干擾素調節因子5抑制多肽及其應用
【技術領域】：
[0001] 本發明涉及藥物領域，具體涉及用于預防和治療或預防類風濕性關節炎的干擾素 調節因子5多肽抑制多肽。
【背景技術】：
[0002] 干擾素調節因子（IRF)是轉錄因子家族成，可以通過與干擾素基因中順式元件 (ISRE)的相互作用而調節干擾素及干擾素誘導基因的表達，在干擾素基因的調控中占有重 要地位。干擾素調節因子-5是該家族其中的一員，IRF5能誘導IFN-a、IFN-β產生，也 能促進IL-6、IL-12b、IL-17、IL-23、TNF等細胞因子的分泌，從而參與機體的免疫反應、細 胞生長、細胞分化、細胞凋亡、腫瘤發生和細胞信號轉導等過程。干擾素調節因子-5在人體 許多疾病的發生、發展中起重要作用.研究發現干擾素調節因子-5(IRF-5)基因 rs2004640 位點基因多態性與河北漢族人群類風濕關節炎（RA)存在高度的相關性。IRF5不僅可以誘 導產生干擾素，并且通過Toll樣受體通路激活干擾素下游靶基因，因此，IRF5在自身免疫 性疾病發病中起重要的作用，成為治療類風濕關節炎的新靶點。
[0003] 類風濕關節炎（rheumatoid arthritis，RA)是臨床最常見的炎性關節病和主要致 殘因素之一。在全世界約為0.5%-1.0%，RA的發病在我國約為0.4%。RA可發生于任何 年齡，隨著年齡的增長，發病率也隨之增高。女性高發年齡為45-55歲，性別與RA發病關系 密切，男女之比約1: 3。RA是一種病因尚未明了的慢性全身性炎癥性疾病，以慢性、對稱性、 多滑膜關節炎和關節外病變為主要臨床表現，屬于自身免疫炎性疾病。類風濕關節炎的病 因和發病機制尚未完全明了，其基本病理特點是血管炎和滑膜炎。關節內滑膜血管增生，形 成血管翳，導致滑膜增厚，滲出增多，分泌多種細胞因子，侵犯軟骨并引起骨質損害。對其周 圍的肌腔、韌帶、腱鞘以及肌肉等組織也均可侵蝕，從而影響關節的穩定，容易發生關節畸 形而出現功能障礙。血管炎亦可侵犯周身各臟器組織，形成系統性疾病。
[0004] 目前治療RA的藥物分為兩大類：控制癥狀藥和控制疾病藥。由于RA病因不明， 故當今并無堪稱控制疾病的藥。控制癥狀的抗風濕藥分為四類：一、非留體類抗炎藥，通常 稱為一線藥，這類藥物種類繁多，國內市場已多達數十種。二、類固醇激素，激素是一個非常 好的止痛抗炎藥，但長期單獨使用不能改善病情，反而帶來許多副作用，激素作為二線慢作 用藥起效前的過渡性用是可以的，但用量要小，時間不宜過長。在病情較重，伴有關節外表 現的患者，短期治療沖擊，并聯合二線藥治療時必須的。三、慢作用抗風濕藥，通常稱為二線 藥，所謂慢作用藥包括抗瘧藥、金鹽、青霉胺和柳氮碘胺吡啶，它們治療RA起效慢，長期作 用對RA病情有一定緩解作用，故也稱病情改善藥。四、免疫抑制多肽：常用有甲氨喋呤、環 磷酰胺、硫唑嘌呤、雷公藤、青風藤等。先有的抗類風濕關節炎藥物都差強人意。因此，急需 開發新型的抗類風濕關節炎藥物。
[0005] 目前盡管研究認為，IRF5是治療RA的新靶點。但是并沒有成熟開發的干擾素調 節因子5抑制多肽問世，用于治療RA。

【發明內容】
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[0006] 本發明目的是針對現有抗類風濕關節炎藥物的特點，設計一種IRF5多肽拮抗劑， 可以用于預防或治療類風濕關節炎。
[0007] 本發明技術方案是提供一種干擾素調節因子5抑制多肽，其序列為 TCMIPRDTHDGAFYRA，及在治療或預防類風濕性關節炎藥物中的應用。可通過多種給藥方式 治療和預防類風濕關節炎疾病，包括皮下或肌肉注射，靜脈注射或者靜脈滴注，口服給藥如 藥丸、膠囊等，鼻噴劑等。
[0008] 有益結果：
[0009] 本發明中的干擾素調節因子5抑制多肽序列TCMIPRDTHDGAFYRA，可以靶向抑制 IRF5,抑制干擾素調節因子5受體產生的生理或病理的效應，達到預防或治療類風濕性關 節炎的效果。
[0010] 發明人經過大量實驗獲知干擾素調節因子5抑制多肽能夠抑制佐劑型大鼠類風 濕關節炎和DBA/1小鼠膠原型類風濕性關節炎的發展，體內實驗證明具有顯著的治療類風 濕型關節炎的效果。說明本發明設計的干擾素調節因子5抑制多肽科學、合理、可行有效， 能作為治療或預防類風濕性關節炎藥物。
【具體實施方式】
[0011] 實施例1
[0012] 干擾素調節因子5抑制多肽在膠原誘導小鼠關節炎動物模型體內免疫保護作用
[0013] 構建膠原型小鼠關節炎動物模型，研究干擾素調節因子5抑制多肽對小鼠膠原誘 導性關節炎（collagen induced arthritis，CIA)的治療作用。采用小鼠作為受試動物， SPF級DBA/1小鼠60只（由上海西普爾-必凱實驗動物有限公司（Sino-British SIPPR Lab. Animal Ltd)提供，動物生產許可證號碼：SCXK (滬）2008-0016)，雄性，7-8周齡，體重 為18-22g，隨機分成6組，分別是正常對照組，模型對照組，多肽低中高3個劑量組（1，2， 4mg/kg)和陽性藥對照組（甲氨蝶呤2mg/kg)。除正常組外，第0天各實驗組建立小鼠 CIA 模型，方法是雞軟骨II型膠原（c II )用0. lmol/1醋酸溶解成4mg/ml的溶液，于4°C冰箱 過夜。實驗當天用 II 型膠原與含 4mg/ml Myeobaeterium tuberculosis strain H37Rv 的 完全弗氏佐劑（CFA)等體積充分乳化，待DBA/1小鼠麻醉后，于其尾部皮內每只注射乳化劑 50 y 1進行致敏，21d后用4mg/ml的II型膠原（c II )與不完全弗氏佐劑（IFA)等體積充分 乳化后以相同劑量的乳化劑于尾部進行再次免疫。造模第30d起皮下注射給藥：多肽的3 個劑量組（l，2,4mg/kg):每日兩次，連續7天；陽性藥對照組（甲氨蝶呤2mg/kg):每3天 一次，連續3次；正常對照組和模型對照組（生理鹽水）：連續7天。分別于造模后第38天 測關節評分、分別檢測左右后足足踝直徑來觀察藥物對小鼠膠原型關節炎的影響。
[0014] 干擾素調節因子5抑制多肽在膠原誘導小鼠關節炎動物模型體內免疫保護作用 具體結果如下：干擾素調節因子5抑制多肽對小鼠膠原型關節腫脹度率的影響，陽性對照 組、干擾素調節因子5抑制多肽高、中、低劑量組關節腫脹度率與模型組比較，均有極顯著 性差異（P〈〇. 01)實驗結果具有統計學意義。干擾素調節因子5抑制多肽對小鼠膠原型關 節炎足爪腫脹度率的影響，陽性對照組、干擾素調節因子5抑制多肽高、中、低劑量組足爪 腫脹度率與模型組比較，均有極顯著性差異（P〈〇. 01)，實驗結果具有統計學意義。多肽對 膠原型關節炎小鼠關節評分的影響，多肽低、中、高劑量組四肢評分顯著低于模型對照組（P < 0. 01)，與模型對照組比較極顯著性差異，實驗結果具有統計學意義。
[0015] 表1干擾素調節因子5抑制多肽對膠原型關節炎的影響（means土SD)
[0018] *Ρ〈0· 05 ;林P〈0. 01 (和模型組比較）
[0019] 結論：干擾素調節因子5抑制多肽對小鼠膠原型關節炎具有治療作用。
[0020] 實施例2
[0021] 干擾素調節因子5抑制多肽對佐劑型大鼠關節炎動物模型體內免疫保護作用
[0022] 構建佐劑型大鼠關節炎動物模型，研究多肽對佐劑性關節炎（Ad juvant arthritis，AA)大鼠的治療作用。采用大鼠作為受試動物，SPF級SD大鼠60只（由上海西 普爾-必凱實驗動物有限公司（Sino-British SIPPR Lab. Animal Ltd)提供，動物生產許 可證號碼：SCXK (滬）2008-0016)，雄性，體重為140g-160g，隨機分成6組，分別是正常對照 組，模型對照組，干擾素調節因子5抑制多肽低中高3個劑量組（0. 5, l，2mg/kg)和陽性藥 對照組（甲氨蝶呤lmg/kg)。除正常組外，第0天各實驗組建立大鼠 AA模型，方法是在大鼠 的左側后足足跎注射含滅活的結核分枝桿菌（H37RA，10mg/ml)完全弗氏佐劑0.1 ml造成大 鼠佐劑性關節炎模型。造模第10天起皮下注射給藥：多肽的3個劑量組（0. 5, l，2mg/kg): 每日兩次，連續7天；陽性藥對照組（甲氨蝶呤lmg/kg):每3天一次，連續3次；正常對照 組和模型對照組（生理鹽水）：連續7天。造模后第18天，關節評分、分別檢測左右后足足 踝直徑來觀察藥物對大鼠佐劑型關節炎的影響。
[0023] 多肽在佐劑性大鼠關節炎動物模型體內免疫保護作用，具體結果如下：干擾素 調節因子5抑制多肽對大鼠原發性關節炎足爪腫脹度率的影響，大鼠陽性對照組、干擾 素調節因子5抑制多肽的低、中、高劑量組左后足踝直徑與模型組比較，有極顯著性差異 (P〈0. 01);干擾素調節因子5抑制多肽對大鼠繼發性關節炎右后足踝直徑的影響，大鼠陽 性對照組、干擾素調節因子5抑制多肽低、中、高劑量組右后足踝直徑與模型組比較，有顯 著性差異（P〈〇. 05)。干擾素調節因子5抑制多肽對佐劑型關節炎大鼠關節評分的影響，多 肽低、中、高劑量組四肢評分顯著低于模型對照組（P < 〇. 05)，與模型對照組比較差異均有 統計學意義。
[0024] 表2干擾素調節因子5抑制多肽對佐劑型關節炎的影響（means土SD)
[0026] *Ρ〈0· 05 ;#P〈0. 01 (和模型組比較）
[0027] 結論：干擾素調節因子5抑制多肽對AA大鼠關節炎具有治療作用。
【主權項】
1. 干擾素調節因子5抑制多肽，其特征在于其序列為TCMIPRDTHDGAFYRA。2. 權利要求1的抑制多肽在制備治療和預防類風濕關節炎疾病藥物中的應用。3. 根據權利要求1-2任一所述抑制多肽的用途，其特征在于：可通過多種給藥方式治 療和預防類風濕關節炎疾病，包括皮下或肌肉注射，靜脈注射或者靜脈滴注，口服給藥如藥 丸、膠囊等，鼻噴劑等。
【專利摘要】本發明涉及藥物領域，具體涉及具有抑制干擾素調節因子5，其序列為TCMIPRDTHDGAFYRA是全新的序列，能預防和治療類風濕性關節炎的多肽，可通過多種給藥方式治療和預防類風濕關節炎疾病，包括皮下或肌肉注射，靜脈注射或者靜脈滴注，口服給藥如藥丸、膠囊等，鼻噴劑等。本發明的有益效果是可用于治療類風濕性關節炎，具有潛在的新藥開發價值。
【IPC分類】A61P29/00, C07K7/08, A61K38/10, A61P19/02
【公開號】CN105061565
【申請號】CN201510551657
【發明人】羅瑞雪
【申請人】蘇州普羅達生物科技有限公司
【公開日】2015年11月18日
【申請日】2015年9月1日