一種液體型纖維蛋白原檢測試劑及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及體外診斷試劑技術領域，具體設及一種穩定的液體型纖維蛋白原檢測 試劑及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 纖維蛋白原（Fibrinogen, FIB)是肝臟合成的一種血漿球蛋白，是體內重要的凝 血因子，其主要的生理功能是作為凝血因子I參與體內凝血過程。血漿中的纖維蛋白原在 過量纖維蛋白原的作用下，它會由可溶的蛋白轉變為不可溶的聚合物，從而形成纖維蛋白 凝塊。血漿的凝集時間和纖維蛋白質量分數成反比，在纖維蛋白原過量的情況下，測定的血 漿的凝集時間，通過纖維蛋白原標準曲線計算公式便可得到待測纖維蛋白原質量分數。
[0003] 隨著血栓與止血檢測在臨床上的廣泛應用，纖維蛋白原（FIB)檢測已成為出血和 血栓檢驗的常規檢測項目，具有重要的臨床診斷意義。
[0004] 纖維蛋白原的測定過程受多種因素的影響，其中試劑的質量是最關鍵因素，由于 目前國產的纖維蛋白原檢測試劑普遍存在產品質量不穩定、敏感性差的問題，致使檢測結 果不穩定，不同的臨床檢驗實驗室之間測得的結果難W比較，因此目前臨床實驗室所使用 的試劑絕大部分為進口產品，價格昂貴。另一方面，由于試劑的穩定性問題，目前國內外的 纖維蛋白原檢測試劑幾乎均為凍干粉劑型，使用前需要進行復溶，操作麻煩、瓶間差異大， 且試劑復溶后質量穩定性差。

【發明內容】

[0005] 基于此，為了克服上述現有技術的缺陷，本發明提供了一種液體型纖維蛋白原檢 測試劑及其制備方法。
[0006] 為了實現上述發明目的，本發明采取了 W下技術方案：
[0007] 一種液體型纖維蛋白原檢測試劑，包括：
[000引凝血酶試劑，其包括凝血酶、氨基酸、表面活性劑、牛血清白蛋白、明膠、甘露醇和 水；
[0009] 樣本稀釋液，其包括咪挫、氯化鋼和水。
[0010] 所述凝血酶試劑的抑值為6. 0~8. 0。
[0011] 所述凝血酶試劑的凝血酶酶活力2000~35000lU/mL。
[0012] 所述氨基酸的質量分數為3%~10% ;
[0013] 所述表面活性劑的體積分數為0. 1 %~0. 5% ;
[0014] 所述牛血清白蛋白的質量分數為6%~15% ;
[0015] 所述明膠的質量分數為0. 1 %~0. 5% ;
[0016] 所述甘露醇的質量分數為3%~10%。
[0017] 還包括緩沖鹽，且其濃度為40~500mmol/L。
[001引還包括防腐劑，且其質量分數為0. 1%。
[0019] 所述樣本稀釋溶液的抑值為6. 0~8. 0。
[0020] 所述咪挫質量分數為0. 15%~0. 5% ;
[0021] 所述氯化鋼質量分數為0. 5%~2% ;
[0022] 所述氨基酸為甘氨酸；
[0023] 所述表面活性劑為吐溫60或吐溫80。
[0024] 一種液體型纖維蛋白原檢測試劑的制備方法，包括：
[0025] 保護液配制；將甘氨酸、吐溫60或吐溫80、牛血清白蛋白、明膠、甘露醇溶解于水 中攬拌溶解，并調節抑值為6. 0~8. 0 ;
[0026] 凝血酶試劑配制；用保護液溶解凝血酶凍干粉得到凝血酶試劑。
[0027] 樣本稀釋液配制；稱取咪挫和氯化鋼，加入純化水，攬拌進行溶解，調節抑值為 6.0~8.0,得到樣本稀釋液。
[002引與現有技術相比，本發明具有W下有益效果：
[0029] 1)試劑生產過程簡化，生產設備簡單，無凍干過程，生產成本低；
[0030] 。使用為即開即用型，不需復溶，操作方便；
[0031] 3)不存在因所用水的質量或體積差異造成的差異，瓶間差異在3% W內；
[0032] 試劑穩定性高，瓶間一致性好，37°C熱穩定在30天W上，2~8°C密封儲存可穩定 18個月W上。
【附圖說明】
[0033] 圖1為本發明一種液體型纖維蛋白原檢測試劑的制備方法流程示意圖。
【具體實施方式】
[0034] 為了使本發明實現的技術手段、創作特征、達成目的與功效易于明白了解，下面結 合具體圖示進一步闡述本發明。
[0035] 如圖1所示，一種液體型纖維蛋白原檢測試劑制備方法，包括凝血酶試劑的配制 包括：
[0036] 保護液配制；將緩沖劑、含氨基酸、表面活性劑、牛血清白蛋白、明膠、甘露醇、防腐 劑溶解于水中攬拌溶解，并調節抑值為6. 0~8. 0 ;
[0037] 凝血酶試劑配制；用保護液溶解凝血酶凍干粉得到凝血酶試劑。
[003引樣本稀釋液配制；稱取咪挫和氯化鋼，加入純化水，攬拌進行溶解，調節抑值為 6.0~8.0,得到樣本稀釋液。
[0039] 緩沖劑為Tris，濃度為40~SOOmmol/l，氨基酸為甘氨酸，質量分數為3 %~ 10%，表面活性劑為 Tween-60 (吐溫 60)或 Tween-80,用量（v/v)為 0. 1 %~0. 5% ;BSA 質量分數為6%~15%，明膠質量分數為0. 1 %~0. 5%，甘露醇質量分數為3%~10%，防 腐劑為疊氮鋼，質量分數0. 1 %。
[0040] 凝血酶試劑配制；用保護液溶解凝血酶凍干粉得到凝血酶試劑；
[0041] 凝血酶為商品化的牛源凝血酶凍干粉，終濃度為2000IU~3500IU/mL。
[0042] 樣本稀釋液配制；稱取咪挫和氯化鋼，加入純化水，攬拌進行溶解，抑值為6. 0~ 8. 0，
[0043] 得到樣本稀釋液；樣本稀釋液咪挫的質量分數為0. 15%~0. 5%，氯化鋼的質量 分數為0. 5%~2%。
[0044] 凝血酶試劑的配制可先于或晚于樣本稀釋液配制進行，也可W同時進行。
[0045] 本申請還公開了一種液體型纖維蛋白原檢測試劑，包括凝血酶試劑和樣本稀釋 液，該凝血酶試劑中含有凝血酶、氨基酸、表面活性劑、牛血清白蛋白、明膠和甘露醇，溶劑 為水，抑為6. 0-8.0。其中，氨基酸優選甘氨酸，表面活性劑優選吐溫60或吐溫80。該樣 本稀釋液含有咪挫和氯化鋼，溶劑為水。
[0046] 本申請中甘氨酸、甘露醇與其他試劑組分配合能夠很好地保持凝血酶在液體試劑 中的穩定性，制備的液體型試劑在2~8°C密封儲存18個月后，用該試劑進行纖維蛋白原 檢測，檢測結果偏移在10% W內。另外，該凝血酶試劑還可W含有緩沖鹽更好地維持試劑 的抑值，W更好地保持凝血酶的活性。該凝血酶試劑還可W含有防腐劑，W可W抑制試劑 中維生物的生長，有利于試劑長期保存。常用的診斷試劑的防腐劑均可使用，例如疊氮鋼。
[0047] 下面W-個具體實施例具體介紹一個液體型纖維蛋白原檢測試劑的組成、制備方 法，W及穩定性性能。
[0048] 實施例1液體型纖維蛋白原檢測試劑的制備方法
[0049] 1保護液配制；稱取Tris6. 06g(50mmol/L)、甘氨酸50g(質量分數為5% )、BSA lOOg (質量分數為10 % )、明膠2g (質量分數為0. 2 % )、甘露醇40g (質量分數為4 % )、 Tween - 60 2血(v/v為0. 2% )、疊氮鋼Ig(質量分數為0. 1% )，加入1L純化水，攬拌使其 充分溶解，用0.1mol/L的化0H調抑為7. 0。
[0化日]2過濾除菌：用水潤濕0. 45 y m的=醋酸纖維素，緊貼放在抽濾過濾器砂巧上對保 護液進行抽濾，收集濾液得到濾清的保護液，去除配制過程中的少量不溶物。
[0化^ 3凝血酶試劑配制：取10支1血規格、200000IU/血的凝血酶凍干品，分別用1血 保護液溶解10分鐘后，轉移至盛保護液的容器中，清洗3次，也全部轉移至盛保護液的容器 中，合并得到約1L凝血酶試劑。
[005引 4樣本稀釋液配制；稱取2g咪挫、lOg氯化鋼，用1L純化水進行溶解，用0.1 mo 1/ L的鹽酸調整抑值為7. 4,得到樣本稀釋液。
[005引 5纖維蛋白原（FIB)檢測試劑性能檢測：
[0化4] 檢測方法為；待測血漿或質控品用樣本稀釋液先W 1:10稀釋，然后取200 y L作為 樣本，37°C育溫3分鐘后加入100 y L凝血酶試劑，W Sysmex CA-1500血凝儀凝固法進行檢 測。
[00巧]1)準確性檢測
[0化6] 上述凝血酶試劑及樣本稀釋液按上述檢測方法在Sysmex CA-1500血凝儀上 用Siemens FI B試劑校準按說明書操作進行校準，檢測W冊纖維蛋白原標準物Blood Coagulat ion Fibrinogen Plasma (09/264)，結果如下表 1 ;
[0057] 表1試劑的校準及準確性檢測結果（單位；mg/化）
[005引
【主權項】
1. 一種液體型纖維蛋白原檢測試劑，其特征在于，包括： 凝血酶試劑，其包括凝血酶、氨基酸、表面活性劑、牛血清白蛋白、明膠、甘露醇，溶劑為 水； 樣本稀釋液，其包括咪唑、氯化鈉，溶劑為水。
2. 根據權利要求1所述的液體型纖維蛋白原檢測試劑，其特征在于，所述凝血酶試劑 的pH值為6. O~8.0。
3. 根據權利要求2所述的液體型纖維蛋白原檢測試劑，其特征在于，所述凝血酶試劑 的凝血酶酶活力2000~35000IU/mL。
4. 根據權利要求1至3中任意一項所述的液體型纖維蛋白原檢測試劑，其特征在于，所 述氨基酸的質量分數為3%~10% ; 所述表面活性劑的體積分數為〇. 1 %~〇. 5% ; 所述牛血清白蛋白的質量分數為6%~15% ; 所述明膠的質量分數為〇. 1 %~〇. 5% ; 所述甘露醇的質量分數為3%~10%。
5. 根據權利要求4所述的液體型纖維蛋白原檢測試劑，其特征在于，所述氨基酸為甘 氨酸。
6. 根據權利要求5所述的液體型纖維蛋白原檢測試劑，其特征在于，所述表面活性劑 為吐溫60或吐溫80。
7. 根據權利要求1所述的液體型纖維蛋白原檢測試劑，其特征在于，所述樣本稀釋溶 液的pH值為6.0~8.0。
8. 根據權利要求1或7所述的液體型纖維蛋白原檢測試劑，其特征在于， 所述咪唑質量分數為0. 15%~0. 5% ; 所述氯化鈉質量分數為〇. 5%~2%。
9. 一種液體型纖維蛋白原檢測試劑的制備方法，其特征在于，包括： 保護液配制：將甘氨酸、吐溫60或吐溫80、牛血清白蛋白、明膠、甘露醇溶解于水中攪 拌溶解，并調節PH值為6. 0~8. 0 ; 凝血酶試劑配制：用保護液溶解凝血酶凍干粉得到凝血酶試劑。
10. 根據權利要求9所述的液體型纖維蛋白原檢測試劑制備方法，其特征在于，樣本稀 釋液配制：稱取咪唑和氯化鈉，加入純化水，攪拌進行溶解，調節PH值為6. 0~8. 0,得到樣 本稀釋液。
【專利摘要】本發明公開一種液體型纖維蛋白原檢測試劑及其制備方法，制備方法包括1)保護液配制：將緩沖劑、含氨基酸、表面活性劑、牛血清白蛋白、明膠、甘露醇、防腐劑溶解于水中攪拌溶解，并調節pH值為6.0～8.0；2)凝血酶試劑配制：用步驟2)得到的保護液溶解凝血酶凍干粉得到凝血酶試劑。一種液體型纖維蛋白原檢測試劑,包括：凝血酶試劑，其包括凝血酶、緩沖劑、氨基酸、表面活性劑、牛血清白蛋白、明膠、甘露醇、防腐劑和水。本發明試劑生產過程簡化，生產設備簡單，生產成本低；即開即用型，瓶間差異小；試劑穩定性高。
【IPC分類】C12Q1-56
【公開號】CN104630325
【申請號】CN201510058314
【發明人】艾峰, 肖國偉, 潘仁斌
【申請人】上海長島生物技術有限公司
【公開日】2015年5月20日
【申請日】2015年2月4日