本發明涉及(ji)醫藥化(hua)學領域(yu),具體涉及(ji)一種(zhong)具抗腫瘤(liu)活性的不對稱雙(shuang)取代(dai)靛(dian)紅席夫堿類化(hua)合物及(ji)其(qi)合成方(fang)法。
背景技術:
席(xi)夫堿化(hua)合(he)物(wu)(wu)(wu)因其(qi)獨特(te)(te)的(de)(de)(de)結(jie)構特(te)(te)征(zheng),即核心(xin)基(ji)團(tuan)含(han)有帶(dai)孤對(dui)電子的(de)(de)(de)N原子,從(cong)(cong)而具(ju)有很(hen)好的(de)(de)(de)配(pei)對(dui)能(neng)力(li),而該基(ji)團(tuan)兩(liang)邊均可與各種(zhong)類型的(de)(de)(de)基(ji)團(tuan)反應(ying)(ying)(ying)從(cong)(cong)而得(de)到性(xing)質不(bu)一的(de)(de)(de)衍生物(wu)(wu)(wu),這使得(de)其(qi)在實際(ji)應(ying)(ying)(ying)用上極具(ju)特(te)(te)色,尤其(qi)在化(hua)學(xue)(xue)、生物(wu)(wu)(wu)學(xue)(xue)方面(mian)應(ying)(ying)(ying)用廣(guang)泛。不(bu)對(dui)稱雙席(xi)夫堿,由于其(qi)結(jie)構的(de)(de)(de)不(bu)對(dui)稱性(xing),使得(de)擁有很(hen)多(duo)特(te)(te)殊的(de)(de)(de)用途,如(ru)可用作載氧載體、催化(hua)劑、殺蟲劑、抑菌(jun)劑、生物(wu)(wu)(wu)模擬過程的(de)(de)(de)模擬分(fen)子等,近年來此類化(hua)合(he)物(wu)(wu)(wu)的(de)(de)(de)合(he)成和性(xing)質研究也成為化(hua)學(xue)(xue)領域中一個十分(fen)活躍的(de)(de)(de)課題。
靛紅(hong)及其(qi)衍生(sheng)物具有獨(du)特的(de)(de)電子特性(xing)(xing)(xing)和優越的(de)(de)生(sheng)物活性(xing)(xing)(xing),在抗腫瘤、抗病毒、神經保(bao)護等方面的(de)(de)活性(xing)(xing)(xing)有重要意義。靛紅(hong)目(mu)前(qian)可以作為(wei)(wei)工業品大量(liang)合成,是相對較便宜的(de)(de)原料,其(qi)1、2、3位(wei)及苯(ben)環上(shang)可以發生(sheng)多(duo)種類型(xing)的(de)(de)化(hua)學反應(ying),為(wei)(wei)其(qi)衍生(sheng)物的(de)(de)合成提供了廣闊的(de)(de)空間,因此目(mu)前(qian)對靛紅(hong)及其(qi)衍生(sheng)物的(de)(de)合成和活性(xing)(xing)(xing)的(de)(de)研究非(fei)常活躍(yue)。
含O、S、N的(de)(de)席(xi)(xi)夫(fu)堿(jian)及(ji)其金屬(shu)配(pei)合(he)(he)(he)物(wu),以其良好的(de)(de)抑菌、抗癌和(he)抗病毒的(de)(de)生(sheng)(sheng)物(wu)活(huo)性一直(zhi)受到(dao)人們的(de)(de)重視(shi)。靛紅(hong)席(xi)(xi)夫(fu)堿(jian)類(lei)化合(he)(he)(he)物(wu)具有較好的(de)(de)抑菌、抗病毒、神經保護(hu)活(huo)性。因(yin)此,筆者利(li)用(yong)5-N雜靛紅(hong)及(ji)其衍(yan)生(sheng)(sheng)物(wu)、靛紅(hong)及(ji)其衍(yan)生(sheng)(sheng)物(wu)和(he)水合(he)(he)(he)肼(jing)為原料,設計合(he)(he)(he)成了一類(lei)結構新穎的(de)(de)不(bu)對稱雙取代靛紅(hong)席(xi)(xi)夫(fu)堿(jian)類(lei)化合(he)(he)(he)物(wu)。
技術實現要素:
:
為(wei)了客服上(shang)述現有技術(shu)的(de)(de)不(bu)(bu)足,本發(fa)明(ming)的(de)(de)目的(de)(de)是提供一(yi)種一(yi)種具抗腫(zhong)瘤活性的(de)(de)不(bu)(bu)對稱雙取代靛紅席夫(fu)堿類化合(he)(he)物(wu)及其(qi)合(he)(he)成(cheng)方法,采用(yong)5-N雜靛紅及其(qi)衍生(sheng)物(wu)、靛紅及其(qi)衍生(sheng)物(wu)和水(shui)合(he)(he)肼為(wei)原(yuan)料,以(yi)乙(yi)醇作溶劑,在加熱回流的(de)(de)條件(jian)下(xia)進(jin)行合(he)(he)成(cheng),原(yuan)料環保,生(sheng)產(chan)成(cheng)本低,操作安全性高,反應條件(jian)溫和,反應原(yuan)料利用(yong)充分,適用(yong)于工業化生(sheng)產(chan),解(jie)決了現有技術(shu)產(chan)率(lv)低的(de)(de)問(wen)題。
為(wei)了實現(xian)上述目的(de),本發明(ming)采用的(de)技(ji)術方(fang)案是(shi):
一種(zhong)具有抗腫瘤活性的不(bu)對稱雙取代靛紅席夫堿(jian)類(lei)化合物,其(qi)結構如式(Ⅰ)如下所示(shi):
其中,R1、R2、R3可以為氫(qing)、硝基(ji)、烷氧基(ji)、鹵(lu)素,取代(dai)或(huo)(huo)未(wei)取代(dai)的苯基(ji),取代(dai)或(huo)(huo)未(wei)取代(dai)的低級(ji)烷基(ji)或(huo)(huo)環烷基(ji)、低級(ji)烷基(ji)-環烷基(ji)、環烷基(ji)-低級(ji)烷基(ji);
優選R1表示下(xia)列基(ji)團:氫、甲氧(yang)基(ji)、硝基(ji)、鹵(lu)素,取(qu)(qu)代(dai)或未取(qu)(qu)代(dai)的苯基(ji),取(qu)(qu)代(dai)或未取(qu)(qu)代(dai)的低級(ji)烷(wan)(wan)基(ji)或環(huan)烷(wan)(wan)基(ji)。
優選R2表示下列基(ji)(ji)(ji)團:甲(jia)氧基(ji)(ji)(ji)、硝基(ji)(ji)(ji)、甲(jia)基(ji)(ji)(ji)、鹵素,取(qu)(qu)代或未取(qu)(qu)代的苯基(ji)(ji)(ji),取(qu)(qu)代或未取(qu)(qu)代的低級烷基(ji)(ji)(ji)或環(huan)烷基(ji)(ji)(ji)。
優選R3表(biao)示下列基團:甲(jia)氧基、硝基、甲(jia)基、鹵素,取代或未取代的低(di)級烷(wan)基或環(huan)烷(wan)基。
一種具有抗腫瘤(liu)活(huo)性的不(bu)對(dui)稱雙取代(dai)靛紅席夫堿類(lei)化合(he)(he)(he)物的合(he)(he)(he)成(cheng)方法,由(you)5-N雜靛紅及其(qi)衍(yan)生物、靛紅及其(qi)衍(yan)生物和水合(he)(he)(he)肼為(wei)原(yuan)料(liao),在乙醇作為(wei)反應溶(rong)劑的條件下進行(xing)合(he)(he)(he)成(cheng),合(he)(he)(he)成(cheng)路線如下所示:
具體的制(zhi)備過(guo)程如下(xia):
1)將適量5-N雜靛紅或其衍生(sheng)物用有(you)機溶劑溶解(jie),置于錐(zhui)形瓶(ping)中(zhong),磁力攪拌下緩慢滴加(jia)到水合肼的有(you)機溶劑中(zhong),加(jia)熱到60℃~100℃,反應4~8小時;
2)薄(bo)層層析(xi)(xi)方法跟蹤反應至(zhi)完全,將反應體(ti)(ti)系的混合(he)液(ye)趁熱抽濾,用乙醇洗滌(di),濾液(ye)靜(jing)置析(xi)(xi)晶(jing)得到中(zhong)間(jian)體(ti)(ti);
3)將上(shang)述得到的中(zhong)(zhong)間(jian)體與靛紅或其衍生物按摩爾比1:1~1:2置于反應器中(zhong)(zhong),繼續加熱、攪拌,60℃~100℃下(xia)回流反應2~6小(xiao)時;
4)TCL跟蹤至反應(ying)完全,停止(zhi)加熱,撤去冷凝裝置。將(jiang)反應(ying)體系的(de)固液(ye)混合物減壓濃(nong)縮(suo),然后冷卻至室溫過濾,濾餅(bing)用溫水洗滌,得到不(bu)對稱雙(shuang)取代靛紅西(xi)佛堿粗品;
5)將不對稱雙(shuang)取(qu)代靛紅西佛堿粗品(pin)加入到(dao)反(fan)應(ying)器中,加入有機(ji)溶劑進行重結晶,過濾,干燥得到(dao)目標產物化合(he)物(I)。
所述步驟(1)中的(de)有機溶劑(ji)優選(xuan)甲(jia)醇或(huo)乙(yi)醇,進一步優選(xuan)為乙(yi)醇。
所述(shu)的步驟(1)中5-N雜(za)靛紅或(huo)其衍生物與水合肼的摩(mo)爾(er)比為1:1~1:2.5,進一步優選(xuan)為1:1.5~1:2。
所述的步驟(1)中的反應時間(jian)優(you)選為5~6小時。
所(suo)述的步驟1)、步驟3)中的溫度為75℃~85℃。
所述(shu)的步驟(zou)3)中的中間體與靛紅或其衍生物按摩爾(er)比為1:1~1:1.5。
所述(shu)的步驟3)中的反應時間為3~4小時。
所述的(de)步(bu)(5)所述的(de)有(you)機溶劑為乙醇。
結構(gou)(gou)式(I)部(bu)分優(you)選實施(shi)方(fang)案中的化(hua)合物(wu)結構(gou)(gou)式如(ru)下所示(shi):
本發(fa)明(ming)的有(you)益效(xiao)果是:
原(yuan)料環保(bao),生產成(cheng)本低,操作安(an)全性高,反應(ying)條件溫和,反應(ying)原(yuan)料利用(yong)充分(fen),適用(yong)于工業化(hua)生產,解決了現有(you)技術(shu)產率低的問題。
具體實施方式
以下結合實施例對本發(fa)明進一(yi)步(bu)敘(xu)述,但(dan)本發(fa)明不局限(xian)于(yu)以下實施例。
實施例1
化合物(1)(Z)-3-((Z)-(1,5-dimethyl-2-oxoindolin-3-ylidene)hydrazono)-1-methyl-1H-pyrrolo[3,2-c]pyridin-2(3H)-one的制備(bei)。
將適量1.62g(10mmol)1-甲基-5-N雜靛(dian)(dian)紅用(yong)50mL乙(yi)醇(chun)(chun)溶(rong)解,置(zhi)于錐形(xing)瓶中(zhong),磁(ci)力(li)攪拌(ban)下緩慢滴(di)加到50mL含(han)有0.75g(15mmol)水合(he)(he)肼的乙(yi)醇(chun)(chun)溶(rong)液(ye)中(zhong),加熱到80℃,反(fan)應(ying)6小時。薄層(ceng)層(ceng)析(xi)方法(fa)跟蹤反(fan)應(ying)至完(wan)全,將反(fan)應(ying)體(ti)(ti)系的混合(he)(he)液(ye)趁熱抽濾,用(yong)乙(yi)醇(chun)(chun)洗(xi)滌,濾液(ye)靜(jing)置(zhi)析(xi)晶得到中(zhong)間體(ti)(ti)。所(suo)得中(zhong)間體(ti)(ti)與2.09g(10mmol)5-氯-1-乙(yi)基靛(dian)(dian)紅置(zhi)于反(fan)應(ying)器中(zhong),加入50mL乙(yi)醇(chun)(chun),繼續加熱、攪拌(ban),80℃下回流(liu)反(fan)應(ying)4小時。TCL跟蹤至反(fan)應(ying)完(wan)全,停(ting)止加熱,撤(che)去冷(leng)凝(ning)裝置(zhi)。將反(fan)應(ying)體(ti)(ti)系的固(gu)液(ye)混合(he)(he)物(wu)減壓(ya)濃縮,冷(leng)卻至室溫后過濾,濾餅(bing)用(yong)溫水洗(xi)滌,得到不對稱雙取代靛(dian)(dian)紅西佛堿(1)粗品。將該粗品加入到反(fan)應(ying)器中(zhong),加入25mL乙(yi)醇(chun)(chun)進行重結晶,過濾,干燥得到淡(dan)黃(huang)色(se)結晶性粉末(mo)(2.34克),總收率63.8%。
淡黃色結晶粉末,M.P.161.5℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.94(2H,s,J=2Hz),8.76(1H,d,J=3Hz),8.23(1H,s,J=2Hz),7.76(1H,t,J=2Hz),7.18(1H,s,J=2Hz),3.46(3H,s),3.42(3H,s),2.36(3H,s);13C-NMR(75MHz,DMSOd6)δ(ppm):163.6,155.9,152.6,150.5,138.4,138.2,134.3,129.8,120.7,117.8,116.3,112.7,109.9,30.2,21.5;HRMS(ESI)for(M+H)+:calcd:333.1228,found:333.1231.
實施例2
化合物(2)(Z)-3-((Z)-(5-chloro-1-ethyl-2-oxoindolin-3-ylidene)hydrazono)-1-methyl-1H-pyrrolo[3,2-c]pyridin-2(3H)-one的制備。
將適量1.62g(10mmol)1-甲基(ji)-5-N雜靛紅用(yong)50mL乙醇(chun)溶解,置(zhi)于錐形(xing)瓶(ping)中,磁力攪拌下緩慢滴加(jia)到(dao)50mL含有(you)0.75g(15mmol)水合肼的乙醇(chun)溶液(ye)中,加(jia)熱到(dao)80℃,反(fan)(fan)(fan)應(ying)6小(xiao)時(shi)。薄層層析方(fang)法(fa)跟(gen)蹤(zong)反(fan)(fan)(fan)應(ying)至(zhi)(zhi)完全(quan),將反(fan)(fan)(fan)應(ying)體系的混(hun)(hun)合液(ye)趁熱抽(chou)濾,用(yong)乙醇(chun)洗滌(di)(di),濾液(ye)靜置(zhi)析晶得(de)(de)到(dao)中間(jian)體。所得(de)(de)中間(jian)體與1.75g(10mmol)1,7-二甲基(ji)靛紅置(zhi)于反(fan)(fan)(fan)應(ying)器中,加(jia)入(ru)(ru)50mL乙醇(chun),繼(ji)續加(jia)熱、攪拌,80℃下回流反(fan)(fan)(fan)應(ying)4小(xiao)時(shi)。TCL跟(gen)蹤(zong)至(zhi)(zhi)反(fan)(fan)(fan)應(ying)完全(quan),停止加(jia)熱,撤去冷(leng)凝(ning)裝置(zhi)。將反(fan)(fan)(fan)應(ying)體系的固液(ye)混(hun)(hun)合物減(jian)壓(ya)濃縮,冷(leng)卻至(zhi)(zhi)室溫后過濾,濾餅用(yong)溫水洗滌(di)(di),得(de)(de)到(dao)不對稱雙取代靛紅西佛堿(2)粗(cu)品。將該粗(cu)品加(jia)入(ru)(ru)到(dao)反(fan)(fan)(fan)應(ying)器中,加(jia)入(ru)(ru)25mL乙醇(chun)進行(xing)重結晶,過濾,干燥得(de)(de)到(dao)灰白(bai)色結晶性(xing)粉末(2.47克),總收率74.2%。
灰白色結晶粉末,M.P.179.4℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.94(2H,s,J=6Hz),8.76(1H,d,J=3Hz),7.91(1H,s,J=20Hz),7.82(2H,d,J=20Hz),7.51(1H,d,J=21Hz),7.18(1H,d,J=2Hz),4.30(3H,q,J=25Hz),3.42(3H,s,),1.33(3H,t);13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):163.4,155.9,152.6,150.5,145.7,138.2,131.5,130.2,124.5,119.3,112.6,109.8,42.4,30.3,13.8;HRMS(ESI)for(M+H)+:calcd:367.0837,found:367.0839.
實施例3
化合物(3)(Z)-1-ethyl-3-((Z)-(1-isopropyl-5-methyl-2-oxoindolin-3-ylidene)hydrazono)-1H-pyrrolo[3,2-c]pyridin-2(3H)-one的制備。
將適量1.76(10mmol)1-乙基-5-N雜(za)靛(dian)紅(hong)用50mL乙醇溶(rong)解,置于錐形瓶中(zhong)(zhong)(zhong),磁力(li)攪(jiao)拌下緩慢滴加(jia)到(dao)50mL含有0.75g(15mmol)水合(he)肼的(de)乙醇溶(rong)液(ye)中(zhong)(zhong)(zhong),加(jia)熱(re)到(dao)80℃,反(fan)應(ying)(ying)(ying)6小(xiao)時(shi)。薄(bo)層層析方法跟蹤(zong)(zong)反(fan)應(ying)(ying)(ying)至完全,將反(fan)應(ying)(ying)(ying)體系的(de)混合(he)液(ye)趁熱(re)抽濾,用乙醇洗滌,濾液(ye)靜置析晶得到(dao)中(zhong)(zhong)(zhong)間體。所得中(zhong)(zhong)(zhong)間體與2.03g(10mmol)5-甲基-1-異丙基靛(dian)紅(hong)置于反(fan)應(ying)(ying)(ying)器中(zhong)(zhong)(zhong),加(jia)入50mL乙醇,繼續加(jia)熱(re)、攪(jiao)拌,80℃下回(hui)流反(fan)應(ying)(ying)(ying)4小(xiao)時(shi)。TCL跟蹤(zong)(zong)至反(fan)應(ying)(ying)(ying)完全,停止加(jia)熱(re),撤去冷(leng)(leng)凝裝置。將反(fan)應(ying)(ying)(ying)體系的(de)固液(ye)混合(he)物減(jian)壓濃縮,冷(leng)(leng)卻至室溫后過(guo)濾,濾餅用溫水洗滌,得到(dao)不對(dui)稱(cheng)雙(shuang)取(qu)代靛(dian)紅(hong)西佛堿(3)粗(cu)品。將該粗(cu)品加(jia)入到(dao)反(fan)應(ying)(ying)(ying)器中(zhong)(zhong)(zhong),加(jia)入25mL乙醇進行(xing)重結(jie)晶,過(guo)濾,干燥得到(dao)白色(se)結(jie)晶性粉末(2.73克(ke)),總收(shou)率(lv)72.7%。
白色結晶粉末,M.P.170.2℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.94(2H,s,J=7.5Hz),8.76(1H,d,J=7.5Hz),8.23(1H,s,J=1.5Hz),7.76(1H,d,J=7.5Hz),7.18(2H,d,J=7.5Hz),4.30(2H,q,J=8.0Hz),3.96(1H,m,J=1.5Hz),2.35(3H,s,J=8.0Hz),1.41(3H,t,J=6.8Hz),1.22(6H,d,J=6.8Hz);13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):163.4,156.0,152.6,150.5,144.6,138.2,134.3,129.8,120.7,117.8,116.3,112.7,109.9,58.6,42.4,21.5,20.8,13.8;HRMS(ESI)for(M+H)+:calcd:375.1697,found:375.1701.
實施例4
化合(he)物(wu)(4)(Z)-3-((Z)-(1-cyclohexyl-5-methoxy-2-oxoindolin-3-ylidene)hydrazono)-1-isopropyl-1H-pyrrolo[3,2-c]pyridin-2(3H)-one的制(zhi)備。
將(jiang)適量1.90g(10mmol)1-異丙基-5-N雜靛(dian)紅用(yong)(yong)50mL乙(yi)(yi)(yi)醇(chun)(chun)(chun)溶(rong)解,置于(yu)錐形瓶中(zhong)(zhong),磁力攪拌(ban)下緩慢滴加(jia)到(dao)50mL含有0.75g(15mmol)水合(he)肼的乙(yi)(yi)(yi)醇(chun)(chun)(chun)溶(rong)液中(zhong)(zhong),加(jia)熱(re)(re)到(dao)80℃,反應6小時(shi)。薄層層析(xi)方法跟(gen)蹤反應至(zhi)完全,將(jiang)反應體系的混合(he)液趁熱(re)(re)抽濾,用(yong)(yong)乙(yi)(yi)(yi)醇(chun)(chun)(chun)洗滌,濾液靜置析(xi)晶(jing)得到(dao)中(zhong)(zhong)間體。所得中(zhong)(zhong)間體與2.59g(10mmol)1-環己基-5-甲氧基靛(dian)紅置于(yu)反應器中(zhong)(zhong),加(jia)入(ru)(ru)50mL乙(yi)(yi)(yi)醇(chun)(chun)(chun),繼續加(jia)熱(re)(re)、攪拌(ban),80℃下回流反應4小時(shi)。TCL跟(gen)蹤至(zhi)反應完全,停止加(jia)熱(re)(re),撤(che)去冷凝裝置。將(jiang)反應體系的固液混合(he)物減壓濃縮,冷卻至(zhi)室溫后過濾,濾餅用(yong)(yong)溫水洗滌,得到(dao)不(bu)對稱雙(shuang)取代靛(dian)紅西佛堿(4)粗品(pin)。將(jiang)該粗品(pin)加(jia)入(ru)(ru)到(dao)反應器中(zhong)(zhong),加(jia)入(ru)(ru)25mL乙(yi)(yi)(yi)醇(chun)(chun)(chun)進行重結晶(jing),過濾,干燥得到(dao)灰色結晶(jing)性粉末(mo)(2.99克),總(zong)收率67.3%。
灰色結晶粉末,M.P.193.0℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.94(2H,s,J=0.4Hz),8.76(1H,d,J=7.5Hz),7.77(1H,d,J=7.5Hz),7.50(1H,s,J=7.5Hz),7.18(1H,d,J=0.4Hz),7.06(1H,d,J=1.5Hz),3.96(1H,m,J=6.8Hz),3.57(1H,m,J=7.0Hz),1.76(2H,m,,1.49(2H,m),1.32-1.12(10H,m);13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):163.0,156.5,152.6,150.5,139.9,138.2,128.1,118.8,113.7,112.6,109.9,101.6,64.5,58.7,55.9,31.4,25.9,25.3,20.8;HRMS(ESI)for(M+H)+:calcd:445.2115,found:445.2119.
實施例5
化合物(5)的制(zhi)備。
將(jiang)(jiang)適量1.90g(10mmol)1-乙(yi)(yi)基-5-N雜(za)靛紅(hong)用(yong)50mL乙(yi)(yi)醇溶解,置(zhi)于錐形瓶中,磁(ci)力(li)攪拌下緩慢滴加(jia)(jia)到(dao)(dao)50mL含有0.75g(15mmol)水合(he)肼的(de)乙(yi)(yi)醇溶液(ye)中,加(jia)(jia)熱(re)到(dao)(dao)80℃,反(fan)應(ying)(ying)6小時。薄層(ceng)層(ceng)析方(fang)法(fa)跟蹤反(fan)應(ying)(ying)至完(wan)全,將(jiang)(jiang)反(fan)應(ying)(ying)體(ti)(ti)系(xi)的(de)混合(he)液(ye)趁(chen)熱(re)抽濾(lv),用(yong)乙(yi)(yi)醇洗滌(di),濾(lv)液(ye)靜(jing)置(zhi)析晶得到(dao)(dao)中間體(ti)(ti)。所得中間體(ti)(ti)與2.55g(10mmol)1-苯乙(yi)(yi)基-5-氟(fu)靛紅(hong)置(zhi)于反(fan)應(ying)(ying)器中,加(jia)(jia)入(ru)50mL乙(yi)(yi)醇,繼續(xu)加(jia)(jia)熱(re)、攪拌,80℃下回流反(fan)應(ying)(ying)4小時。TCL跟蹤至反(fan)應(ying)(ying)完(wan)全,停止加(jia)(jia)熱(re),撤去冷(leng)凝裝置(zhi)。將(jiang)(jiang)反(fan)應(ying)(ying)體(ti)(ti)系(xi)的(de)固液(ye)混合(he)物減壓(ya)濃縮(suo),冷(leng)卻至室溫后過濾(lv),濾(lv)餅用(yong)溫水洗滌(di),得到(dao)(dao)不對(dui)稱雙(shuang)取代靛紅(hong)西佛堿(5)粗品。將(jiang)(jiang)該粗品加(jia)(jia)入(ru)到(dao)(dao)反(fan)應(ying)(ying)器中,加(jia)(jia)入(ru)25mL乙(yi)(yi)醇進行(xing)重結(jie)晶,過濾(lv),干燥得到(dao)(dao)褐(he)色結(jie)晶性粉末(mo)(3.07克),總(zong)收率71.8%。
褐色結晶粉末,M.P.232.8℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.94(2H,s,J=0.4Hz),8.76(1H,d,J=0.4Hz),7.85,7.77(2H,m,J=7.5Hz),7.42-7.12(7H,m),4.30(2H,q),1.39(3H,t);13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):163.7,163.4,158.8,155.9,152.6,150.5,143.2,138.2,136.3,128.7,127.1,126.9,125.2,119.5,118.1,112.7,111.0,109.9,47.5,42.4,13.8;HRMS(ESI)for(M+Na)+:calcd:427.1446,found 427.1449.
實施例6
化合物(6)(Z)-1-ethyl-3-((Z)-(5-fluoro-1-methyl-2-oxoindolin-3-ylidene)hydrazono)-1H-pyrrolo[3,2-c]pyridin-2(3H)-one的制備。
將適量1.90g(10mmol)1-乙基(ji)-5-N雜(za)靛紅(hong)用50mL乙醇溶解,置(zhi)(zhi)于錐形瓶中(zhong),磁(ci)力攪拌(ban)(ban)下緩慢滴加(jia)(jia)(jia)到50mL含有0.75g(15mmol)水合(he)肼(jing)的(de)乙醇溶液(ye)中(zhong),加(jia)(jia)(jia)熱到80℃,反(fan)(fan)應(ying)6小(xiao)時。薄層(ceng)層(ceng)析方法跟蹤(zong)反(fan)(fan)應(ying)至完全(quan)(quan),將反(fan)(fan)應(ying)體系(xi)的(de)混(hun)合(he)液(ye)趁熱抽濾(lv),用乙醇洗滌,濾(lv)液(ye)靜置(zhi)(zhi)析晶得到中(zhong)間體。所得中(zhong)間體與1.91g(10mmol)1-甲基(ji)-5-甲氧基(ji)靛紅(hong)置(zhi)(zhi)于反(fan)(fan)應(ying)器中(zhong),加(jia)(jia)(jia)入(ru)50mL乙醇,繼續加(jia)(jia)(jia)熱、攪拌(ban)(ban),80℃下回流(liu)反(fan)(fan)應(ying)4小(xiao)時。TCL跟蹤(zong)至反(fan)(fan)應(ying)完全(quan)(quan),停(ting)止加(jia)(jia)(jia)熱,撤去冷(leng)凝(ning)裝置(zhi)(zhi)。將反(fan)(fan)應(ying)體系(xi)的(de)固液(ye)混(hun)合(he)物(wu)減壓濃縮,冷(leng)卻至室溫后過濾(lv),濾(lv)餅用溫水洗滌,得到不對稱雙取代(dai)靛紅(hong)西佛堿(jian)(6)粗品。將該(gai)粗品加(jia)(jia)(jia)入(ru)到反(fan)(fan)應(ying)器中(zhong),加(jia)(jia)(jia)入(ru)25mL乙醇進(jin)行重結(jie)晶,過濾(lv),干燥得到黃(huang)色結(jie)晶性(xing)粉(fen)末(1.36克),總(zong)收(shou)率(lv)38.7%。
黃色結晶粉末,M.P.201.3℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.94(2H,s,J=0.4Hz),8.76(1H,d,J=7.5Hz),7.85,7.77(2H,m,J=7.5Hz),7.36(1H,t,J=1.5Hz),7.18(1H,d,J=0.4Hz),4.30(2H,q,J=8.0Hz),3.46(3H,s,J=8.0Hz),1.39(3H,t);13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):162.5,158.8,155.9,152.6,150.5,138.2,136.9,125.2,119.5,118.1,112.6,111.0,109.8,42.4,30.3,13.9;HRMS(ESI)for(M+Na)+:calcd:351.1134,found:351.117.
實施例7
化合(he)物(7)(Z)-1-benzyl-3-((Z)-(5-methoxy-1-methyl-2-oxoindolin-3-ylidene)hydrazono)-1H-pyrrolo[3,2-c]pyridin-2(3H)-one的制備(bei)。
將(jiang)(jiang)適量2.38g(10mmol)1-苯(ben)乙(yi)基(ji)-5-N雜靛紅(hong)用50mL乙(yi)醇溶解(jie),置(zhi)于錐(zhui)形瓶中(zhong),磁(ci)力(li)攪拌下(xia)緩慢滴(di)加(jia)(jia)(jia)到(dao)(dao)50mL含有0.75g(15mmol)水合肼的乙(yi)醇溶液(ye)中(zhong),加(jia)(jia)(jia)熱到(dao)(dao)80℃,反(fan)應6小(xiao)時(shi)。薄層(ceng)層(ceng)析方法跟蹤反(fan)應至完全(quan),將(jiang)(jiang)反(fan)應體系(xi)的混合液(ye)趁熱抽濾(lv)(lv),用乙(yi)醇洗滌,濾(lv)(lv)液(ye)靜置(zhi)析晶得(de)到(dao)(dao)中(zhong)間體。所得(de)中(zhong)間體與1.91g(10mmol)1-甲基(ji)-5-甲氧基(ji)靛紅(hong)置(zhi)于反(fan)應器中(zhong),加(jia)(jia)(jia)入(ru)50mL乙(yi)醇,繼續(xu)加(jia)(jia)(jia)熱、攪拌,80℃下(xia)回流反(fan)應4小(xiao)時(shi)。TCL跟蹤至反(fan)應完全(quan),停止加(jia)(jia)(jia)熱,撤(che)去冷凝裝置(zhi)。將(jiang)(jiang)反(fan)應體系(xi)的固液(ye)混合物(wu)減壓(ya)濃縮,冷卻至室溫后過濾(lv)(lv),濾(lv)(lv)餅用溫水洗滌,得(de)到(dao)(dao)不對稱(cheng)雙取代靛紅(hong)西佛(fo)堿(7)粗(cu)品。將(jiang)(jiang)該(gai)粗(cu)品加(jia)(jia)(jia)入(ru)到(dao)(dao)反(fan)應器中(zhong),加(jia)(jia)(jia)入(ru)25mL乙(yi)醇進行重結晶,過濾(lv)(lv),干燥得(de)到(dao)(dao)灰白色結晶性粉末(mo)(2.02克),總收率47.6%。
灰白色粉末,M.P.176.5℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.94(1H,s,J=0.4Hz),8.76(1H,d,J=7.5Hz),7.77(1H,d,J=7.5Hz),7.49(1H,s,J=1.5Hz),7.42-7.12(6H,m),7.06(1H,d,J=1.5Hz),4.96(2H,s,),3.85(3H,s,,),3.46(3H,s);13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):163.7,156.5,155.9,152.6,150.6,138.2,136.3,133.7,128.6,128.2,127.0,126.8,118.9,113.6,112.7,109.8,101.6,55.9,47.4,30.3;HRMS(ESI)for(M+Na)+:calcd:425.1489,found:425.1493.
實施例8
化合(he)物(8)(Z)-3-((Z)-(5-chloro-2-oxo-1-propylindolin-3-ylidene)hydrazono)-1-cyclohexyl-1H-pyrrolo[3,2-c]pyridin-2(3H)-one的制備。
將(jiang)(jiang)適量2.30g(10mmol)1-環己基(ji)-5-N雜靛(dian)紅用50mL乙(yi)醇溶(rong)解,置(zhi)于(yu)錐(zhui)形瓶中(zhong),磁力(li)攪拌(ban)下緩(huan)慢(man)滴加(jia)到(dao)(dao)50mL含(han)有0.75g(15mmol)水合肼的(de)(de)乙(yi)醇溶(rong)液中(zhong),加(jia)熱到(dao)(dao)80℃,反(fan)(fan)應(ying)(ying)(ying)(ying)6小時(shi)。薄層(ceng)層(ceng)析(xi)方法跟蹤反(fan)(fan)應(ying)(ying)(ying)(ying)至(zhi)完全(quan),將(jiang)(jiang)反(fan)(fan)應(ying)(ying)(ying)(ying)體(ti)系(xi)的(de)(de)混合液趁(chen)熱抽濾,用乙(yi)醇洗(xi)滌(di),濾液靜置(zhi)析(xi)晶(jing)得到(dao)(dao)中(zhong)間(jian)體(ti)。所得中(zhong)間(jian)體(ti)與2.23g(10mmol)1-丙基(ji)-5-氯靛(dian)紅置(zhi)于(yu)反(fan)(fan)應(ying)(ying)(ying)(ying)器中(zhong),加(jia)入50mL乙(yi)醇,繼續加(jia)熱、攪拌(ban),80℃下回流反(fan)(fan)應(ying)(ying)(ying)(ying)4小時(shi)。TCL跟蹤至(zhi)反(fan)(fan)應(ying)(ying)(ying)(ying)完全(quan),停止加(jia)熱,撤去冷(leng)凝裝(zhuang)置(zhi)。將(jiang)(jiang)反(fan)(fan)應(ying)(ying)(ying)(ying)體(ti)系(xi)的(de)(de)固液混合物減壓濃縮,冷(leng)卻至(zhi)室溫(wen)后過濾,濾餅用溫(wen)水洗(xi)滌(di),得到(dao)(dao)不對稱雙取代(dai)靛(dian)紅西(xi)佛(fo)堿(jian)(8)粗品。將(jiang)(jiang)該(gai)粗品加(jia)入到(dao)(dao)反(fan)(fan)應(ying)(ying)(ying)(ying)器中(zhong),加(jia)入25mL乙(yi)醇進行重結晶(jing),過濾,干燥得到(dao)(dao)黃(huang)棕色結晶(jing)性(xing)粉末(3.52克),總收率78.3%。
黃棕色結晶粉末,M.P.188.7℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.94(1H,s,J=0.4Hz),8.76(1H,d,J=7.0Hz),7.91(1H,s,J=7.5Hz),7.82(1H,d,J=7.5Hz),7.53(1H,d,J=7.5Hz),7.18(1H,s,J=0.4Hz),4.30(2H,t,J=7.1Hz),3.56(1H,m,J=7.0Hz),1.7-0.8(15H,m,);13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):163.4,163.0,155.9,152.6,150.5,145.7,138.2,131.5,130.1,129.6,124.5,119.3,112.7,109.9,64.4,44.8,31.4,25.8,25.3,20.7,11.6;HRMS(ESI)for(M+H)+:calcd:449.1620,found:449.1624.
實施例9
化(hua)合物(9)(Z)-1-benzyl-3-((Z)-(1-benzyl-5-methyl-2-oxoindolin-3-ylidene)hydrazono)-1H-pyrrolo[3,2-c]pyridin-2(3H)-one的(de)制備。
將(jiang)適量2.38g(10mmol)1-苯乙(yi)基-5-N雜(za)靛紅(hong)用50mL乙(yi)醇溶解,置(zhi)于(yu)錐形瓶(ping)中(zhong),磁(ci)力攪(jiao)拌(ban)下緩慢滴加(jia)(jia)(jia)(jia)到(dao)50mL含有(you)0.75g(15mmol)水(shui)合肼的乙(yi)醇溶液中(zhong),加(jia)(jia)(jia)(jia)熱到(dao)80℃,反(fan)(fan)應(ying)6小時(shi)。薄層層析方法跟(gen)蹤反(fan)(fan)應(ying)至完(wan)全(quan),將(jiang)反(fan)(fan)應(ying)體(ti)系的混合液趁熱抽濾(lv)(lv),用乙(yi)醇洗滌(di)(di),濾(lv)(lv)液靜置(zhi)析晶(jing)得到(dao)中(zhong)間(jian)(jian)體(ti)。所得中(zhong)間(jian)(jian)體(ti)與2.51g(10mmol)5-甲基-1-苯乙(yi)基靛紅(hong)置(zhi)于(yu)反(fan)(fan)應(ying)器中(zhong),加(jia)(jia)(jia)(jia)入50mL乙(yi)醇,繼續加(jia)(jia)(jia)(jia)熱、攪(jiao)拌(ban),80℃下回(hui)流反(fan)(fan)應(ying)4小時(shi)。TCL跟(gen)蹤至反(fan)(fan)應(ying)完(wan)全(quan),停(ting)止加(jia)(jia)(jia)(jia)熱,撤去(qu)冷凝裝置(zhi)。將(jiang)反(fan)(fan)應(ying)體(ti)系的固液混合物(wu)減壓濃縮,冷卻(que)至室(shi)溫后過濾(lv)(lv),濾(lv)(lv)餅(bing)用溫水(shui)洗滌(di)(di),得到(dao)不(bu)對稱(cheng)雙取代靛紅(hong)西佛(fo)堿(9)粗品。將(jiang)該粗品加(jia)(jia)(jia)(jia)入到(dao)反(fan)(fan)應(ying)器中(zhong),加(jia)(jia)(jia)(jia)入25mL乙(yi)醇進行重結晶(jing),過濾(lv)(lv),干燥得到(dao)淡黃色(se)結晶(jing)性粉(fen)末(3.66克(ke)),總(zong)收率75.5%。
淡黃色結晶粉末,M.P.231.2℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.94(1H,s,J=0.4Hz),8.76(1H,d,J=7.5Hz),8.23(1H,s,J=7.5Hz),7.76(1H,d,J=7.5Hz),7.42-7.12(10H,m,),4.96(2H,s),2.36(3H,s);13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):163.7,155.9,152.6,150.5,144.6,138.2,136.5,134.3,129.8,128.7,127.0,126.8,122.5,120.8,117.8,116.3,112.6,109.9,61.8,47.5,21.4,14.6,12.5,-2.5;HRMS(ESI)for(M+Na)+:calcd:485.1854,found:485.1857.
實施例10
本(ben)發明化合物的抗(kang)腫瘤活性測(ce)試(shi)
對本發明的(de)化合(he)物進行了腫瘤細胞增殖抑制試驗(yan),試驗(yan)方法采用常規的(de)MTT法。
細(xi)胞(bao)(bao)株選用(yong):人肝癌(ai)細(xi)胞(bao)(bao)(HepG2),人肺(fei)癌(ai)細(xi)胞(bao)(bao)(A-549),人胃(wei)癌(ai)細(xi)胞(bao)(bao)(SGC-7901)。培養液為DMEM+15%NBS+雙抗。
樣品液的(de)(de)(de)配制:用DMSO(Merck)溶(rong)解后(hou),加(jia)入PBS(-)配成的(de)(de)(de)100μmol/L的(de)(de)(de)溶(rong)液或(huo)者均勻(yun)的(de)(de)(de)混懸液,然(ran)后(hou)用DMSO的(de)(de)(de)PBS(-)稀釋,最終(zhong)濃(nong)度(du)分別(bie)為(wei)0.1,1,10,20,40,60,80,100μmol/L。
將上(shang)市的(de)抗腫瘤藥物阿糖胞苷(Ara-C)以同樣的(de)條(tiao)件配(pei)成對照品溶液。
細胞培養:貼壁生長腫瘤細胞細胞培養于含10%滅活新生牛血清和青霉素、鏈霉素(各100萬U/L)的1640培養液中,置于37℃,5%CO2,飽和濕(shi)度(du)的(de)二(er)氧化(hua)碳(tan)培(pei)(pei)養箱(xiang)中(zhong)培(pei)(pei)養。細(xi)胞(bao)貼壁生(sheng)長,每2~3天傳(chuan)代(dai)1次,傳(chuan)代(dai)時首先倒出培(pei)(pei)養液(ye),PBS洗(xi)2次,胰酶消化(hua)后(hou),加入新鮮的(de)培(pei)(pei)養液(ye)吹打均勻,調整細(xi)胞(bao)至適當濃度(du)移入新的(de)培(pei)(pei)養瓶中(zhong),添加培(pei)(pei)養液(ye)至適量(liang)。取對數(shu)生(sheng)長期細(xi)胞(bao)用于實驗。
MTT法檢測細胞活性及IC50的測定:
實驗原理:活細胞線(xian)粒體中脫氫酶能(neng)將黃色(se)的(de)MTT還原成(cheng)不溶于水(shui)的(de)藍紫色(se)產物(wu)甲臜(MTT formazan),并沉積在細胞中,生成(cheng)的(de)量(liang)與活細胞數目(mu)成(cheng)正比(bi),而死(si)細胞沒有(you)這種(zhong)功(gong)能(neng)。DMSO能(neng)溶解藍紫色(se)結晶物(wu),顏(yan)色(se)深淺與所含的(de)量(liang)成(cheng)正比(bi),因此用(yong)酶標儀測定的(de)光(guang)吸收值可反映細胞存活率(lv)。
實驗方法:取對數生長期細胞,消化、計數,以2×104/mL的密度接種于96孔培養板中,每孔100μl。培養24小時后,將待測化合物以0.1,1,10,20,40,60,80,100μmol/L濃度處理細胞。實驗組每個濃度設5個復孔,以含0.4%DMSO的培養液作對照。藥物作用48小時后,去上清,每孔加入100μl MTT(2-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-3,5-二苯基-2H-四唑氫溴酸鹽)(1mg/mL),繼續培養4小時,棄上清,每孔加入100μl DMSO,振蕩混勻,用酶標儀在570nm處測定吸光度值,采用IC50計算軟件求出半數抑制濃度(IC50)。
試驗結(jie)果詳(xiang)見表1,其(qi)中(zhong),樣品是指相應實(shi)(shi)施例中(zhong)制備的(de)不對(dui)稱雙(shuang)取代靛紅席夫堿類(lei)化合物(wu),樣品編號對(dui)應制備實(shi)(shi)施例中(zhong)所得(de)到的(de)化合物(wu)的(de)具體編號。
表1化合物對不同腫瘤細胞的半數抑制濃度IC50(單位(wei):μmol/L)
化合(he)物(wu)9在所測試的(de)3種細胞株(zhu)中(zhong)均表現出了良(liang)好的(de)抗(kang)(kang)腫瘤(liu)活(huo)性(xing),化合(he)物(wu)5和7次之,在不(bu)同的(de)細胞株(zhu)中(zhong)也表現出了良(liang)好的(de)抗(kang)(kang)腫瘤(liu)活(huo)性(xing)。以上實驗結果表明,本發明的(de)化合(he)物(wu)具有良(liang)好的(de)抗(kang)(kang)腫瘤(liu)活(huo)性(xing),特別(bie)是(shi)部分不(bu)對稱雙(shuang)取(qu)代靛紅席夫堿類(lei)化合(he)物(wu)的(de)活(huo)性(xing)在特定細胞株(zhu)中(zhong)抗(kang)(kang)腫瘤(liu)活(huo)性(xing)優于或等同于阿糖胞苷,可用(yong)于抗(kang)(kang)腫瘤(liu)藥(yao)物(wu)的(de)研究。