專利名稱：陰離子型或陽離子型樹枝狀聚合物抗微生物或抗寄生物的組合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及抑制微生物和寄生物劑的方法，且更具體地說，本發明涉及樹枝狀聚合物作為由諸如細菌、真菌或寄生物導致的人體和非人體的動物體患者感染的抑制劑的用途。
國際專利申請號PCT/AU95/00350(WO 95/34595)和PCT/AU97/00447(WO 98/03573)中公開了諸如帶有多個端基的聚酰氨基胺或聚賴氨酸樹枝狀聚合物這樣的樹枝狀聚合物，其中至少一個端基帶有與之結合或連接的含陰離子或陽離子的部分。將這些公開的國際專利申請的內容引入本文作為參考。
本發明提供了樹枝狀聚合物在抑制包括細菌和真菌病原體在內的微生物劑和寄生物劑中的用途。
發明概括本發明提供了一種預防性或治療性抑制人體或非人體的動物體患者體內微生物或寄生物劑的方法，該方法包括對所述患者給予有效量的帶有多個端基的樹枝狀聚合物的步驟，其中至少一個所述端基帶有與之結合或連接的含陰離子或陽離子的部分。
用于本發明方法的特別優選的化合物是帶有下列與其端基連接的部分的樹枝狀聚合物含磺酸的部分、含羧酸的部分、含磷酸和膦酸的部分、含硼酸的部分、含神經氨酸或唾液酸的部分或含神經氨酸或唾液酸的部分；含伯氨基、仲氨基、叔氨基或季氨基的部分、含吡啶鎓的部分；含鈲鹽的部分；含脒鎓(amidinium)的部分；含苯酚的部分；具有酸性或堿性氫的雜環；含兩性離子的部分或上述部分的混合物。
將用于本發明方法的化合物在本文中稱作聚離子型樹枝狀聚合物并將該術語在本說明書的上下文和權利要求中使用，它不僅包括樹枝狀聚合物本身，而且包括其藥物上或獸藥上可接受的鹽，例如諸如鈉、鉀或鈣鹽這樣的堿金屬鹽或堿土金屬鹽以及諸如氟離子、氯離子、溴離子、碘離子、檸檬酸根、乙酸根、對甲苯磺酸根等這樣的藥物上可接受的陰離子。發明詳述用于本發明的優選化合物包括通式Ⅰ的聚離子型樹枝狀聚合物 其中I是引發劑核；Z是內部支化單元；n是代表樹枝狀聚合物代數的整數；且
A是可以通過任選的連接基團X與內部支化單元Z連接的含陰離子或陽離子的部分。
樹枝狀聚合物是大分子的多支化合物，它通過從最初的核分子開始經添加連續“代(generation)”的連續層或階段的重迭代反應順序來構成三維高度有序的聚合物化合物。樹枝狀聚合物具有下列特征ⅰ引發劑核(Ⅰ)可以帶有一個或多個反應部位并且是點樣或顯著大小以便獲得最終的樹枝狀聚合物拓撲結構；ⅱ支化重復單元(Z)層與引發劑核連接；ⅲ官能端基(諸如A部分)任選地通過連接基團(諸如連接基團X)與樹枝狀聚合物表面結合。本發明使用樹枝狀結構作為連接離子部分的構架；本發明并不限于本文具體描述的球形樹枝狀聚合物，而可以以任意樹枝狀結構為基礎。各種形狀或結構的樹枝狀聚合物對本領域技術人員來說是眾所周知的。
樹枝狀聚合物的制備方法是眾所周知的且例如通過美國專利4289872和4410688(描述以多層賴氨酸單元為基礎的樹枝狀聚合物)以及美國專利4,507,466、4,558,120、4,568,737和4,587,329(描述以包括聚酰氨基胺或PAMAM樹枝狀聚合物在內的其它單元為基礎的樹枝狀聚合物)來描述。這些美國專利中所公開的樹枝狀聚合物被描述為適用于在制備紙中作為諸如作為表面修飾劑、作為金屬螯合劑、作為反乳化劑或油/水乳劑、濕強度劑和適用于作為改變諸如漆這樣的含水劑粘度的試劑。在美國專利4,289,872和4,410,688中還提示了可以將以賴氨酸單元為基礎的樹枝狀聚合物用作制備藥物劑型的基質。
國際專利公開號WO88/01178、WO88/01179和WO88/01180公開了將樹枝狀聚合物與另一種諸如攜帶的藥物或農業物質這樣的物質接合或連接的接合物。此外，國際專利公開號WO95/24221公開了由至少一種與可以是生物反應修飾劑的載體物質連接的樹枝狀聚合物和任選的靶物定向劑組成的樹枝狀聚合物接合物。這些專利公開以及上述美國專利中包括廣泛公開的各種樹枝狀聚合物及其制備方法并將這些公開文獻中每一篇的內容均引入本文作為參考。
在最廣義的意義上理解本文所用的術語“樹枝狀聚合物”且在其范圍內包括如專利公開號WO88/01178、WO88/01179和WO88/01180中所公開的這些樹枝狀聚合物的所有形式和組合物。該術語還包括在這些專利公開文獻中所公開的連接或橋連的樹枝狀聚合物。
本發明優選的樹枝狀聚合物包括與至少兩個樹枝狀分支共價結合的多價核且優選通過至少兩代擴展。特別優選的樹枝狀聚合物是聚酰氨基胺(PAMAM)樹枝狀聚合物、PAMAM(EDA)樹枝狀聚合物、聚(丙烯亞胺)(poly(propyleneimine)(PPI))樹枝狀聚合物和聚賴氨酸樹枝狀聚合物。
根據本發明，樹枝狀聚合物表面上端基中的至少一個且優選顯著數量的端基帶有與之結合的含陰離子或陽離子的部分。樹枝狀聚合物的分支可以在氨基或其它反應性官能基諸如OH、SH等上封端，隨后這些基團與陰離子或陽離子部分反應。如果樹枝狀聚合物的端基是胺基，那么含陰離子或陽離子的部分可以通過包括酰胺和硫脲鍵在內的各種官能基與該樹枝狀聚合物連接。可以與樹枝狀聚合物端基結合的優選的含陰離子或陽離子的部分包括含磺酸的部分、含羧酸的部分(包括含神經氨酸和唾液酸的部分和含修飾的神經氨酸和唾液酸的部分)、含硼酸的部分、含磷酸和膦酸的部分(包括含酯化的磷酸和膦酸的部分)和含伯氨基、仲氨基、叔氨基或季氨基的部分、含吡啶鎓的部分、含鈲鹽的部分、含脒鎓的部分、含苯酚的部分、具有酸性或堿性氫的雜環、含兩性離子的部分或上述部分的混合物。
可以與氨基或其它端基結合或連接的合適的含陰離子和陽離子的部分包括例如下列基團(其中n是0或正整數，更具體地說，n是0或1-20的整數)-NH(CH2)nSO3--(CH2)nSO3--Ar(SO3-)n-CH2CH(SO3-)COOH -CH(SO3)CH2COOH -ArX(CH2)nSO3-X=O,S,NH -ArXP(=O)(OR)2X=O,CH2,CHF,CF2R=烷基，芳基，H,Na-ArXP(=O)(OR1)(NR2R3)X=O,CH2,CHF,CF2R1=烷基，芳基，H,Na R2,R3=基，芳基-Ar[P(=O)(OR)2]n R=烷基，芳基，H,Na n=1-3-Ar[B(OH)2]nn=1-3 -Ar[COOH]nn=1-3 R=烷基或芳烷基；R1、R2、R3(可以相同或不同)=烷基或芳烷基 除上述之外，各種含神經氨酸或唾液酸的部分或含修飾的神經氨酸或唾液酸的部分可以與本發明的樹枝狀聚合物結合或連接。這些部分包括各種N-和O-取代的神經氨酸衍生物，特別是諸如N-乙酰基、O-乙酰基和N-乙醇酰衍生物這樣的N-和O-酰基衍生物以及神經氨酸基被修飾的部分。適當修飾的神經氨酸基團包括4-位上被氨基、酰氨基、氰基、疊氮基或胍基所取代的基團以及不飽和神經氨酸基團。這些部分可以通過2-、7-、9-或5-NAc位與樹枝狀聚合物連接。
優選的情況是，在通式Ⅰ的聚離子型樹枝狀聚合物中，n是1-20或以上的整數；更優選1-10。另外優選的情況是，樹枝狀聚合物至少包括3個或更多個端基。
可以起樹枝狀聚合物與A部分之間間隔基作用的任選的連接基團可以由烷基鏈(任選地被取代或分支)、烷氧基、聚烷氧基、烷硫基或聚烷硫基鏈(可以被取代或不被取代)或鏈烯基、多個鏈烯基、炔基或多個炔基鏈(可以被取代或不被取代)組成。合適的間隔基鏈包括式-(CH2)m-Z-(CH2)m-的基團，其中Z是-CH2-、-CH=CH-、-C≡C-、-O-或-S-，且m是1-15的整數。
通過本領域技術人員眾所周知的標準化學方法可以制備本發明的陰離子型或陽離子型樹枝狀聚合物。合適的方法例如下列實施例中的描述。
如上所述，已經發現本發明的陰離子型或陽離子型樹枝狀聚合物可抑制微生物或寄生物劑。本文所用的術語“微生物劑”用來指細菌和酵母或真菌劑，特別是細菌和酵母或真菌的病原體。因此，該術語包括但不限于革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌諸如大腸桿菌、鼠傷寒沙門氏菌以及鏈球菌屬、葡萄球菌屬、志賀氏菌屬、假單胞菌屬、梭狀芽孢桿菌屬、奈瑟氏球菌屬和肺炎球菌屬的種。此外，該術語包括諸如假絲酵母屬這樣的酵母病原體和諸如煙曲霉這樣的真菌病原體。
本文所用的術語“寄生物劑”特別指的是寄生性病原體，包括但不限于諸如瘧原蟲屬、錐蟲屬和利什曼蟲屬(Leischmania)的種類、鼠弓形體(Toxoplasma gondii)、卡氏肺囊蟲(Pneumocystis carinii)和Cryptosporidium parvum這樣的寄生物劑。
本文所用的術語“抑制”在最廣泛的意義上包括對人體或非人體的動物體患者體內由微生物或寄生物病原體導致感染的完全或部分抑制或壓制作用或對這類由微生物或寄生物病原體導致患者的感染的病原性作用完全或部分抑制或壓制作用。該術語還用于包括預防性和治療性的治療。
因此，本發明在另一個方面中提供了一種用于預防性或治療性抑制人體或非人體的動物體患者體內微生物或寄生物劑的藥物組合物或獸藥組合物，它包括如上述概括的樹枝狀聚合物以及至少一種藥物上或獸藥上可接受的載體或稀釋劑。
這類組合物的制劑對本領域技術人員來說是眾所周知的。合適的藥物上可接受的載體和/或稀釋劑包括任意和所有的常用溶劑、分散介質、填充劑、固體載體、水溶液、包衣材料、抗菌劑和抗真菌劑、等滲和延緩吸收劑等。這類介質和試劑在活性物質中的應用在本領域中是眾所周知的且通過《Remington氏藥物科學》(Remington’sPharmaceutical Sciences)第18版，Mack Publishing Company,Pennsylvania,USA中的實例來描述。除任意常用介質或試劑與活性組分不相容外，所關注的是它們在本發明藥物組合物中的應用。還可以將補充的活性組分混入組合物。
特別有利的是配制給藥方便和劑量均勻的單位劑型形式的組合物。本文所用的單位劑型指的是適合作為所治療的人受治療者的單位劑型的物理上可分散的劑型；含有預定量活性組分與所需藥物上可接受載體和/或稀釋劑的各劑型適合于產生所需的治療作用。對本發明新型單位劑型的說明由下列因素來決定并直接取決于下列因素(a)活性組分的獨特特性和所獲得的特定治療作用和(b)化合這類用于特定療法的活性組分的領域中固有的限制。
在另一個方面中，本發明提供了如上述概括的有效量的樹枝狀聚合物通過抑制微生物或寄生物而預防性或治療性治療人體或非人體的動物體患者或在制備用于預防性或治療性治療人體或非人體的動物體患者的藥劑中的用途。
可利用各種給藥途徑。當然，所選擇的特殊方式取決于所治療的特定疾病和達到治療功效所需的劑量。一般來說，使用醫療上可接受的任意給藥方式、即產生本發明活性成分的治療水平而不會導致臨床上不可接受的不良反應的任意方式可以實施本發明的方法。這類給藥方式包括口服、直腸、局部、鼻部、吸入、經皮或非腸道(例如皮下、肌內和靜脈內)途徑。用于口服給藥的制劑包括諸如膠囊、片劑、錠劑等這樣的分散單位。其它途徑包括直接進入脊髓液的鞘內給藥、諸如通過本領域技術人員眾所周知的導管和氣囊血管成形術裝置直接導入和經實質內注入靶向區域。
可以方便地將所述的組合物制成單位劑型且可以通過藥物學領域中眾所周知的任意方法來制備它們。這類方法包括使活性成分結合入構成一種或多種輔助組分的載體的步驟。一般來說，通過均勻而緊密地使活性成分結合入液體載體、粉碎的固體載體或兩者中且然后如果需要使產物成形來制備所述的組合物。
可以將適合于口服給藥的本發明組合物制成諸如膠囊、扁囊劑、片劑或錠劑這樣的分散單位、在脂質體中含有預定量活性成分的各種劑型或制成諸如糖漿、酏劑或乳劑這樣的含水液體或非水液體形式的混懸液。
便于非腸道給藥的組合物包括優選與受體血液等滲的活性成分的無菌含水制劑。可以使用那些合適的分散劑或濕潤劑和懸浮劑、按照公知的方法來配制這種含水制劑。這種無菌注射劑也可以是無菌注射用無毒性非腸道可接受稀釋劑或溶劑的溶液或混懸液，例如制成聚乙二醇的溶液。在可接受的載體和溶劑中，可以使用水、林格氏溶液和等滲氯化鈉溶液。此外，可便利地將無菌固定油用作溶劑或懸浮介質。為了這一目的，可以使用任意緩和的固定油包括合成的單或二酸甘油酯類。此外，諸如油酸這樣的脂肪酸類應用于制備注射劑。
還可以將活性成分配制成用于通過鼻內或通過吸入給予活性成分的轉運系統，例如制成含有活性成分的精細分散的氣溶膠噴霧劑。
其它轉運系統可以包括緩釋轉運系統。優選的緩釋轉運系統是那些可以以緩釋丸粒或膠囊形式釋放本發明活性成分的系統。可以利用許多類型的緩釋轉運系統。它們包括但不限于(a)活性成分包含在基質內的浸蝕性系統；和(b)活性成分以受控速率透過聚合物的擴散系統。此外，可以使用以泵為基礎的金屬構件轉運系統，它們中的某些適用于移植。
以預防或治療有效量給予活性成分。預防或治療有效量指的是至少部分獲得所需作用或延緩所治療特定疾病的發作或發展發作、抑制它們發展或使兩者均停止所必需的量。當然，這樣的量取決于所治療的特定疾病、所述疾病的嚴重程度和包括年齡、身體情況、高矮、體重和同時進行的療法在內的個體患者參數。這些因素對本領域技術人員來說是眾所周知的且僅根據常規實驗就可以確定它們。一般優選使用最大劑量，即根據聲音醫療判斷的最高安全劑量。然而，本領域技術人員可以理解可以因醫療因素、心理因素或實際上任意其它因素而給予較低的劑量或耐受性劑量。
一般來說，活性成分的每日口服劑量約為0.01mg/kg/天-1000mg/kg/天。開始可以給予小劑量(0.01-1mg)，隨后使劑量增加到約1000mg/kg/天。在這種受治療者在該劑量下的反應不充分的情況中，甚至可以將劑量使用到患者耐受性所允許的較高的程度(或通過不同的更加集中的轉運途徑的較高有效劑量)。所關注的是用于獲得化合物的合適全身濃度的每日多重劑量。
本發明的活性成分還可以制成適用于獸藥組合物的形式，例如，可以通過本領域中常用的方法來制備它們。這類獸藥組合物的實例包括適合于下述給藥的組合物(a)口服給藥、外用，例如浸漬液(例如含水或非水溶液或混懸液)；片劑或藥丸；用于含有飼料的混合物的粉劑、顆粒或丸粒；施用于舌頭的膏劑；(b)例如通過皮下、肌內或靜脈內注射的非腸道給藥，例如制成無菌溶液或混懸液；或(如果合適)通過乳房內注射給藥，其中將混懸液或溶液經乳頭導入乳房；(c)局部施用，例如制成施用于皮膚的霜劑、軟骨或噴霧劑；或(d)陰道內給藥，例如制成陰道栓、霜劑或泡沫。
除非上下文中另有說明，將貫穿于本說明書和權利要求中的術語“包括”或諸如“包括”或“含有”這樣的變化術語理解為包括所述的整體或整體組，但不排除任何其它的整體或整體組。
附圖2表示BRI6741對體外人紅細胞中惡性瘧原蟲生長的作用。
附圖3表示BRI2998對體外人紅細胞中惡性瘧原蟲生長的作用。
附圖4表示BRI7011對體外人紅細胞中惡性瘧原蟲生長的作用。
附圖5表示BRI6181對體外人紅細胞中惡性瘧原蟲生長的作用。
從下列為例舉而包括但并不用來限定本發明的實施例中可以明顯得出本發明的進一步特征。在下列實施例中，PAMAM樹枝狀聚合物指的是以美國專利4,507,466、4,558,120、4,568,737和4,587,329中具體描述的氨核為基礎的聚酰氨基胺樹枝狀聚合物；PAMAM(EDM)樹枝狀聚合物指的是以乙二胺核為基礎的聚酰氨基胺樹枝狀聚合物；且BHAlysxlysylysz樹枝狀聚合物指的是以如美國專利4,289,872和4,410,688中所述的二苯甲基胺核和賴氨酸支化單元為基礎的不對稱聚賴氨酸樹枝狀聚合物。如美國專利4289872、4410688、4507466、4558120、4568737和4587329以及國際專利公開號WO88/01178、WO88/01179、WO88/01180和WO95/24221中所述制備的聚酰氨基胺樹枝狀聚合物PAMAM1.0、PAMAM2.0、PAMAM3.0、PAMAM4.0、PAMAM5.0或更高的代、PAMAM4.0(EDA)以及聚賴氨酸樹枝狀聚合物BHAlyslys2、BHAlyslys2lys4、BHAlyslys2lys4lys8和BHAlyslys2lys4lys8lys16、BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32、BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32lys64或更高的。
實施例1樹枝狀聚合物與2-丙烯酰氨基-2-甲基丙磺酸反應生成磺酸封端的樹枝狀聚合物A PAMAM1.0將固體碳酸鈉(0.13g；1.0mmol)緩慢加入攪拌的2-丙烯酰氨基-2-甲基丙磺酸(0.41g；2.0mmol)的水(3ml)溶液中。在氣體停止放出后，該溶液的pH為8.0。然后將PAMAM 1.0(0.12g；0.33mmol)的水(1ml)溶液加入到上述溶液中，隨后加入4滴40％的芐基三甲基氫氧化銨水溶液。接著在60℃下和氮氣環境中將該溶液加熱3天且然后濃縮。使殘余物通過凝膠過濾(Sephadex G10；水)純化且然后凍干至得到磺酸化的PAMAM1.0樹枝狀聚合物、為一種灰白色固體(0.51g)。1H和13Cnmr光譜證實是二烷基化和一烷基化的PAMAM1.0樹枝狀聚合物(約70∶30)的混合物。13C nmr(D2O):δ31.0,31.1,37.1,37.7,41.3,48.6,51.5,53.1,53.4,55.6,56.2,61.2,61.5,178.3,179.0,179.8.B PAMAM2.0如上所述使PAMAM2.0與2-丙烯酰氨基-2-甲基丙磺酸反應。使粗產物通過凝膠過濾(Sephadex G10；水)純化且然后凍干至得到一種灰白色固體(0.51g)。1H和13C nmr光譜證實是二烷基化和一烷基化的PAMAM 2.0樹枝狀聚合物(約65∶35)的混合物。
13C nmr(D2O):δ31.0,31.1,37.1,37.7,41.3,48.7,51.5,53.4,55.6,56.2,5.6,56.2,61.2,61.5,178.4,179.0,179.1,179.6.
當重復上述反應時，略去芐基三甲基氫氧化銨獲得了類似的結果。C PAMAM3.0BRI2783除使用稍過量的碳酸鈉且不使用芐基三甲基氫氧化銨外，如上所述使PAMAM3.0與2-丙烯酰氨基-2-甲基丙磺酸反應。1H和13Cnmr光譜證實是二烷基化和一烷基化的PAMAM3.0樹枝狀聚合物(約50:50)的混合物。13C nmr(D2O):δ31.0,31.1,36.9,37.4,41.1,48.6,51.5,53.4,55.7,56.2,61.1,61.5,178.2,178.9,179.0,179.8.D PAMAM4.0BRI2784如對PAMAM3.0所述使PAMAM4.0與2-丙烯酰氨基-2-甲基丙磺酸反應。1H和13Cnmr光譜證實是二烷基化和一烷基化的PAMAM4.0樹枝狀聚合物(約35∶65)的混合物。13C nmr(D2O):δ31.0,31.1,36.9,37.3,41.1,48.5,51.5,53.5,55.7,56.2,61.1,61.5,178.1,178.9,179.0,179.8實施例2磺基乙酰胺鈉封端的樹枝狀聚合物的制備A PAMAM1.0將4-硝基苯基溴乙酸酯(0.40g；1.5mmol)的無水DMF(1ml)溶液加入攪拌的PAMAM 1.0(0.18g；0.5mmol)的DMF(3ml)溶液中。當茚三酮試驗為陰性時,將所得的黃色溶液在室溫下攪拌20分鐘。將該溶液濃縮(30°/0.1mmHg)至得到黃色油。使該油分配在水與氯仿之間并分離出水層且用氯仿(2X)洗滌并且最后用乙酸乙酯洗滌。將該水溶液濃縮(35°/25mmHg)至得到溴乙酰化的PAMAM1.0樹枝狀聚合物、為一種黃色油(0.36g；100％)。13Cnmr(D2O):δ32.8,33.3,43.0,43.5,54.4,174.5,176.4.
將亞硫酸鈉(0.2g；1.6mmol)的水(1ml)溶液加入到上述溴乙酰化的PAMAM1.0樹枝狀聚合物(0.36g；0.5mmol)的水(5ml)溶液中并在室溫下使該溶液保持穩定11天。將黃色溶液濃縮至得到一種淡黃色固體(0.60g)。13C nmr(D2O):δ34.4,43.1,43.4,54.0,61.7,171.3,177.2.
通過簡單地將亞硫酸鈉溶液加入到獲自第一次反應的水的粗提取物中可以進行上述反應過程而不需分離溴乙酰化的樹枝狀聚合物。B PAMAM2.0方法1將4-硝基苯基溴乙酸酯(0.18g；0.7mmol)的無水DMF(1ml)溶液加入攪拌的PAMAM2.0(0.10g；0.1mmol)的DMF(3ml)溶液中。當茚三酮試驗為陰性時，將所得的黃色溶液在室溫下攪拌20小時。然后在渦旋條件下將該溶液加入水(150ml)中并用氯仿(3X)和乙酸乙酯提取該混合物。將亞硫酸鈉(0.1g；0.8mmol)的水(1ml)溶液加入到粗溴乙酰化的樹枝狀聚合物溶液中并在室溫下使該混合物保持穩定3天。接著將淡黃色溶液濃縮至得到黃色固體殘余物，使其通過凝膠過濾(Sephadex LH20；水)純化而得到磺基乙酰胺鈉封端的PAMAM2.0樹枝狀聚合物(103mg)。13C nmr(D2O):δ33.0,35.7,36.0,37.7,40.3,43.0,43.2,53.4,53.7,56.0,61.6,171.2,174.6,178.5.方法2將固體乙酰硫乙酸琥珀酰亞胺酯(67mg；0.33mmol)加入到PAMAM2.0(52mg；0.05mmol)的無水DMF(2ml)溶液中并將所得的溶液在室溫下攪拌2天。然后將該混合物濃縮(30°/10-3mmHg)至得到一種油狀殘余物。使該殘余物分配在水和氯仿之間并分離出水層且濃縮至得到粘性油(117mg)。1H和13C nmr證實所述的油是乙酰化樹枝狀聚合物和N-羥基琥珀酰亞胺的混合物。凝膠過濾(Sephadex G10；水)產生了乙酰硫基乙酰胺封端的PAMAM2.0樹枝狀聚合物的純樣品(29mg)。13C nmr(D2O):δ34.0,34.2,37.3,43.0,43.1,43.3,53.5,54.0,56.3,175.4,177.2,177.5.
然后將上述官能化的樹枝狀聚合物溶于40％水性甲酸(7ml)所得到的溶液加入到新近制備的冰冷的過甲酸(1.6mmol)的甲酸(2ml)溶液中。在0°下將該混合物攪拌1小時且然后在室溫下攪拌20小時。接著加入少量活性炭以便分解任何過量的過酸，將該混合物攪拌30分鐘且然后過濾并濃縮至得到一種粘性油。
將粗產物溶于水、用碳酸氫鈉水溶液將pH調節至9.0并通過Sephadex G10柱使該物質脫鹽。在凍干后獲得一種白色固體(20mg)，使其進行基本上與方法1獲得的物質相同的分光光度法。13C nmr(D2O):δ33.0,38.7,42.9,43.0,43.1,53.9,54.3,56.5,61.6,171.2,176.4,177.0.
實施例3磺基琥珀酰胺酸鈉封端的樹枝狀聚合物的制備A PAMAM1.0將固體馬來酐(0.11g；1.1mmol)加入到攪拌的PAMAM1.0(0.12g；0.33mmol)的無水DMF(3ml)溶液中。該混合物變成稍溫和淺棕色溶解的酸酐并將所得的溶液在室溫下攪拌過夜。然后將該溶液濃縮(30°/10-4mmHg)至得到一種粘性油。1H和13C nmr(D2O)證實PAMAM1.0完全轉化成三酰胺以及一些馬來酸。13C nmr(D2O):δ33.1,42.8,43.1,54.3,135.0,137.1,169.1,171.9,173.3.
然后將三酰胺粗品溶于水(4ml)并加入固體亞硫酸鈉(0.20g；1.6mmol)。使所得的溶液在室溫下保持穩定4天且然后濃縮。1H和13CnmR(D2O)證實是1:1的區域異構體磺基琥珀酰胺酸鈉封端的PAMAM1.0樹枝狀聚合物與一些磺基琥珀酸的混合物。使粗產物通過凝膠過濾(SephadexG10；水)純化而得到磺基琥珀酰胺酸鈉封端的PAMAM1.0樹枝狀聚合物樣品(107mg)。13C nmr(D2O):δ33.3,39.6,40.0,42.9,43.1,54.0,67.9,69.4,173.8,176.3,177.6,181.8.B PAMAM2.0
如上所述制備區域異構體磺基琥珀酰胺酸鈉封端的PAMAM2.0樹枝狀聚合物的混合物。13C nmr PAMAM2.0馬來酰胺酸衍生物(D2O):δ32.8,33.0,38.7,42.9,53.8,54.3,56.5,135.2,136.8,169.2,171.9,173.5,174.6.
13C nmr PAMAM2.0磺基琥珀酰胺酸鈉衍生物(D2O):δ37.0,40.1,41.1,43.0,43.2,43.9,53.0,53.3,55.5,68.0,69.4,173.8,177.6,179.1,179.5,179.8,182.3.C PAMAM4.0BRI6038將固體馬來酐(60mg；0.6mmol)加入到攪拌的PAMAM4.0(51mg；0.01mmol)的無水DMF(2ml)溶液中。開始該混合物變渾濁，而不久即得到澄清溶液，將其在室溫下攪拌過夜。然后將該溶液濃縮(35°/10-4mmHg)至得到一種粘性油。1H和13C nmr(D2O)證實PAMAM4.0完全轉化成聚酰胺以及一些馬來酸。然后將聚酰胺粗品溶于水(2ml)并加入亞硫酸鈉(126mg；1.0mmol)的水(2ml)溶液。使所得的溶液在室溫下保持穩定2天且然后濃縮。1H和13Cnmr(D2O)證實是區域異構體磺基琥珀酰胺酸鈉封端的PAMAM4.0樹枝狀聚合物與一些磺基琥珀酸的混合物。使粗產物通過凝膠過濾(Sephadex LH20；水)純化而得到由24個位置異構的磺基琥珀酰胺酸基團封端的PAMAM4.0樹枝狀聚合物樣品(90mg)。1H nmr(D2O):δ2.4-2.6；2.7-3.1；3.2-3.4；3.9-4.0.13C nmr(D2O):δ36.2；39.8；40.5；43.0；43.2；53.5；55.8；68.1；69.5；173.8；177.4；177.6；178.7；182.3.
實施例4N-(2-磺基乙基)琥珀酰胺鈉封端的樹枝狀聚合物的制備a N-(2-磺基乙基)琥珀酰胺酸四丁銨的制備將固體琥珀酐(0.5g；5.0mmol)加入到攪拌的2-氨乙基磺酸四丁銨(1.83g；5.0mmol)的無水二氯甲烷(30ml)溶液中。琥珀酐緩慢溶解并將所得的渾濁溶液在室溫下攪拌過夜。將所得的混合物過濾并將濾液濃縮至得到一種粘性油(2.41g)。13Cnmr證實完全轉化成所需的單胺以及少量琥珀酸。通過將二氯甲烷溶液逐滴加入到大量過量的乙醚來重復沉淀產物而得到N-(2-磺乙基)琥珀酰胺酸四丁銨、為一種白色固體(1.762g；76％),mp125-127℃。1H nmr(CDCl3):δ0.86(t,12h,4xCH3),1.28(m,8H,4xCH2),1.50(m,8H,4xCH2),2.33(m,2H,CH2COOH),2.44(m,2H,CH2CONH),2.76(m,2H,CH2NHCO),3.12(m,8H,4xCH2N),3.50(m,2H,CH2SO3-),7.53(brt,1H,NH).13C nmr(CDCl3):δ13.5,19.5,23.8,30.1,30.9,35.6,50.0,58.5,172.0,174.1.b 4-硝基苯基N-(2-磺基乙基)琥珀酰胺酸四丁銨的制備將二環己基碳化二亞胺(45mg；0.22mmol)的無水二氯甲烷(1ml)溶液加入到攪拌的N-(2-磺乙基)琥珀酰胺酸四丁銨(94mg；0.20mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液中并將該混合物在室溫下攪拌過夜。將所得的混懸液過濾并將濾液濃縮至得到活性酯的粗品，不需進一步純化而使用它。A N-(2-磺基乙基)琥珀酰胺鈉封端的PAMAM樹枝狀聚合物的制備PAMAM4.0BRI2786將粗品4-硝基苯基N-(2-磺基乙基)琥珀酰胺酸四丁銨(0.30mmol)的無水DMF(1ml)溶液加入到攪拌的PAMAM 4.0(51.5mg；0.01mmol)溶于50％DMF水溶液(3ml)所得到的溶液中并將所得的黃色溶液在室溫下攪拌過夜。然后該將該混合物濃縮(35°/10-5mmHg)并使黃色殘余物分配在水與氯仿之間。分離出水層、用氯仿(2X)和乙酸乙酯洗滌且然后濃縮至得到黃色油(134mg)。將粗產物通過Amberlite IR 120(Na)柱轉化成鈉鹽而得到85mg的物質。將該物質進一步通過凝膠過濾(Sephadex LH20；水)過濾而得到N-(2-磺乙基)琥珀酰胺鈉封端的PAMAM 4.0樹枝狀聚合物(45mg)。13C nmr(D2O):δ33.2,33.6,35.5,39.0,39.5,42.8,43.2,53.8,54.1,54.4,56.6,176.5,176.9,177.2,178.9,179.4.
按照類似方法制備相應的用N-(2-磺基乙基)琥珀酰胺鈉基團封端的PAMAM1.0和PAMAM3.0(BRI2785)樹枝狀聚合物。13C nmr PAMAM3.0衍生物(D2O):δ33.4,35.5,39.0,39.5,42.9,43.2,53.8,54.1,54.3,56.5,176.4,176.9,177.4,178.9,179.4.13C nmr PAMAM1.0衍生物(D2O):δ34.9,35.5,39.5,42.9,43.1,53.7,54.1,179.0,179.1,179.3.B N-(2-磺基乙基)琥珀酰胺鈉封端的聚賴氨酸樹枝狀聚合物的制備BHAlyslys2lys4lys8lys16BRI2789將三氟乙酸(1ml)加入到BHAlyslys2lys4lys8DBL16(36.5mg；5.0μmol)的無水二氯甲烷(1ml)混懸液中并將所得溶液在室溫下和氮氣環境中攪拌2小時且然后濃縮。將殘余物溶于無水DMSO(2ml)并用三乙胺將pH調節至8.5。接著逐滴加入粗品4-硝基苯基N-(2-磺乙基)琥珀酰胺酸四丁銨(約0.2mmol)的DMSO(1ml)黃色溶液并在室溫下將該混合物攪拌過夜。然后將黃色溶液濃縮(50°/10-5mmHg)并使黃色殘余物分配在水和氯仿之間。分離出水層、用氯仿(3X)和乙酸乙酯洗滌且然后濃縮至得到一種油(99mg)。將粗產物通過Amberlite IR 120(Na)柱轉化成鈉鹽而得到81mg的物質。將該物質進一步通過凝膠過濾(Sephadex LH20；水)純化而得到N-(2-磺乙基)琥珀酰胺鈉封端的BHAlyslys2lys4lys8lys16樹枝狀聚合物(39mg)。13C nmr(D2O):δ27.0,32.3,35.2,35.3,35.6,35.7,39.5,43.5,54.1,58.5,131.5,132.0,133.3,145.1,177.8,178.0,178.4,178.8,178.9,179.2,179.7,179.8.
按照類似方法制備相應的用N-(2-磺基乙基)琥珀酰胺鈉基團封端的BHAlyslys2、BHAlyslys2lys4(BRI2787)、BHAlyslys2lys4lys8(BRI2788)。13C nmr BHAlyslys2lys4lysx衍生物(D2O):δ26.9,32.3,35.1,35.3,35.6,35.7,39.5,43.5,54.1,58.5,131.6,131.9,132.2,132.3,133.2,133.3,145.0,145.2,177.2,177.8,177.9,178.0,178.2,178.3,178.6,178.7,178.8,178.9,179.2,179.3,179.7,179.8.13C nmr BHAlyslys2lys4衍生物(D2O):δ26.9,32.3,35.1,35.4,35.7,35.8,39.5,43.5,54.1,58.5,61.8,131.7,132.0,132.2,132.3,133.2,133.3,145.0,145.1,177.3,178.0,178.3.178.4,178.7,178.9,179.0,179.3,179.7,179.8.13C nmr BHAlyslys2衍生物(D2O):δ26.9,27.1,32.2,32.3,34.7,34.8,35.1,35.3,35.6,35.7,39.5,43.4,54.1,58.6,61.8,131.7,131.9,132.2,132.3,133.3,144.9,145.0,177.7,178.4,178.8,179.0,179.3,180.0.
實施例54-磺基苯基硫脲鈉封端的樹枝狀聚合物的制備A PAMAM4.0BRU2791將固體4-磺基苯基異硫氰酸鈉一水合物(500mg；1.96mmol)加入到PAMAM4.0(300mg；0.0582mmol)的水(10ml)溶液中并將所得溶液在53°下和氮氣環境中加熱2小時且然后冷卻。將該溶液濃縮并使黃色固體殘余物通過凝膠過濾(Sephadex LH20；水)純化。合并純的級分并凍干至得到4-磺基苯基硫脲鈉封端的PAMAM4.0樹枝狀聚合物、為一種松散的白色固體(370mg)。
1H nmr(D2O):δ2.28；2.52；2.69；3.15；3.27；3.60；7.32(d,J=9Hz)；7.72(d,J=9Hz).13C nmr(D2O):δ36.9；41.1；43.1；48.3；53.6；55.8；129.0；131.1；144.4；178.5；179.1；184.4.
按照類似方法制備相應的分別用3、6、12和48個4-磺基苯基硫脲鈉基團封端的PAMAM1.0、PAMAM2.0(BRU2790)、PAMAM3.0和PAMAM5.0(BRU2991)樹枝狀聚合物。B PAMAM4.0(EDA)BRU6045將固體4-磺基苯基異硫氰酸鈉一水合物(130mg；0.5mmol)加入到PAMAM 4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)的水(4ml)溶液中并將所得溶液在53°下和氮氣環境中加熱2小時且然后冷卻。將該溶液濃縮并使固體殘余物通過凝膠過濾(Sephadex LH20；水)純化。合并純的級分并凍干至得到用32個4-磺基苯基硫脲鈉基團封端的PAMAM4.0、為一種松散的白色固體(136mg)。1H nmr(D2O):δ2.30；2.50；2.70；3.18；3.62；7.35(d,J=9Hz)；7.72(d,J=9Hz).13C nmr(D2O):δ36.8；41.0；43.1；48.4；53.6；55.7；128.9；131.0；144.3；178.5；179.0；184.5.C BHAlyslys2lys4lys8lys16BRI2792在氮氣環境中將三氟乙酸(4ml)加入到BHAlyslys2lys4lys8DBL16(0.73g；0.1mmol)的無水二氯甲烷(4ml)混懸液中。觀察到有短時間的劇烈的氣體放出并將所得溶液在室溫下攪拌2小時且然后濃縮。將殘余的糖漿狀物溶于水(5ml)、使該溶液通過Amberlite IRA-401(OH)柱并將濾液濃縮至得到BHAlyslys2lys4lys8lys16、為一種粘性油(0.49g)。將該油重新溶于水(5ml)并加入N,N-二甲基-N-烯丙基胺緩沖液(pH9.5；3ml)。然后加入固體4-磺苯基異硫氰酸鈉一水合物(1.30g；5.1mmol)并將所得溶液在53°下和氮氣環境中加熱2小時且然后冷卻。將該溶液濃縮并使淺棕色固體殘余物通過凝膠過濾(Sephadex LH20；水)純化。合并純的級分、過Amberlite IR 120(Na)柱并凍干至得到4-磺基苯基硫脲鈉封端的BHAlyslys2lys4lys8lys16樹枝狀聚合物、為一種松散的白色固體(374mg)。1H nmr(D2O):δ1.40；1.72；3.08；3.42；4.24；4.60；7.30；7.40(d,J=9Hz)；7.78(d,J=9Hz).13C nmr(D2O):δ27.3；32.5；35.9；43.7；48.9；58.6；63.3；128.8；131.0；143.7；144.7；145.1；177.7；178.1；183.8；185.2.
按照類似方法制備相應的分別用16、64和128個4-磺基苯基硫脲鈉基團封端的BHAlyslys2lys4lys8、BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32(BRI2992)和BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32lys64(BRI2993)樹枝狀聚合物。
實施例63,6-二磺基萘基硫脲鈉封端的樹枝狀聚合物的制備A PAMAM4.0BRI2923將固體3,6-二磺基萘基異硫氰酸鈉(160mg；0.41mmol)加入到PAMAM4.0(51mg；0.01mmol)的水(3ml)溶液中并將所得溶液在53°下和氮氣環境中加熱2小時且然后冷卻。將該溶液濃縮并使棕色固體殘余物通過凝膠過濾(Sephadex LH20；水)純化。合并純的級分并濃縮至得到3,6-二磺基萘基硫脲鈉封端的PAMAM4.0樹枝狀聚合物、為一種棕色固體(73mg)。
1H nmr(D2O):δ2.30；2.60；2.74；3.20；3.57；7.75；7.86；8.28.13C nmr(D2O):δ35.0；39.9；43.1；48.1；53.8；56.1；128.4；128.6；129.3；131.0；131.3；136.0；136.8；138.2；145.5；146.0；177.2；177.8；185.5.
按照類似方法制備相應的用3,6-二磺基萘基硫脲鈉基團封端的PAMAM2.0樹枝狀聚合物。B PAMAM4.0(EDA)BRI6046將固體3,6-二磺基萘基異硫氰酸鈉(220mg；0.57mmol)加入到PAMAM4.0(EDA)(74mg；0.01mmol)的水(4ml)溶液中并將所得溶液在53°下和氮氣環境中加熱2小時且然后冷卻。將該溶液濃縮并使淺棕色固體殘余物通過凝膠過濾(Sephadex LH20；水)純化。合并純的級分并濃縮至得到用32個3,6-二磺基萘基硫脲鈉基團封端的PAMAM4.0、為一種褐色固體(148mg)。
1H nmr(D2O):δ2.30；2.80；3.20；3.54；7.74；7.85；8.25.13C nmr(D2O):δ36.0；40.8；43.1；48.3；53.6；55.9；128.5；129.4；131.0；131.3；136.0；136.8；138.3；145.5；146.0；178.2；1 85.6.C BHAlyslys2lys4lys8lys16BRI2999在氮氣環境中將三氟乙酸(2ml)加入到BHAlyslys2lys4lys8DBL16(73mg；0.01mmol)的無水二氯甲烷(2ml)混懸液中。觀察到有短時間的劇烈的氣體放出并將所得溶液在室溫下攪拌2小時且然后濃縮。將殘余的糖漿狀物溶于水(5ml)、使該溶液通過Amberlite IRA-401(OH)柱并將濾液濃縮至得到BHAlyslys2lys4lys8lys16、為一種粘性油。將該油重新溶于水(5ml)并加入N,N-二甲基-N-烯丙基胺緩沖液(pH9.5；3ml)。然后加入固體3,6-二磺基萘基異硫氰酸鈉(234mg；0.60mmol)并將所得溶液在53°下和氮氣環境中加熱2小時且然后冷卻。將該溶液濃縮并使淺棕色固體殘余物通過凝膠過濾(Sephadex LH20；水)純化。合并純的級分、過Amberlite IR120(Na)柱并凍干至得到用32個3,6-二磺基萘基硫脲鈉基團封端的BHAlyslys2lys4lys8lys16、為一種松散的灰白色固體(119mg)。1H nmr(D2O):δ1.0-2.0；3.18；3.43；4.31；7.22；7.80；7.89；8.25.13C nmr(D2O):δ 27.2；32.4；35.3；43.7；49.0；58.5；63.6；128.4；129.1；131.4；136.1；136.6；138.6；139.0；145.1；145.6；178.4；184.8；186.7.
實施例74-磺基萘基硫脲鈉封端的樹枝狀聚合物的制備PAMAM4.0BRI2997將固體4-磺基萘基異硫氰酸鈉(180mg；0.5mmol)加入到PAMAM4.0(51mg；0.01mmol)的水(5ml)溶液中并將該混合物在53°下和氮氣環境中加熱2小時且然后冷卻。在減壓條件下從所得的混懸液中蒸餾出水并使黃白色固體殘余物通過凝膠過濾(Sephadex LH20；水)純化。合并純的級分并凍干至得到4-磺基萘基硫脲鈉封端的PAMAM4.0樹枝狀聚合物、為一種松散的白色固體(60mg)。1Hnmr(D2O):δ2.20；2.60；3.14；3.48；7.23；7.47；7.56；7.77；7.93(d,J=6Hz)；8.56(d,J=6Hz).13C nmr(D2O):δ35.8；40.5；43.1；48.4；53.6；55.9；127.6；128.6；130.3；131.9；132.5；133.5；134.7；140.5；142.7；177.8；178.0；185.4.
實施例83,5-二磺基苯基硫脲鈉封端的樹枝狀聚合物的制備PAMAM4.0BRI6039將固體3,5-二磺基苯基異硫氰酸鈉(110mg；0.32mmol)加入到PAMAM4.0(63mg；0.012mmol)的水(3ml)溶液中并將所得溶液在53°下和氮氣環境中加熱2小時且然后冷卻。將該溶液濃縮并使淺棕色固體殘余物通過凝膠過濾(Sephadex G25；水)純化。合并純的級分并濃縮至得到用24個3,5-二磺基苯基硫脲鈉基團封端的PAMAM4.0、為一種灰白色固體(110mg)。1H nmr(D2O):δ2.53；3.08；3.36；3.66；7.90；7.95.13C nmr(D2O):δ34.8；41.0；43.1；48.0；53.7；56.2；124.1；128.6；143.5；148.8；177.6；185.0.
實施例93,6,8-三磺基萘基硫脲鈉封端的樹枝狀聚合物的制備PAMAM4.0BRI2998將固體3,6,8-三磺基萘基異硫氰酸鈉(250mg；0.5mmol)加入到PAMAM4.0(51mg；0.01mmol)和N,N-二甲基-N-烯丙基胺緩沖液(pH9.5；1ml)的水(2ml)溶液中并將該混合物在53°下和氮氣環境中加熱2小時且然后冷卻。將該混合物在減壓條件下濃縮至得到橙色固體。將殘余的固體溶于水(2ml)并使其通過Amberlite IR-120(Na)的短柱。然后將濾液濃縮并使殘余物通過凝膠過濾(Sephadex LH20；水)純化。合并純的級分并凍干至得到3,6,8-三磺基萘基硫脲鈉封端的PAMAM4.0樹枝狀聚合物、為一種灰白色固體(102mg)。
1H nmr(D2O):δ2.65；3.02；3.30；3.66；8.05；8.42；8.59；8.67.13C nmr(D2O):δ33.2；38.7；43.2；43.7；47.8；54.0；54.3；56.7；131.0；131.3；131.9；135.9；138.0；139.6；143.8；144.1；145.6；176.2；176.5；186.0.
按照類似方法制備相應的3,6,8-三磺基萘基硫脲鈉封端的樹枝狀聚合物BHAlys.lys2lys4lys8lys16BRI7011。
實施例104-(磺基甲基)苯甲酰胺鈉封端的樹枝狀聚合物的制備PAMAM4.0BRI6040將固體4-(氯甲基)苯甲酸4-硝基苯基酯(200mg；0.68mmol)加入到攪拌的PAMAM4.0(70mg；0.014mmol)的無水DMSO(4ml)溶液中并將所得的黃色溶液在室溫下攪拌2小時。然后將該溶液濃縮(10-4mmHg；40°)并用水和二氯甲烷(1∶1)的混合物提取殘余物。將剩余的固體物質溶于DMSO(5ml)并加入亞硫酸鈉(130mg；1mmol)的水(3ml)溶液。使所得的輕度渾濁的混合物保持穩定4天，此后添加過量的水(2ml)而導致形成澄清均勻的黃色溶液。然后將該溶液首先在25mmHg和40°、接著在10-4mmHg和50°下濃縮至得到粗產物。使該粗產物通過凝膠過濾(Sephadex G25；水)純化而得到用24個4-(磺基甲基)苯甲酰胺鈉基團封端的PAMAM4.0(24mg)。1H nmr(D2O):δ2.25；2.66；3.08； 3.20；3J3；3.38；4.01；7.40(brd)；7.62(br d).13C nmr(D2O):δ36.7；40.9；43.0；43.6；53.5；55.5；61.0；131.6；135.0；137.2；140.4；174.5；178.6；179.2.
實施例114-磺基苯甲酰胺封端的樹枝狀聚合物的制備PAMAM4.0(EDA)BRI6116將固體N-羥基琥珀酰亞胺基4-磺基苯甲酸鉀(100mg；0.3mmol)加入到PAMAM4.0(EDA)(35mg；0.005mmol)溶于0.1M、pH8.5的硼酸鹽緩沖液(5ml)所得到的溶液中并將該溶液在室溫下攪拌2小時。在該階段產生的乳白色溶液具有的pH為4.5。然后加入1M碳酸鈉溶液(1ml)而得到一種澄清溶液，將該溶液濃縮至得到粗產物、為一種白色固體。使該粗產物通過凝膠過濾(Sephadex G25；水)純化而得到用32個4-磺基苯甲酰胺鈉基團封端的PAMAM4.0(EDA)(47mg)。1H nmr(D2O):δ2.25；2.42；2.63；3.05；3.18；3.31；3.38；7.72(d,J=8Hz)；7.78(d,J=8Hz).13C nmr(D2O):δ 36.0；40.4；43.0；43.7；53.7；55.8；130.2；132.2；140.4；150.1；173.6；178.0；178.5.
實施例12N-(4-磺基苯基)丙酰胺鈉封端的樹枝狀聚合物的制備PAMAM4.0(EDA)BRI6117將固體N-(4-磺基苯基)丙烯酰胺鈉(250mg；1mmol)和固體碳酸鈉(106mg；1mmol)依次加入到攪拌的PAMAM4.0(EDA)(78mg；0.011mmol)的水(4ml)溶液中。在所得溶液在氮氣環境中攪拌4天且然后凍干至得到一種松散的白色固體。使該粗產物通過凝膠過濾(Sephadex LH20；水)純化而得到用64個N-(4-磺基苯基)丙酰胺鈉基團封端的PAMAM4.0(EDA)(206mg)。13C nmr證實了有極微量轉化成了一烷基化的末端氨基。1H nmr(D2O):δ2.10；2.48；2.58；2.79；3.20；7.42(d,J=7Hz)；7.65(d,J=7Hz).13C nmr(D2O):δ36.5；37.9；41.1；53.4；55.6；124.8；130.9；143.0；144.2；177.4；178.5.
實施例134-磺基苯基脲鈉封端的樹枝狀聚合物的制備PAMAM4.0(EDA)BRI6115將磺胺酸鈉(195mg；1mmol)的無水DMSO(3ml)溶液逐滴加入到N,N’-二琥珀酰亞胺基碳酸酯(530mg；2mmol)的無水DMSO(4ml)溶液中并將所得的淺棕色溶液在室溫下攪拌20小時。加入PAMAM4.0(EDA)(75mg；0.011mmol)的無水DMSO(1ml)溶液并將該溶液進一步攪拌18小時。然后在高度真空(10-5mmHg；35°)下將該溶液濃縮至得到一種淺黃色半固體。將該粗產物溶于DMSO(4ml)并將該溶液加入到200ml的經充分攪拌的乙酸乙酯中。通過過濾收集沉淀的白色固體并用乙酸乙酯(2X)和乙醚(2X)洗滌，然后干燥至得到一種白色粉末(275mg)。使該物質進一步通過凝膠過濾(Sephadex LH20；水)純化而得到用32個4-磺基苯基脲鈉基團封端的PAMAM4.0(EDA)(106mg)。lH nmr(D2O):δ2.31；2.55；2.75；3.19；7.32(d,J=9Hz)；7.63(d,J=9Hz).13C nmr(D2O):δ36.3；40.7；43.3；43.8；53.7；55.7；123.3；130.9；140.9；146.0；161.4；178.2；178.6.
實施例14N,N,N-三甲基甘氨酰胺氯化物封端的樹枝狀聚合物的制備BHAlyslys2lys4lys8lys16BRI2922將三氟乙酸(4ml)加入到BHAlyslys2lys4lys8DBL16(220mg；30μmmol)的無水二氯甲烷(2ml)混懸液中并將所得溶液在室溫下和氮氣環境中攪拌2小時且然后冷卻。將殘余物溶于無水DMSO(5ml)并用三乙胺將pH調節至8.5。然后加入固體4-硝基苯基N,N,N-三甲基甘氨酸氯化物(0.50g；1.8mmol)并將該混合物在室溫下攪拌過夜。接著濃縮渾濁的溶液(50°/10-5mmHg)并使殘余物分配在水與二氯甲烷之間。分離出水層、用二氯甲烷(3X)和乙酸乙酯洗滌且然后濃縮至得到一種油(1.128g)。使該粗產物通過凝膠過濾(Sephadex LH20；水)純化而得到N,N,N-三甲基甘氨酰胺封端的BHAlyslys2lys4lys8lys16樹枝狀聚合物(116mg)。13C nmr(D2O):δ25.5,30.5,30.8,33.4,42.1,56.5,57.1,67.5,68.1,166.7,167.0,167.1,176.0,176.2.
實施例154-三甲銨苯甲酰胺封端的樹枝狀聚合物的制備PAMAM4.0BRI6043將1,1’-羰基二咪唑(85mg；0.52mmol)加入到4-三甲銨苯甲酸碘化物(154mg；0.5mmol)的無水DMF(4ml)溶液中并將所得混合物在室溫下和氬氣環境中攪拌2小時。在此期間，從該溶液中析出白色固體。然后加入PAMAM4.0(58；0.011mmol)的無水DMF(2ml)溶液并將該混合物在室溫下攪拌過夜。此后大部分沉淀已經溶解且溶液的茚三酮試驗呈陰性。將該混合物濃縮(10-4mmHg；30°)至得到一種白色固體殘余物。使該粗產物進一步通過凝膠過濾(Sephadex LH20；10％AcOH)純化而得到用24個4-三甲銨苯甲酰胺基團封端的PAMAM4.0、為乙酸鹽(89mg)。1H nmr(D2O):δ1.96；2.65-2.85；3.25-3.55；3.64；7.92.13C nmr(D2O):δ25.8；33.1；33.5；38.7；43.1；43.5；53.5；54.1；56.4；61.2；124.8；133.6；139.9；153.2；173.2；176.3；176.8；182.6.
按照類似方法制備相應的用6個4-三甲銨苯甲酰胺基團封端的PAMAM2.0樹枝狀聚合物。
實施例164-(三甲銨甲基)苯甲酰胺封端的樹枝狀聚合物的制備PAMAM4.0BRI6044將固體4-(氯甲基)苯甲酸4-硝基苯基酯(150mg；0.5mmol)加入到攪拌的PAMAM4.0(52mg；0.01mmol)的無水DMSO(3ml)溶液中。當茚三酮試驗呈陰性(pH約為8.5)時，將所得的黃色溶液在室溫下攪拌20小時。然后濃縮該溶液(10-5mmHg；40°)并將殘余物與水和二氯甲烷(1∶1)的混合物一起振搖。通過過濾收集不溶性的凝膠樣物質、用水(2X)和二氯甲烷(2X)洗滌且然后風無水。將4-(氯甲基)苯甲酰胺封端的樹枝狀聚合物粗品溶于25％的三乙胺水溶液(20ml)并使黃色溶液保持穩定過夜。然后將該溶液濃縮、將殘余物溶于水(5ml)并使該溶液過Amberlite IRA-401(OH)柱。將無色濾液濃縮至得到一種粘性油，使其通過凝膠過濾(Sephadex G10；10％AcOH)純化而得到用24個4-(三甲銨甲基)苯甲酰胺基團封端的PAMAM4.0(90mg)。1H nmr(D2O):δ1.88；2.65-2.80；2.98；3.10-3.60；7.52(brd,J=9Hz)；7.72(brd,J=9Hz).13C nmr(D2O):δ26.6；33.4；38.8；43.2；43.5；53.6；53.6；54.1；56.8；62.8；73.0；132.1；135.3；137.5；140.0；176.4；176.9；183.6.
實施例17N-(2-乙酰氧基乙基)-N,N-(二甲銨)甲基羧酰胺封端的樹枝狀聚合物的制備PAMAM4.0將固體1,1’-羰基二咪唑(85mg；0.52mmol)加入到溴化N-(2-乙酰氧基乙基)-N-(羧甲基)-N,N-二甲銨(135mg；0.5mmol)的無水DMF(3ml)溶液中并將所得溶液在氮氣環境中攪拌2小時。然后加入PAMAM4.0(60mg；0.012mmol)的DMF(2ml)溶液中，該過程瞬間形成可緩慢再溶解的絮狀沉淀。將該混合物攪拌2天且然后濃縮(10-4mmHg；40°)至得到一種粘性油。使該粗產物通過凝膠過濾(Sephadex G10；10％AcOH)純化而得到用24個N-(2-乙酰氧基乙基)-N,N-(二甲銨)甲基羧酰胺基團封端的PAMAM4.0(64mg)。1Hnmr(D2O):δ1.93；2.05；2.70；3.10-3.60；3.28；3.93(m)；4.14；4.48(m).13C nmr(D2O):δ24.6；26.2；33.2；38.7；42.8；42.9；53.9；57.4；62.6；67.3；67.5；168.9；176.4；176.8；177.3；183.2.
實施例18胍基封端的樹枝狀聚合物的制備PAMAM4.0BRI6042將PAMAM4.0(63mg；0.012mmol)和硫酸甲硫假脲酯(170mg；0.61mmol)的水(5ml)溶液(pH 10.5)在80°和氮氣環境中加熱2小時。然后將該溶液濃縮并使殘余物通過凝膠過濾(Sephadex G10；10％AcOH)純化而得到用24個胍基基團封端的PAMAM4.0、為乙酸鹽(107mg)。1H nmr(D2O):δ2.00；2.80(brt)；3.09(brt)；3.32；3.45(brt)；3.60(brt)13C nmr(D20):δ25.2；33.2；33.4；38.7；41.2；42.6；43.4；44.7；53.5；54.0；56.3；176.5；176.7；176.9；181.6.
按照類似方法制備相應的用6個胍基基團封端的PAMAM2.0樹枝狀聚合物。
實施例194-([1,4,8,11-四氮雜環十四烷]甲基)苯甲酰胺封端的樹枝狀聚合物的制備PAMAM4.0BRI6041在室溫下使1-(4-羧苯基)甲基-1,4,8,11-四氮雜環十四烷四鹽酸鹽(120mg；0.25mmol)、N-羥基琥珀酰亞胺(60mg；0.52mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(250mg；1.3mmol)溶于pH為7的磷酸鹽緩沖液(10ml)所得到的溶液在室溫下保持穩定1小時且然后加入PAMAM4.0(32mg；0.006mmol)溶于pH7的磷酸鹽緩沖液(10ml)所得到的溶液。使該混合物保持穩定2天且然后濃縮。使殘余物通過凝膠過濾(Sephadex G10；10％AcOH)純化而得到如1H和13C nmr所測定的用約12個4-([1,4,8,11-四氮雜環十四烷]甲基)苯甲酰胺基團封端的PAMAM4.0(80mg)。接著將該產物溶于水并過Amberlite IRA-401(Cl)樹脂柱且然后濃縮。將殘余物溶于水(1ml)、加入濃HCl(1ml)并用乙醇(30ml)稀釋該溶液而沉淀出一種白色固體。通過過濾收集該固體。1H和13C nmr再次證實末端氨基基團中約50％官能化。1H nmr(D2O):δ2.17；2.36；2.50；2.78；2.85；3.25；3.40；3.50；3.60；3.62；4.49；7.63(br d)；7.78(br d).13Cnmr(D2O):δ22.7；23.1；33.2；38.8；39.9；40.2；40.3；41.0；41.2；42.0；42.9；43.2；43.6；45.5；46.1；49.1；52.2；53.9；54.3；56.6；62.7；132.5；135.7；137.1；139.7；174.3；176.2；176.3；176.7；177.0；178.2；178.5.
實施例204-羧基-3-羥基芐胺封端的樹枝狀聚合物的制備PAMAM4.0(EDA)BRI6119將氰基硼氫化鈉(32mg；0.5mmol)加入到PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)、4-甲酰基-2-羥基苯甲酸(83mg；0.5mmol)和碳酸氫鈉(42mg；0.5mmol)的水(4ml)混合物中。將不均勻的橙色混合物在室溫下攪拌4小時。在此期間它變均勻。然后將該橙色溶液濃縮并使殘余物通過凝膠過濾(Sephadex LH20；水)純化而得到用約32個4-羧基-3-羥基芐胺基團封端的PAMAM4.0(EDA)(91mg)。1H和13C nmr(D2O)證實末端氨基中大部分一烷基化而某些二烷基化，兩種光譜均顯示出寬峰。13C nmr(D2O):δ37.0；41.1；50.9；53.4；55.5；55.8；61.5；120.9；122.2；122.4；132.3；132.7；135.0；135.8；163.5；163.7；169.0；178.6；179.3.1H nmr(D2O):δ 2.20；2.35；2.60；3.1 5；3.30；3.55；4.25；6.68；7.12；7.55.
實施例214-羧基苯基酰胺封端的樹枝狀聚合物的制備PAMAM4.0(EDA)將固體4-羧苯基異硫氰酸酯(86mg；0.48mmol)加入到PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)的水(20ml)溶液中。用飽和NaHCO3將所得渾濁溶液的pH調節至9并在室溫下持續攪拌24小時。然后將反應混合物過濾將濾液濃縮至得到一種白色固體殘余物，使其通過凝膠過濾(Sephadex LH20；水)純化且然后凍干至得到白色松散固體產物(68mg)。
實施例223,5-二羧基苯基酰胺封端的樹枝狀聚合物的制備PAMAM4.0(EDA)將固體3,5二羧苯基異硫氰酸酯(112mg；0.5mmol)加入到PAMAM4.0(EDA)(70mg；0.01mmol)的水(5ml)溶液中。用1MNa2CO3溶液將所得渾濁溶液的pH調節至10并在53°下和氮氣環境中加熱2小時。然后將反應混合物過濾將濾液濃縮至得到一種淺棕色固體殘余物，使其通過凝膠過濾(Sephadex LH20；水)純化且然后凍干至得到淺棕色松散固體產物(112mg)。
實施例234-膦酰基氧基苯基硫脲鈉封端的樹枝狀聚合物的制備PAMAM4.0(EDA)將固體4-膦酰基氧基苯基異硫氰酸鈉(251mg)加入到PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)的水(20ml)溶液中。將所得溶液(pH9)在室溫下和氮氣環境中攪拌24小時。然后將反應混合物濃縮至得到一種白色固體殘余物，使其通過凝膠過濾(Sephadex LH0；水)純化且然后凍干至得到白色松散固體產物(86mg)。
實施例244-(膦酰基甲基)苯基硫脲鈉封端的樹枝狀聚合物的制備PAMAM4.0(EDA)將固體4-(膦酰基甲基)苯基異硫氰酸鈉(97mg)加入到PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)的水(30ml)溶液中。將所得溶液在室溫下和氮氣環境中攪拌3天，通過定期添加飽和NaHCO3溶液將pH維持在8。然后將反應混合物濃縮至得到一種白色固體殘余物，使其通過凝膠過濾(Sephadex LH20；水)純化且然后凍干至得到白色松散固體產物(102mg)。
實施例25乙基4-(膦酰基甲基)苯基硫脲鈉封端的樹枝狀聚合物的制備PAMAM4.0(EDA)將固體乙基4-(膦酰基甲基)苯基硫脲異硫氰酸鈉(109mg)加入到PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)的DMF(30ml)溶液中。將所得溶液在室溫下和氮氣環境中攪拌17小時，通過定期添加飽和NaHCO3溶液將pH維持在8。然后將反應混合物濃縮至得到一種白色固體殘余物，使其通過凝膠過濾(Sephadex LH20；水)純化且然后凍干至得到白色松散固體產物(30mg)。
實施例26Cn-烷基連接的2-硫代唾液酸糖苷(thiosialoside)封端的樹枝狀聚合物的制備通過下列步驟制備[(8-辛酸N-羥基琥珀酰亞胺酯)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰基-3,5-雙脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷]酸(α-D-galacto-2-nonulopyranosid)onate)甲酯。
向5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰基-2-S-乙酰基-3,5-雙脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖酸(α-D-galacto-2-nonulopyranosonate)甲酯(Hasegawa等，1986)(100mg)的無水二甲基甲酰胺(1ml)溶液中加入8-溴辛酸(41mg)和二乙胺(280mg)并將該溶液在20℃下攪拌17小時。在真空中除去溶劑并使殘余物分配在乙酸乙酯和5％冰冷的鹽酸之間。將有機層用水洗滌、用硫酸鈉干燥并蒸發至得到殘余物(130mg)。將其溶于乙酸乙酯(5ml)并加入N-羥基琥珀酰亞胺(26mg)和二環己基碳化二亞胺(46mg)。將該混合物在20℃下攪拌17小時，然后過濾出白色沉淀。濃縮濾液并通過使用乙酸乙酯洗脫的硅膠閃蒸色譜法純化。合并含有產物的級分并蒸發至得到97mg、71％的白色泡沫。
以類似方式制備下列物質[(11-十一酸N-羥基琥珀酰亞胺酯)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰基-3,5-雙脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷]酸甲酯；[(乙酸N-羥基琥珀酰亞胺酯)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰基-3,5-雙脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷]酸甲酯；[(4-丁酸N-羥基琥珀酰亞胺酯)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰基-3,5-雙脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷]酸甲酯；[(4-甲基苯甲酸N-羥基琥珀酰亞胺酯)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰基-3,5-雙脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷]酸甲酯。A PAMAM[EDA]4.0[(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-雙脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸(2-nonulopyranosidoic acid)]32BRI6112在惰性氣體環境中向PAMAM[EDA]4.0(50mg)的無水二甲亞砜(4ml)溶液中加入[(8-辛酸N-羥基琥珀酰亞胺酯)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰基-3,5-雙脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷]酸甲酯(300mg)并將該溶液在20℃下攪拌60小時。在真空中除去溶劑并將殘余物溶于甲醇(2ml)。將該溶液在Sephadex LH20上進行大小排阻層析、用甲醇洗脫。在蒸發溶劑時，獲得182mg、93％的產物PAMAM[EDA]4.0[[(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-雙脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷]酸甲酯]32、為一種白色粉末。
通過下列方法將其轉化成游離的唾液酸糖苷(sialoside)在20℃下和氬氣環境中向PAMAM[EDA]4.0[[(8-辛酸N-羥基琥珀酰亞胺酯)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰基-3,5-雙脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷]酸甲酯]32(182mg)的無水甲醇(3ml)溶液中加入新近制備的0.19M甲醇鈉的甲醇(7ml)溶液并將該混合物攪拌2.5小時。蒸發溶劑并將殘余物溶于水(10ml)且攪拌3小時。將該溶液在Sephadex LH20上進行大小排阻層析、用水洗脫。在凍干時，獲得110mg、77％的產物PAMAM[EDA]4.0[(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-雙脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸]32、為一種淺檸檬色粉末。
通過類似步驟制備下列物質PAMAM[EDA]4.0[(11-十一酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-雙脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸]32BRI6147；PAMAM[EDA]4.0[(乙酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-雙脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸]32BRI6121；PAMAM[EDA]4.0[(4-甲基苯甲酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-雙脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸]32BRI6120；BHAlyslys2lys4lys8lys16[(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-雙脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸]32BRI6169。
在20℃下，將BHAlyslys2lys4lys8lys16(t-Boc)32(20.3mg)溶于三氟乙酸(2ml)和二氯甲烷(2ml)混合物所得到的溶液攪拌2小時，然后在真空中除去溶劑。將殘余物溶于無水二甲亞砜(1ml)并加入二異丙基乙胺(25mg)和[(8-辛酸N-羥基琥珀酰亞胺酯)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰基-3,5-雙脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷]酸甲酯(78mg)。在20℃下和氬氣環境中將該混合物攪拌60小時，然后在真空中除去溶劑。將殘余物溶于新近制備的0.1M甲醇鈉的甲醇(2.5ml)溶液并在20℃下和氬氣環境中將該混合物攪拌3小時。蒸發溶劑并將殘余物溶于水(1ml)并攪拌17小時。將該溶液在Sephadex LH20上進行大小排阻層析、用水洗脫。在凍干后，獲得44mg、86％的產物BHAlyslys2lys4lys8lys16[(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-雙脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸]32、為一種白色粉末。
實施例27唾液酸4-位上修飾的樹枝狀唾液酸糖苷(sialoside)的制備通過下列步驟制備4-疊氮基-5-乙酰氨基-7,8,9-三-O-乙酰基-2-S-乙酰基-3,4,5,-三脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸甲酯。向4-疊氮基-5-乙酰氨基-7,8,9-三-O-乙酰基-2-氯-3,4,5,-三脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酮酸甲酯(Sabesan,1994)(5g)的無水二氯甲烷(150ml)溶液中加入細粉狀的硫羥乙酸鉀(5.8g)并在20℃下將該混懸液劇烈攪拌48小時。將該混合物過濾并蒸發至得到淺棕色泡沫(5.2)。通過制備型反相HPLC[C18,30％乙腈/水]分離所需產物、為一種白色泡沫(3.9g,72％)。
通過下列步驟制備[(8-辛酸N-羥基琥珀酰亞胺酯)4-疊氮基-5-乙酰氨基-7,8,9-三-O-乙酰基-3,5-雙脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷]酸甲酯。
向4-疊氮基-5-乙酰氨基-7,8,9-三-O-乙酰基-2-S-乙酰基-3,4,5,-三脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸甲酯(300mg)的無水二甲基甲酰胺(3.5ml)溶液中加入8-溴辛酸(155mg)和二乙胺(1.26ml)并在20℃下將該溶液攪拌17小時。在真空中除去溶劑并使殘余物分配在乙酸乙酯和10％冰冷的鹽酸之間。將有機層用水洗滌、用硫酸鈉干燥并蒸發至得到一種黃色泡沫(385mg)。將其溶于乙酸乙酯(20ml)并加入N-羥基琥珀酰亞胺(95mg)和二環己基碳化二亞胺(175mg)。在20℃下將該混合物攪拌17小時，然后過濾出白色沉淀。將濾液濃縮并通過制備型反相HPLC[C18,30％乙腈/水]純化而得到一種白色泡沫(340mg,83％)。A PAMAM[EDA]4.0[(8-辛酰氨基)-4-疊氮基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸]32BRI6146在惰性氣體環境中向PAMAM[EDA]4.0(72mg)的無水二甲亞砜(5ml)溶液中加入[(8-辛酸N-羥基琥珀酰亞胺酯)4-疊氮基-5-乙酰氨基-7,8,9-三-O-乙酰基-3,4,5-三脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷]酸甲酯(318mg)并將該溶液在20℃下攪拌60小時。在真空中除去溶劑并將殘余物溶于甲醇(2ml)。將該溶液在Sephadex LH20上進行大小排阻層析、用甲醇洗脫。在蒸發溶劑時，獲得225mg、81％的產物PAMAM[EDA]4.0[[(8-辛酰氨基)4-疊氮基-5-乙酰氨基-7,8,9-三-O-乙酰基-3,4,5-三脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷]酸甲酯]32、為一種白色泡沫。
通過下列方法獲得游離的唾液酸糖苷(sialoside)在20℃下和氬氣環境中向PAMAM[EDA]4.0[[(8-辛酰氨基)4-疊氮基-5-乙酰氨基-7,8,9-三-O-乙酰基-3,4,5-三脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷]酸甲酯]32(215mg)的無水甲醇(1ml)溶液中加入新近制備的1M甲醇鈉的甲醇(1ml)溶液并將該混合物攪拌3小時。蒸發溶劑并將殘余物溶于水(2ml)且攪拌17小時。將該溶液在Sephadex LH20上進行大小排阻層析、用水洗脫。在凍干時，獲得160mg、90％的產物PAMAM[EDA]4.0[(8-辛酰氨基)-4-疊氮基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸]32、為一種松散的白色粉末。B PAMAM[EDA]4.0[(8-辛酰氨基)-4-氨基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸]32BRI6149在20℃下使硫化氫氣流緩慢通過PAMAM[EDA]4.0[(8-辛酰氨基)-4-疊氮基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸]32(25mg)溶于吡啶(40ml)和水(20ml)的混合物所得到的溶液中5天。然后用氮氣使該溶液發泡2小時以便除去過量的硫化氫。將該溶液蒸發至無水并將殘余物溶于水(5ml)且通過0.45μm的濾膜過濾以除去硫。在凍干時，獲得23mg、96％的產物PAMAM[EDA]4.0[(8-辛酰氨基)-4-氨基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸]32、為一種松散的白色粉末。
實施例28硼酸封端的樹枝狀聚合物的制備4-羧基苯基硼酸N-羥基琥珀酰亞胺酯向-羧苯基硼酸(500mg)的無水二甲基甲酰胺(5ml)溶液中加入N-羥基琥珀酰亞胺(380mg)和二環己基甲酰胺(680mg)。在20℃下將該混合物攪拌64小時，然后過濾出白色沉淀。在真空中除去溶劑并將殘余物溶于乙酸乙酯(100ml)。將該溶液用水洗滌、用硫酸鈉干燥并蒸發至得到一種白色固體，使其從乙腈/水中結晶、為細針狀體(730mg,92％)。PAMAM[EDA]4.0[4-苯甲酰氨基硼酸]32BRI6160在惰性氣體環境中向PAMAM[EDA]4.0(69mg)的無水二甲亞砜(5ml)溶液中加入4-羧苯基硼酸N-羥基琥珀酰亞胺酯(130mg)并將該溶液在20℃下攪拌65小時。向該渾濁的淤漿中加入1M碳酸鈉溶液(1ml)并將澄清溶液再攪拌24小時。在真空中除去溶劑并將殘余物溶于10％的氨溶液(5ml)。將該溶液在Sephadex LH20柱上進行大小排阻層析，用10％氨溶液洗脫。在蒸發溶劑時，獲得110mg、94％的產物PAMAM[EDA]4.0[4-苯甲酰氨基硼酸]32、為一種白色松散固體。
實施例293,6-二磺基萘基硫脲鈉封端的樹枝狀聚合物的制備BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32將三氟乙酸(2ml)加入到BHAlyslys2lys4lys8lys16DBL32(147mg)的無水二氯甲烷(2ml)攪拌的混懸液中并將所得溶液在室溫下和氮氣環境中攪拌2小時且然后濃縮。將殘余物溶于N,N-二甲基-N-烯丙基胺緩沖液(pH9.5；5ml)且然后加入固體異硫氰酸3,6-二磺基萘基酯(400mg)。接著通過加入1M碳酸鈉將該混合物的pH調節至9.5并在53℃下和氮氣環境中將該溶液加熱3小時。并將該反應混合物濃縮并將殘余物重新溶于水且使該溶液過Amberlite IR120(Na)柱。將濾液濃縮至得到粗產物，使其通過凝膠過濾(Sephadex LH20；水)純化而得到用64個3,6-二磺基萘基硫脲鈉基團封端的BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32、為一種白色松散固體(175mg)。
實施例303,5-二磺基苯基硫脲鈉封端的樹枝狀聚合物的制備BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32將三氟乙酸(3ml)加入到BHAlyslys2lys4lys8lys16DBL32(300mg；0.02ml)的無水二氯甲烷(3ml)攪拌的混懸液中并將所得溶液在室溫下和氮氣環境中攪拌2小時且然后濃縮。將殘余物溶于水并使該溶液過Amberlite IR401(OH)柱并將濾液濃縮至得到一種粘性油(187mg)。將該油溶于吡啶/水的1∶1混合物(8ml)并加入異硫氰酸3,5-二磺苯基酯(680mg；2mmol)。將所得溶液在53℃下和氮氣環境中加熱3小時。然后將該溶液濃縮至得到一種白色固體殘余物。使該粗產物通過凝膠過濾(Sephadex LH20；水)純化而得到用64個3,6-二磺基苯基硫脲鈉基團封端的BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32、為一種白色松散固體。
實施例313,5-二羧基苯基硫脲鈉封端的樹枝狀聚合物的制備BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32BRI6741將三氟乙酸(3ml)加入到BHAlyslys2lys4lys8lys16DBL32(300mg；0.02ml)的無水二氯甲烷(3ml)攪拌的混懸液中并將所得溶液在室溫下和氮氣環境中攪拌2小時且然后濃縮。將殘余物溶于水并使該溶液過Amberlite IR401(OH)柱并將濾液濃縮至得到一種粘性油(186mg)。將該油溶于吡啶/水的1∶1混合物(8ml)并加入異硫氰酸3,5-二羧苯基酯(450mg；2mmol)。將所得溶液在53℃下和氮氣環境中加熱13小時。然后將該溶液濃縮至得到一種白色固體殘余物。使該粗產物通過凝膠過濾(Sephadex LH20；水)純化而得到用64個3,6-二羧基苯基脲鈉基團封端的BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32、為一種白色松散固體。
以類似方式制備3,5-二羧基苯基硫脲鈉封端的樹枝狀聚合物PAMAM4.0(EDA)BRI6195。
實施例324-膦酰基氧基苯基硫脲鈉封端的樹枝狀聚合物的制備BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32BRI6181將三氟乙酸(2ml)加入到BHAlyslys2lys4lys8lys16DBL32(147mg；0.01ml)的無水二氯甲烷(2ml)攪拌的混懸液中并將所得溶液在室溫下和氮氣環境中攪拌2小時且然后濃縮至得到一種粘性油。將該油溶于N,N-二甲基-N-烯丙基胺(pH9.5；5ml)并加入固體異硫氰酸4-膦酰基氧基苯基酯(250mg)。用1M碳酸鈉將該所得溶液的pH調節至10并在53℃下和氮氣環境中將該溶液加熱3小時。然后將該溶液濃縮至得到一種白色固體殘余物。將該殘余物重新溶于水并使該溶液過Amberlite IR120(Na)柱且濃縮濾液。然后使該殘余物通過凝膠過濾(Sephadex LH20；水)純化而得到用64個4-膦酰基氧基苯基脲鈉基團封端的BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32、為一種白色松散固體(150mg)。
實施例334-膦酰基苯基硫脲鈉封端的樹枝狀聚合物的制備BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32將三氟乙酸(2ml)加入到BHAlyslys2lys4lys8lys16DBL32(147mg；0.01ml)的無水二氯甲烷(2ml)攪拌的混懸液中并將所得溶液在室溫下和氮氣環境中攪拌2小時且然后濃縮至得到一種粘性油。將該油溶于N,N-二甲基-N-烯丙基胺(pH9.5；5ml)并加入固體異硫氰酸4-膦酰基苯基酯(250mg)。用飽和碳酸氫鈉溶液將該所得溶液的pH調節至9并在53℃下和氮氣環境中將該溶液加熱3小時。然后將該溶液濃縮至得到一種白色固體殘余物。將該殘余物重新溶于水并使該溶液過Amberlite IR120(Na)柱且濃縮濾液。然后使殘余物通過凝膠過濾(Sephadex LH20；水)純化而得到用64個4-膦酰基苯基脲鈉基團封端的BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32BRI6196,在凍干后得到一種白色松散固體(152mg)。
實施例344,6-二膦酰基萘基硫脲鈉封端的樹枝狀聚合物的制備PAMAM4.0將異硫氰酸4,6-二膦酰基萘基酯(165mg)的水(2ml)溶液加入到PAMAM4.0(51mg；0.01mmol)的水(2ml)溶液中。用飽和碳酸氫鈉溶液將該混合物的pH調節至9.5并將該混合物在室溫下劇烈攪拌1小時且然后在53℃下和氮氣環境中加熱3小時。接著將該混合物過濾并將濾液濃縮至得到一種棕色固體殘余物。使該粗產物通過凝膠過濾(Sephadex G25；水)純化而得到用24個4,6-二膦酰基萘基硫脲鈉基團封端的PAMAM4.0，在凍干后得到一種棕色固體(81mg)。
實施例35熒光素硫脲封端的樹枝狀聚合物的制備PAMAM4.0(EDA)將固體異硫氰酸熒光素酯(188mg)加入到PAMAM4.0(EDA)(74mg；0.01mmol)的水(3ml)溶液中。加入飽和碳酸氫鈉溶液將pH調節至9并將所得的均勻溶液在室溫下攪拌過夜且然后濃縮。使橙色殘余物通過凝膠過濾(Sephadex LH20；水)純化而得到用21個熒光素硫脲基團封端的PAMAM4.0(EDA)，在凍干后得到一種松散的橙色固體(193mg)。
實施例36(苯基-3-硼酸)硫脲鈉封端的樹枝狀聚合物的制備PAMAM4.0(EDA)將固體(苯基-3-硼酸)異硫氰酸酯(100mg；0.5mmol)加入到PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)的水(2ml)溶液中。將1M碳酸鈉加入到溶解的異硫氰酸酯中(pH約為10)。然后在53℃下和氮氣環境中將該混合物加熱2小時、接著過濾并將濾液濃縮至得到一種淺棕色固體殘余物。使該粗產物通過凝膠過濾(Sephadex LH20；水)純化而得到用32個(苯基-3-硼酸)硫脲基團封端的PAMAM4.0(EDA)，在凍干后得到一種白色松散固體(87mg)。
實施例37吡啶鎓十二烷基羧酰氨基-(Pyridinium dodecyl carboxamido-)封端的樹枝狀聚合物的制備PAMAM2.0樹枝狀聚合物BRI-6807從0.5ml的MeOH溶液中蒸發出PAMAM2.0代的核(0.0479mmol；50mg)且然后將其重新溶于10ml的水。向該溶液中加入1-N-吡啶鎓12-十二酸溴化物(0.14g；0.384mmol)、N-羥基苯并三唑水合物[HOBT](52mg；0.384mmol)、三乙胺(53μl；0.384mmol)和鹽酸1-(3-二乙氨基丙基-3-乙基)碳化二亞胺[EDC](74mg；0.384mmol)。將該反應混合物在室溫下攪拌過夜。在減壓條件下使體積減少至三分之一并使該溶液在LH20柱上進行層析，用水作洗脫劑。收集含有產物的級分并通過凍干分離出吡啶鎓十二烷基羧酰胺PAMAM2.0溴化物、為一種松散的白色固體。1H nmr(D2O):δ1.15,1.45,1.9,2.15,2.75,2.8,3.15,3.35,3.5,4.55,8.05,8.5,8,8.PAMAM4.0樹枝狀聚合物BRI-6809從1.0ml的MeOH溶液中蒸發出PAMAM4.0代的核(0.05mmol；69mg)且然后將其重新溶于15ml的水。向該溶液中加入1-N-吡啶鎓12-十二酸溴化物(0.143g；0.4mmol)、N-羥基苯并三唑水合物[HOBT](77mg；0.4mmol)、三乙胺(56μl；0.4mmol)和鹽酸1-(3-二乙氨基丙基-3-乙基)碳化二亞胺[EDC](77mg；0.4mmol)。
將該反應混合物在室溫下攪拌過夜。在減壓條件下使體積減少至三分之一并使該溶液在LH20柱上進行層析，用1％的三乙胺水溶液作洗脫劑。收集含有產物的級分并通過凍干分離出吡啶鎓十二烷基羧酰胺PAMAM溴化物4.0、為一種松散的白色固體。使少量產物與乙酐反應而證實該樹枝狀聚合物核的NH2端基被完全封端。1H nmr(D2O):δ1.10,1.45,1.9,2.1,2.30,2.5,2.7,3.2,4.5,8.00,8.45,8.80.
實施例38糖精封端的樹枝狀聚合物的制備PAMAM4.0樹枝狀聚合物BRI-6157向乙二胺核PAMAM4.0樹枝狀聚合物核(275mg；39.8μM)的無水二甲基甲酰胺(25ml)溶液中加入6-(苯并硫酰亞氨基)異硫氰酸酯(400mg；1.67mM)并將該混合物在室溫下攪拌24小時。通過用碳酸鈉溶液將pH調節至pH10-10.5而使渾濁溶液澄清。將該溶液再攪拌24小時并在旋轉蒸發器上除去揮發性物質。將該溶液在大SephadexLH20柱上進行層析并收集前面的級分。收集剩余的級分并重新在小柱上進行層析。蒸發合并的前面的級分并凍干至得到糖精封端的樹枝狀聚合物產物(450mg；78％)、為一種松散的白色固體。1H nmr(D2O):δ2.20,2.50 3.23,3.46,3.63,7.52,7.87.
按照類似方式制備糖精封端的BHA.lys.lys2lys4.lys8.lys16.lys32…樹枝狀聚合物BRI-6189。
實施例39體外抗寄生物試驗I進行下列試驗作為體外試驗以用于測試抑制錐蟲的作用。A 材料和方法培養基Balz-MEM”+10％加熱失活的馬血清錐蟲菌株 STB900(克隆自STIB704的T.b.rhodesiense)STB920(克隆自STIB348的T.b.brucei)STB930(克隆自STIB754的T.b.gambiense)標準藥物 硫胂密胺(Arsobal,Specia,France)，噴他脒(Pentacarinat,Rhone-Poulenc),蘇拉明(Germanin,Bayer,Germany)培養條件 在37℃下和5％CO2的濕潤環境中72小時。測試系統 96孔微量滴定平板；100μl/孔；200-1000個錐蟲/孔(根據菌株來決定)并使用兩個終點讀數進行評估評估 a．通過MIC的顯微測定b．在添加BCECF/AM后進行熒光讀取或使用Coulter計數器或CASY進行計數藥物制備液10mM 10％溶劑(DMSO、乙醇等)的儲備溶液，最高藥物濃度為50μM。
具體測試步驟本試驗基于LILIT低接種物濃度和長培養期試驗(Brun和Lun Vet《寄生物》(Par.)52(1994)37-46)1.將50μl的完全培養基加入到橫行B-H、縱行2-10的96孔平板(標記的孔)中；2．將75μl的含有兩次最高測試用藥物濃度的培養基加入到B-D(D1)和F-H(D2)11號縱行的孔中；3．使用多用移液管通過將來自11號孔的25μl轉入10號孔制備系列稀釋液并通過吸取和最少10次分配培養基進行混合。
4．從左至右方向連續稀釋，直到將25μl從5號孔加至4號孔為止。在混合后，棄去剩余的25μl。將每橫行中的2號和3號孔用作不含藥物的對照孔。
5．以4×103/ml的接種密度將50μl錐蟲混懸液加入到所述平板的2-11號孔的B、C和F、G孔(制成200/孔)。將不含錐蟲的50μl Balz培養基加入到2-11號孔的D和E橫行中作為用于熒光試驗的背景對照。
6．在37℃、5％CO2下培養平板。
7．在反向顯微鏡下觀察以便用顯微鏡測定MIC(最低抑制濃度)可以觀察到最低藥物濃度，在此濃度下，與對照孔相比沒有正常形態和游動的錐蟲或在此濃度下沒有錐蟲存活。
8．通過在添加BCECF/AM后的熒光讀數或通過用Coulter計數器的生長抑制評價可以進一步評估本試驗。B．結果測試下列樹枝狀聚合物。
(ⅰ)在72小時熒光試驗中測試4種化合物在體外對T.b.rhodesiense(SYIB900)的活性。以4mg/ml的濃度將所有化合物溶于蒸餾水且然后稀釋至在完全培養基中的所需濃度。
MIC=最低抑制濃度(沒有錐蟲存活)MIC=最高耐受濃度(沒有藥物效應)(ⅱ)在72小時熒光試驗中測試5種化合物在體外對T.b.rhodesiense(SYIB900)的活性。以20μg/ml的濃度將所有化合物溶于蒸餾水且然后按1∶10稀釋入完全培養基(BMEM+10％HI馬)。
Ⅱ在用于測試抑制錐蟲屬(T)和瘧原蟲屬(P)種類的體外試驗中獲得下列試驗結果。測試下列化合物
使用下列菌株進行測試寄生物 菌株 階段 標準藥物T.b.rhodesiense STIB900錐鞭毛體硫胂密胺惡性瘧原蟲NF54 所有階段 氯喹結果(所有值均為μg/ml)
實施例40抗菌活性的測定本試驗中所用的細菌是金黃色葡萄球菌(ATCC29213)糞腸球菌(ATCC29212)大腸桿菌(ATCC25922)通過使用2-5×104cfu(對數期)接種物在陽離子調節的Mueller-Hinton肉湯(pH7)中進行微量肉湯稀釋(NCCLS-M7A3 1993)并在35℃和需氧條件下培養24和48小時來測定最低抑制濃度(MIC)和最低殺菌濃度(MBC)。將MBC看作表示接種物減少3log的滴度。將測定的結果列在下表中(所有單位均以μg/ml計)。
MIC=最低抑制濃度(MBC)=最低殺菌濃度實施例41樹枝狀聚合物對體外人紅細胞中人瘧原蟲惡性瘧原蟲的侵入和生長的作用的定量方法瘧原蟲.3D7是體外充分表征化的惡性瘧原蟲的適應培養系。使寄生物在人紅細胞內的生長和復制進行重復循環。各循環的期限是從寄生物的幼環狀體期開始的48小時，所述的寄生物通過染色的滋養體(在循環的第一個24小時過程中)至分裂以釋放快速侵害新鮮紅細胞的感染性裂殖子的分裂的裂殖體而成熟。
寄生物培養和生長試驗.使用充分公開的技術在新近收集的人紅細胞的同步型體外培養物中維持惡性瘧原蟲(3D7系)寄生物。為進行侵害試驗，通過凝膠飄浮法純化含有成熟的染色滋養體的紅細胞，然后將其懸浮于新鮮的人紅細胞中，使得每200個紅細胞中約有1個含寄生物(5％的寄生物血癥)。接著加入新鮮培養基以便使最終紅細胞濃度為2×108個紅細胞/ml。
將紅細胞懸浮液的等分試樣(各95μl)分配入96孔平板、一式兩份。將含有測試化合物(BRI 2999；BRI6741；BRI2998；BRI7011；BRI6181)或PBS(對照)的5μl寄生物培養基加入適宜的孔中并在37℃和1％O2下培養平板。立即(時間=0)、隨后在24、48和72小時培養后制作來自各孔的薄涂片。在pH7.2下用吉姆薩染色后通過對涂片進行顯微鏡檢驗來對各涂片進行寄生物血癥和寄生物成熟階段進行定量。這使得侵害的寄生物發育且隨后對再侵害進行定量。在各取樣時間點處，完全替換剩余孔中的培養基(含或不含化合物)。
首先將測試化合物以20mg/ml溶于無菌等滲磷酸鹽緩沖鹽水(pH7.2)，然后進一步稀釋成1mg/ml-200μg/ml范圍的濃儲備溶液。將儲備溶液在整個試驗期間內保存在4℃下并在需要時適當稀釋入寄生物培養基。結果對各化合物進行各自的侵入/生長實驗并以圖解方式將結果列在附

圖1-5中。在10、25和50μg/ml的終濃度下測試各化合物的作用。5種化合物中的每一種均顯示出對寄生物侵入、生長和復制的濃度依賴性抑制作用；就任意給定的濃度而言，絕對抑制水平實際上在不同化合物之間是不同的。在所有測試濃度(達到且包括50μg/ml)下，5種測試化合物中沒有一種對紅細胞形態有任何不利作用。在測試BRI7011和BRI6181的實驗中(附圖4和5)，在72小時時，在對照孔中的寄生物侵入水平低于在正常情況下所觀察到的。這是由于在48小時培養后寄生物生長某一段時間中的表觀阻滯而使得在72小時時，較大比例的裂殖體尚未突發釋放侵入的裂殖子所導致的。
權利要求
1．一種預防性或治療性抑制人或非人的動物患者體內微生物或寄生物劑的方法，該方法包括對所述患者給予有效量的帶有多個端基的樹枝狀聚合物，其中至少一個所述端基帶有與之結合或連接的含陰離子或陽離子的部分。
2．一種根據權利要求1所述的方法，其中所述的化合物是樹枝狀聚合物，它包括與至少兩個樹枝狀分支共價結合的多價核并通過至少兩代擴展。
3．一種根據權利要求2所述的方法，其中所述的樹枝狀聚合物是基于氨核的聚酰氨基胺樹枝狀聚合物。
4．一種根據權利要求2所述的方法，其中所述的樹枝狀聚合物是基于乙二胺核的聚酰氨基胺樹枝狀聚合物。
5．一種根據權利要求2所述的方法，其中所述的樹枝狀聚合物是基于二苯甲基胺核或其它合適核的聚賴氨酸樹枝狀聚合物。
6．一種根據權利要求2所述的方法，其中所述的樹枝狀聚合物是聚(丙烯亞胺)樹枝狀聚合物。
7．一種根據權利要求2所述的方法，其中所述的化合物是下列通式Ⅰ的聚離子型樹 其中I是引發劑核；Z是內部支化單元；n是代表所述樹枝狀聚合物代數的整數；且A是可以通過任選的連接基團X與內部支化單元Z連接的含陰離子或陽離子的部分。
8．一種根據權利要求1-7中任意一項所述的方法，其中在所述的化合物中，所述含陰離子或陽離子的部分或多個部分通過酰胺或硫脲鍵與胺、硫氫基、羥基或其它反應性端基結合。
9．一種根據權利要求1-8中任意一項所述的方法，其中在所述的化合物中，所述含陰離子或陽離子的部分選自下列部分組成的組含磺酸的部分、含羧酸的部分(包括含神經氨酸和唾液酸的部分和含修飾的神經氨酸和唾液酸的部分)、含硼酸的部分、含磷酸和膦酸的部分(包括含酯化的磷酸和膦酸的部分)、含伯氨基、仲氨基、叔氨基或季氨基的部分、含吡啶鎓的部分、含鈲鹽的部分、含脒鎓的部分、含苯酚的部分、具有酸性或堿性氫的雜環和含兩性離子的部分。
10．一種根據權利要求1-9中任意一項所述的方法，其中在所述的化合物中，與樹枝狀聚合物的氨基或其它反應性端基結合的部分或多個部分選自下列基團，其中n是0或正整數-NH(CH2)nSO3--(CH2)nSO3--Ar(SO3-)n-CH2CH(SO3-)COOH -CH(SO3-)CH2COOH -ArX(CH2)nSO3-X=O.S,NH -ArXP(=O)(OR)2X=O,CH2,CHF,CF2R=烷基，芳基，H,Na-ArXP(=O)(OR1)(NR2R3) X=O, CH2,CHF,CF2R1=烷基，芳基，H,Na R2,R3=烷基，芳基-Ar[P(=O)(OR)2]nR=烷基，芳基，H,Na n=1-3-Ar[B(OH)2]nn=1-3 -Ar[COOH]nn=1-3 R=烷基或芳烷基；R1、R2、R3(可以相同或不同)=烷基或芳烷基
11．一種根據權利要求1-10中任意一項所述的方法，其中所述的化合物選自下列物質組成的組ⅰ．烷基磺酸封端的樹枝狀聚合物；ⅱ．磺基乙酰胺封端的樹枝狀聚合物；ⅲ．磺基琥珀酰胺酸封端的樹枝狀聚合物；ⅳ．N-(2-磺基乙基)琥珀酰胺封端的樹枝狀聚合物；ⅴ．4-磺基苯基硫脲封端的樹枝狀聚合物；ⅵ．3,6-二-磺基萘基硫脲封端的樹枝狀聚合物；ⅶ．4-磺基萘基硫脲封端的樹枝狀聚合物；ⅷ．3,5-二-磺基苯基硫脲封端的樹枝狀聚合物；ⅸ．3,6,8-三-磺基萘基硫脲封端的樹枝狀聚合物；ⅹ．4-(磺基甲基)苯甲酰胺封端的樹枝狀聚合物；ⅹⅰ．4-磺基苯甲酰胺封端的樹枝狀聚合物；ⅹⅱ．N-(4-磺基苯基)丙酰胺封端的樹枝狀聚合物；ⅹⅲ．4-磺基苯基脲封端的樹枝狀聚合物；ⅹⅳ．N,N,N-三-甲基甘氨酰胺封端的樹枝狀聚合物；ⅹⅴ．4-三甲基銨苯甲酰胺封端的樹枝狀聚合物；ⅹⅵ．4-(三甲基銨甲基)苯甲酰胺封端的樹枝狀聚合物；ⅹⅶ．N-(2-乙酰氧基乙基)-N,N-(二甲基銨)甲基-羧酰胺封端的樹枝狀聚合物；ⅹⅷ．胍基封端的樹枝狀聚合物；ⅹⅸ．4-([1,4,8,11-四氮雜環十四烷]甲基)苯甲酰胺封端的樹枝狀聚合物；ⅹⅹ．4-羧基-3-羥基-芐胺封端的樹枝狀聚合物；ⅹⅹⅰ．4-羧基苯基酰胺封端的樹枝狀聚合物；ⅹⅹⅱ．3,5-二羧基苯基酰胺封端的樹枝狀聚合物；ⅹⅹⅲ．4-膦酰基氧基苯基硫脲封端的樹枝狀聚合物；ⅹⅹⅳ.4-(膦酰基甲基)苯基硫脲封端的樹枝狀聚合物；ⅹⅹⅴ．乙基-4-(膦酰基甲基)苯基硫脲封端的樹枝狀聚合物；ⅹⅹⅵ．(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-雙脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸封端的樹枝狀聚合物；ⅹⅹⅶ．(11-十一酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-雙脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸封端的樹枝狀聚合物；ⅹⅹⅷ．(乙酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-雙脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸封端的樹枝狀聚合物；ⅹⅹⅸ．(4-丁酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-雙脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸封端的樹枝狀聚合物；ⅹⅹⅹ．(4-甲基苯甲酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-雙脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸封端的樹枝狀聚合物；ⅹⅹⅹⅰ．(8-辛酰氨基)-4-疊氮基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸封端的樹枝狀聚合物；ⅹⅹⅹⅱ．(8-辛酰氨基)-4-氨基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脫氧-2-硫-D-甘油基-α-D-半乳糖基-2-nonulo吡喃糖苷酸封端的樹枝狀聚合物；ⅹⅹⅹⅲ．4-苯甲酰氨基硼酸封端的樹枝狀聚合物；ⅹⅹⅹⅳ．3,5-二羧基苯基硫脲封端的樹枝狀聚合物；ⅹⅹⅹⅴ．4-膦酰基氧基苯基硫脲封端的樹枝狀聚合物；ⅹⅹⅹⅵ．4-膦酰基苯基硫脲封端的樹枝狀聚合物；ⅹⅹⅹⅶ．4,6-二膦酰基萘基硫脲封端的樹枝狀聚合物；ⅹⅹⅹⅷ．熒光素硫脲封端的樹枝狀聚合物；ⅹⅹⅹⅸ．(苯基-3-硼酸)-硫脲封端的樹枝狀聚合物；ⅹl．十二烷基羧酰胺吡啶鎓封端的樹枝狀聚合物；和ⅹll．糖精封端的樹枝狀聚合物。
12．一種根據權利要求1-11中任意一項所述的方法，其中所述的治療包括抑制細菌、酵母或真菌病原體或寄生物病原體。
13．一種用于預防性或治療性抑制人或非人的動物體內微生物或寄生物劑的藥物組合物或獸藥組合物，它包括如權利要求1-11中任意一項所定義的陰離子或陽離子樹枝狀聚合物以及至少一種藥物上或獸藥上可接受的載體或稀釋劑。
14．如權利要求1-11中任意一項所定義的陰離子或陽離子樹枝狀聚合物在預防性或治療性抑制人或非人的動物體內微生物或寄生物劑中的用途，或制備用于預防性或治療性抑制人或非人的動物體內微生物或寄生物劑的藥物中的用途。
全文摘要
本發明涉及一種預防性或治療性抑制人或非人的動物患者體內微生物或寄生物劑的方法,該方法包括對所述患者給予有效量的帶有多個端基的樹枝狀聚合物的步驟,其中至少一個端基帶有與之結合或連接的陰離子或陽離子部分。
文檔編號C08G69/48GK1323214SQ99812270
公開日2001年11月21日 申請日期1999年9月13日 優先權日1998年9月14日
發明者B·R·馬休斯, G·霍蘭 申請人:星藥有限公司