本發明屬于(yu)藥物合(he)成領域，具體涉及一種bcl-2抑制劑venetoclax的(de)合(he)成方(fang)法。
背景技術：
bcl-2蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)在(zai)(zai)30年前即1986年首(shou)次被發現，由(you)bcl-2基因表(biao)達。bcl-2基因是(shi)一種原(yuan)癌(ai)基因，其表(biao)達的(de)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)稱(cheng)為(wei)bcl-2家(jia)族(zu)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)。bcl-2家(jia)族(zu)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)是(shi)細(xi)胞(bao)凋(diao)亡(wang)(wang)途(tu)徑中(zhong)的(de)一種重要(yao)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)，在(zai)(zai)腫瘤(liu)的(de)發生及轉移中(zhong)起(qi)關鍵作用(yong)(yong)。通(tong)過(guo)與bax形成二(er)聚體以(yi)及自身二(er)聚，bcl-2蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)在(zai)(zai)細(xi)胞(bao)凋(diao)亡(wang)(wang)的(de)調控中(zhong)發揮重要(yao)作用(yong)(yong)：當(dang)bcl-2蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)被抑制(zhi)時，它與bax形成二(er)聚體減少(shao)，從而導致細(xi)胞(bao)的(de)凋(diao)亡(wang)(wang)；當(dang)bcl-2蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)過(guo)度表(biao)達時，它與bax形成的(de)雜二(er)聚體增(zeng)多(duo)，細(xi)胞(bao)凋(diao)亡(wang)(wang)被抑制(zhi)。bcl-2和bax蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)在(zai)(zai)細(xi)胞(bao)死亡(wang)(wang)信號檢(jian)查(cha)點之(zhi)間的(de)平衡，決定了細(xi)胞(bao)的(de)生存或凋(diao)亡(wang)(wang)。由(you)于在(zai)(zai)癌(ai)細(xi)胞(bao)中(zhong)高度表(biao)達，bcl-2家(jia)族(zu)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)抑制(zhi)劑可以(yi)選擇(ze)性地在(zai)(zai)腫瘤(liu)細(xi)胞(bao)中(zhong)發揮抗腫瘤(liu)作用(yong)(yong)。目前，bcl-2家(jia)族(zu)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)已成為(wei)抗癌(ai)藥物(wu)研發的(de)重要(yao)靶(ba)點之(zhi)一。
venetoclax(abt-199)是abbvie公司和genentech公司合(he)作研發的(de)(de)(de)(de)(de)一個選擇性(xing)(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)(de)bcl-2抑制(zhi)劑，用(yong)(yong)于(yu)治(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)療(liao)(liao)(liao)慢性(xing)(xing)(xing)淋(lin)巴(ba)(ba)細胞(bao)(bao)(bao)(bao)白(bai)血病(bing)，非(fei)霍(huo)奇金淋(lin)巴(ba)(ba)瘤(liu)，小淋(lin)巴(ba)(ba)細胞(bao)(bao)(bao)(bao)淋(lin)巴(ba)(ba)瘤(liu)，彌(mi)漫性(xing)(xing)(xing)大(da)b細胞(bao)(bao)(bao)(bao)淋(lin)巴(ba)(ba)瘤(liu)，多發性(xing)(xing)(xing)骨髓(sui)瘤(liu)等。在2011年進入(ru)臨床試驗(yan)，i期試驗(yan)(nct01328626)入(ru)組(zu)了84例復(fu)發性(xing)(xing)(xing)/難(nan)治(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)性(xing)(xing)(xing)cll/sll患者和44例復(fu)發型(xing)/難(nan)治(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)型(xing)非(fei)霍(huo)奇金淋(lin)巴(ba)(ba)瘤(liu)患者。venetoclax治(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)療(liao)(liao)(liao)cll/sll的(de)(de)(de)(de)(de)應答(da)(da)率(lv)為79％(完全應答(da)(da)率(lv)為22％)，中(zhong)位(wei)持續應答(da)(da)時間為20.5個月(yue)；venetoclax治(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)療(liao)(liao)(liao)非(fei)霍(huo)奇金淋(lin)巴(ba)(ba)瘤(liu)的(de)(de)(de)(de)(de)應答(da)(da)率(lv)為48％(完全應答(da)(da)率(lv)為7.5％)。截至目前，共獲得fda授(shou)(shou)予(yu)(yu)的(de)(de)(de)(de)(de)3個突(tu)(tu)破性(xing)(xing)(xing)治(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)療(liao)(liao)(liao)藥(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)資(zi)格：2015年4月(yue)，fda授(shou)(shou)予(yu)(yu)venetoclax單(dan)(dan)藥(yao)(yao)治(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)療(liao)(liao)(liao)攜帶17p刪除突(tu)(tu)變的(de)(de)(de)(de)(de)復(fu)發性(xing)(xing)(xing)/難(nan)治(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)性(xing)(xing)(xing)慢性(xing)(xing)(xing)淋(lin)巴(ba)(ba)細胞(bao)(bao)(bao)(bao)白(bai)血病(bing)(cll)的(de)(de)(de)(de)(de)突(tu)(tu)破性(xing)(xing)(xing)藥(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)資(zi)格；2016年1月(yue)，fda授(shou)(shou)予(yu)(yu)venetoclax聯合(he)抗(kang)癌藥(yao)(yao)利妥昔(xi)單(dan)(dan)抗(kang)(rituximab，美羅華)治(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)療(liao)(liao)(liao)復(fu)發性(xing)(xing)(xing)/難(nan)治(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)性(xing)(xing)(xing)慢性(xing)(xing)(xing)淋(lin)巴(ba)(ba)細胞(bao)(bao)(bao)(bao)白(bai)血病(bing)的(de)(de)(de)(de)(de)突(tu)(tu)破性(xing)(xing)(xing)藥(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)資(zi)格；此后不(bu)久(jiu)，fda又授(shou)(shou)予(yu)(yu)venetoclax與去甲基化藥(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)(hmas)合(he)并用(yong)(yong)藥(yao)(yao)突(tu)(tu)變性(xing)(xing)(xing)治(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)療(liao)(liao)(liao)藥(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)資(zi)格，用(yong)(yong)于(yu)不(bu)宜接(jie)受標準(zhun)誘導治(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)療(liao)(liao)(liao)的(de)(de)(de)(de)(de)既往未治(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)療(liao)(liao)(liao)的(de)(de)(de)(de)(de)急(ji)性(xing)(xing)(xing)髓(sui)性(xing)(xing)(xing)白(bai)血病(bing)患者。此外，2016年1月(yue)初，fda授(shou)(shou)予(yu)(yu)venetoclax單(dan)(dan)藥(yao)(yao)治(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)療(liao)(liao)(liao)既往已(yi)接(jie)受至少一種(zhong)療(liao)(liao)(liao)法的(de)(de)(de)(de)(de)cll(包括17p缺失(shi)cll)的(de)(de)(de)(de)(de)新藥(yao)(yao)申請(qing)(nda)優先審查資(zi)格。2016年4月(yue)11日(ri)美國(guo)fda批準(zhun)venetoclax用(yong)(yong)于(yu)治(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)療(liao)(liao)(liao)慢性(xing)(xing)(xing)淋(lin)巴(ba)(ba)細胞(bao)(bao)(bao)(bao)白(bai)血病(bing)，成(cheng)為全球第一個bcl-2抑制(zhi)劑。
venetoclax別名abt-199，cas號(hao)：1257044-40-8；分(fen)子(zi)量：868.44；分(fen)子(zi)式：c45h50cln7o7s。化合(he)物結構如下：
專利(li)wo2012058392、wo2012071336、wo2010138588等公開了(le)venetoclax的合(he)成(cheng)方法，以5-溴-7-氮雜吲哚為(wei)原(yuan)料經三(san)異丙基硅(gui)基保(bao)護(hu)、羥基化得(de)到化合(he)物(wu)3，再與2,4-二(er)氟苯(ben)甲(jia)酸甲(jia)酯反應(ying)得(de)到ven-16，與化合(he)物(wu)4反應(ying)、水(shui)解得(de)到化合(he)物(wu)6，化合(he)物(wu)6與ven-21縮(suo)合(he)得(de)到venetocla，具(ju)體路線如下：
上述專利用該方法制備ven-16時，由(you)于2,4-二(er)氟苯甲酸甲酯(zhi)有兩個f都可以參加反應，導致純化(hua)困(kun)難，需柱層析純化(hua)；化(hua)合物5專利中(zhong)也沒有精制方法，同樣是(shi)通過柱層析純化(hua)，因此(ci)放大(da)比較困(kun)難。
專利cn201410582048以2-氟-4-硝(xiao)基(ji)苯甲酸甲酯為(wei)原(yuan)料(liao)，與5-羥基(ji)-7-氮雜吲哚反(fan)應(ying)生成(cheng)(cheng)化合(he)(he)(he)物(wu)(wu)8，硝(xiao)基(ji)還(huan)原(yuan)得到化合(he)(he)(he)物(wu)(wu)9，用雙(2-氯乙基(ji))胺成(cheng)(cheng)哌嗪(qin)環合(he)(he)(he)成(cheng)(cheng)化合(he)(he)(he)物(wu)(wu)10、經柱層析(xi)純化，三步總(zong)收率57.4％；化合(he)(he)(he)物(wu)(wu)10和ven-7縮合(he)(he)(he)、水(shui)解生成(cheng)(cheng)化合(he)(he)(he)物(wu)(wu)12，再(zai)與ven-21縮合(he)(he)(he)生成(cheng)(cheng)ven-0。
上述專(zhuan)利所用原料2-氟-4-硝(xiao)基苯(ben)甲(jia)(jia)酸甲(jia)(jia)酯相對2,4-二氟苯(ben)甲(jia)(jia)酸甲(jia)(jia)酯價格較貴，而且(qie)沒有(you)商業化(hua)大(da)量供應；而且(qie)該合成路線(xian)所有(you)化(hua)合物(wu)純化(hua)均通過柱層析純化(hua)，很難進行放大(da)反應，因此無法工(gong)業化(hua)生產。
技術實現要素：
本(ben)發明提供了(le)一種bcl-2抑制劑venetoclax的合成(cheng)方法(fa)，新的合成(cheng)方法(fa)，能夠(gou)克服之前路線的缺陷，產(chan)(chan)率高，操作(zuo)簡便，完全避免(mian)了(le)不適合工業化(hua)(hua)生產(chan)(chan)的柱層析純化(hua)(hua)操作(zuo)，而且合成(cheng)成(cheng)本(ben)低(di)，適合工業化(hua)(hua)生產(chan)(chan)放大。
一種bcl-2抑(yi)制劑venetoclax的(de)合(he)成方(fang)法(fa)，包括以下步驟：
(1)5-羥基-7-氮(dan)雜(za)吲哚(duo)與2,4-二氟苯甲酸甲酯在堿的作用下發生醚化反應，反應結(jie)束后(hou)(hou)經(jing)過(guo)后(hou)(hou)處(chu)理得到ven-16；
(2)ven-16與(yu)n-boc-哌嗪(qin)在(zai)堿的(de)作(zuo)用下發(fa)生胺(an)化反應得到(dao)ven-17；
(3)將ven-17進行水解反(fan)應(ying)得(de)到ven-18；
(4)ven-18和(he)ven-21在縮合劑的作用下發生縮合反應，反應結(jie)束后(hou)經過后(hou)處理得到ven-19；
(5)ven-19在酸性條件下發(fa)生脫boc反應(ying)，得到(dao)ven-20；
(6)ven-20與ven-7在堿的(de)作用下發生取(qu)代反應(ying)，反應(ying)結束后(hou)經過后(hou)處理得到所述(shu)的(de)venetoclax；
反應式如下：
步驟(1)中，使(shi)用價格較為(wei)(wei)低廉(lian)的2,4-二氟苯甲(jia)酸(suan)甲(jia)酯為(wei)(wei)原料，與5-羥(qian)基-7-氮(dan)雜(za)吲(yin)哚縮合反(fan)應(ying)得到ven-16，通過控制反(fan)應(ying)條件可以(yi)有效地(di)抑制4-位(wei)取代異構體和其它雜(za)質(zhi)的產生，作(zuo)為(wei)(wei)優(you)選，所述的堿為(wei)(wei)碳(tan)酸(suan)鉀，碳(tan)酸(suan)鈉，碳(tan)酸(suan)銫，磷酸(suan)鉀等無(wu)機(ji)堿，所述的醚化(hua)反(fan)應(ying)在甲(jia)基叔(shu)丁基醚，二氧(yang)六環，乙二醇二甲(jia)醚，二乙二醇二甲(jia)醚等醚類溶劑中進(jin)行。
作為進一步(bu)的優(you)選，所述的后處理(li)包(bao)括：除去反(fan)應溶劑，用乙(yi)酸(suan)乙(yi)酯溶解(jie)、洗滌、干燥(zao)、濃縮得到粗品(pin)，然(ran)后粗品(pin)用乙(yi)酸(suan)乙(yi)酯和(he)石(shi)油(you)醚重結(jie)晶(jing)，得到ven-16。通過該后處理(li)操作，可(ke)以進一步(bu)降低產(chan)物中4-位(wei)取(qu)代異構(gou)體和(he)其它雜(za)質的量。
步驟(zou)(2)得到(dao)的反(fan)應(ying)液經過(guo)乙(yi)(yi)酸乙(yi)(yi)酯萃(cui)取、洗(xi)滌(di)、濃縮至(zhi)干后直接進(jin)入步驟(zou)(3)進(jin)行反(fan)應(ying)，避免了柱(zhu)層析的操作。
步(bu)驟(3)中(zhong)，所述的水解反應在四(si)氫呋喃，甲(jia)醇，乙醇等有機(ji)溶劑和氫氧(yang)化鈉(na)，氫氧(yang)化鉀等無極(ji)堿水溶液的作用下進行(xing)。
步驟(4)中(zhong)，所述的縮(suo)合(he)劑由(you)edci，edc等縮(suo)合(he)試劑和三乙(yi)胺，二(er)異丙基乙(yi)基胺，dmap等有機堿組成，所述的縮(suo)合(he)反應在乙(yi)酸乙(yi)酯，四氫呋喃(nan)，二(er)氯甲烷等有機溶劑中(zhong)進行。
步驟(4)中，所述的后(hou)處(chu)理包括：反應液依次用乙(yi)酸水(shui)溶(rong)液、碳酸氫鈉(na)水(shui)溶(rong)液、水(shui)、食鹽水(shui)洗滌(di)，再經(jing)過(guo)干(gan)燥，濃縮至干(gan)得到粗(cu)品，然后(hou)用乙(yi)腈重(zhong)結(jie)晶得到ven-19，通過(guo)該后(hou)處(chu)理操(cao)作(zuo)避免了柱(zhu)層(ceng)析(xi)的使用，便于工業化生(sheng)產(chan)。
步驟(6)中，所述的(de)堿(jian)為碳酸鈉，碳酸銫，磷(lin)酸鉀(jia)，碳酸鉀(jia)等無機(ji)堿(jian)，所述的(de)取代反應在四氫呋喃，nmp，丙酮，乙腈和(he)dmf等有機(ji)溶劑中進行。
步(bu)驟(6)中，所(suo)述(shu)的(de)后處理包括：向反(fan)應液中加(jia)水析(xi)出粗產(chan)物，粗產(chan)品采用(yong)(yong)乙腈重結晶得到所(suo)述(shu)的(de)venetoclax純品，通過采用(yong)(yong)重結晶操作(zuo)，避(bi)免了柱層析(xi)操作(zuo)，且(qie)產(chan)物的(de)純度高(gao)，便(bian)于(yu)工業化(hua)生產(chan)。
同現(xian)有技術相比，本(ben)發明(ming)的有益效果(guo)體(ti)現(xian)在：
(1)本發明采用價(jia)廉易得(de)的2,4-二氟(fu)苯甲(jia)酸甲(jia)酯和關鍵中間(jian)體(ti)5-羥基-7-氮(dan)雜(za)吲哚作為起始原料進行反應(ying)(ying)，通(tong)過控制反應(ying)(ying)條件和尋(xun)找純化(hua)方(fang)法，完全(quan)除(chu)去了4-位異構(gou)體(ti)，使后續反應(ying)(ying)變得(de)簡單。
(2)本發明的后處理操(cao)作(zuo)避免了現有技術(shu)中采用的柱層析純(chun)(chun)(chun)化，通過控(kong)制中間體的純(chun)(chun)(chun)度和尋找venetoclax重結晶方法，使(shi)產品hplc純(chun)(chun)(chun)度達到99.5％，單雜小于0.1％，具有重要的工業應用價值。
具體實施方式
實(shi)施例1ven-16合成：
向三口(kou)瓶中(zhong)加(jia)入(ru)100g5-羥基(ji)-7-氮(dan)雜(za)吲(yin)哚(746mmol)、141g2,4-二(er)氟苯甲(jia)(jia)酸(suan)甲(jia)(jia)酯(zhi)(zhi)(821mmol)、237g磷酸(suan)鉀(1.12mol)和500ml二(er)乙二(er)醇二(er)甲(jia)(jia)醚(mi)，110℃反(fan)應24h(hplc監測5-羥基(ji)-7-氮(dan)雜(za)吲(yin)哚反(fan)應完全)。反(fan)應液濃縮至干(gan)，加(jia)入(ru)2l乙酸(suan)乙酯(zhi)(zhi)和2l水攪拌，分(fen)出有機相，無水硫(liu)酸(suan)鈉干(gan)燥，濃縮至干(gan)得(de)粗(cu)品。粗(cu)品用(yong)1260ml乙酸(suan)乙酯(zhi)(zhi)加(jia)熱至回(hui)流溶清，緩(huan)慢滴加(jia)1260ml石油醚(mi)，1h滴完，滴畢，繼續回(hui)流狀態(tai)攪拌1h，緩(huan)慢降溫(wen)至25℃，過濾，烘干(gan)，得(de)到淺白色(se)固體163g，收率76.5％。hplc純度98％。
反應式如下：
實施例2ven-17合成：
向反應(ying)瓶中加入30gven-16(104.9mmol)、600mldmso、23.4g(125.9mmol)n-boc-哌嗪(qin)和(he)35.9g(157.4mmol)磷(lin)酸氫二(er)鉀(jia)，升溫至(zhi)120℃反應(ying)24h(tlc監測ven-16反應(ying)完全)，加入900ml乙酸乙酯和(he)900ml水攪(jiao)拌(ban)30min后分液，有機相用(yong)2×900ml水洗，無水硫酸鈉干燥，濃縮至(zhi)干得淡(dan)黃色(se)固體66g。直接投入下步反應(ying)。
反應式如下：
實(shi)施例3ven-18合成：
反(fan)應瓶中加入40gven-17(88mmol)和400ml四氫(qing)呋喃，滴(di)加10％氫(qing)氧(yang)化鈉(na)水溶(rong)液500ml，加熱升溫至65℃反(fan)應24h，tlc監測原料反(fan)應完全，冷(leng)卻至室溫，加入400ml甲基(ji)(ji)叔(shu)丁基(ji)(ji)醚攪(jiao)拌，分出(chu)甲基(ji)(ji)叔(shu)丁基(ji)(ji)醚相，用10％鹽(yan)酸溶(rong)液調節(jie)ph至4-5，有固(gu)體析出(chu)，繼續攪(jiao)拌1h，過濾(lv)，于45℃烘(hong)干得(de)39g白色(se)粉末狀固(gu)體，收(shou)率100％。
反應式如下：
實施例4ven-19合成：
反(fan)應(ying)瓶中加入(ru)35gven-18(80mmol)和1000ml二氯甲烷，加入(ru)22.8gven-21(80mmol)、17.7gdmap(160mmol)和27.8g(160mmol)edci，30℃反(fan)應(ying)約24h，tlc監測原料(liao)反(fan)應(ying)完全，依次用900ml10％乙酸(suan)水溶(rong)液，900ml飽(bao)和碳酸(suan)氫鈉水溶(rong)液，900ml水，900ml飽(bao)和食鹽水洗(xi)，無水硫(liu)酸(suan)鈉干(gan)燥(zao)，濃縮至(zhi)干(gan)得黃色粉(fen)末(mo)狀固體粗(cu)品56g。粗(cu)品用1000ml乙腈重結晶(jing)，抽(chou)濾，濾餅200ml乙腈洗(xi)，烘干(gan)得黃色粉(fen)末(mo)狀固體47g，收率80％。hplc純度：99％。
實(shi)施例5ven-20合成：
反應瓶中加入15gven-19(20mmol)和75ml二氯甲(jia)烷(wan)，加入75ml三氟乙酸25℃反應5h，tlc監(jian)測原(yuan)料反應完全，滴加600ml甲(jia)基叔丁基醚(mi)，析出固(gu)(gu)體，過濾，用200ml甲(jia)基叔丁基醚(mi)洗，45℃烘干(gan)得黃色粉末(mo)狀(zhuang)固(gu)(gu)體19.2g。hplc純度：99％。
實施例(li)6venetoclax合(he)成：
反應(ying)瓶中加入56gven-20(88mmol)和(he)600mldmf，加入34gven-7(176mmo)和(he)120g碳酸(suan)鉀(jia)(176mmo)，升溫至80℃反應(ying)24h，tlc監測ven-20反應(ying)完全。加入6l水(shui)攪拌析出黃(huang)色(se)固體，過濾，濾餅依次(ci)用3l水(shui)、3l乙(yi)醇洗，得粗品(pin)。粗品(pin)加入2l乙(yi)腈重(zhong)結(jie)晶，抽濾，500ml乙(yi)腈洗，50℃烘干得黃(huang)色(se)粉末狀固體61g，收率(lv)80％。hplc純度：99.5％，保留(liu)時間(jian)與(yu)標(biao)準品(pin)一致，最大的單一雜質含量0.08％。
反應式如下：