專利名稱：因子11表達的調節的制作方法
技術領域：
本發明的實施例提供了降低動物中因子11的mRNA和蛋白的表達的方法、化合物以及組合物。這些方法、化合物以及組合物可用于治療、防止或改善血栓栓塞性并發癥。
背景技術：
循環系統需要防止失血的機制，以及對抗不當血管內栓塞的機制。通常，凝血包括以可溶性纖維蛋白原轉化為不溶性纖維蛋白凝膠為終點的級聯反應。級聯反應的步驟涉及非活性酶原向活性酶的轉化。然后活性酶再催化級聯反應的下一步驟。凝血級聯反應凝血級聯反應可能通過兩條支路啟動，作為初始通路的組織因子通路(也稱為 “外源性通路”)，以及接觸激活通路(也稱為“內源性通路”)。組織因子通路由細胞表面受體組織因子(TF，也被稱為因子III)啟動，后者由血管外細胞(周邊細胞、心肌細胞、平滑肌細胞和角質細胞)組成型表達，并且由血管單核細胞和內皮細胞在炎癥細胞因子或內毒素的誘導下表達(Drake et al. ,Am J Pathol 1989， 134:1087-1097)。TF是凝結因子Vila(—種絲氨酸蛋白酶)的高親和力細胞受體。缺少 TF時，VIIa具有非常低的催化活性，與TF的結合對于通過變構機制賦予VIIa功能是必要的(Drake et al.，Am J Pathol 1989，134 :1087_1097)。TF-VIIa 復合物將因子 X 激活為 Xa0 Xa再與輔因子因子Va結合為凝血酶原酶復合物，后者再將凝血酶原(也被稱為因子 II或因子2)激活為凝血酶(也被稱為因子IIa或因子2a)。凝血酶激活血小板，將纖維蛋白原轉化為纖維蛋白，通過激活因子XIII促進纖維蛋白交聯，然后在TF暴露于血管外細胞的位點形成穩定的栓塞。此外，凝血酶通過激活因子V和VIII來增強凝血級聯反應。接觸激活通路由因子XII向XIIa的活化所引起。因子XIIa將XI轉化為XIa，而 XIa將IX轉化為IXa。IXa與輔因子VIIIa結合，將X轉化為Xa。當因子Xa與因子Va結合而將凝血酶原(因子II)轉化為凝血酶(因子IIa)時，兩條通路在這一點匯合。凝血抑制。至少有三種機制控制凝血級聯反應，即活化蛋白C、抗凝血酶和組織因子通路抑制劑的作用。活化蛋白C是一種能降解輔因子Va和VIIIa的絲氨酸蛋白酶。蛋白C由凝血酶和血栓調節蛋白一起激活，行使功能需要輔酶蛋白S。抗凝血酶是一種能抑制凝血酶、Xa、 XIIa、XIa和IXa等絲氨酸蛋白酶的絲氨酸蛋白酶抑制劑(絲氨酸蛋白酶抑制劑)。組織因子通路抑制劑抑制Xa和TF-VIIa復合物的作用(Schwartz AL et al. ,Trends Cardiovasc Med. 1997 ；7 :234_239·)。
疾病血栓形成是血栓的病理學發展，當血凝塊遷移至個體的另一部分并且干擾器官功能時，栓塞出現。血栓栓塞可能導致如深靜脈血栓、肺栓塞、心肌梗塞和中風等狀況。 很明顯，血栓栓塞是發病的一個主要原因，其每年影響超過兩百萬個美國人(Adcock et al. American Journal of Clinical Pathology. 1997 ； 108 :434_49)。盡管大部分血栓形成的病例是因為例如手術、癌癥以及不動等后天的外在問題，一些病例則是因為遺傳易感性， 比如抗磷脂綜合癥和常染色體顯性遺傳，因子V Leiden (Bertina RM et al. Nature 1994 ； 369 64-67.)。治療。最常用抗凝劑華法林、肝素以及低分子量肝素(LMWH)都有顯著的缺點。華法林通常用于治療患有心房顫動的病人。藥物與包括因子II、VII、IX和X等維生素K依賴的凝結因子相互作用。抗凝劑蛋白C和S也被華法林所抑制。華法林與包括如胺碘酮等心房顫動治療藥物的其他藥物相互作用的事實使華法林的藥物治療進一步變得復雜。因為華法林的治療難以預測，為了檢測任何異常出血跡象，必須對病人小心監測。肝素通過激活對凝血酶和因子X都抑制的抗凝血酶來作用(Bjork I, Lindahl U. Mol Cell Biochem. 1982 48:161-182.)。肝素治療可能引起免疫反應，這使血管中血小板聚集而導致血栓形成。這種副作用被稱為肝素誘導的血小板減少癥(HIT)，需要對病人監測。肝素的延長治療也可能導致骨質疏松癥。LMWH也可以抑制因子2，但程度弱于未分級肝素(UFH)。LMWH與HIT發展有關。因此，現有的抗凝血藥缺少可預測性和特異性，所以需要小心監測病人以防止如出血并發癥等不良副作用。目前沒有僅針對內源性或外源性通路的抗凝劑。

發明內容
此處提供了調節因子11的mRNA和蛋白的表達的方法、化合物以及組合物。在一些實施例中，因子11特異性抑制劑調節因子11的mRNA和蛋白的表達。在一些實施例中， 因子U特異性抑制劑是核酸、蛋白或小分子。在一些實施例中，調節作用在細胞或組織中發生。在一些實施例中，細胞或組織在動物中。在一些實施例中，所述動物是人。在一些實施例中，因子11的mRNA水平被降低。 在一些實施例中，因子11的蛋白水平被降低。這種降低可以時間依賴的方式或劑量依賴的方式發生。本申請也提供了用于防止、治療和改善疾病、紊亂和狀況的方法、化合物以及組合物。在一些實施例中，這些疾病、紊亂和狀況是血栓栓塞性并發癥。這種血栓栓塞性并發癥包括各類血栓形成、栓塞和血栓栓塞。在一些實施例中，這些血栓栓塞性并發癥包括深靜脈血栓形成、肺栓塞、心肌梗塞和中風。這些疾病、紊亂和狀況通常具有一個或多個危險因素、原因或結果。血栓栓塞性并發癥發展的某些危險因素和原因包括不動、手術(尤其是矯形手術)、惡性腫瘤、懷孕、高齡、使用口服避孕藥、心房顫動、先前的血栓栓塞性并發癥、慢性炎癥疾病和遺傳或后天的凝血紊亂。血栓栓塞性并發癥發展相關的某些結果包括通過受影響血管的血流降低、組織壞死以及死亡。在一些實施例中，治療方法包括將因子11特異性抑制劑給藥于需要的個體。發明的詳細說明在此聲明，前面的一般說明和后面的詳細說明都僅僅是示例性和說明性的，不限制本發明，這是可以理解的。此處，單數的使用包括復數，除非另有特別指明。如此處所用， 使用“或”意味著“和/或”，除非另有特別指明。而且，使用術語“包括”以及如“包括”和 “被包括”等其他形式，不是限制性的。如“元素”或“組分”等術語涵蓋包括一個單元的元素和組分，也涵蓋包括一個以上單元的元素和組分，除非另有特別指明。此處所用的分段標題僅用于組織的目的，不應被解釋為限制所描述的主題。本申請中引用的所有文件或文件部分，包括但不限于專利、專利申請、文章、書籍和論文，其在此被套論的部分被作為參考，并且其全部內容被并入本申請。定義除非提供特別定義，此處描述的分析化學、合成有機化學和醫藥化學的相關術語以及其流程和技術是那些本領域所熟知和通用的。在化學合成和化學分析中可使用標準技術。本公開中準許引用的所有專利、申請、已發表的申請和其他出版物、從如國家生物技術信息中心(NCBI)等數據庫中獲得的GENBANK登錄號和相關序列信息以及其他數據，其在此被套論的部分被作為參考，并且這些部分的全部內容被并入本申請。除非另行指出，下列術語具有下列含義“2’ -0-甲氧乙基”(也表示為2’ -MOE和2’ -O(CH2)2-OCH3)指的是呋喃 環的2’位置的0-甲氧-乙基修飾。2’ -0-甲氧乙基修飾的糖是修飾糖。“2’ -0-甲氧乙基核苷酸”是指包含2’ -0-甲氧乙基修飾糖基的核苷酸。“5-甲基胞嘧啶”是指5’位置連有甲基修飾的胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶是修飾的核
苷堿基。“活性藥劑”是指當給個體給藥時能夠提供治療益處的藥物組合物中的物質。例如，在一些實施例中，針對因子11的反義寡核苷酸是一種活性藥劑。“活性靶區”或“靶區”是指一個或多個活性反義化合物針對的區域。“活性反義化合物”是指能降低目標核酸水平或蛋白質水平的反義化合物。“隨附給藥”是指兩種試劑以它們的藥理學效果在病人體內同時都顯現的任何方式共同給藥。隨附給藥不需要在單一藥物組合物中、相同劑型中或以相同給藥途徑將兩種試劑給藥。兩種試劑的效果不需要同時顯現。效果只需要在一段時間重疊，不需要共同延伸。“給藥”是指將一種藥劑提供給個體，包括但不限于醫學專業人員的給藥以及自我給藥。“改善”是指與疾病、紊亂或狀況關聯的至少一種指標、跡象或癥狀的減輕。指標的嚴重程度可以通過本領域普通技術人員已知的主觀或客觀的測定來確定。“動物”是指人或非人動物，包括但不限于小鼠、大鼠、兔、狗、貓、豬和非人靈長類，包括但不限于猴和黑猩猩。“解毒化合物”指的是能降低任何反義介導活性的強度或持續時間的化合物。“解 毒寡核苷酸”是指包括與反義化合物互補且能與之雜交的寡核苷酸的解毒化合物。“解毒蛋白，，是指包括肽的解毒化合物。“抗體”指的是以通過某種方式與抗原特異性反應為特征的分子，其中抗體和抗原各自根據對方來定義。抗體可能是指完整的抗體分子或其中任何片段或區域，如重鏈、輕鏈、Fab區段以及Fc區段。“反義活性”是指反義化合物與目標核酸相雜交所引起的任何可檢測或可測量的活性。在一些實施例中，反義活性是目標核酸或該目標核酸編碼的蛋白質的量或表達的減少。“反義化合物”是指能夠通過氫鍵與目標核酸相雜交的寡聚化合物。“反義抑制”是指在與目標核酸互補的反義化合物存在時，與沒有反義化合物時的目標核酸水平或目標蛋白水平相比，目標核酸水平或目標蛋白水平降低。“反義寡核苷酸”是指具有能與目標核酸的相應區域或片段雜交的核苷堿基序列的單鏈寡核苷酸。“雙環糖”是指通過兩個非偕式環原子橋接而修飾的呋喃環。雙環糖是一種修飾的糖。“雙環核酸”或“BNA”指的是一種核苷或核苷酸，其中核苷或核苷酸的呋喃糖部分包括一個連接呋喃糖環上兩個碳原子的橋鍵，從而形成一個雙環系統。“帽結構”或“末端帽部分”是指包含在反義化合物任一末端的化學修飾。“化學獨特區域”指的是反義化合物中在某些方面在化學上不同于相同反義化合物的另一區域的區域。例如，具有2’ -0-甲氧乙基核苷酸的區域在化學上不同于含有無 2’ -0-甲氧乙基修飾的核苷酸的區域。“嵌合型反義化合物”是指具有至少兩個化學獨特區域的反義化合物。“共同給藥”是指將兩種或多種藥劑給藥于一個個體。兩種或多種藥劑可以在單一藥物組合物中，也可能在分開的藥物組合物中。兩種或多種藥劑中的每一種可以通過相同或不同的給藥途徑給藥。共同給藥涵蓋平行或順序給藥。“凝結因子”是指凝血級聯反應中的因子I、II、III、IV、V、VII、VIII、IX、X、XI、 XII、XIII或TAFI中的任一個。“凝結因子核酸”是指編碼凝結因子的任意核酸。例如，在一些實施例中，凝結因子核酸非限制地包括編碼凝結因子的DNA序列(包括含內含子和外顯子的基因組DNA)、由編碼凝結因子的DNA轉錄的RNA序列以及編碼凝結因子的mRNA序列。“凝結因子mRNA”是指編碼凝結因子蛋白的mRNA。“互補性”是指第一核酸與第二核酸的核苷堿基間的配對能力。“相鄰核苷堿基”是指彼此直接相鄰的核苷堿基。“稀釋劑”是指組合物中無藥理學活性，但藥學必需或需要的成分。例如，在注射的組合物中的稀釋劑可能是液體，比如鹽溶液。“劑量”是指在單一給藥中或規定時間期間內提供的藥劑的規定量。在一些實施例中，一個劑量可能通過一份、兩份或多份丸藥、片劑或注射劑來給藥。例如，在一些需要皮下給藥的實施例中，所需劑量需要通過一次注射不容易容納的體積，因此，可以使用兩次或多次注射以達到所需劑量。在一些實施例中，藥劑是通過在延長的時間期間或連續輸液來給藥的。劑量可以按小時、日、周或月來規定。 “有效量”是指在需要藥劑的個體中足以實現所需生理學結果的活性藥劑量。根據待處理個體的健康與生理狀況、處理個體的分類群、組合物的劑型、個體醫療狀況的評估以及其他有關因素，個體間的有效量可能有變化。“因子11核酸”、“因子XI核酸”、“F 11核酸”或“F XI核酸”是指編碼因子11的任意核酸。例如，在一些實施例中，因子11核酸包括編碼因子11的DNA序列、由編碼因子 11的DNA轉錄的RNA序列(包括含內含子和外顯子的基因組DNA)以及編碼因子11 WmRNA 序列。“因子1 ImRNA，，是指編碼因子11蛋白的mRNA。“因子11特異性抑制劑”指的是能在分子水平上特異性抑制因子11的mRNA和/ 或因子11蛋白的表達的任何試劑。例如，因子11特異性抑制劑包括能夠抑制因子11的 mRNA和/或因子11蛋白的表達的核酸(包括反義化合物)、肽、抗體、小分子以及其他試劑。 在一些實施例中，通過特異性調節因子11的mRNA表達和/或因子11蛋白的表達，因子11 特異性抑制劑可能影響凝血級聯反應中的其他組分，包括下游組分。類似地，在一些實施例中，因子11特異性抑制劑可能影響動物中其他分子過程。“因子11特異性抑制劑解毒劑”是指能降低因子11特異性抑制劑效果的化合物。 在一些實施例中，因子11特異性抑制劑解毒劑挑選自因子11肽；因子11解毒劑寡核苷酸，包括與因子11反義化合物互補的因子11解毒化合物；以及影響內源性或外源性凝結通路的任何化合物或蛋白。“完全互補”或“100%互補”是指第一核酸的每個核苷堿基在第二核酸中具有一個互補的核苷堿基。在一些實施例中，第一核酸是反義化合物，目標核酸是第二核酸。“Gapmer”是指一種嵌合型反義化合物，其中，具有多個支持RNase H裂解的核苷的內部區段位于具有一個或多個核苷的外部區段之間，其中，組成內部區段的核苷化學上不同于組成外部區段的核苷。內部區段可被稱為“間隙區段”，外部區段可被稱為“側翼區段”。“間隙擴大的”是指在具有一到六個核苷的5’和3’側翼區段之間并且與其直接相鄰處具有12或更多個連續的2’ -脫氧核糖核苷的嵌合型反義化合物。“雜交，，是指互補的核酸分子的退火。在一些實施例中，互補的核酸分子包括反義化合物和目標核酸。“找出具有血栓栓塞性并發癥風險的動物”是指找出已經診斷具有血栓栓塞性并發癥的動物，或找出具有發展血栓栓塞性并發癥傾向性的動物。具有發展血栓栓塞性并發癥傾向性的個體包括那些具有一種或多種血栓栓塞性并發癥危險因素的個體，這些因素包括不動、手術(尤其是矯形手術)、惡性腫瘤、懷孕、高齡、使用口服避孕藥和遺傳或后天的凝血紊亂。這種識別可能通過包括評價個體病史和標準的臨床測試或評估的任何方法來完成。“直接相鄰”是指在直接相鄰的元素之間沒有任何干擾元素。“個體”是指被挑選用于處理或治療的人或非人動物。“核苷內連接”指的是核苷間的化學連接。“連接的核苷”是指連接在一起的相鄰核苷。
“錯配”或“非互補核苷堿基”指的是當第一核酸的核苷堿基不能與第二或目標核酸的相應核苷堿基配對時的情形。“修飾的核苷內連接”指的是天然存在的核苷內連接(也就是磷酸二酯鍵核苷內鍵)的替換或任意改變。“修飾核苷堿基”指的是除了腺嘌呤、胞嘧啶、鳥嘌呤、胸腺嘧啶或尿嘧啶之外的任何核苷堿基。“未修飾的核苷堿基”是指嘌呤堿基腺嘌呤(A)和鳥嘌呤(G)，以及嘧啶堿基胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)和尿嘧啶(U)。
“修飾核苷酸”是指獨立具有修飾糖基、修飾核苷內連接或修飾核苷堿基的核苷酸。“修飾核苷”是指獨立具有修飾糖基或修飾核苷堿基的核苷。“修飾寡核苷酸”是指包含修飾核苷內連接、修飾糖或修飾核苷堿基的寡核苷酸。“修飾糖”指的是從天然糖的替換或改變。“結構域”是指反義化合物中化學獨特區域的模式。“天然存在的核苷內連接”是指3'至5'磷酸二酯鍵連接。“天然糖基”是指在DNA(2’ -H)或RNA(2’ -OH)中發現的糖。“核酸”指的是由單體核苷酸組成的分子。核酸包括核糖核酸(RNA)、脫氧核糖核酸(DNA)、單鏈核酸、雙鏈核酸、小干擾核糖核酸(siRNA)以及微RNA(miRNA)。“核苷堿基”是指能與另一核酸的堿基配對的雜環基團。“核苷堿基序列”是指不依賴于任何糖、連接或核苷堿基修飾的連續核苷堿基的順序。“核苷”是指連接于糖的核苷堿基。“模擬核苷”包括用于替代寡聚化合物的一個或多個位點上的糖或糖和堿基且未必是連接的那些結構，例如具有嗎啉基、環己烯基、環己基、四氫吡喃基、如非呋喃糖單元的雙環或三環模擬糖的模擬核苷。模擬核苷包括用于替代寡聚化合物的一個或多個位點上的核苷和連接的那些結構，例如肽核酸或嗎啉(通過-N(H)-C( = 0)-0-或其他非磷酸二酯鍵連接而連接的嗎啉)。糖替代物與稍廣義術語模擬核苷有重疊，但僅僅傾向于用于表示糖單元(呋喃糖環)的替代。此處提供的四氫吡喃環是糖替代物例子的展示，其中，呋喃糖基團被四氫吡喃環系統所替代。“核苷酸”是指具有與核苷的糖部分共價連接的磷酸基團的核苷。“寡聚化合物”或“寡聚物”是指能與核酸分子的至少一個區段雜交的連接的單體亞單位的聚合物。“寡核苷酸”是連接核苷的聚合物，其中，這些核苷的每一可以是修飾或未修飾，并且彼此獨立的。“腸胃外給藥”是指通過注射或輸液給藥。腸胃外給藥包括皮下給藥、靜脈給藥、肌肉給藥、動脈給藥、腹腔內給藥或顱內給藥，比如鞘內給藥或腦室內給藥。“肽”是指以酰胺鍵連接至少兩個氨基酸形成的分子。肽指多肽和蛋白質。“藥物組合物”是指適于個體給藥的物質的混合物。例如，藥物組合物可以包含一種或多種活性藥劑和無菌水溶液。“藥用可接受鹽”是指生理學和藥學可接受的反義化合物的鹽，也就是保留本體寡核苷酸的需要生物活性，但不另外賦予不需要的毒性效果的鹽。 “磷硫酰連接”是指核苷間的連接，其中，一個非橋接氧原子被硫原子替代而修飾磷酸二酯鍵。磷硫酰連接(P = S)是修飾的核苷內連接。“部分”是指核酸中確定數量的連續(也就是連接的)核苷堿基。在一些實施例中，部分是指目標核酸中確定數量的連續核苷堿基。在一些實施例中，部分是反義化合物中確定數量的連續核苷堿基。“防止”指的是延遲或預防疾病、紊亂或狀況的發生或發展幾分鐘到無限的時間期間。防止也指降低疾病、紊亂或狀況發展的風險。“前體藥物”是指以在身體或細胞內由其中的內源酶或其他化學品或條件的作用而轉化為活性形式的非活化形式制備的治療劑。“副作用”是指由治療所引起的除了預期效果之外的生理反應。在一些實施例中， 副作用包括注射部位反應、肝功能測試異常、腎功能異常、肝臟毒性、腎臟毒性、中樞神經系統異常、肌肉疾病以及不適。例如，血清中提高的轉氨酶水平可能表明肝臟毒性或肝功能異常。例如，增高的膽紅素可能表明肝臟毒性或肝功能異常。“單鏈寡核苷酸”是指沒有與互補鏈雜交的寡核苷酸。“可特異性雜交的”指的是反義化合物在反義寡核苷酸和目標核酸間具有足以誘導期望效果的互補度，而在期望特異性結合的條件下，也就是在體內化驗和治療處理時的生理條件下，表現出對非目標核酸最低影響或無影響。“靶向”或“被靶向”是指設計和選擇與目標核酸特異性雜交并誘導預期效果的反義化合物的過程。“目標核酸”、“目標RNA”和“目標RNA轉錄本”都指的是能被反義化合物靶向的核酸。“目標區段”是指反義化合物靶向的目標核酸的核苷酸的序列。“5’靶向位點”指的是目標區段的最5’端核苷酸。“3’靶向位點”指的是目標區段的最3’端的核苷酸。“治療有效量”是指為個體提供治療益處的藥劑的量。“血栓栓塞性并發癥”是指涉及血栓引起的栓塞的任何疾病、紊亂或狀況。這些疾病、紊亂或狀況的示例包括各類血栓形成、栓塞和血栓栓塞。在一些實施例中，這些疾病、紊亂或狀況包括深靜脈血栓形成、肺栓塞、心肌梗塞和中風。“處理”指的是將藥物組合物進行給藥以影響疾病、紊亂或狀況的改變或改善。“未修飾核苷酸”是指由天然存在的核苷堿基、糖基和核苷內連接所組成的核苷酸。在一些實施例中，未修飾核苷酸是RNA核苷酸(也就是β -D-核糖核苷)或DNA核苷酸(也就是β -D-脫氧核糖核苷)。一些實施例本發明的實施例提供了降低因子11的mRNA和蛋白的表達的方法、化合物以及組合物。本發明的實施例提供了用于治療、防止或改善需要治療的個體中與因子11相關的疾病、紊亂和狀況的方法、化合物以及組合物。也構思了用于治療、防止或改善與因子11 相關的疾病、紊亂和狀況的藥劑制備的方法和化合物。與因子11相關的疾病、紊亂和狀況包括血栓栓塞性并發癥，如血栓形成、栓塞、血栓栓塞、深靜脈血栓形成、肺栓塞、心肌梗塞和中風。本發明的實施例提供了用于治療、防止或改善因子11相關疾病的因子11特異性抑制劑。在一些實施例中，因子11特異性抑制劑是能夠抑制因子11的mRNA和/或因子11 蛋白的表達的核酸(包括反義化合物)、肽、抗體、小分子以及其他試劑。在本發明的一些實施例中，因子11特異性抑制劑是肽或蛋白，比如但不限于J Clin Invest 1982，69 :844_852中所述的alpha 1蛋白酶抑制劑、抗凝血酶III、C1抑制劑和alpha 2纖溶酶抑制劑；Thromb Res 1987，48 145-151中所述的alpha 1抗胰蛋白酶 (alpha 1AT) ；USPPN 2008/021998 和 Blood 1998，92 :4198_206 中所述的因子 11 肽抑制劑；Thromb Res 2001，104 :451_465 中所述的MAP4-RGKWC ;Proc Natl Acad Sci 2004，101 3939-44 中所述的 beta 2 GPI ；Eur J Biochem 1999，262 :915_923 中所述的香菇蛋白酶抑制劑J Biol Chem 2004，279 :29485_29492中所述的連接蛋白酶2/beta淀粉樣蛋白前體 Kunitz 結構域抑制劑(APPI)和抗凝血酶(AT)；以及 J Biol Chem 2005，280 :23523_30 中所述的抑肽酶。在本發明的一些實施例中，因子11特異性抑制劑是抗體，比如，但不限于Blood 1988,72 1748-54 中所述的 Winston-Salem(IgG3 kappa)禾Π Baltimore (IgGl kappa)； J Biol Chem 1985，260 :10714-719 中所述的 5F4、3C1 和 IFl ；Throm Haemost 1990,63 417-23 中所述的單克隆抗體；J Thromb Haem 2006，4 :1496_1501 中所述的 XI-5108 ； Thromb Res 1986,42 :225_34中所述的單克隆抗體4_1 ；以及USPN 6，566，140中例子19中所述的abcixmab抗體。在本發明的一些實施例中，因子11特異性抑制劑是小分子，比如，但不限于二丙烯基氟磷酸鹽(DFP) ；USPPN 2004/0180855中例子1-7中所述的小分子抑制劑；以及J Biol Chem 2005,280 :23523_30中所述的對氨基芐脒(pAB)。本發明的實施例提供了因子11特異性抑制劑，如此處所述，可用于治療、防止或改善血栓栓塞性并發癥，如血栓形成、栓塞、血栓栓塞、深靜脈血栓形成、肺栓塞、心肌梗塞和中風。本發明的實施例提供了如此處所述的因子11特異性抑制劑在用于治療、防止或改善血栓栓塞性并發癥，如血栓形成、栓塞、血栓栓塞、深靜脈血栓形成、肺栓塞、心肌梗塞和中風的藥劑生產中的使用。本發明的實施例提供了此處所述的因子11特異性抑制劑與此處所述的其他試劑或治療方法相結合的療法中的應用，這些療法用于治療、防止或改善此處所述的血栓栓塞性并發癥。試劑或治療方法可以共同給藥或隨附給藥。本發明的實施例提供了此處所述的因子11特異性抑制劑在藥劑生產中的 應用， 該藥劑與此處所述的其他試劑或治療方法相結合的療法用于治療、防止或改善此處所述的血栓栓塞性并發癥的藥劑生產。試劑或治療方法可以共同給藥或隨附給藥。本發明的實施例提供了此處所述的因子11特異性抑制劑在用于治療、防止或改善此處所述的病人體內血栓栓塞性并發癥的藥劑生產中的應用，該病人后續被給藥其他試劑或療法。本發明的實施例提供了用于治療、防止或改善此處所述的血栓栓塞性并發癥的試劑盒，其中試劑盒包括
(i)此處所述的因子11特異性抑制劑；以及作為選擇(ii)此處所述的其他試劑或治療方法。本發明的試劑盒可以進一步包括用試劑盒以此處所述的組合治療方法來治療、防止或改善此處所述的血栓栓塞性并發癥的說明書。本發明的實施例提供了靶向因子11核酸的反義化合物。在一些實施例中，因子11 核酸是下列發布序列中的任一個GENBANK登錄號NM_000128 :3(以SEQ ID NO :1并入本申請)，GENBANK 登錄號 NT_022792. 17，19598000 至 19624000 缺失(以 SEQ ID NO 2 并入本申請)，GENBANK 登錄號 NM_028066. 1(以 SEQ ID NO :6 并入本申請)，外顯子 1-15，GENBANK 登錄號 NW_001118167. 1 (以 SEQ ID NO 274 并入本申請)。在一些實施例中，本發明提供了包含修飾寡核苷酸的化合物。在一些實施例中，本發明的化合物包括由12至30個連接核苷組成的修飾寡核苷酸。在一些實施例中，本發明的化合物可以包括含有與SEQ ID NO=I的等長部分至少 80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互補的核苷堿基序列的修飾寡核苷酸。在一些實施例中，本發明的化合物可以包括含有與SEQ ID NO 1的等長部分至少100%互補的核苷堿基序列的修飾寡核苷酸。在一些實施例中，本發明提供了包括含有與SEQ ID NO 1的第656位至第676位核苷堿基的至少部分互補的核苷堿基序列的修飾寡核苷酸的化合物。所述修飾寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20個與SEQ ID NO :1的第656 位至第676位核苷堿基等長部分互補的連續核苷堿基。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID NO 1的相同長度部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、 至少98%或至少99%互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID NO=I 的相同長度部分100%互補的核苷堿基序列。當在H印G2細胞中，用RT-PCR分析方法測定， 所述修飾寡核苷酸可以實現人mRNA水平至少80%的抑制(例如，如例3所述)。在一些實施例中，本發明提供了包括修飾寡核苷酸的化合物，該修飾寡核苷酸含有與SEQ ID NO :1的第665位至第687位核苷堿基的至少部分互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20個與SEQ ID NO 1的第665位至第687位核苷堿基等長部分互補的連續核苷堿基。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID NO :1的等長部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、 至少97%、至少98%或至少99%互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID NO 1的等長部分100%互補的核苷堿基序列。當在!fepG2細胞中，用RT-PCR分析方法測定，所述修飾寡核苷酸可以實現人mRNA水平至少50%的抑制(例如，如例3所述)。在一些實施例中，本發明提供了包括修飾寡核苷酸的化合物，該修飾寡核苷酸包括與SEQ ID NO :1的第675位至第704位核苷堿基的至少部分互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20個與SEQ ID NO 1的第675位至第704位核苷堿基等長部分互補的連續核苷堿基。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID NO :1的等長部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、 至少97%、至少98%或至少99%互補的核苷堿基序列。所述 修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID NO 1的等長部分100%互補的核苷堿基序列。當在!fepG2細胞中，用RT-PCR分析方法測定，所述修飾寡核苷酸可以實現人mRNA水平至少50%的抑制(例如，如例3所述)。
在一些實施例中，本發明提供了包括修飾寡核苷酸的化合物，該修飾寡核苷酸包括與SEQ ID NO :1的第677位至第704位核苷堿基至少部分互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20個與SEQ ID NO 1的第677位至第704位核苷堿基等長部分互補的連續核苷堿基。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID NO :1的等長部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、 至少97%、至少98%或至少99%互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID NO 1的等長部分100%互補的核苷堿基序列。當在!fepG2細胞中，用RT-PCR分析方法測定，所述修飾寡核苷酸可以實現人mRNA水平至少60%的抑制(例如，如例3所述)。

在一些實施例中，本發明提供了包括修飾寡核苷酸的化合物，該修飾寡核苷酸包括與SEQ ID NO 1的第678位至第697位核苷堿基的至少部分互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20個與SEQ ID NO 1的第678位至第697位核苷堿基等長部分互補的連續核苷堿基。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID NO :1的等長部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、 至少97%、至少98%或至少99%互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID NO 1的等長部分100%互補的核苷堿基序列。當在!fepG2細胞中，用RT-PCR分析方法測定，所述修飾寡核苷酸可以實現人mRNA水平至少70%的抑制(例如，如例3所述)。在一些實施例中，本發明提供了包括修飾寡核苷酸的化合物，該修飾寡核苷酸包括與SEQ ID NO :1的第680位至第703位核苷堿基的至少部分互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20個與SEQ ID NO 1的第680位至第703位核苷堿基等長部分互補的連續核苷堿基。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID N0:1的等長部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少 96%、至少97%、至少98%或至少99%互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID NO 1的等長部分100%互補的核苷堿基序列。當在H印G2細胞中，用RT-PCR分析方法測定，所述修飾寡核苷酸可以實現人mRNA水平至少80%的抑制(例如，如例3和例 30所述)。在一些實施例中，本發明提供了包括修飾寡核苷酸的化合物，該修飾寡核苷酸包括與SEQ ID NO :1的第683位至第702位核苷堿基的至少部分互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20個與SEQ ID NO 1的第683位至第702位核苷堿基等長部分互補的連續核苷堿基。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID NO :1的等長部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、 至少97%、至少98%或至少99%互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID NO 1的等長部分100%互補的核苷堿基序列。當在!fepG2細胞中，用RT-PCR分析方法測定，所述修飾寡核苷酸可以實現人mRNA水平至少90%的抑制(例如，如例3所述)。在一些實施例中，本發明提供了包括修飾寡核苷酸的化合物，該修飾寡核苷酸包括與SEQ ID NO :1的第738位至第759位核苷堿基的至少部分互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20個與SEQ ID NO 1的第738位至第759位核苷堿基等長部分互補的連續核苷堿基。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID N0:1的等長部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少 96%、至少97%、至少98%或至少99%互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID NO=I的等長部分100%互補的核苷堿基序列。當在!fepG2細胞中，用RT-PCR分析方法測定，所述修飾寡核苷酸可以實現人mRNA水平至少80%的抑制(例如，如例3和例 30所述)。在一些實施例中，本發明提供了包括修飾寡核苷酸的化合物，該修飾寡核苷酸包括與SEQ ID NO :1的第738位至第760位核苷堿基的至少部分互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20個與SEQ ID NO 1的第738位至第760位核苷堿基的等長部分互補的連續核苷堿基。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID N0:1的等長部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID NO :1的等長部分100%互補的核苷堿基序列。當在H印G2細胞中，用RT-PCR 分析方法測定，所述修飾寡核苷酸可以實現人mRNA水平至少60%的抑制(例如，如例3所述)O 在一些實施例中，本發明提供了包括修飾寡核苷酸的化合物，該修飾寡核苷酸包括與SEQ ID NO :1的第738位至第762位核苷堿基的至少部分互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20個與SEQ ID NO 1的第738位至第762位核苷堿基等長部分互補的連續核苷堿基。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID NO :1的等長部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、 至少97%、至少98%或至少99%互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID NO 1的等長部分100%互補的核苷堿基序列。當在!fepG2細胞中，用RT-PCR分析方法測定，所述修飾寡核苷酸可以實現人mRNA水平至少45%的抑制(例如，如例3所述)。在一些實施例中，本發明提供了包括修飾寡核苷酸的化合物，該修飾寡核苷酸包括與SEQ ID NO 1的第1018位至第1042位核苷堿基的至少部分互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20個與SEQ ID NO 1的第1018位至第1042位核苷堿基等長部分互補的連續核苷堿基。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID N0:1的等長部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID NO :1的等長部分100%互補的核苷堿基序列。當在H印G2細胞中，用RT-PCR 分析方法測定，所述修飾寡核苷酸可以實現人mRNA水平至少80%的抑制(例如，如例3所述)O在一些實施例中，本發明提供了包括修飾寡核苷酸的化合物，該修飾寡核苷酸包括與SEQ ID NO 1的第1062位至第1089位核苷堿基的至少部分互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20個與SEQ ID NO 1的第1062位至第1089位核苷堿基等長部分互補的連續核苷堿基。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID N0:1的等長部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID NO :1的等長部分100%互補的核苷堿基序列。當在H印G2細胞中，用RT-PCR 分析方法測定，所述修飾寡核苷酸可以實現人mRNA水平至少70%的抑制(例如，如例3所述)O在一些實施例中，本發明提供了包括修飾寡核苷酸的化合物，該修飾寡核苷酸包括與SEQ ID NO=I的第1062位至第1090位核苷堿基的至少部分互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20個與SEQ ID NO 1的第1062位至第1090位核苷堿基等長部分互補的連續核苷堿基。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID NO :1的等長部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID NO :1的等長部分100%互補的核苷堿基序列。當在H印G2細胞中，用RT-PCR 分析方法測定，所述修飾寡核苷酸可以實現人mRNA水平至少60%的抑制(例如，如例3所述)在一些實施例中，本發明提供了包括修飾寡核苷酸的化合物，該修飾寡核苷酸包括與SEQ ID NO 1的第1062位至第1091位核苷堿基的至少部分互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20個與SEQ ID NO 1的第1062位至第1091位核苷堿基等長部分互補的連續核苷堿基。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID NO :1的等長部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID NO :1的等長部分100%互補的核苷堿基序列。當在H印G2細胞中，用RT-PCR 分析方法測定，所述修飾寡核苷酸可以實現人mRNA水平至少20%的抑制(例如，如例3所述)O在一些實施例中，本發明提供了包括修飾寡核苷酸的化合物，該修飾寡核苷酸包括與SEQ ID NO 1的第1275位至第1301位核苷堿基的至少部分互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20個與SEQ ID NO 1的第1062位至第1091位核苷堿基等長部分互補的連續核苷堿基。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID N0:1的等長部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID NO 1的等長部分100%互補的核苷堿基序列。當在!fepG2細胞中，用RT-PCR 分析方法測定，所述修飾寡核苷酸可以實現人mRNA水平至少80%的抑制(例如，如例3所述)O在一些實施例中，本發明提供了包括修飾寡核苷酸的化合物，該修飾寡核苷酸包括與SEQ ID NO 1的第1276位至第1301位核苷堿基的至少部分互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可能包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20個與SEQ ID NO 1的第1062位至第1091位核苷堿基等長部分互補的連續核苷堿基。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID NO :1的等長部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少 96%、至少97%、至少98%或至少99%互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID NO 1的等長部分100%互補的核苷堿基序列。當在!fepG2細胞中，用RT-PCR分析方法測定，所述修飾寡核苷酸可以實現人mRNA水平至少80 %的抑制(例如，如例30所述)O在一些實施例中，本發明提供了包括修飾寡核苷酸的化合物，該修飾寡核苷酸包括與SEQ ID NO 1的第1284位至第1308位核苷堿基的至少部分互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20個與SEQ ID NO 1的第1062位至第1091位核苷堿基等長部分互補的連續核苷堿基。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID N0:1的等長部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID NO :1的等長部分100%互補的核苷堿基序列。當在H印G2細胞中，用RT-PCR 分析方法測定，所述修飾寡核苷酸可以實現人mRNA水平至少80%的抑制(例如，如例3所述)O 在一些實施例中，本發明提供了包括修飾寡核苷酸的化合物，該修飾寡核苷酸包括與SEQ ID NO 1的第1291位至第1317位核苷堿基的至少部分互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20個與SEQ ID NO 1的第1062位至第1091位核苷堿基等長部分互補的連續核苷堿基。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID N0:1的等長部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID NO :1的等長部分100%互補的核苷堿基序列。當在H印G2細胞中，用RT-PCR 分析方法測定，所述修飾寡核苷酸可以實現人mRNA水平至少80%的抑制(例如，如例3所述)O在一些實施例中，本發明提供了包括修飾寡核苷酸的化合物，該修飾寡核苷酸包括與SEQ ID NO 1的第1275位至第1318位核苷堿基的至少部分互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20與SEQ ID NO 1的第1275位至第1318位核苷堿基等長部分互補的連續核苷堿基。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID N0:1的等長部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互補的核苷堿基序列。所述修飾寡核苷酸可以包含與SEQ ID NO 1的等長部分100%互補的核苷堿基序列。當在H印G2細胞中，用RT-PCR 分析方法測定，所述修飾寡核苷酸可以實現人mRNA水平至少70%的抑制(例如，如例3所述)O本發明的實施例提供了包括修飾寡核苷酸的化合物，該修飾寡核苷酸由12至30 個連接核苷組成并且具有核苷堿基序列，該核苷堿基序列包括選自SEQ ID N0:15至241中列舉的核苷堿基序列的至少8個、至少10個、至少12個、至少14個、至少16個、至少18個或20個連續核苷堿基。本發明的實施例提供了包括修飾寡核苷酸的化合物，該修飾寡核苷酸由12至30 個連接核苷組成并且具有核苷堿基序列，該核苷堿基序列包括選自SEQ ID N0:15至269中列舉的核苷堿基序列的至少8個、至少10個、至少12個、至少14個、至少16個、至少18個或20個連續核苷堿基。本發明的實施例提供了包括修飾寡核苷酸的化合物，該修飾寡核苷酸由12至30 個連接核苷組成并且具有核苷堿基序列，該核苷堿基序列包括選自SEQ ID N0:242至269 中列舉的核苷堿基序列的至少8個、至少10個、至少12個、至少14個、至少16個、至少18 個或20個連續核苷堿基。在一些實施例中，修飾寡核苷酸包括至少8個、至少10個、至少12個、至少14個、 至少16個或至少18個選自以下的核苷堿基序列的核苷堿基ISIS Nos 22、31、32、34、36 至 38、40、41、43、51 至 53、55、56、59、60、64、66、71、73、75、96、98 至 103,105 至 109,113 至 117、119、124、127、129、171、172、174、176、178、179、181 至 197、199 至 211 和 213 至 232。在一些實施例中，修飾寡核苷酸包含選自以下的核苷堿基序列ISIS Nos 22、31、32、34、36至 38、40、41、43、51至53、55、56、59、60、64、66、71、73、75、96、98至103、105至109、113至117、 119、124、127、129、171、172、174、176、178、179、181 至 197,199 至 211 和 213 至 232。在一些實施例中，修飾寡核苷酸由選自以下的核苷堿基序列所組成SEQ ID NOs 22、31、32、34、 36 至 38、40、41、43、51 至 53、55、56、59、60、64、66、71、73、75、96、98 至 103,105 至 109,113 至 117、11 9、124、127、129、171、172、174、176、178、179、181 至 197、199 至 211 和 213 至 232。 當在H印G2細胞中，用RT-PCR分析方法測定，所述修飾寡核苷酸可以實現人mRNA水平至少 70%的抑制(例如，如例3所述)。在一些實施例中，修飾寡核苷酸包括至少8個、至少10個、至少12個、至少14個、 至少16個或至少18個選自以下的核苷堿基序列的核苷堿基ISIS Nos 22、31、34、37、40、 43、51 至 53、60、98、100 至 102、105 至 109、114、115、119、171、174、176、179、181、186、188 至 193、195、196、199至210和213至232。在一些實施例中，修飾寡核苷酸包括選自以下的核苷堿基序列SEQ ID NOs 22、31、34、37、40、43、51 至 53、60、98、100 至 102、105 至 109、114、 115、119、171、174、176、179、181、186、188 至 193、195、196、199 至 210 和 213 至 232。在一些實施例中，修飾寡核苷酸由選自以下的核苷堿基序列所組成SEQ ID NOs 22、31、34、37、 40、43、51 至 53、60、98、100 至 102,105 至 109、114、115、119、171、174、176、179、181、186、 188至193、195、196、199至210和213至232。當在H印G2細胞中，用RT-PCR分析方法測定，所述修飾寡核苷酸可以實現人mRNA水平至少80%的抑制(例如，如例3所述)。在一些實施例中，修飾寡核苷酸包括至少8個、至少10個、至少12個、至少14個、 至少16個或至少18個選自以下的核苷堿基序列的核苷堿基ISIS Nos 31、37、100、105、 179,190 至 193、196、202 至 207、209、210、214 至 219,221 至 224、226、227、229 和 231。在一些實施例中，修飾寡核苷酸包括選自以下的核苷堿基序列SEQ ID NOs 31、37、100、105、 179,190 至 193、196、202 至 207、209、210、214 至 219,221 至 224、226、227、229 和 231。在一些實施例中，修飾寡核苷酸由選自以下的核苷堿基序列所組成SEQ ID NOs 31、37、100、 105、179、190 至 193、196、202 至 207、209、210、214 至 219,221至 224、226、227、229和 231。 當在H印G2細胞中，用RT-PCR分析方法測定，所述修飾寡核苷酸可以實現人mRNA水平至少 90%的抑制(例如，如例3所述)。在一些實施例中，修飾寡核苷酸包括至少8個、至少10個、至少12個、至少14個、 至少16個或至少18個選自以下的核苷堿基序列的核苷堿基SEQ ID NOs 34、52、53、114、 115、190至213、232、242至260以及262至266。在一些實施例中，修飾寡核苷酸包括選自以下的核苷堿基序列SEQ ID NOs 34、52、53、114、115、190、213至232、242至260 以及262 至266。在一些實施例中，修飾寡核苷酸由選自以下的核苷堿基序列所組成SEQ ID NOs 34、52、53、114、115、190、213至232、242至260和 262至266。當在 H印G2 細胞中，用 RT-PCR 分析方法測定，所述修飾寡核苷酸可以實現人mRNA水平至少70 %的抑制(例如，如例30所述)O在一些實施例中，修飾寡核苷酸包括至少8個、至少10個、至少12個、至少14個、 至少16個或至少18個選自以下的核苷堿基序列的核苷堿基SEQ ID NOs 34、52、53、114、 115、190、213 至 216,218 至 226,243 至 246、248、249、252 至 259,264 和 265。在一些實施例中，修飾寡核苷酸包括選自以下的核苷堿基序列SEQ ID NOs 34、52、53、114、115、190、213至216、218至226、243至246、248、249、252至259、264和265。在一些實施例中，修飾寡核苷酸由選自以下的核苷堿基序列所組成SEQ ID NOs 34、52、53、114、115、190、213至216、 218 至 226、243 至 246、248、249、252 至 259、264 和 265。當在!fepG2 細胞中，用 RT-PCR 分析方法測定，所述修飾寡核苷酸可以實現人mRNA水平至少80%的抑制(例如，如例30所述)O在一些實施例中 ，修飾寡核苷酸包括至少8個、至少10個、至少12個、至少14個、 至少16個或至少18個選自以下的核苷堿基序列的核苷堿基SEQ ID NOs 34、190、215、 222、223、226、246和254。在一些實施例中，修飾寡核苷酸包括選自以下的核苷堿基序列 SEQ ID NOs 34、190、215、222、223、226、246和254。在一些實施例中，修飾寡核苷酸由選自以下的核苷堿基序列所組成SEQ ID NOs 34、190、215、222、223、226、246和254。當在 HepG2細胞中，用RT-PCR分析方法測定，所述修飾寡核苷酸可以實現人mRNA水平至少90% 的抑制(例如，如示例30所述)。在一些實施例中，化合物由單鏈修飾寡核苷酸所組成。在一些實施例中，修飾寡核苷酸由20個連接核苷所組成。在一些實施例中，修飾寡核苷酸的核苷堿基序列與SEQ ID N0:1、SEQ ID NO :2、 SEQ ID NO 6或SEQ ID NO 274的核苷堿基序列100%互補。在一些實施例中，化合物具有至少一個修飾的核苷內連接。在一些實施例中，核苷內連接是硫代磷酸核苷內連接。在一些實施例中，化合物具有至少一個包含修飾糖的核苷。在一些實施例中，至少一個修飾糖是雙環糖。在一些實施例中，至少一個修飾糖包含2’ -0-甲氧乙基。本發明的實施例提供了包括修飾寡核苷酸的化合物，該修飾寡核苷酸由12至30 個連接核苷組成并且具有核苷堿基序列，該核苷堿基序列包括選自SEQ ID N0:15-241、SEQ ID NO 15-269或SEQ ID NO :242_269中所列舉的核苷堿基序列的至少8個、至少10個、至少12個、至少14個、至少16個、至少18個或20個連續核苷堿基，其中，至少一個核苷包含修飾糖。在一些實施例中，所述至少一個修飾糖是雙環糖。在一些實施例中，所述至少一個雙環糖包含4’ -(CH2)n-0-2'橋聯，其中η為1或 2。在一些實施例中，所述至少一個雙環糖包含4’ -CH(CH3)-0_2’橋聯。在一些實施例中，所述至少一個修飾糖包含2’ -0-甲氧乙基基團。本發明的實施例提供了包括修飾寡核苷酸的化合物，該修飾寡核苷酸由12至30 個連接核苷組成并且具有核苷堿基序列，該核苷堿基序列包括選自SEQ ID N0:15-241、SEQ ID NO 15-269或SEQ ID NO :242_269中所列舉的核苷堿基序列的至少8個、至少10個、至少12個、至少14個、至少16個、至少18個或20個連續核苷堿基，包含至少一個四氫吡喃修飾核苷，其中，四氫吡喃環取代了呋喃糖環。在一些實施例中，所述至少一個四氫吡喃修飾核苷具有如下結構
在一些實施例中，化合物具有至少一個包含修飾的核苷堿基的核苷。在一些實施例中，修飾核苷堿基是5-甲基胞嘧啶。在一些實施例中，化合物的修飾寡核苷酸包括(i)由連接的脫氧核苷組成的間隙區段；(i)由連接的核苷組成的5’側翼區段；(iii)由連接的核苷組成的3’側翼區段，其中，間隙區段直接相鄰于且位于5’側翼區段和3’側翼區段之間，其中，每一側翼區段的每個核苷包含一個修飾糖。在一些這樣的實施例中，修飾寡核苷酸中的每個胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。在一些實施例中，化合物的修飾寡核苷酸包括(i)由10個連接脫氧核苷組成的間隙區段；(i)由5個連接的核苷組成的5’側翼區段；(iii)由5個連接的核苷組成的3’側翼區段，其中，間隙區段直接相鄰于且位于 5’側翼區段和3’側翼區段之間，其中，每一側翼區段的每個核苷包含2’ -0-甲氧乙基糖； 其中，每個核苷內連接是磷硫酰連接。在一些這樣的實施例中，修飾寡核苷酸中的每個胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。在一些實施例中，化合物的修飾寡核苷酸包括(i)由14個連接脫氧核苷組成的間隙區段；(ii)由3個連接的核苷組成的5’側翼區段；(iii)由3個連接的核苷組成3’側翼區段，其中，間隙區段直接相鄰于且位于5’ 側翼區段和3’側翼區段之間，其中，每一側翼區段的每個核苷包含2’ -0-甲氧乙基糖；其中，每個核苷內連接是磷硫酰連接。在一些這樣的實施例中，修飾寡核苷酸中的每個胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。在一些實施例中，化合物的修飾寡核苷酸包括(i)由13個連接脫氧核苷組成的間隙區段；(i)由2個連接的核苷組成的5’側翼區段；(iii)由5個連接的核苷組成的3’側翼區段，其中，間隙區段直接相鄰于且位于 5’側翼區段和3’側翼區段之間，其中，每一側翼區段的每個核苷包含2’ -0-甲氧乙基糖； 其中，每個核苷內連接是磷硫酰連接。在一些這樣的實施例中，修飾寡核苷酸中的每個胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。本發明的實施例提供了包括修飾寡核苷酸的組合物，該修飾寡核苷酸由12至30 個連接核苷組成并且具有核苷堿基序列，該核苷堿基序列包括選自SEQ ID N0:15-241所列舉的核苷堿基序列的至少12個連續核苷堿基，或其鹽以及藥用可接受的載體或稀釋劑。本發明的實施例提供了包括修飾寡核苷酸的組合物，該修飾寡核苷酸由12至30 個連接核苷組成并且具有核苷堿基序列，該核苷堿基序列包括選自SEQ ID N0:15-269所列舉的核苷堿基序列的至少12個連續核苷堿基，或其鹽以及藥用可接受的載體或稀釋劑。本發明的實施例提供了包括修飾寡核苷酸的組合物，該修飾寡核苷酸由12至30個連接核苷組成并且具有核苷堿基序列，該核苷堿基序列包括選自SEQ ID N0:241-269所列舉的核苷堿基序列的至少12個連續核苷堿基，或其鹽以及藥用可接受的載體或稀釋劑。本 發明的實施例提供了方法，這些方法包括向動物給藥包括修飾寡核苷酸的化合物，該修飾寡核苷酸由12至30個連接核苷組成并且具有核苷堿基序列，該核苷堿基序列包含選自SEQ ID NO :15-241所列舉的核苷堿基序列的至少8個連續核苷堿基。本發明的實施例提供了方法，這些方法包括向動物給藥包括修飾寡核苷酸的化合物，該修飾寡核苷酸由12至30個連接核苷組成并且具有核苷堿基序列，該核苷堿基序列包含選自SEQ ID NO: 15-269所列舉的核苷堿基序列的至少8個連續核苷堿基。本發明的實施例提供了方法，這些方法包括向動物給藥包括修飾寡核苷酸的化合物，該修飾寡核苷酸由12至30個連接核苷組成并且具有核苷堿基序列，該核苷堿基序列包含選自SEQ ID NO 241-269所列舉的核苷堿基序列的至少8個連續核苷堿基。在一些實施例中，動物是人。在一些實施例中，給藥防止了深靜脈血栓形成或肺栓塞。在一些實施例中，所述化合物與從阿司匹林、氯吡格雷、雙嘧達莫、肝素、來匹盧定、噻氯匹啶、華法林、阿哌沙班、利伐沙班和依諾肝素鈉中挑選的任一個共同給藥。在一些實施例中，所述化合物與任何因子Xa抑制劑共同給藥。在一些實施例中，因子Xa抑制劑是利伐沙班、LY517717、YMl50,阿哌沙班、 PRT054021 和 DU-176b 中的任一種。在一些實施例中，化合物與從阿司匹林、氯吡格雷、雙嘧達莫、肝素、來匹盧定、噻氯匹啶、華法林、阿哌沙班、利伐沙班和依諾肝素鈉中挑選的任一個隨附給藥。在一些實施例中，給藥是腸胃外給藥。在一些實施例中，腸胃外給藥是皮下注射或靜脈注射給藥中的任一種。本發明的實施例提供了方法，包括鑒定有發展血栓栓塞性并發癥的風險的動物， 以及向該有風險的動物給藥治療有效量的包括修飾寡核苷酸的化合物，該修飾寡核苷酸由 12至30個連接的核苷組成，其中，該修飾的寡核苷酸與因子11核酸互補。在一些實施例中，血栓栓塞性并發癥是深靜脈血栓形成、肺栓塞或其組合。本發明的實施例提供了方法，包括通過向動物給藥治療有效量的包括修飾寡核苷酸的化合物識別出有凝血紊亂風險的動物，該修飾寡核苷酸由12至30個連接的核苷組成， 其中，修飾的寡核苷酸與因子U核酸互補。在一些實施例中，化合物與從阿司匹林、氯吡格雷、雙嘧達莫、肝素、來匹盧定、噻氯匹啶、華法林、阿哌沙班、利伐沙班和依諾肝素鈉中挑選的任一個共同給藥。在一些實施例中，化合物與從阿司匹林、氯吡格雷、雙嘧達莫、肝素、來匹盧定、噻氯匹啶、華法林、阿哌沙班、利伐沙班和依諾肝素鈉中挑選的任一個隨附給藥。本發明的實施例提供了方法，該方法包括通過向動物給藥治療有效量的包括修飾寡核苷酸的化合物，降低動物血栓栓塞性并發癥的風險，其中，修飾寡核苷酸由12至30個連接的核苷組成，其中，修飾的寡核苷酸與因子11核酸互補。本發明的實施例提供了方法，包括通過向動物給藥治療有效量的包括修飾寡核苷酸的化合物，治療動物體內的凝血紊亂，其中，修飾寡核苷酸由12至30個連接的核苷組成， 其中，修飾的寡核苷酸與因子U核酸互補。
本發明的實施例提供了方法，包括通過向動物給藥治療有效量的包括修飾寡核苷酸的化合物，抑制動物體內因子11的表達，其中，修飾寡核苷酸由12至30個連接的核苷組成，其中，修飾的寡核苷酸與因子U核酸互補。在一些實施例中，通過給藥修飾寡核苷酸的解毒劑逆轉動物體內因子11的抑制。

在一些實施例中，解毒劑是與修飾寡核苷酸互補的寡核苷酸。反義化合物寡聚化合物包括，但不限于，寡核苷酸、寡核苷、寡核苷酸類似物、寡核苷酸模擬物、反義化合物、反義寡核苷酸以及siRNA。寡聚化合物可以與目標核酸“反義”，是指它能夠通過氫鍵作用與目標核酸相雜交。在一些實施例中，反義化合物具有核苷堿基序列，當以5’至3’方向表示時，其包含其靶向的目標核酸的目標區段的反式互補序列。在一些這樣的實施例中，反義寡核苷酸具有核苷堿基序列，當5’至3’方向表示時，其具有其靶向的目標核酸的目標區段的反式互補序列。在一些實施例中，靶向因子11核酸的反義化合物的長度為12-30個亞單位。換言之，這樣的反義化合物是12到30個連接的亞單位。在其他實施例中，反義化合物是8至 80、12至50、15至30、18至24、19至22或20個連接的亞單位。在一些這種實施例中，反義化合物的長度是8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、 29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、 54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79 或80個連接的亞單位，或是由任意兩個上述數值定義的范圍。在一些實施例中，反義化合物是反義寡核苷酸，連接的亞單位是核苷酸。在一些實施例中，靶向因子11核酸的反義寡核苷酸可能被縮短或截短。例如，可以從5’末端(5’截短)或者從3’末端(3’截短)刪除單個亞單位。靶向因子11核酸的縮短或截短的反義化合物可能有兩個從反義化合物的5’末端刪除的亞單位，或者兩個從反義化合物的3’末端刪除的亞單位。另外，被刪除的核苷可能分散在反義化合物的各處，例如，分散在有一個從5’末端刪除的亞單位以及一個從3’末端刪除的亞單位的反義化合物中。當加長的反義化合物中存在單個額外的亞單位時，該額外的亞單位可以位于反義化合物的5’或3’末端。當存在兩個或多個額外的亞單位時，這些增加的亞單位可能彼此相鄰，例如，在有兩個亞單位被加到反義化合物的5’末端(5’增加)或者3’末端(3’增加) 的反義化合物中。或者，增加的亞單位可以分散在反義化合物的各處，例如，在有一個亞單位被增加到5’末端以及一個亞單位被增加到3’末端的反義化合物中。增加或降低反義化合物，如反義寡核苷酸，的長度，和/或引入錯配堿基而不消除活性是可能的。例如，在Woolf等人的工作中(Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:7305-7309， 1992)，對一系列長度為13-25個核苷堿基的反義寡核苷酸在卵母細胞注射模型中誘導目標RNA裂解的能力進行了測試。靠近反義寡核苷酸末端有8或11個錯配堿基且長度為25 個核苷堿基的反義寡核苷酸能夠引導目標mRNA的特異性裂解，雖然其程度小于不含錯配的反義寡核苷酸。類似地，用包括那些有1個或3個錯配的13個核苷堿基的反義寡核苷酸實現了目標特異性裂解。
Gautschi 等人(J. Natl. Cancer Inst. 93 :463_471，March 2001)說明了與 bcl-2mRNA 100%互補并且與bcl_xL mRNA有3個錯配的寡核苷酸在體外和體內對bcl_2 和bcl-xL兼有降低表達的能力。而且，這種寡核苷酸在體內表現出有效地抗腫瘤活性。Maher 和 Dolnick(Nuc. Acid. Res. 16 :3341_3358，1988)分別對一系列 14 個核苷堿基串聯的反義寡核苷酸以及由兩個或三個串聯反義寡核苷酸構成的28個和42個核苷堿基的反義寡核苷酸測試了它們在兔網織紅細胞測試中阻止人DHFR翻譯的能力。3條14個核苷堿基的反義寡核苷酸的每一個單獨能抑制翻譯，雖然水平比28個或42個核苷堿基的反義寡核苷酸的水平要更弱些。反義化合物結構域在一些實施例中，靶向因子11核酸的反義化合物具有模式化排列的化學修飾亞單位或結構域，以賦予反義化合物如增強抑制活性、增強對目標核酸的結合力或對體內核酸酶引起的降解的抵抗力等特性。嵌合型反義化合物通常包含至少一個修飾區域，以便賦予對核酸酶降解的增強的抵抗力、增強的細胞攝入、對目標核酸的增強的結合力和/或增強的抑制活性。嵌合型反義化合物的第二個區域可作為裂解RNA:DNA雙螺旋的RNA鏈的細胞核酸內切酶RNase H的底物。具有gapmer結構域的反義化合物被視為嵌合型反義化合物。在gapmer中，具有多個支持RNase H裂解的核苷酸的內部區段位于具有多個化學上不同于內部區域核苷的核苷酸的外部區段之間。就具有gapmer結構域的反義寡核苷酸而言，間隙區段通常作為核酸內切酶裂解的底物，而側翼區段包含修飾的核苷。在一些實施例中，gapmer的區域的差別在于包括每個獨特區域的糖基的類型。在一些實施例中，用來區別gapmer區域的糖基類型包括 β -D-核糖核苷、β -D-脫氧核糖核苷、2'-修飾的核苷(這些2'-修飾的核苷可以包括 2’ -MOE和2’ -O-CH3等等)和雙環糖修飾的核苷(這些雙環糖修飾的核苷可以包括那些具有4’-(CH2)n-0-2’橋聯的核苷，其中η= 1或η = 2)。優選地，每一獨特區域包括統一的糖基。側翼-間隙-側翼結構域經常表示為“Χ-Υ-Ζ”，其中，“X”代表5’側翼區域的長度， “Y”代表間隙區域的長度，“Ζ”代表3’側翼區域的長度。如此處所用，被描述為“Χ-Υ-Ζ”的 gapmer具有間隙區段與5’側翼區段和3’側翼區段每個直接相鄰的結構。因此，在5’側翼區段和間隙區段之間或間隙區段與3’側翼區段之間沒有干擾核苷。此處描述的任何反義化合物可以有gapmer結構域。在一些實施例中，X和Z相同，在其他實施例中，它們不同。在優先實施例中，Y介于8個至15個核苷酸之間。X、Y或Z可以是1個、2個、3個、4個、5個、 6個、7個、8個、9個、10個、11個、12個、13個、14個、15個、16個、17個、18個、19個、20個、 25個、30個或更多個核苷酸。因此，本發明的gapmer包括，但不限于，例如5_10-5、4-8_4、
4-12-3、4-12-4、3-14-3、2-13-5、2-16-2、1-18-1、3-10-3、2-10-2、1-10-1、2-8-2、5-8-5或 6-8-6。在一些實施例中，反義化合物具有側翼-間隙或間隙-側翼結構的“wingmer”結構域，也就是上面描述的gapmer結構的X-Y或Y-Z結構。因此，本發明的wingmer結構包括， 但不限于，例如 5-10、8-4、4-12、12-4、3-14、16-2、18-1、10-3、2-10、1-10、8-2、2-13、5-13、
5-8或 6-8。在一些實施例中，靶向因子11核酸的反義化合物具有5-10-5gapmer結構域。
在一些實施例中，靶向因子11核酸的反義化合物具有3-14-3gapmer結構域。在一些實施例中，靶向因子11核酸的反義化合物具有2-13-5gapmer結構域。在一些實施例中，靶向因子11核酸的反義化合物具有5-8-5gapmer結構域。在一些實施例中，靶向因子11核酸的反義化合物具有6-8-6gapmer結構域。
在一些實施例中，靶向因子11核酸的反義化合物具有間隙擴寬的結構域。在一些實施例中，靶向因子11核酸的間隙擴寬的反義寡核苷酸具有由14個 2’ -脫氧核糖核苷構成的間隙區段，其直接相鄰并介于由三個化學修飾的核苷構成的側翼區段之間。在一些實施例中，化學修飾包括2’-糖基修飾。在另一實施例中，化學修飾包括含2’ -MOE糖基修飾。在一些實施例中，靶向因子11核酸的間隙擴寬的反義寡核苷酸具有由13個 2’ -脫氧核糖核苷構成的間隙區段，其直接相鄰并介于由兩個化學修飾的核苷構成的5’側翼區段和由五個化學修飾的核苷構成的3’側翼區段之間。在一些實施例中，化學修飾包括 2’ -糖基修飾。在另一實施例中，化學修飾包括2’ -MOE糖基修飾。目標核酸、目標區域和核苷酸序列編碼因子11的核苷酸序列包括，但不限于以下GENBANK登錄號NM_000128. 3， 1999 年 3 月 24 日 GENBANK 首次收錄，指定為 SEQ ID NO 1 ；NT_022792. 17，從 19598000 至 19624000截斷，2000年11月29日GENBANK首次收錄，指定為SEQ ID NO :2 ;GENBANK登錄號 NM_028066. 1，2002年6月2日GENBANK首次收錄，指定為SEQ ID NO 6 ；以及外顯子1-15, GENBANK 登錄號 NW_001118167. 1，2006 年3 月 28 日 GENBANK 首次收錄，指定為 SEQ ID NO: 274。可以理解，此處包含的例子中每個SEQ ID NO所對應的序列獨立于任何糖基、核苷內連接或核苷堿基的修飾。同樣，SEQ ID NO定義的反義化合物可以獨立地包含一個或多個糖基、核苷內連接或核苷堿基的修飾。Isis號(Isis No)描述的反義化合物表示核苷堿基序列和結構域的結合。在一些實施例中，目標區段是目標核酸的結構性定義的區段。例如，目標區段可包含3’UTR、5’UTR、外顯子、內含子、外顯子/內含子結合點、編碼區域、翻譯起始區域、翻譯終止區域或其他定義的核酸區域。針對因子11的結構性定義區域可以通過登錄號從如NCBI 等序列數據庫中獲得，這些信息在此被作為參考并并入本申請。在一些實施例中，目標區域可包含從目標區域中目標區段的5’目標位點到同樣目標區域中另一目標區段的3’目標位點間的序列。靶向包括確定反義化合物與之雜交以便發生預期效果的至少一個目標區段。在一些實施例中，預期效果是目標核酸mRNA水平的下降。在一些實施例中，預期效果是目標核酸編碼的蛋白水平的下降或目標核酸相關的表型變化。目標區域可包含一個或多個目標區段。目標區域中的多個目標區段可以重疊。或者，它們可以不重疊。在一些實施例中，目標區域中的目標區段被至多約300個核苷酸分開。在一些實施例中，目標區域中的目標區段被目標核酸的大約、至多、至多約250、200、 150、100、90、80、70、60、50、40、30、20或10個核苷酸，或者任意兩個前面數值定義的范圍的數量的核苷酸分開。在一些實施例中，目標區域中的目標區段被目標核酸的至多或至多約 5個核苷酸分開。在一些實施例中，目標區段是連續的。由具有以此處所列的5’目標位點或3’目標位點中任一個為起始核酸的范圍所定義的目標區域同樣被構思。合適的目標區段可能在5’ UTR、編碼區域、3’ UTR、內含子、外顯子或外顯子/內含子結合點中被發現。包含起始密碼子或終止密碼子的目標區段也是合適的目標區段。合適的目標區段可能特異性地排除如起始密碼子或終止密碼子等特定結構性定義的區域。合適的目標區段的確定可包括目標核酸序列與基因組中其他序列的比較。例如， BLAST算法可用于鑒定不同核酸中有相似性的區域。這種比較可以防止挑選出可能與選中的目標核酸之外的序列(也就是非靶向的或脫靶序列)非特異性雜交的反義化合物序列。反義化合物在活性目標區域中的活性(例如，以目標核酸水平的降低百分比來定義)可能會變化。在一些實施例中，因子IlmRNA水平的降低表明了因子11表達的抑制。因子11蛋白水平的降低也表明了對目標mRNA表達的抑制。而且，表型變化表明了因子11表達的抑制。例如，延長的aPTT時間可表明因子11表達的抑制。在另一例子中，延長的aPTT 時間連同正常的PT時間可表明因子11表達的抑制。在另一例子中，血小板因子4 (PF-4) 的減少量可表明因子11表達的抑制。在另一例子中，減少的血栓形成或血栓形成時間增加可表明因子11表達的抑制。雜交在一些實施例中，雜交發生在此處披露的反義化合物與因子11核酸之間。雜交最常見的機制涉及核酸分子的互補核苷堿基間的氫鍵作用(例如Watson-Crick，Hoogsteen 或反向Hoogsteen S鍵作用)。雜交可以在不同條件下發生。嚴謹條件是序列依賴的，取決于待雜交的核酸分子的特性和組成。確定序列是否與目標核酸特異性雜交的方法為本領域所熟知。在一些實施例中， 此處提供的反義化合物可與因子11的核酸特異性雜交。互補當反義化合物的足夠數量的核苷堿基與目標核酸的相應核苷堿基發生氫鍵作用而產生期望效果時(例如，目標核酸，如因子11核酸，的反義抑制)，那么反義化合物與目標核酸彼此互補。反義化合物和因子11核酸間的非互補核苷堿基是可被容忍說明反義化合物依然能夠與目標核酸特異性雜交。而且，反義化合物可與因子11核酸的一個或多個區段雜交， 以至于干擾或相鄰區段不涉及到雜交事件中(例如，回環結構、錯配或發卡結構)。在一些實施例中，此處提供的反義化合物或其中指定部分與因子11核酸、目標區域、目標區段或其中指定部分有或至少有70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、 91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%^； 100%的互補。反義化合物和目標核酸的互補百分比可以用常規方法測定。例如，反義化合物的20個核苷堿基中的18個與目標區域互補并因此特異性雜交的反義化合物展示90%的互補性。在該例中，剩下 的非互補核苷堿基可以是聚集的或點綴著互補核苷堿基，不必彼此之間或與互補核苷堿基相連續。 同樣，長度為18個核苷堿基且具有4(四)個兩側有與目標核酸完全互補的兩個區域的非互補核苷堿基的反義化合物即具有與目標核酸77. 8%的總的互補性，也落在本發明的范圍之內。可以用本領域已知的BLAST程序(基本的局部比對搜索工具)和PowerBLAST程序 (Altschul et al. , J. Mol.Biol. ,1990,215,403 410 ；Zhang and Madden, Genome Res.,1997,7,649 656)以常規的方法確 定反義化合物與目標核酸區域的互補性百分比。同源百分比、序列身份或互補性可以用例如采用默認設置的Gap程序(Wisconsin序列分析軟件包，Unix的版本8，遺傳學計算機組，Research Park大學，Madison Wis.)來確定，其利用 Smith 和 Waterman 算法(Adv. Appl. Math.，1981，2，482-489)。在一些實施例中，此處提供的反義化合物或其中指定部分與目標核酸或其中指定部分完全互補(也就是100%互補)。例如，反義化合物可與因子11核酸或目標區域或其中的目標區段或目標序列完全互補。如此處所用，“完全互補”是指反義化合物的每個核苷堿基能夠與目標核酸的相應核苷堿基準確堿基配對。例如，只要400個核苷堿基長的目標核酸中有20個核苷堿基部分與反義化合物完全互補，20個核苷堿基反義化合物就與該目標序列完全互補。完全互補也可以用于第一條和/或第二條核酸的指定部分。例如，30個核苷堿基的反義化合物中的20個核苷堿基部分可以與400個核苷堿基長度的目標序列“完全互補”。如果目標序列有相應的20個核苷堿基，其中每個堿基與反義化合物的20個核苷堿基部分互補，那么30個核苷堿基寡核苷酸的20個核苷堿基部分與目標序列完全互補。同時，根據反義化合物剩下10個核苷堿基是否也與目標序列互補，整個30個核苷堿基反義化合物與目標序列可能完全互補或可能不完全互補。非互補核苷堿基的位置可在反義化合物的5’末端或3’末端。或者，非互補核苷堿基或核苷堿基可在反義化合物的內部位置。當存在兩個或多個非互補核苷堿基時，它們可以是連續的(也就是連接的)或非連續的。在一個實施例中，非互補核苷堿基位于gapmer 反義寡核苷酸的側翼區段。在一些實施例中，相對于如因子11核酸的目標核酸或其中指定部分，長度為或高至12、13、14、15、16、17、18、19或20個核苷堿基的反義化合物包含不多于4、不多于3、不多于2、不多于1個非互補核苷堿基。在一些實施例中，相對于如因子11核酸的目標核酸或其中指定部分，長度為或高至 12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29 或 30 個核苷堿基的反義化合物包含不多于6、不多于5、不多于4、不多于3、不多于2、不多于1個非互補核苷堿基。此處提供的反義化合物還包括那些與目標核酸的部分互補的化合物。如此處所用，“部分”指的是在目標核酸的區域或區段中確定數量的連續的(也就是連接的)核苷堿基。“部分”也可以指反義化合物中確定數量的連續核苷堿基。在一些實施例中，反義化合物與目標區段的至少8個核苷堿基的部分互補。在一些實施例中，反義化合物與目標區段的至少12個核苷堿基的部分互補。在一些實施例中，反義化合物與目標區段的至少15個核苷堿基的部分互補。與目標區段中至少9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多個核苷堿基或由這些數值中任意兩個所定義的范圍內的核苷堿基數相互補的反義化合物也被考慮到了。標i只此處提供的反義化合物也可有與特定核苷酸序列、SEQ ID NO或由特定Isis號代表的化合物或其中部分的相似度百分比。如此處所用，如果具有相同的核苷堿基配對能力， 反義化合物就與此處披露的序列相同。例如，由于尿嘧啶和胸腺嘧啶與腺嘌呤都能配對，在披露的DNA序列中包含尿嘧啶替代胸腺嘧啶的RNA被認為與該DNA序列的相同。此處描述的反義化合物的縮短和延長版本以及具有相對于此處提供的反義化合物的非相同堿基的化合物也被考慮了。非相同堿基可彼此相鄰或分散在反義化合物中各處。根據相對于被比較序列具有相同堿基配對的堿基數量計算反義化合物的相似度百分比。在一些實施例中，反義化合物或其中部分與此處公開的一個或多個反義化合物或 SEQ ID NOs或其中部分有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或 100%的相同。在一些實施例中，反義化合物的部分與目標核酸的等長部分相比較。在一些實施例中，8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24 或 25 個核苷堿基部分與目
標核酸的等長部分相比較。在一些實施例中，反義寡核苷酸的部分與目標核酸的等長部分相比較。在一些實施例中，8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24 或 25 個核苷堿基部分與目標核酸的等長部分相比較。修飾核苷是堿基_糖組合。核苷的核苷堿基(也被稱為堿基)部分通常是一個雜環堿基部分。核苷酸是進一步包括共價偶聯在核苷的糖部分的磷酸基的核苷。對于那些包括五呋喃糖的核苷，磷酸基團可被連接在糖的2'、3'或5'羥基上。寡核苷酸是通過彼此相鄰的核苷間的共價連接形成，以形成線性多聚寡核苷酸。在寡核苷酸結構中，磷酸基團通常被認為形成寡核苷酸的核苷內連接。反義化合物的修飾包括核苷內連接、糖基或核苷堿基的取代或改變。因為像例如增強細胞攝入、對核酸目標的增強親和力、核酸酶存在時的增強穩定性或增強抑制活性等期望特性，相對于天然形式，優選修飾的反義化合物。化學修飾核苷也可能用來增加縮短或截短的反義寡核苷酸對其目標核酸的結合力。所以，以具有這樣化學修飾核苷的更縮的反義化合物，經常可以獲得類似的結果。修飾的核苷內連接RNA和DNA的天然存在的核苷內連接是3'至5'磷酸二酯鍵連接。因為像例如增強細胞攝入、對目標核酸的增強親和力和核酸酶存在時的增強穩定性等期望的特性，相對于天然存在的核苷內連接，優選具有一個或多個修飾的，也就是非天然存在的核苷內連接的反義化合物。具有修飾的核苷內連接的寡核苷酸包括保留磷原子的核苷內連接以及沒有磷原子的核苷內連接。典型的含有磷原子的核苷內連接包括，但不限于，磷酸二酯、磷酸三酯、甲基磷酸酯、氨基磷酸酯以及磷硫酰。制備含磷和不含磷連接的方法是業界習知的。在一些實施例中，靶向因子11核酸的反義化合物包含一個或多個修飾的核苷內連接。在一些實施例中，修飾的核苷內連接是磷硫酰連接。在一些實施例中，反義化合物的每個核苷內連接是磷硫酰核苷內連接。修飾的糖基可選地，本發明的反義化合物可包含一個或多個其中糖基被修飾的核苷。這樣的糖修飾的核苷可賦予反義化合物增強的核酸酶穩定性、增強的結合力或一些其他有益的生物學特性。在一些實施例中，核苷包含化學修飾的呋喃核糖環部分。化學修飾的呋喃核糖環的例子非限制地包括加入取代基(包括5'和2'取代基)、形成雙環核酸(BNA)的非偕環原子的橋聯、以S或N(R)或C(Rl) (R) 2 (R = H, C1-C12烷基或保護基團)替代核糖環氧原子，以及其組合。化學修飾糖的例子包括2' -F-5' _甲基取代核苷(見08年8月 21日公開的PCT國際申請WO 2008/101157，其是有關其他被披露的5'，2'-雙取代核苷)，或者以S取代核糖環氧原子并在2'-位(見2005年6月16日公開的美國專利申請 US號)或者在5'-取代BNA(見07年11月22日公開的PCT國際申請WO 2007/134181號，其中LNA被例如5'-甲基或5'-乙烯基所取代)。具有修飾糖基的核苷的例子非限制地包括含有5'-乙烯基、5'-甲基(R或 S)、4' -S、2' -F、2' -0CH3以及2' -0(CH2) 20CH3取代基團的核苷。2’位的取代也可以選自烯丙基、氨基、疊氮基、硫代的、0-烯丙基、0-C1-C10烷基、0CF3、0(CH2)2SCH3、 0 (CH2) 2-0-N (Rm) (Rn)和 0-CH2-C ( = 0) -N (Rm) (Rn)，其中，Rm 和 Rn 各自獨立地是 H 或取代的或非取代的Cl-Cio烷基。雙環核酸(BNAs)的例子非限制地包括包含4'和2'核糖環原子間橋聯的核苷。在一些實施例中，此處提供的反義化合物包括一個或多個BNA核苷，其中，橋聯包括下列分子式之一 4' -(CH2)-0-2 ‘ (LNA) ；4 ‘ -(CH2)-S-2 ‘ ；4，-(CH2)-0-2，(LNA)； 4，-(CH2) 2-0-2，(ENA) ；4，-C (CH3) 2_0_2，(見 PCT/US2008/068922) ； 4，-CH(CH3)，-0-2， 和4，-OH(CH2OCH3) 0-2，(見美國專利7，399，845號，2008年7月15日授權)； 4，-CH2-N(0CH3)-2，(見 PCT/US2008/064591) ；4，-CH2-0_N(CH3)-2，(見已公開的美國專利申請US號，2004年9月2日公開)；4，_CH2_N(R)-0-2，(見美國專利 7，427，672 號，2008 年 9 月 23 日公開)；4，-CH2-C(CH3)-2lP4，-CH2-0(=CH2)-2'(見 PCT/ US2008/066154)；其中，R獨立地是H、C1-C12烷基或保護基團。每一個前面的BNA包含包括例如α -L-呋喃核糖和β -D-呋喃核糖(見PCT國際申請PCT/DK98/00393號，于1999 年3月25日公開為WO 99/14226)的各種立體化學的糖構型。在一些實施例中，核苷被以糖替代物對核糖環的替代所修飾。這樣的修飾非限制地包括以替代環系統(有時指的是DNA類似物)對核糖環的替代，替代環系統如嗎啉環、環己烯
HO^/O. HO-^O ΗΟ^^Ο
H0 ^^Bx HO、V^Bx HO ^^Bx FOCH3基環、環己基環或如具有下列結構式之一的四氫吡喃環可用于修飾以包含在反義化合物中的核苷的許多其他雙環和三環糖替代環系統也為本領域已知(見例如綜述文章Leumann, J. C, Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2002，10,841-854)。這種環系統可以承受各種附加替代以增強活性。制備修飾糖的方法為本領域普通技術人員所熟知。具有修飾糖基的核苷中，核苷堿基部分(天然的、修飾的或其組合)被保留，用于與合適的核酸目標雜交。在一些實施例中，靶向因子11核酸的反義化合物包含一個或多個具有修飾的糖部分的核苷酸。在一些實施例中，修飾的糖基是2 ’ -MOE。在一些實施例中，2 ’ -MOE修飾的核苷酸以gapmer結構域排列。修飾的核苷堿基
核苷堿基(或堿基)修飾或取代與天然存在或合成的未修飾的核苷堿基在結構上可區別，然而在功能上可互換。天然和修飾的核苷堿基都能夠參與氫鍵作用。這樣的核苷堿基修飾可能賦予反義化合物核酸酶穩定性、結合力或一些其他有益的生物學特性。修飾的核苷堿基包括像例如5-甲基胞嘧啶(5-me-C)等合成和天然的核苷堿基。包括5-甲基胞嘧啶取代的一些核苷堿基取代對于增強反義化合物與目標核酸的親和力特別有用。例如，5-甲基胞嘧啶取代已經被證明使核酸雙螺旋穩定性增加了 0. 6-1. 2V (Sanghvi,Y. S.， Crooke, S.T. and Lebleu, B. , eds. , Antisense Research and Applications, CRC Press, Boca Raton,1993，pp.276-278)。另外的修飾核苷堿基包括5-羥甲基胞嘧啶、黃嘌呤、次黃嘌呤、2-氨基腺嘌呤、腺嘌呤和鳥嘌呤的6-甲基和其他烷基衍生物、2-硫脲嘧啶、2-硫代胸腺嘧啶和2-巰基胞嘧啶、5-鹵素尿嘧啶和胞嘧啶、5-丙炔基(-C ε C-CH3)尿嘧啶和胞嘧啶以及嘧啶堿基的其他炔基衍生物、6-含氮尿嘧啶、胞嘧啶和胸腺嘧啶、5-尿嘧啶(假尿嘧啶)、4_硫脲嘧啶、8-鹵素、8-氨基、8-硫醇、8-硫代烷基、8-羥基和其他8-取代的腺嘌呤和鳥嘌呤、5-鹵素特別是 5_溴代、5-三氟甲基和其他5-取代的尿嘧啶和胞嘧啶、7-甲基鳥嘌呤和7-甲基腺嘌呤、 2-F-腺嘌呤、2-氨基-腺嘌呤、8-氮鳥嘌呤和8-氮雜腺嘌呤、7-去氮雜鳥嘌呤和7-去氮雜腺嘌呤和3-去氮雜鳥嘌呤以及3-去氮雜腺嘌呤。雜環堿基部分也可包括那些其中的嘌呤或嘧啶堿基被其他雜環所取代的，例如 7-去氮雜-腺嘌呤、7-去氮雜鳥嘌呤、2-氨基吡啶和2-吡啶酮等。對于增強反義化合物的結合力特別有用的核苷堿基包括5-取代嘧啶、6-氮雜嘧啶和N-2、N-6和0-6取代嘌呤，包括2-氨丙基腺嘌呤、5-丙基尿嘧啶和5-丙炔基胞嘧啶。在一些實施例中，靶向因子11核酸的反義化合物包含一個或多個修飾的核苷堿基。在一些實施例中，靶向因子11核酸的間隙擴寬的反義寡核苷酸包含一個或多個修飾的核苷堿基。在一些實施例中，修飾核苷堿基是5-甲基胞嘧啶。在一些實施例中，每一個胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。配制藥物組合物的組分和方法為制備藥物組合物或劑型，反義寡核苷酸可與藥用可接受的活性或惰性物質相混合。配制藥物組合物的組分和方法取決于一些標準，包括但不限于，給藥方式、疾病程度或給藥劑量。通過組合反義化合物和合適的藥用可接受的稀釋劑或載體，靶向因子11核酸的反義化合物可被用于藥物組合物。藥用可接受的稀釋劑包括磷酸鹽緩沖液(PBS)。PBS是一種適合用在非腸道給藥的組合物中的稀釋劑。因此，在一個實施例中，被此處描述的方法采用的是一種包含靶向因子11核酸的反義化合物以及藥用可接受的稀釋劑的藥物組合物。在一些實施例中，藥用可接受的稀釋劑是PBS。在一些實施例中，反義化合物是反義寡核苷酸。含反義化合物的藥物組合物涵蓋在給包括人的動物給藥時能提供(直接或間接) 生物活性的代謝物或其殘基的任何藥用可接受的鹽、酯類、或這些酯的鹽、或者任何其他寡核苷酸。因此，例如，本披露也指向反義化合物的藥用可接受的鹽、前體藥物、這種前體藥物的藥用可接受的鹽以及其他生物等同物。合適的藥用可接受的鹽包括但不限于，鈉和鉀鹽。前體藥物可以包括在反義化合物的一個或兩個末端添加額外的核苷，其被體內的內源性核酸酶裂解以形成活性反義化合物。偶聯的反義化合物反義化合物可共價連接至能增強得到的反義寡核苷酸的活性、細胞分布或細胞攝入的一個或多個部分或偶聯物。典型的偶聯基團包括膽固醇基或脂基。另外的偶聯基團包括碳水化合物、磷脂、生物素、吩嗪、葉酸、菲啶、蒽醌、吖啶、熒光素、若丹明、香豆素以及染料。反義化合物也可以被修飾為具有一個或多個通常連接在反義化合物的一個或兩個末端的穩定基團，以增強例如核酸酶穩定性等特性。穩定基團包括帽結構。這些末端修飾能防止具有末端核酸的反義化合物被核酸外切酶降解，并有助于細胞內的傳送和/或定位。帽可以存在于5'-末端(5'-帽)，或在3'-末端(3'-帽)，或者在兩個末端都存在。帽結構為本領域普通技術人員所熟知，包括，例如，反轉的脫氧脫堿基帽。可用于在反義化合物的一個或兩個末端形成帽結構以賦予核酸酶穩定性的3'和5'穩定基團還包括2003年1月16日公開的WO 03/004602中所披露的那些基團。細胞培養和反義化合物處理可以在各種細胞類型中體外測試反義化合物對因子11核酸水平、活性或表達的影響。用于這種分析的細胞類型可購自商業供應商(例如美國菌種保藏中心，Manassus， VA ；Zen-Bio,Inc. ,Research Triangle Park,NC ；Clonetics Corporation,Walkersvilie, MD)，根據供應商說明書用商售試劑(例如Invitrogen Life Technologies,Carlsbad,CA) 進行培養。示例性的細胞類型包括但不限于，HepG2細胞、H印3B細胞以及原代肝細胞。反義寡核苷酸的體外測試此處描述的是用反義寡核苷酸處理細胞的方法，這些方法可以被適當修改從而用其他反義化合物來處理。通常，當細胞達到約60-80%培養克隆率時，用反義寡核苷酸處理細胞。通常用于將反義寡核苷酸轉入培養細胞的試劑包括陽離子脂類轉染試劑 LIP0FECTIN(Invitrogen, Carlsbad, CA)。將反義寡核苷酸與 LIP0FECTIN 在 0ΡΤΙ-ΜΕΜ Klnvitrogen, Carlsbad, CA)中混合以達到期望的反義寡核苷酸的終濃度以及通常每 IOOnM反義寡核苷酸對應2至12ug/mL范圍的LIP0FECTIN濃度。用于將反義寡核苷酸轉入培養細胞的另一種試劑包括 LIPOFECTAMINE (Invitrogen, Carlsbad, CA)。將反義寡核苷酸與 LIP0FECTAMINE 在 OPTI-MEM 1減血清培養基(Invitrogen，Carlsbad，CA)中混合以達到期望的反義寡核苷酸的濃度以及通常每IOOnM反義寡核苷酸對應2至12ug/mL范圍的LIPOFECTAMINE的濃度。用于將反義寡核苷酸轉入培養細胞的另一種技術包括電穿孔。細胞用反義寡核苷酸以常規方法處理。細胞通常在反義寡核苷酸處理后16-24小時收獲，此時用此處描述的本領域已知的方法測定目標核酸的RNA或蛋白水平。通常，以多份重復進行處理時，以重復處理的平均值作為結果。采用的反義寡核苷酸的濃度因細胞株而變化。針對特定細胞株確定最佳反義寡核苷酸濃度的方法為本領域所熟知。當用LIPOFECTAMINE轉染時，通常在InM至300nM的濃度范圍內使用反義寡核苷酸。當用電穿孔轉染時，通常在625至20，OOOnM的濃度范圍內使用反義寡核苷酸。
分離 RNA可對總的細胞RNA或po 1 y (A) +mRNA進行RNA分析。分離RNA的方法為本領域所熟知。用本領域熟知的方法制備RNA，例如，根據制造商推薦的操作規程用TRIZOL試劑 (Invitrogen, Carlsbad, CA)進^J0目標水平或表達的抑制的分析因子11核酸的水平或表達的抑制可以用本領域已知的各種方法測試。例如，目標核酸水平可以用例如印記雜交分析(Northen blot analysis)、競爭性聚合酶鏈式反應或定量實時PCR來定量。可對總的細胞RNA或poly (A) +mRNA進行RNA分析。分離RNA的方法為本領域所熟知。印記雜交分析也是本領域的常規方法。定量實時PCR可以根據制造商的說明用加利福尼亞州福斯特市的PE-應用生物系統公司提供的商售ABI PRISM 7600,7700 或7900序列檢測系統方便地完成。目標RNA水平的定量實時PCR分析目標RNA水平的定量可以根據制造商的說明用ABI PRISM 7600、7700或7900序列檢測系統(PE-應用生物系統公司，福斯特市，加利福尼亞州)的定量實時PCR來完成。定量實時PCR的方法為本領域所熟知。在實時PCR之前，分離的RNA要進行逆轉錄酶(RT)反應，以產生隨后可用作實時 PCR擴增的底物的互補DNA(cDNA)。RT和實時PCR反應在同樣的樣本孔中順序進行。RT和實時PCR的試劑從hvitrogen(Carlsl3ad，CA)獲得。RT和實時PCR反應用本領域普通技術人員熟知的方法實現。用實時PCR獲得的基因(或RNA)目標量用如親環素A等表達恒定的基因的表達水平或用RIBOGREENanvitrogen，Inc. Carlsbad, CA)對總RNA的定量來歸一化。親環素 A用實時PCR來定量，與目標同時或多通路或分別地運行。總RNA用RIB0GREEN RNA定量試劑(Invetrogen, Inc. Eugene, OR)來定量。RIB0GREEN 定量 RNA 的方法在 Jones, L. J 等人的工作(Analytical Biochemistry, 1998, 265, 368-374)中講授。CYT0FLU0R 4000 設備 (PE應用生物系統公司)用來測定RIB0GREEN熒光。設計與因子11核酸雜交的探針和引物。設計實時PCR探針和引物的方法為本領域所熟知，可包括使用如 PRIMER EXPRESS 軟件(Applied Biosystems, Foster City, CA)等軟件的使用。蛋白水平分析因子11核酸的反義抑制可以通過測定因子11蛋白水平來評估。因子11的蛋白水平可以用本領域熟知的各種方法來評價或定量，比如免疫沉淀反應、Western印記分析(免疫印記)、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、定量蛋白質分析、蛋白活性分析(例如，凋亡蛋白酶活性分析)、免疫組織化學、免疫細胞化學或熒光活化細胞分選(FACS)。指向目標的抗體可被識別并從如MSRS抗體目錄(Aerie Corporation, Birmingham,MI)等各種來源獲得，或可以通過本領域熟知的常規單克隆或多克隆抗體生產技術來制備。對探測小鼠、大鼠、猴和人的因子11有用的抗體可以通過商業途徑購買。反義化合物的體外測試在動物體內測試了例如反義寡核苷酸的反義化合物，以評價它們抑制因子11表達和產生表型變化的能力，例如，延長的aPTT、與正常PT交匯的延長的aPTT時間、血小板因子4(PF_4)的減少量以及血栓形成減少或血栓形成時間增加。測試可以在正常動物體內或在實驗疾病模型中進行。向動物給藥的反義寡核苷酸在如磷酸鹽緩沖液等藥用可接受的稀釋劑中配制。給藥包括如腹腔注射、靜脈注射以及皮下注射等非腸道給藥途徑。對反義寡核苷酸劑量和給藥頻率的計算在本領域普通技術人員的能力范圍之內，取決于如給藥方式和動物體重等因素。以反義寡核苷酸的處理一段期間之后，從肝臟組織中分離RNA，測定因子11核酸表達的改變。還用凝血酶生成試驗測定了因子11蛋白水平的改變。另外，用已處理動物的血漿測定對例如PT和aPTT等凝結時間的影響。耐受性在一些實施例中，此處提供的化合物表現最低的副作用。副作用包括通常與因子 11靶向無關的對反義化合物的給藥的反應，比如在動物中的炎癥反應。在一些實施例中，化合物被動物很好地耐受。增強的耐受性取決于一些因素，包括但不限于反義化合物的核苷酸序列、核苷酸的化學修飾、反義化合物中未修飾或修飾核苷的特定結構域，或其組合。耐受性取決于許多因素。這些因素包括體重、器官重量、肝功能、腎功能、血小板數、白細胞數。在一些實施例中，此處提供的化合物表現出對器官重量的最低影響。在一些實施例中，化合物表現出脾臟和/或肝臟重量的低于7倍、6倍、5倍、4倍、3倍、2倍或沒有明顯的增加。在一些實施例中，此處提供的化合物表現出對肝功能的最小影響。評價肝功能的因素包括ALT水平、AST水平、血漿膽紅素水平以及血漿白蛋白水平。在一些實施例中，此處提供的化合物表現出ALT或AST的低于7倍、低于6倍、低于5倍、低于4倍、低于3倍、 低于2倍或沒有明顯的增加。在一些實施例中，此處提供的化合物表現出血漿膽紅素水平的低于3倍、低于2倍或沒有明顯的增加。在一些實施例中，此處提供的化合物表現出對腎功能的最低影響。在一些實施例中，此處提供的化合物表現出血漿血液尿素氮(BUN)濃度的低于3倍、至少2倍或沒有明顯的增加。在一些實施例中，此處提供的化合物表現出尿蛋白與肌酐比值的低于6倍、5倍、4 倍、3倍、2倍或沒有明顯的增加。在一些實施例中，此處提供的化合物表現出對血液指標的最低影響。在一些實施例中，此處提供的化合物表現出血小板數的低于60 %、50 %、40 %、30 %、20 %、10 %或5 % 的減少。在一些實施例中，此處提供的化合物表現出單核細胞數的低于4倍、低于3倍、低于2倍或沒有明顯的增加。在一些實施例中，化合物進一步表現出有利的藥物動力學。在一些實施例中，反義化合物在相關生物體液或組織中顯示出相對高的半衰期。在一些實施例中，化合物或組合物進一步表現出有利的粘度。在一些實施例中，化合物或組合物在165-185mg/mL濃度時的粘度僅為40cP。在其他實施例中，化合物表現出上述特征的組合，在動物模型中高效地降低因子 IlmRNA的表達。一些適應癥在一些實施例中，本發明提供了治療個體的方法，包括給藥本發明的一種或多種藥物組合物。在一些實施例中，個體具有血栓栓塞性并發癥。在一些實施例中，個體具有血液凝結紊亂的風險，包括但不限于，梗塞、血栓形成、栓塞以及血栓栓塞，比如如深靜脈血栓形成、肺栓塞、心肌梗塞和中風。這包括個體具有引起血栓形成風險的后天問題、疾病或紊亂，例如手術、癌癥、不動、敗血癥、動脈粥樣硬化、心房顫動等，以及例如抗磷脂綜合癥和常染色體顯性遺傳的因子V Leiden突變等遺傳傾向性。在一些實施例中，個體被鑒定為需要抗凝治療。這樣的個體的例子包括但不限于，那些經受大型矯形手術(例如，髖骨/膝關節置換術或髖骨骨折手術)的人以及如那些經歷心房顫動需防止中風等需要長期治療的病人。在一些實施例中，本發明提供了預防性地降低個體內因子11表達的方法。一些實施例包括通過向需要治療的個體給藥治療有效量的靶向因子11核酸的反義化合物。在一個實施例中，給藥治療有效量的靶向因子11核酸的反義化合物的同時，伴隨著監測個體血清中的因子11的水平，以確定個體對于反義化合物給藥的反應。個體對于反義化合物給藥的反應被內科醫師用來確定治療干預的用量及持續時間。在一些實施例中，靶向因子11核酸的反義化合物的給藥導致因子11的表達至少 15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95 或 99%，或者這些數值中任意兩個所定義的范圍的降低。在一些實施例中，靶向因子11核酸的反義化合物的給藥導致用標準測試測量的血液凝結的測量值的改變，例如但不限于，活化部分凝血活酶時間(aPTT) 測試、凝血酶原時間(PT)測試、凝血酶時間(TCT)、出血時間或D-二聚體。在一些實施例中， 因子11的反義化合物的給藥至少增加了測量值15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、 75、80、85、90、95或99%或者這些數值中任意兩個所定義的范圍。在一些實施例中，因子11 的反義化合物的給藥至少降低了測量值15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、 85,90,95或99%或者這些數值中任意兩個所定義的范圍。在一些實施例中，包含靶向因子11的反義化合物的藥物組合物被用于用來治療遭受或易患血栓栓塞性并發癥的病人的藥劑生產。一些聯合治療在一些實施例中，本發明的一種或多種藥物組合物與一種或多種其他藥劑共同給藥。在一些實施例中，這樣的一種或多種其他藥劑被設計成用于治療本發明的一種或多種藥物組合物所治療的相同的疾病、紊亂或狀況。在一些實施例中，這樣的一種或多種其他藥劑被設計成用于治療不同于本發明的一種或多種藥物組合物所治療的疾病、紊亂或狀況。 在一些實施例中，這樣的一種或多種其他藥劑被設計成用于治療本發明的一種或多種藥物組合物的不希望的副作用。在一些實施例中，本發明的一種或多種藥物組分與另一種藥劑共同給藥以治療其他藥劑的副作用。在一些實施例中，本發明的一種或多種藥物組合物與另一種藥劑共同給藥以產生聯合效果。在一些實施例中，本發明的一種或多種藥物組合物與另一種藥劑共同給藥以產生協同效應。在一些實施例中，本發明的一種或多種藥物組合物與一種或多種其他藥劑同時給藥。在一些實施例中，本發明的一種或多種藥物組合物與一種或多種其他藥劑在不同時間給藥。在一些實施例中，本發明的一種或多種藥物組合物與一種或多種其他藥劑一起制備成單一制劑。在一些實施例中，本發明的一種或多種藥物組合物與一種或多種其他藥劑分別制備。在一些實施例中，可與本發明的藥物組分共同給藥的藥劑包括抗凝劑或抗血小板劑。在一些實施例中，可與本發明的藥物組分共同給藥的藥劑包括NSAID/環氧酶抑制劑， 比如阿司匹林。在一些實施例中，可與本發明的藥物組分共同給藥的藥劑包括二磷酸腺苷(ADP)受體抑制劑，比如氯吡格雷(波立維)和噻氯匹啶(TICLID)。在一些實施例中，可與本發明的藥物組分共同給藥的藥劑包括磷酸二酯酶抑制劑，比如西洛他唑(PLETAL)。在一些實施例中，可與本發明的藥物組合物共同給藥的藥劑包括糖蛋白IIB/IIIA抑制劑，比如阿昔單抗(REOPRO)、埃替非巴肽(INTEGRILIN)、替羅非班(AGGRASTAT)以及去纖苷。在一些實施例中，可與本發明的藥物組合物共同給藥的藥劑包括腺苷再攝取抑制劑，比如雙嘧達莫(PERSANTINE)。在一些實施例中，可與本發明的藥物組合物共同給藥的藥劑包括但不限于，華法林(和相關香豆素)、肝素、直接凝血酶抑制劑(比如來匹盧定、比伐盧定)、阿哌沙班、依諾肝素鈉以及直接干擾特定凝結因子的小分子化合物(例如，干擾因子fe的利伐沙班)。在一些實施例中，可與本發明的因子11特異性抑制劑共同給藥的藥劑包括但不限于，其他因子11抑制劑。在一些實施例中，抗凝劑或抗血小板劑在本發明的藥物組合物給藥之前給藥。在一些實施例中，抗凝劑或抗血小板劑在本發明的藥物組合物給藥之后給藥。 在一些實施例中，抗凝劑或抗血小板劑在本發明的藥物組合物給藥同時給藥。在一些實施例中，共同給藥的抗凝劑或抗血小板劑的劑量與該抗凝劑或抗血小板劑單獨給藥時的給藥劑量相同。在一些實施例中，共同給藥的抗凝劑或抗血小板劑的劑量低于該抗凝劑或抗血小板劑單獨給藥時的給藥劑量。在一些實施例中，共同給藥的抗凝劑或抗血小板劑的劑量高于該抗凝劑或抗血小板劑單獨給藥時的給藥劑量。在一些實施例中，第二個化合物的共同給藥增強了第一個化合物的抗凝效果，以至于化合物的共同給藥會導致高于第一個化合物單獨給藥時的抗凝效果。在其他實施例中，相對于單獨給藥化合物，共同給藥導致了增加的抗凝效果。在一些實施例中，相對于單獨給藥化合物，共同給藥導致了超量增加的抗凝效果。在一些實施例中，第二個化合物的共同給藥會增加抗血栓形成的活性，同時不增加出血風險。在一些實施例中，第一個化合物是反義化合物。在一些實施例中，第二個化合物是反義化合物。在一些實施例中，解毒劑在因子11特異性抑制劑給藥后的任意時間給藥。在一些實施例中，解毒劑在靶向因子11的反義寡核苷酸給藥后的任意時間給藥。在一些實施例中，解毒劑在靶向因子11的反義化合物給藥的幾分鐘、幾小時、幾天、幾周或幾月后給藥。 在一些實施例中，解毒劑與靶向因子11的反義化合物互補(例如，同義鏈)。在一些實施例中，解毒劑是因子7、因子7a、因子11或因子Ila蛋白。在一些實施例中，因子7、因子7a、 因子11或因子Ila蛋白是人因子7、人因子7a、人因子11或人因子Ila蛋白。在一些實施例中，因子7蛋白是N0V0SEVEN。一些共同給藥的抗血小板治療在一些實施例中，因子11抑制劑與抗血小板治療聯用。在一些實施例中，相比于單獨抗血小板治療，與抗血小板治療聯用的因子11抑制劑的給藥導致出血風險的少量至沒有可覺察或可檢測的增加。在一些實施例中，風險概況或風險指標與單獨抗血小板治療相比沒有改變。抗血小板和抗凝血療法聯用在臨床實踐中最頻繁使用于被診斷具有例如血栓栓塞、心房顫動、心瓣膜紊亂、瓣膜性心臟病、中風、CAD的病人以及有機械閥的病人。雙重療法的益處有關對血小板和凝結因子活性兼有抑制的可能的累加效應。雙重療法的風險是增加出血的可能性(Dowd, M. Plenary Sessions/Thrombosis Research 123(2008)) 相比于抗凝血或抗血小板單獨治療，以前的抗血小板和抗凝血療法聯用已經表現出出血風險的增加。這樣的聯用包括Fxa抑制劑(例如阿匹西班和利伐沙班)與ADP受體/P2Y12抑制劑(噻吩并吡啶類，比如氯吡格雷-也被稱為PLAVIX)以及NSAIDs (例如阿司匹林和萘普生)(Kubitza, D. et al.，Br. J. Clin. Pharmacol. 63 :4(2006) ；Wong，P. C. et al. Journal of Thrombosis and Haemostasis 6(2008)；新藥申請的 FDA 咨詢委員會簡 艮文件22-406 Q009))。例如，Wong報道增加特定劑量的阿哌沙班至阿司匹林和至阿司匹林與氯吡格雷中，相比于單用阿司匹林和阿司匹林與氯吡格雷會顯著增加出血時間。Kubitza 報道利伐沙班和萘普生聯合給藥相比于單用萘普生會顯著增加出血時間。例子非限制性披露及通過參考并入文獻盡管此處所述的一些化合物、組合物和方法已經依照某些實施例進行了具體描述，下面的例子僅僅用于說明此處所述的化合物，而非限制。本申請列舉的每個參考文獻都在此被參考并且其全文被并入本申請中。例1 對H印G2細胞中人因子11的反義抑制在體外測試靶向因子11核酸的反義寡核苷酸對因子11 WmRNA的影響。用含75ηΜ 反義寡核苷酸的脂質體試劑轉染密度為每孔10，000個細胞的培養的H印G2細胞。在處理約 24小時后，從細胞中分離RNA，以定量實時PCR測定因子11的mRNA水平。根據RIB0GREEN 測定的總的RNA量對因子11的mRNA水平進行校正。結果以相對于未處理的對照細胞的因子11的抑制百分比來表示。表1和2中的嵌合型反義寡核苷酸被設計為5-10-5 MOE gapmer。gapmer長度為 20個核苷酸，其中，中央的間隙區段由10個2’ -脫氧核苷酸組成，兩邊(在5’和3’方向) 為各包含5個核苷酸的側翼。5’側翼區段中的每個核苷酸和3’側翼區段中的每個核苷酸有2’ -MOE修飾。每條gapmer中的核苷內連接是磷硫酰(P =幻連接。每條gapmer中的所有胞嘧啶核苷都是5-甲基胞嘧啶核苷。“目標起始位點”是指gapmer靶向的最5’端的核苷酸。“目標終止位點”是指gapmer靶向的最3’端的核苷酸。表1中所列的每條gapmer 靴向SEQ ID NO :1(GENBANK登錄號NM_000128. 3)，表2中所列的每條gapmer靶向SEQ ID NO 2 (GENBANK 登錄號 NT_022792. 17，19598000 至 19624000 缺失)。表1具有靶向SEQ ID NO=I的5_10_5M0E側翼和脫氧間隙的嵌合型反義寡核苷酸對人因子IlmRNA水平的抑制
權利要求
1.一種化合物，包含由12至30個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸，并且所述修飾寡核苷酸包含包括SEQ ID NO 223的至少12個連續核苷堿基的核苷堿基序列。
2.如權利要求1所述的化合物，由單鏈修飾寡核苷酸構成。
3.如權利要求2所述的化合物，其中，所述修飾寡核苷酸的核苷堿基序列與SEQID NO 1的核苷堿基序列100%互補。
4.如權利要求2所述的化合物，其中，至少一個核苷內連接是修飾的核苷內連接。
5.如權利要求4所述的化合物，其中，每一個核苷內連接是磷硫酰核苷內連接。
6.如權利要求1所述的化合物，其中，至少一個核苷包含修飾糖。
7.如權利要求6所述的化合物，其中，至少一個修飾糖是雙環糖。
8.如權利要求7所述的化合物，其中，所述至少一個雙環糖的每一個包含4’-(CH2)n-0-2’ 橋聯，其中η為1或2。
9.如權利要求7所述的化合物，其中，所述至少一個雙環糖的每一個包含 4’ -CH(CH3)-0-2’ 橋聯。
10.如權利要求6所述的化合物，其中，至少一個修飾糖包含2’-0-甲氧乙基基團。
11.如權利要求1所述的化合物，包含至少一個四氫吡喃修飾的核苷，其中，四氫吡喃環取代了呋喃環。
12.如權利要求11所述的化合物，其中，所述至少一個四氫吡喃修飾的核苷中的每一個包含如下結構其中，Bx是可選擇地被保護的雜環堿基。
13.如權利要求2所述的化合物，其中，至少一個核苷包含修飾核苷堿基。
14.如權利要求13所述的化合物，其中，所述修飾核苷堿基是5-甲基胞嘧啶。
15.如權利要求1所述的化合物，其中，所述修飾寡核苷酸包含 由連接的脫氧核苷組成的間隙區段；由連接的核苷組成的5’側翼區段； 由連接的核苷組成的3’側翼區段；其中，所述間隙區段直接相鄰于且位于5’側翼區段和3’側翼區段之間，其中，每一側翼區段的每個核苷包含修飾糖。
16.如權利要求15所述的化合物，其中，所述修飾寡核苷酸包含 由10個連接的脫氧核苷組成的間隙區段；由5個連接的核苷組成的5’側翼區段； 由5個連接的核苷組成的3’側翼區段；其中，所述間隙區段直接相鄰于且位于5’側翼區段和3’側翼區段之間，其中，每一側翼區段的每個核苷包含2’ -0-甲氧乙基糖；其中，每一個核苷內連接是磷硫酰連接。
17.如權利要求16所述的化合物，其中，每一個胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
18.如權利要求2或17所述的化合物，其中，所述修飾寡核苷酸由20個連接的核苷所組成。
19.一種如權利要求1至18中的任一項的用于治療血栓栓塞性并發癥的化合物。
20.如權利要求19所述的化合物，其中，所述動物是人。
21.如權利要求20所述的化合物，用于預防深靜脈血栓形成。
22.如權利要求20所述的化合物，用于預防肺栓塞。
23.如權利要求19所述的中化合物，用于與選自阿司匹林、氯吡格雷、雙嘧達莫、肝素、 來匹盧定、噻氯匹啶、華法林、阿哌沙班、利伐沙班、依諾肝素鈉和因子敘抑制劑的任意組共同給藥。
24.如權利要求19所述的化合物，用于與選自阿司匹林、氯吡格雷、雙嘧達莫、肝素、來匹盧定、噻氯匹啶、華法林、阿哌沙班、利伐沙班、依諾肝素鈉和因子)(a抑制劑的任意組隨附給藥。
25.如權利要求23所述的化合物，用于非消化道給藥。
26.如權利要求M所述的化合物，用于非消化道給藥。
27.如權利要求25所述的化合物，用于皮下或靜脈給藥。
28.如權利要求沈所述的化合物，用于皮下或靜脈給藥。
29.一種化合物，包含由12至30個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸，其中，所述修飾寡核苷酸與因子11核酸互補，用于治療凝血紊亂。
30.如權利要求1至18中任一項所述的化合物與選自阿司匹林、氯吡格雷、雙嘧達莫、 肝素、來匹盧定、噻氯匹啶、華法林、阿哌沙班、利伐沙班和依諾肝素鈉的任意組，在用于治療血栓栓塞性并發癥的藥劑生產中的用途。
31.一種組合物，包含由12至30個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸，并且該修飾寡核苷酸包含包括SEQ ID NO :223的至少12個連續核苷堿基的核苷堿基序列，或其鹽以及藥用可接受的載體或稀釋劑。
32.如權利要求31所述的組合物，由單鏈寡核苷酸組成。
33.如權利要求32所述的組合物，其中，所述修飾寡核苷酸由20個連接的核苷所組成。
34.一種方法，包括鑒定具有血栓栓塞性并發癥風險的動物；以及將治療有效量的包含由12至30個連接的核苷所組成的修飾寡核苷酸的化合物給藥于所述有風險的動物，其中，所述修飾的寡核苷酸與因子11核酸互補。
35.如權利要求34所述的方法，其中，血栓栓塞性并發癥是深靜脈血栓形成、肺栓塞或其組合。
36.一種方法，包括鑒定患有凝血紊亂的動物；以及將治療有效量的包含由12至30個連接的核苷所組成的修飾寡核苷酸的化合物給藥于該動物，其中，所述修飾的寡核苷酸與因子U核酸互補。
37.如權利要求36所述的方法，包括將化合物與選自阿司匹林、氯吡格雷、雙嘧達莫、 肝素、來匹盧定、噻氯匹啶、華法林、阿哌沙班、利伐沙班、依諾肝素鈉和因子敘抑制劑的任意組共同給藥。
38.一種方法，包括降低動物中血栓栓塞性并發癥的風險；以及將治療有效量的包含由12至30個連接的核苷所組成的修飾寡核苷酸的化合物給藥于該動物，其中，所述修飾的寡核苷酸與因子U核酸互補。
39.一種方法，包括治療治療動物中凝血紊亂；以及將治療有效量的包含由12至30個連接的核苷所組成的修飾寡核苷酸的化合物給藥于該動物，其中，所述修飾的寡核苷酸與因子U核酸互補。
40.如權利要求39所述的方法，包括通過將修飾寡核苷酸的解毒劑給藥以逆轉所述動物體內因子11的抑制。
41.如權利要求39所述的方法，其中，所述解毒劑是與所述修飾寡核苷酸互補的寡核苷酸。
42.如權利要求40所述的方法，包括通過給藥選自因子7、因子7a、因子11或因子1Ia 蛋白的任意組，以逆轉所述動物體內因子11的抑制。
43.一種方法，包括鑒定具有血栓栓塞性并發癥風險的動物；以及向所述有風險的動物給藥治療有效量的因子11特異性抑制劑與抗血小板治療藥物。
44.一種方法，包括鑒定患有凝血紊亂的動物；以及向所述動物給藥治療有效量的因子11特異性抑制劑與抗血小板治療藥物。
45.一種方法，包括降低動物體內血栓栓塞性并發癥的風險；以及向所述動物給藥治療有效量的因子11特異性抑制劑與抗血小板治療藥物。
46.一種方法，包括治療動物體內凝血紊亂；以及向所述動物給藥治療有效量的因子11特異性抑制劑與抗血小板治療藥物。
47.如權利要求43至46中任一項所述的方法，其中，所述抗血小板治療藥物選自ADP 受體抑制劑、NSAID、磷酸二酯酶抑制劑、糖蛋白IIB/IIIA抑制劑或腺苷重攝取抑制劑或其組合。
48.如權利要求47所述的方法，其中，NSAID是阿司匹林、萘普生或二者的組合。
49.如權利要求47所述的化合物，其中，ADP受體/P2Y12抑制劑是噻吩吡啶。
50.一種化合物，包含由12至30個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸，并且該修飾寡核苷酸包含包括與SEQ ID NO :1的核苷堿基738至762的等長部分互補的至少8個連續核苷堿基部分的核苷堿基序列；其中，所述修飾寡核苷酸的核苷堿基序列與SEQ ID N0:1至少 90%互補。
51.一種化合物，包含由12至30個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸，并且該修飾寡核苷酸包含包括與SEQ ID NO 1的核苷堿基656至704的等長部分互補的至少8個連續核苷堿基部分的核苷堿基序列；其中，所述修飾寡核苷酸的核苷堿基序列與SEQ ID N0:1至少 90%互補。
52.一種化合物，包含由12至30個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸，并且該修飾寡核苷酸包含包括與SEQ ID NO 1的核苷堿基1018至1042的等長部分互補的至少8個連續核苷堿基部分的核苷堿基序列；其中，所述修飾寡核苷酸的核苷堿基序列與SEQ ID N0:1至少90%互補。
53.一種化合物，包含由12至30個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸，并且該修飾寡核苷酸包含包括與SEQ ID NO 1的核苷堿基1062至1091的等長部分互補的至少8個連續核苷堿基部分的核苷堿基序列；其中，所述修飾寡核苷酸的核苷堿基序列與SEQ ID N0:1至少90%互補。
54. 一種化合物，包含由12至30個連接的核苷組成的修飾寡核苷酸，并且該修飾寡核苷酸包含包括與SEQ ID NO 1的核苷堿基1275至1318的等長部分互補的至少8個連續核苷堿基部分的核苷堿基序列；其中，所述修飾寡核苷酸的核苷堿基序列與SEQ ID N0:1至少90%互補。
全文摘要
此處披露了用于在需要的個體中降低因子11以及治療或預防血栓栓塞性并發癥的反義化合物和方法。可以通過將靶向因子11的反義化合物給藥而改善的疾病狀況的例子包括血栓形成、栓塞以及血栓栓塞，比如如深靜脈血栓形成、肺栓塞、心肌梗塞和中風。靶向因子11的反義化合物也可以用作防止個體血栓形成及栓塞風險的預防性治療。
文檔編號A61K31/70GK102245186SQ200980150276
公開日2011年11月16日 申請日期2009年10月15日 優先權日2008年10月15日
發明者A·M.·斯夫科夫斯基, B·P.·莫尼亞, J·R.·克羅斯比, S·M.·弗賴爾, 張宏, 趙臣廣 申請人:Isis制藥公司