+離子、Ba 2+離子、Zn 3+離子或Fe 3+離子。