一種肉蓯蓉中松果菊苷和毛蕊花糖苷的提取分離方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種中藥有效成分的提取方法，特別涉及一種從中藥肉蓯蓉中提取同 時含有松果菊苷和毛蕊花糖苷等活性成分的方法。 二、 技術背景
[0002] 肉蓯蓉主要分布于新疆、甘肅、寧夏、內蒙古等地，現已進行人工種植。是一種寄生 在梭梭、紅柳根部的列當科肉蓯蓉屬多年生寄生草本植物，屬列當科瀕危種。具有補腎壯 陽，益精氣，延緩衰老，潤腸等功效，素有"沙漠人參"的美譽。藥用價值極高，是我國傳統的 名貴中藥材。
[0003] 肉蓯蓉含有多種活性成分，主要包括：苯乙醇苷類、環烯醚萜苷類、木脂素苷類等， 因苯乙醇苷類具有的抗氧化、促進物質代謝、改善學習記憶、增強性功能、延緩衰老等多種 藥理活性，近年來對肉蓯蓉苯乙醇苷類研究活躍，工業生產的肉蓯蓉提取物大多以分離苯 乙醇苷類為主，而松果菊苷和毛蕊花糖苷是含量較高的苯乙醇苷類物質，因此，也是評價肉 蓯蓉質量優劣的重要指標成分。鑒于肉蓯蓉苯乙醇苷類良好的藥理作用，運用最簡化的工 藝分離制備較高含量，較高收率的苯乙醇苷類化合物，對制藥及保健品研究具有重大意義。
[0004] 目前以松果菊苷和毛蕊花糖苷為指標成分對肉蓯蓉苯乙醇苷類的研究已有許多 技術資料及專利支持，專利"一種肉蓯蓉提取物的生產方法"（專利號=200710032806.9) 介紹了一種通過細胞破碎技術、高溫滅酶技術、噴霧干燥技術和大孔樹脂分離技術制備 肉蓯蓉苯乙醇苷提取物，此種方法以遏制酶催化反應，提高松果菊苷及毛蕊花糖苷的含 量。專利"應用膜分離技術從肉蓯蓉中生產含有苯乙醇苷的原料及其制備方法"（專利號： 200710102756. 7)介紹一種運用膜分離制備苯乙醇苷的方法，此法主要運用目標成分與其 他成分之間的分子量差異進行分離，分離過程穩定，無相變，從而最大程度的收集苯乙醇苷 類物質。專利"一種肉蓯蓉苯乙醇總苷的制備方法"（專利號：CN102441040A)利用肉蓯 蓉苷在弱酸條件下的穩定性，通過粉碎，浸提、樹脂吸附，解吸，濃縮的過程制備，使松果菊 苷和毛蕊花糖苷含量合計比例大于90 %。
[0005]目前肉蓯蓉苯乙醇苷類的分離主要集中在松果菊苷和毛蕊花糖苷的分離制備，部 分工藝只提供松果菊苷分離方法或毛蕊花糖苷分離方法，分離結果單一，造成了資源浪費， 鮮有的同時制備松果菊苷及毛蕊花糖苷的方法也存在制備工藝復雜，生產成本較高的問 題，不適用于大規模生產。 三、

【發明內容】

[0006] 本發明的主要目的在于提供一種從肉蓯蓉中同時獲得高含量松果菊苷和毛蕊花 糖苷的方法，該方法工藝簡單，成本低，適用于肉蓯蓉提取物大規模生產。
[0007] 本發明的制備方法，包括以下步驟：
[0008] 1)鮮肉蓯蓉，切丁、滅酶，干燥，粗粉。
[0009] 2)乙醇多次提取，收集全部乙醇提取液，濃縮至無醇味。
[0010] 3)過濾，得肉蓯蓉提取液澄清溶液。
[0011] 4)將肉蓯蓉提取液的澄清水溶液上大孔樹脂柱進行吸附，先用水洗至流出液澄 清，再用乙醇洗脫，收集全部乙醇洗脫液。
[0012] 5)乙醇洗脫液濃縮，干燥，得到本發明肉蓯蓉提取物。
[0013] 經過對本發明肉蓯蓉提取物中有效成分的含量測定，其中：
[0014] 松果菊苷含量為25%以上，
[0015] 毛蕊花糖苷含量為10%以上，
[0016] 總的苯乙醇苷類成分含量為80%以上。
[0017] 本發明所述的制備方法，其中，步驟1)中所述切丁，是將肉蓯蓉切成正方體小塊， 長寬高均約1. 5cm。步驟1)中所述滅酶，是將肉蓯蓉小塊在溫度為60°C~80°C下進行蒸 煮，使其中的蛋白酶等蛋白質類物質滅酶失活。步驟1)中所述干燥，是將滅酶后的肉蓯蓉 在干燥箱中干燥，干燥后的肉蓯蓉小塊水分要求S15%。所述粗粉是將干燥后的肉蓯蓉小 塊用粉碎機粉碎成顆粒。
[0018] 本發明所述的制備方法，其中，步驟2)中所述提取方法為回流提取或超聲加熱提 取。步驟2)中所述提取時的乙醇濃度為20-90%。
[0019] 本發明所述的制備方法，其中，步驟4)中所述的用乙醇洗脫，乙醇洗脫液濃度為 10 ~95% ?
[0020] 優選的，本發明的制備方法，步驟如下：
[0021] 1)鮮肉蓯蓉，切丁，滅酶，干燥，粗粉。
[0022] 2)將藥材粗粉置于超聲波提取罐中，按1:8~1:40的料液質量體積比向提取罐 中加入質量濃度為10%~90%的乙醇溶液，調節提取溫度為10°C~80°C，超聲提取1~3 小時，提取次數為1~3次，合并提取液減壓濃縮至無乙醇。
[0023] 3)將肉蓯蓉提取物濃縮液用超濾設備進行過濾澄清，得肉蓯蓉提取物的澄清溶 液。
[0024] 4)將肉蓯蓉提取物澄清溶液上大孔樹脂柱進行吸附，首先用純化水洗脫至流出液 無色澄清，除去雜質，然后用10 %~95 %乙醇溶液洗脫，收集全部的10 %~95 %乙醇洗脫 液。
[0025] 5)將乙醇洗脫液用外循環真空濃縮器進行濃縮，再進行噴霧干燥得肉蓯蓉提取 物。
[0026] 特別優選的，本發明的制備方法，步驟如下：
[0027] 1)鮮肉蓯蓉，切丁，滅酶，干燥，粗粉。
[0028] 2)將藥材粗粉置于超聲波提取罐中，按1:8~1:20的料液質量體積比向提取罐中 加入質量濃度為40%~80%的乙醇溶液，調節提取溫度為30~50°C，超聲提取1~3小 時，提取次數為1~3次，合并提取液減壓濃縮至無乙醇。
[0029] 3)將肉蓯蓉提取物濃縮液用超濾設備進行過濾澄清，得肉蓯蓉提取物水溶液的澄 清溶液。
[0030] 4)將肉蓯蓉提取物澄清溶液上大孔樹脂柱進行吸附，首先用純化水洗脫至流出液 無色澄清，除去雜質，然后用30 %~70 %乙醇溶液洗脫，收集全部的30 %~70 %乙醇洗脫 液。
[0031] 5)將乙醇洗脫液用外循環真空濃縮器進行濃縮，再進行噴霧干燥得肉蓯蓉提取 物。
[0032] 最優選的，本發明的制備方法，步驟如下：
[0033] 50公斤肉蓯蓉粗粉中加入500公斤75%乙醇，用多功能超聲波提取罐于45°C超聲 提取1. 5小時，以上方法重復提取3次，合并三次提取液，于70°C以下減壓濃縮至無乙醇，該 溶液用超濾設備過濾至澄清，澄清液上大孔樹脂柱進行吸附，首先用純化水洗脫至流出液 無色澄清，再用55%乙醇洗脫，收集全部55%乙醇洗脫液，用外循環真空濃縮器進行濃縮， 濃縮液噴霧干燥即得肉蓯蓉提取物，松果菊苷含量為26. 91，毛蕊花糖苷含量為11. 45%。 收率為18%。
[0034] 為檢測得到的肉蓯蓉提取物中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量，本發明提供了一種 松果菊苷和毛蕊花糖苷高效液相檢測方法，該方法如下：
[0035] 1所用儀器和設備
[0036] Agilentl260高效液相色譜儀（配有：四元栗、標準型自動進樣器、柱溫箱、 AgilentDAD檢測器）；電子天平（感量O.OOOlg);超聲波清洗儀；玻璃回流裝置；電熱恒溫 水浴鍋；玻璃儀器（各規格移液管或移液器、各規格容量瓶等）；
[0037] 2所需試劑和藥品
[0038] 毛蕊花糖苷、松果菊苷標準品（含量彡98% );甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水。
[0039] 3溶液配制
[0040] 3. 1標準溶液：分別稱取松果菊苷和毛蕊花糖苷對照品5.lmg、5.Omg，置于10mL 的容量瓶中，用洗脫劑定容至刻度，作為對照品儲備液。
[0041] 3. 2樣品溶液：精密稱取一定質量的樣品置于容量瓶中，以洗脫液溶解定容，配制 成一定濃度的樣品溶液，使之峰面積在線性范圍之內。
[0042] 4測定步驟
[0043] 4. 1色譜條件
[0044] 色譜柱：AgilentZ0RBAXEclipsePlusC18 (4. 6mmX25mm，5ym);柱溫：2CTC;流 動相：甲醇、乙腈、水梯度洗脫，洗脫程序見下表；流速：lmL/min;檢測波長：334nm。
[0045] 表1洗脫程序
[0046]
[0047] 4. 2標準曲線的繪制<