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一種具抗腫瘤活性的不對稱雙取代靛紅席夫堿類化合物及其合成方法與流程

文(wen)檔序(xu)號(hao):11106292閱讀:708來源:國知局(ju)

本發明涉及(ji)醫藥化(hua)學領域(yu),具體涉及(ji)一種(zhong)具抗腫瘤(liu)活性的不對稱雙(shuang)取代(dai)靛(dian)紅席夫堿類化(hua)合物及(ji)其(qi)合成方(fang)法。



背景技術:

席(xi)夫堿化(hua)合(he)物(wu)(wu)(wu)因其(qi)獨特(te)(te)的(de)(de)(de)結(jie)構特(te)(te)征(zheng),即核心(xin)基(ji)團(tuan)含(han)有帶(dai)孤對(dui)電子的(de)(de)(de)N原子,從(cong)(cong)而具(ju)有很(hen)好的(de)(de)(de)配(pei)對(dui)能(neng)力(li),而該基(ji)團(tuan)兩(liang)邊均可與各種(zhong)類型的(de)(de)(de)基(ji)團(tuan)反應(ying)(ying)(ying)從(cong)(cong)而得(de)到性(xing)質不(bu)一的(de)(de)(de)衍生物(wu)(wu)(wu),這使得(de)其(qi)在實際(ji)應(ying)(ying)(ying)用上極具(ju)特(te)(te)色,尤其(qi)在化(hua)學(xue)(xue)、生物(wu)(wu)(wu)學(xue)(xue)方面(mian)應(ying)(ying)(ying)用廣(guang)泛。不(bu)對(dui)稱雙席(xi)夫堿,由于其(qi)結(jie)構的(de)(de)(de)不(bu)對(dui)稱性(xing),使得(de)擁有很(hen)多(duo)特(te)(te)殊的(de)(de)(de)用途,如(ru)可用作載氧載體、催化(hua)劑、殺蟲劑、抑菌(jun)劑、生物(wu)(wu)(wu)模擬過程的(de)(de)(de)模擬分(fen)子等,近年來此類化(hua)合(he)物(wu)(wu)(wu)的(de)(de)(de)合(he)成和性(xing)質研究也成為化(hua)學(xue)(xue)領域中一個十分(fen)活躍的(de)(de)(de)課題。

靛紅(hong)及其(qi)衍生(sheng)物具有獨(du)特的(de)(de)電子特性(xing)(xing)(xing)和優越的(de)(de)生(sheng)物活性(xing)(xing)(xing),在抗腫瘤、抗病毒、神經保(bao)護等方面的(de)(de)活性(xing)(xing)(xing)有重要意義。靛紅(hong)目(mu)前(qian)可以作為(wei)(wei)工業品大量(liang)合成,是相對較便宜的(de)(de)原料,其(qi)1、2、3位(wei)及苯(ben)環上(shang)可以發生(sheng)多(duo)種類型(xing)的(de)(de)化(hua)學反應(ying),為(wei)(wei)其(qi)衍生(sheng)物的(de)(de)合成提供了廣闊的(de)(de)空間,因此目(mu)前(qian)對靛紅(hong)及其(qi)衍生(sheng)物的(de)(de)合成和活性(xing)(xing)(xing)的(de)(de)研究非(fei)常活躍(yue)。

含O、S、N的(de)(de)席(xi)(xi)夫(fu)堿(jian)及(ji)其金屬(shu)配(pei)合(he)(he)(he)物(wu),以其良好的(de)(de)抑菌、抗癌和(he)抗病毒的(de)(de)生(sheng)(sheng)物(wu)活(huo)性一直(zhi)受到(dao)人們的(de)(de)重視(shi)。靛紅(hong)席(xi)(xi)夫(fu)堿(jian)類(lei)化合(he)(he)(he)物(wu)具有較好的(de)(de)抑菌、抗病毒、神經保護(hu)活(huo)性。因(yin)此,筆者利(li)用(yong)5-N雜靛紅(hong)及(ji)其衍(yan)生(sheng)(sheng)物(wu)、靛紅(hong)及(ji)其衍(yan)生(sheng)(sheng)物(wu)和(he)水合(he)(he)(he)肼(jing)為原料,設計合(he)(he)(he)成了一類(lei)結構新穎的(de)(de)不(bu)對稱雙取代靛紅(hong)席(xi)(xi)夫(fu)堿(jian)類(lei)化合(he)(he)(he)物(wu)。



技術實現要素:

為(wei)了客服上(shang)述現有技術(shu)的(de)(de)不(bu)(bu)足,本發(fa)明(ming)的(de)(de)目的(de)(de)是提供一(yi)種一(yi)種具抗腫(zhong)瘤活性的(de)(de)不(bu)(bu)對稱雙取代靛紅席夫(fu)堿類化合(he)(he)物(wu)及其(qi)合(he)(he)成(cheng)方法,采用(yong)5-N雜靛紅及其(qi)衍生(sheng)物(wu)、靛紅及其(qi)衍生(sheng)物(wu)和水(shui)合(he)(he)肼為(wei)原(yuan)料,以(yi)乙(yi)醇作溶劑,在加熱回流的(de)(de)條件(jian)下(xia)進(jin)行合(he)(he)成(cheng),原(yuan)料環保,生(sheng)產(chan)成(cheng)本低,操作安全性高,反應條件(jian)溫和,反應原(yuan)料利用(yong)充分,適用(yong)于工業化生(sheng)產(chan),解(jie)決了現有技術(shu)產(chan)率(lv)低的(de)(de)問(wen)題。

為(wei)了實現(xian)上述目的(de),本發明(ming)采用的(de)技(ji)術方(fang)案是(shi):

一種(zhong)具有抗腫瘤活性的不(bu)對稱雙取代靛紅席夫堿(jian)類(lei)化合物,其(qi)結構如式(Ⅰ)如下所示(shi):

其中,R1、R2、R3可以為氫(qing)、硝基(ji)、烷氧基(ji)、鹵(lu)素,取代(dai)或(huo)(huo)未(wei)取代(dai)的苯基(ji),取代(dai)或(huo)(huo)未(wei)取代(dai)的低級(ji)烷基(ji)或(huo)(huo)環烷基(ji)、低級(ji)烷基(ji)-環烷基(ji)、環烷基(ji)-低級(ji)烷基(ji);

優選R1表示下(xia)列基(ji)團:氫、甲氧(yang)基(ji)、硝基(ji)、鹵(lu)素,取(qu)(qu)代(dai)或未取(qu)(qu)代(dai)的苯基(ji),取(qu)(qu)代(dai)或未取(qu)(qu)代(dai)的低級(ji)烷(wan)(wan)基(ji)或環(huan)烷(wan)(wan)基(ji)。

優選R2表示下列基(ji)(ji)(ji)團:甲(jia)氧基(ji)(ji)(ji)、硝基(ji)(ji)(ji)、甲(jia)基(ji)(ji)(ji)、鹵素,取(qu)(qu)代或未取(qu)(qu)代的苯基(ji)(ji)(ji),取(qu)(qu)代或未取(qu)(qu)代的低級烷基(ji)(ji)(ji)或環(huan)烷基(ji)(ji)(ji)。

優選R3表(biao)示下列基團:甲(jia)氧基、硝基、甲(jia)基、鹵素,取代或未取代的低(di)級烷(wan)基或環(huan)烷(wan)基。

一種具有抗腫瘤(liu)活(huo)性的不(bu)對(dui)稱雙取代(dai)靛紅席夫堿類(lei)化合(he)(he)(he)物的合(he)(he)(he)成(cheng)方法,由(you)5-N雜靛紅及其(qi)衍(yan)生物、靛紅及其(qi)衍(yan)生物和水合(he)(he)(he)肼為(wei)原(yuan)料(liao),在乙醇作為(wei)反應溶(rong)劑的條件下進行(xing)合(he)(he)(he)成(cheng),合(he)(he)(he)成(cheng)路線如下所示:

具體的制(zhi)備過(guo)程如下(xia):

1)將適量5-N雜靛紅或其衍生(sheng)物用有(you)機溶劑溶解(jie),置于錐(zhui)形瓶(ping)中(zhong),磁力攪拌下緩慢滴加(jia)到水合肼的有(you)機溶劑中(zhong),加(jia)熱到60℃~100℃,反應4~8小時;

2)薄(bo)層層析(xi)(xi)方法跟蹤反應至(zhi)完全,將反應體(ti)(ti)系的混合(he)液(ye)趁熱抽濾,用乙醇洗滌(di),濾液(ye)靜(jing)置析(xi)(xi)晶(jing)得到中(zhong)間(jian)體(ti)(ti);

3)將上(shang)述得到的中(zhong)(zhong)間(jian)體與靛紅或其衍生物按摩爾比1:1~1:2置于反應器中(zhong)(zhong),繼續加熱、攪拌,60℃~100℃下(xia)回流反應2~6小(xiao)時;

4)TCL跟蹤至反應(ying)完全,停止(zhi)加熱,撤去冷凝裝置。將(jiang)反應(ying)體系的(de)固液(ye)混合物減壓濃(nong)縮(suo),然后冷卻至室溫過濾,濾餅(bing)用溫水洗滌,得到不(bu)對稱雙(shuang)取代靛紅西(xi)佛堿粗品;

5)將不對稱雙(shuang)取(qu)代靛紅西佛堿粗品(pin)加入到(dao)反(fan)應(ying)器中,加入有機(ji)溶劑進行重結晶,過濾,干燥得到(dao)目標產物化合(he)物(I)。

所述步驟(1)中的(de)有機溶劑(ji)優選(xuan)甲(jia)醇或(huo)乙(yi)醇,進一步優選(xuan)為乙(yi)醇。

所述(shu)的步驟(1)中5-N雜(za)靛紅或(huo)其衍生物與水合肼的摩(mo)爾(er)比為1:1~1:2.5,進一步優選(xuan)為1:1.5~1:2。

所述的步驟(1)中的反應時間(jian)優(you)選為5~6小時。

所(suo)述的步驟1)、步驟3)中的溫度為75℃~85℃。

所述(shu)的步驟(zou)3)中的中間體與靛紅或其衍生物按摩爾(er)比為1:1~1:1.5。

所述(shu)的步驟3)中的反應時間為3~4小時。

所述的(de)步(bu)(5)所述的(de)有(you)機溶劑為乙醇。

結構(gou)(gou)式(I)部(bu)分優(you)選實施(shi)方(fang)案中的化(hua)合物(wu)結構(gou)(gou)式如(ru)下所示(shi):

本發(fa)明(ming)的有(you)益效(xiao)果是:

原(yuan)料環保(bao),生產成(cheng)本低,操作安(an)全性高,反應(ying)條件溫和,反應(ying)原(yuan)料利用(yong)充分(fen),適用(yong)于工業化(hua)生產,解決了現有(you)技術(shu)產率低的問題。

具體實施方式

以下結合實施例對本發(fa)明進一(yi)步(bu)敘(xu)述,但(dan)本發(fa)明不局限(xian)于(yu)以下實施例。

實施例1

化合物(1)(Z)-3-((Z)-(1,5-dimethyl-2-oxoindolin-3-ylidene)hydrazono)-1-methyl-1H-pyrrolo[3,2-c]pyridin-2(3H)-one的制備(bei)。

將適量1.62g(10mmol)1-甲基-5-N雜靛(dian)(dian)紅用(yong)50mL乙(yi)醇(chun)(chun)溶(rong)解,置(zhi)于錐形(xing)瓶中(zhong),磁(ci)力(li)攪拌(ban)下緩慢滴(di)加到50mL含(han)有0.75g(15mmol)水合(he)(he)肼的乙(yi)醇(chun)(chun)溶(rong)液(ye)中(zhong),加熱到80℃,反(fan)應(ying)6小時。薄層(ceng)層(ceng)析(xi)方法(fa)跟蹤反(fan)應(ying)至完(wan)全,將反(fan)應(ying)體(ti)(ti)系的混合(he)(he)液(ye)趁熱抽濾,用(yong)乙(yi)醇(chun)(chun)洗(xi)滌,濾液(ye)靜(jing)置(zhi)析(xi)晶得到中(zhong)間體(ti)(ti)。所(suo)得中(zhong)間體(ti)(ti)與2.09g(10mmol)5-氯-1-乙(yi)基靛(dian)(dian)紅置(zhi)于反(fan)應(ying)器中(zhong),加入50mL乙(yi)醇(chun)(chun),繼續加熱、攪拌(ban),80℃下回流(liu)反(fan)應(ying)4小時。TCL跟蹤至反(fan)應(ying)完(wan)全,停(ting)止加熱,撤(che)去冷(leng)凝(ning)裝置(zhi)。將反(fan)應(ying)體(ti)(ti)系的固(gu)液(ye)混合(he)(he)物(wu)減壓(ya)濃縮,冷(leng)卻至室溫后過濾,濾餅(bing)用(yong)溫水洗(xi)滌,得到不對稱雙取代靛(dian)(dian)紅西佛堿(1)粗品。將該粗品加入到反(fan)應(ying)器中(zhong),加入25mL乙(yi)醇(chun)(chun)進行重結晶,過濾,干燥得到淡(dan)黃(huang)色(se)結晶性粉末(mo)(2.34克),總收率63.8%。

淡黃色結晶粉末,M.P.161.5℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.94(2H,s,J=2Hz),8.76(1H,d,J=3Hz),8.23(1H,s,J=2Hz),7.76(1H,t,J=2Hz),7.18(1H,s,J=2Hz),3.46(3H,s),3.42(3H,s),2.36(3H,s);13C-NMR(75MHz,DMSOd6)δ(ppm):163.6,155.9,152.6,150.5,138.4,138.2,134.3,129.8,120.7,117.8,116.3,112.7,109.9,30.2,21.5;HRMS(ESI)for(M+H)+:calcd:333.1228,found:333.1231.

實施例2

化合物(2)(Z)-3-((Z)-(5-chloro-1-ethyl-2-oxoindolin-3-ylidene)hydrazono)-1-methyl-1H-pyrrolo[3,2-c]pyridin-2(3H)-one的制備。

將適量1.62g(10mmol)1-甲基(ji)-5-N雜靛紅用(yong)50mL乙醇(chun)溶解,置(zhi)于錐形(xing)瓶(ping)中,磁力攪拌下緩慢滴加(jia)到(dao)50mL含有(you)0.75g(15mmol)水合肼的乙醇(chun)溶液(ye)中,加(jia)熱到(dao)80℃,反(fan)(fan)(fan)應(ying)6小(xiao)時(shi)。薄層層析方(fang)法(fa)跟(gen)蹤(zong)反(fan)(fan)(fan)應(ying)至(zhi)(zhi)完全(quan),將反(fan)(fan)(fan)應(ying)體系的混(hun)(hun)合液(ye)趁熱抽(chou)濾,用(yong)乙醇(chun)洗滌(di)(di),濾液(ye)靜置(zhi)析晶得(de)(de)到(dao)中間(jian)體。所得(de)(de)中間(jian)體與1.75g(10mmol)1,7-二甲基(ji)靛紅置(zhi)于反(fan)(fan)(fan)應(ying)器中,加(jia)入(ru)(ru)50mL乙醇(chun),繼(ji)續加(jia)熱、攪拌,80℃下回流反(fan)(fan)(fan)應(ying)4小(xiao)時(shi)。TCL跟(gen)蹤(zong)至(zhi)(zhi)反(fan)(fan)(fan)應(ying)完全(quan),停止加(jia)熱,撤去冷(leng)凝(ning)裝置(zhi)。將反(fan)(fan)(fan)應(ying)體系的固液(ye)混(hun)(hun)合物減(jian)壓(ya)濃縮,冷(leng)卻至(zhi)(zhi)室溫后過濾,濾餅用(yong)溫水洗滌(di)(di),得(de)(de)到(dao)不對稱雙取代靛紅西佛堿(2)粗(cu)品。將該粗(cu)品加(jia)入(ru)(ru)到(dao)反(fan)(fan)(fan)應(ying)器中,加(jia)入(ru)(ru)25mL乙醇(chun)進行(xing)重結晶,過濾,干燥得(de)(de)到(dao)灰白(bai)色結晶性(xing)粉末(2.47克),總收率74.2%。

灰白色結晶粉末,M.P.179.4℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.94(2H,s,J=6Hz),8.76(1H,d,J=3Hz),7.91(1H,s,J=20Hz),7.82(2H,d,J=20Hz),7.51(1H,d,J=21Hz),7.18(1H,d,J=2Hz),4.30(3H,q,J=25Hz),3.42(3H,s,),1.33(3H,t);13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):163.4,155.9,152.6,150.5,145.7,138.2,131.5,130.2,124.5,119.3,112.6,109.8,42.4,30.3,13.8;HRMS(ESI)for(M+H)+:calcd:367.0837,found:367.0839.

實施例3

化合物(3)(Z)-1-ethyl-3-((Z)-(1-isopropyl-5-methyl-2-oxoindolin-3-ylidene)hydrazono)-1H-pyrrolo[3,2-c]pyridin-2(3H)-one的制備。

將適量1.76(10mmol)1-乙基-5-N雜(za)靛(dian)紅(hong)用50mL乙醇溶(rong)解,置于錐形瓶中(zhong)(zhong)(zhong),磁力(li)攪(jiao)拌下緩慢滴加(jia)到(dao)50mL含有0.75g(15mmol)水合(he)肼的(de)乙醇溶(rong)液(ye)中(zhong)(zhong)(zhong),加(jia)熱(re)到(dao)80℃,反(fan)應(ying)(ying)(ying)6小(xiao)時(shi)。薄(bo)層層析方法跟蹤(zong)(zong)反(fan)應(ying)(ying)(ying)至完全,將反(fan)應(ying)(ying)(ying)體系的(de)混合(he)液(ye)趁熱(re)抽濾,用乙醇洗滌,濾液(ye)靜置析晶得到(dao)中(zhong)(zhong)(zhong)間體。所得中(zhong)(zhong)(zhong)間體與2.03g(10mmol)5-甲基-1-異丙基靛(dian)紅(hong)置于反(fan)應(ying)(ying)(ying)器中(zhong)(zhong)(zhong),加(jia)入50mL乙醇,繼續加(jia)熱(re)、攪(jiao)拌,80℃下回(hui)流反(fan)應(ying)(ying)(ying)4小(xiao)時(shi)。TCL跟蹤(zong)(zong)至反(fan)應(ying)(ying)(ying)完全,停止加(jia)熱(re),撤去冷(leng)(leng)凝裝置。將反(fan)應(ying)(ying)(ying)體系的(de)固液(ye)混合(he)物減(jian)壓濃縮,冷(leng)(leng)卻至室溫后過(guo)濾,濾餅用溫水洗滌,得到(dao)不對(dui)稱(cheng)雙(shuang)取(qu)代靛(dian)紅(hong)西佛堿(3)粗(cu)品。將該粗(cu)品加(jia)入到(dao)反(fan)應(ying)(ying)(ying)器中(zhong)(zhong)(zhong),加(jia)入25mL乙醇進行(xing)重結(jie)晶,過(guo)濾,干燥得到(dao)白色(se)結(jie)晶性粉末(2.73克(ke)),總收(shou)率(lv)72.7%。

白色結晶粉末,M.P.170.2℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.94(2H,s,J=7.5Hz),8.76(1H,d,J=7.5Hz),8.23(1H,s,J=1.5Hz),7.76(1H,d,J=7.5Hz),7.18(2H,d,J=7.5Hz),4.30(2H,q,J=8.0Hz),3.96(1H,m,J=1.5Hz),2.35(3H,s,J=8.0Hz),1.41(3H,t,J=6.8Hz),1.22(6H,d,J=6.8Hz);13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):163.4,156.0,152.6,150.5,144.6,138.2,134.3,129.8,120.7,117.8,116.3,112.7,109.9,58.6,42.4,21.5,20.8,13.8;HRMS(ESI)for(M+H)+:calcd:375.1697,found:375.1701.

實施例4

化合(he)物(wu)(4)(Z)-3-((Z)-(1-cyclohexyl-5-methoxy-2-oxoindolin-3-ylidene)hydrazono)-1-isopropyl-1H-pyrrolo[3,2-c]pyridin-2(3H)-one的制(zhi)備。

將(jiang)適量1.90g(10mmol)1-異丙基-5-N雜靛(dian)紅用(yong)(yong)50mL乙(yi)(yi)(yi)醇(chun)(chun)(chun)溶(rong)解,置于(yu)錐形瓶中(zhong)(zhong),磁力攪拌(ban)下緩慢滴加(jia)到(dao)50mL含有0.75g(15mmol)水合(he)肼的乙(yi)(yi)(yi)醇(chun)(chun)(chun)溶(rong)液中(zhong)(zhong),加(jia)熱(re)(re)到(dao)80℃,反應6小時(shi)。薄層層析(xi)方法跟(gen)蹤反應至(zhi)完全,將(jiang)反應體系的混合(he)液趁熱(re)(re)抽濾,用(yong)(yong)乙(yi)(yi)(yi)醇(chun)(chun)(chun)洗滌,濾液靜置析(xi)晶(jing)得到(dao)中(zhong)(zhong)間體。所得中(zhong)(zhong)間體與2.59g(10mmol)1-環己基-5-甲氧基靛(dian)紅置于(yu)反應器中(zhong)(zhong),加(jia)入(ru)(ru)50mL乙(yi)(yi)(yi)醇(chun)(chun)(chun),繼續加(jia)熱(re)(re)、攪拌(ban),80℃下回流反應4小時(shi)。TCL跟(gen)蹤至(zhi)反應完全,停止加(jia)熱(re)(re),撤(che)去冷凝裝置。將(jiang)反應體系的固液混合(he)物減壓濃縮,冷卻至(zhi)室溫后過濾,濾餅用(yong)(yong)溫水洗滌,得到(dao)不(bu)對稱雙(shuang)取代靛(dian)紅西佛堿(4)粗品(pin)。將(jiang)該粗品(pin)加(jia)入(ru)(ru)到(dao)反應器中(zhong)(zhong),加(jia)入(ru)(ru)25mL乙(yi)(yi)(yi)醇(chun)(chun)(chun)進行重結晶(jing),過濾,干燥得到(dao)灰色結晶(jing)性粉末(mo)(2.99克),總(zong)收率67.3%。

灰色結晶粉末,M.P.193.0℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.94(2H,s,J=0.4Hz),8.76(1H,d,J=7.5Hz),7.77(1H,d,J=7.5Hz),7.50(1H,s,J=7.5Hz),7.18(1H,d,J=0.4Hz),7.06(1H,d,J=1.5Hz),3.96(1H,m,J=6.8Hz),3.57(1H,m,J=7.0Hz),1.76(2H,m,,1.49(2H,m),1.32-1.12(10H,m);13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):163.0,156.5,152.6,150.5,139.9,138.2,128.1,118.8,113.7,112.6,109.9,101.6,64.5,58.7,55.9,31.4,25.9,25.3,20.8;HRMS(ESI)for(M+H)+:calcd:445.2115,found:445.2119.

實施例5

化合物(5)的制(zhi)備。

將(jiang)(jiang)適量1.90g(10mmol)1-乙(yi)(yi)基-5-N雜(za)靛紅(hong)用(yong)50mL乙(yi)(yi)醇溶解,置(zhi)于錐形瓶中,磁(ci)力(li)攪拌下緩慢滴加(jia)(jia)到(dao)(dao)50mL含有0.75g(15mmol)水合(he)肼的(de)乙(yi)(yi)醇溶液(ye)中,加(jia)(jia)熱(re)到(dao)(dao)80℃,反(fan)應(ying)(ying)6小時。薄層(ceng)層(ceng)析方(fang)法(fa)跟蹤反(fan)應(ying)(ying)至完(wan)全,將(jiang)(jiang)反(fan)應(ying)(ying)體(ti)(ti)系(xi)的(de)混合(he)液(ye)趁(chen)熱(re)抽濾(lv),用(yong)乙(yi)(yi)醇洗滌(di),濾(lv)液(ye)靜(jing)置(zhi)析晶得到(dao)(dao)中間體(ti)(ti)。所得中間體(ti)(ti)與2.55g(10mmol)1-苯乙(yi)(yi)基-5-氟(fu)靛紅(hong)置(zhi)于反(fan)應(ying)(ying)器中,加(jia)(jia)入(ru)50mL乙(yi)(yi)醇,繼續(xu)加(jia)(jia)熱(re)、攪拌,80℃下回流反(fan)應(ying)(ying)4小時。TCL跟蹤至反(fan)應(ying)(ying)完(wan)全,停止加(jia)(jia)熱(re),撤去冷(leng)凝裝置(zhi)。將(jiang)(jiang)反(fan)應(ying)(ying)體(ti)(ti)系(xi)的(de)固液(ye)混合(he)物減壓(ya)濃縮(suo),冷(leng)卻至室溫后過濾(lv),濾(lv)餅用(yong)溫水洗滌(di),得到(dao)(dao)不對(dui)稱雙(shuang)取代靛紅(hong)西佛堿(5)粗品。將(jiang)(jiang)該粗品加(jia)(jia)入(ru)到(dao)(dao)反(fan)應(ying)(ying)器中,加(jia)(jia)入(ru)25mL乙(yi)(yi)醇進行(xing)重結(jie)晶,過濾(lv),干燥得到(dao)(dao)褐(he)色結(jie)晶性粉末(mo)(3.07克),總(zong)收率71.8%。

褐色結晶粉末,M.P.232.8℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.94(2H,s,J=0.4Hz),8.76(1H,d,J=0.4Hz),7.85,7.77(2H,m,J=7.5Hz),7.42-7.12(7H,m),4.30(2H,q),1.39(3H,t);13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):163.7,163.4,158.8,155.9,152.6,150.5,143.2,138.2,136.3,128.7,127.1,126.9,125.2,119.5,118.1,112.7,111.0,109.9,47.5,42.4,13.8;HRMS(ESI)for(M+Na)+:calcd:427.1446,found 427.1449.

實施例6

化合物(6)(Z)-1-ethyl-3-((Z)-(5-fluoro-1-methyl-2-oxoindolin-3-ylidene)hydrazono)-1H-pyrrolo[3,2-c]pyridin-2(3H)-one的制備。

將適量1.90g(10mmol)1-乙基(ji)-5-N雜(za)靛紅(hong)用50mL乙醇溶解,置(zhi)(zhi)于錐形瓶中(zhong),磁(ci)力攪拌(ban)(ban)下緩慢滴加(jia)(jia)(jia)到50mL含有0.75g(15mmol)水合(he)肼(jing)的(de)乙醇溶液(ye)中(zhong),加(jia)(jia)(jia)熱到80℃,反(fan)(fan)應(ying)6小(xiao)時。薄層(ceng)層(ceng)析方法跟蹤(zong)反(fan)(fan)應(ying)至完全(quan)(quan),將反(fan)(fan)應(ying)體系(xi)的(de)混(hun)合(he)液(ye)趁熱抽濾(lv),用乙醇洗滌,濾(lv)液(ye)靜置(zhi)(zhi)析晶得到中(zhong)間體。所得中(zhong)間體與1.91g(10mmol)1-甲基(ji)-5-甲氧基(ji)靛紅(hong)置(zhi)(zhi)于反(fan)(fan)應(ying)器中(zhong),加(jia)(jia)(jia)入(ru)50mL乙醇,繼續加(jia)(jia)(jia)熱、攪拌(ban)(ban),80℃下回流(liu)反(fan)(fan)應(ying)4小(xiao)時。TCL跟蹤(zong)至反(fan)(fan)應(ying)完全(quan)(quan),停(ting)止加(jia)(jia)(jia)熱,撤去冷(leng)凝(ning)裝置(zhi)(zhi)。將反(fan)(fan)應(ying)體系(xi)的(de)固液(ye)混(hun)合(he)物(wu)減壓濃縮,冷(leng)卻至室溫后過濾(lv),濾(lv)餅用溫水洗滌,得到不對稱雙取代(dai)靛紅(hong)西佛堿(jian)(6)粗品。將該(gai)粗品加(jia)(jia)(jia)入(ru)到反(fan)(fan)應(ying)器中(zhong),加(jia)(jia)(jia)入(ru)25mL乙醇進(jin)行重結(jie)晶,過濾(lv),干燥得到黃(huang)色結(jie)晶性(xing)粉(fen)末(1.36克),總(zong)收(shou)率(lv)38.7%。

黃色結晶粉末,M.P.201.3℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.94(2H,s,J=0.4Hz),8.76(1H,d,J=7.5Hz),7.85,7.77(2H,m,J=7.5Hz),7.36(1H,t,J=1.5Hz),7.18(1H,d,J=0.4Hz),4.30(2H,q,J=8.0Hz),3.46(3H,s,J=8.0Hz),1.39(3H,t);13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):162.5,158.8,155.9,152.6,150.5,138.2,136.9,125.2,119.5,118.1,112.6,111.0,109.8,42.4,30.3,13.9;HRMS(ESI)for(M+Na)+:calcd:351.1134,found:351.117.

實施例7

化合(he)物(7)(Z)-1-benzyl-3-((Z)-(5-methoxy-1-methyl-2-oxoindolin-3-ylidene)hydrazono)-1H-pyrrolo[3,2-c]pyridin-2(3H)-one的制備(bei)。

將(jiang)(jiang)適量2.38g(10mmol)1-苯(ben)乙(yi)基(ji)-5-N雜靛紅(hong)用50mL乙(yi)醇溶解(jie),置(zhi)于錐(zhui)形瓶中(zhong),磁(ci)力(li)攪拌下(xia)緩慢滴(di)加(jia)(jia)(jia)到(dao)(dao)50mL含有0.75g(15mmol)水合肼的乙(yi)醇溶液(ye)中(zhong),加(jia)(jia)(jia)熱到(dao)(dao)80℃,反(fan)應6小(xiao)時(shi)。薄層(ceng)層(ceng)析方法跟蹤反(fan)應至完全(quan),將(jiang)(jiang)反(fan)應體系(xi)的混合液(ye)趁熱抽濾(lv)(lv),用乙(yi)醇洗滌,濾(lv)(lv)液(ye)靜置(zhi)析晶得(de)到(dao)(dao)中(zhong)間體。所得(de)中(zhong)間體與1.91g(10mmol)1-甲基(ji)-5-甲氧基(ji)靛紅(hong)置(zhi)于反(fan)應器中(zhong),加(jia)(jia)(jia)入(ru)50mL乙(yi)醇,繼續(xu)加(jia)(jia)(jia)熱、攪拌,80℃下(xia)回流反(fan)應4小(xiao)時(shi)。TCL跟蹤至反(fan)應完全(quan),停止加(jia)(jia)(jia)熱,撤(che)去冷凝裝置(zhi)。將(jiang)(jiang)反(fan)應體系(xi)的固液(ye)混合物(wu)減壓(ya)濃縮,冷卻至室溫后過濾(lv)(lv),濾(lv)(lv)餅用溫水洗滌,得(de)到(dao)(dao)不對稱(cheng)雙取代靛紅(hong)西佛(fo)堿(7)粗(cu)品。將(jiang)(jiang)該(gai)粗(cu)品加(jia)(jia)(jia)入(ru)到(dao)(dao)反(fan)應器中(zhong),加(jia)(jia)(jia)入(ru)25mL乙(yi)醇進行重結晶,過濾(lv)(lv),干燥得(de)到(dao)(dao)灰白色結晶性粉末(mo)(2.02克),總收率47.6%。

灰白色粉末,M.P.176.5℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.94(1H,s,J=0.4Hz),8.76(1H,d,J=7.5Hz),7.77(1H,d,J=7.5Hz),7.49(1H,s,J=1.5Hz),7.42-7.12(6H,m),7.06(1H,d,J=1.5Hz),4.96(2H,s,),3.85(3H,s,,),3.46(3H,s);13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):163.7,156.5,155.9,152.6,150.6,138.2,136.3,133.7,128.6,128.2,127.0,126.8,118.9,113.6,112.7,109.8,101.6,55.9,47.4,30.3;HRMS(ESI)for(M+Na)+:calcd:425.1489,found:425.1493.

實施例8

化合(he)物(8)(Z)-3-((Z)-(5-chloro-2-oxo-1-propylindolin-3-ylidene)hydrazono)-1-cyclohexyl-1H-pyrrolo[3,2-c]pyridin-2(3H)-one的制備。

將(jiang)(jiang)適量2.30g(10mmol)1-環己基(ji)-5-N雜靛(dian)紅用50mL乙(yi)醇溶(rong)解,置(zhi)于(yu)錐(zhui)形瓶中(zhong),磁力(li)攪拌(ban)下緩(huan)慢(man)滴加(jia)到(dao)(dao)50mL含(han)有0.75g(15mmol)水合肼的(de)(de)乙(yi)醇溶(rong)液中(zhong),加(jia)熱到(dao)(dao)80℃,反(fan)(fan)應(ying)(ying)(ying)(ying)6小時(shi)。薄層(ceng)層(ceng)析(xi)方法跟蹤反(fan)(fan)應(ying)(ying)(ying)(ying)至(zhi)完全(quan),將(jiang)(jiang)反(fan)(fan)應(ying)(ying)(ying)(ying)體(ti)系(xi)的(de)(de)混合液趁(chen)熱抽濾,用乙(yi)醇洗(xi)滌(di),濾液靜置(zhi)析(xi)晶(jing)得到(dao)(dao)中(zhong)間(jian)體(ti)。所得中(zhong)間(jian)體(ti)與2.23g(10mmol)1-丙基(ji)-5-氯靛(dian)紅置(zhi)于(yu)反(fan)(fan)應(ying)(ying)(ying)(ying)器中(zhong),加(jia)入50mL乙(yi)醇,繼續加(jia)熱、攪拌(ban),80℃下回流反(fan)(fan)應(ying)(ying)(ying)(ying)4小時(shi)。TCL跟蹤至(zhi)反(fan)(fan)應(ying)(ying)(ying)(ying)完全(quan),停止加(jia)熱,撤去冷(leng)凝裝(zhuang)置(zhi)。將(jiang)(jiang)反(fan)(fan)應(ying)(ying)(ying)(ying)體(ti)系(xi)的(de)(de)固液混合物減壓濃縮,冷(leng)卻至(zhi)室溫(wen)后過濾,濾餅用溫(wen)水洗(xi)滌(di),得到(dao)(dao)不對稱雙取代(dai)靛(dian)紅西(xi)佛(fo)堿(jian)(8)粗品。將(jiang)(jiang)該(gai)粗品加(jia)入到(dao)(dao)反(fan)(fan)應(ying)(ying)(ying)(ying)器中(zhong),加(jia)入25mL乙(yi)醇進行重結晶(jing),過濾,干燥得到(dao)(dao)黃(huang)棕色結晶(jing)性(xing)粉末(3.52克),總收率78.3%。

黃棕色結晶粉末,M.P.188.7℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.94(1H,s,J=0.4Hz),8.76(1H,d,J=7.0Hz),7.91(1H,s,J=7.5Hz),7.82(1H,d,J=7.5Hz),7.53(1H,d,J=7.5Hz),7.18(1H,s,J=0.4Hz),4.30(2H,t,J=7.1Hz),3.56(1H,m,J=7.0Hz),1.7-0.8(15H,m,);13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):163.4,163.0,155.9,152.6,150.5,145.7,138.2,131.5,130.1,129.6,124.5,119.3,112.7,109.9,64.4,44.8,31.4,25.8,25.3,20.7,11.6;HRMS(ESI)for(M+H)+:calcd:449.1620,found:449.1624.

實施例9

化(hua)合物(9)(Z)-1-benzyl-3-((Z)-(1-benzyl-5-methyl-2-oxoindolin-3-ylidene)hydrazono)-1H-pyrrolo[3,2-c]pyridin-2(3H)-one的(de)制備。

將(jiang)適量2.38g(10mmol)1-苯乙(yi)基-5-N雜(za)靛紅(hong)用50mL乙(yi)醇溶解,置(zhi)于(yu)錐形瓶(ping)中(zhong),磁(ci)力攪(jiao)拌(ban)下緩慢滴加(jia)(jia)(jia)(jia)到(dao)50mL含有(you)0.75g(15mmol)水(shui)合肼的乙(yi)醇溶液中(zhong),加(jia)(jia)(jia)(jia)熱到(dao)80℃,反(fan)(fan)應(ying)6小時(shi)。薄層層析方法跟(gen)蹤反(fan)(fan)應(ying)至完(wan)全(quan),將(jiang)反(fan)(fan)應(ying)體(ti)系的混合液趁熱抽濾(lv)(lv),用乙(yi)醇洗滌(di)(di),濾(lv)(lv)液靜置(zhi)析晶(jing)得到(dao)中(zhong)間(jian)(jian)體(ti)。所得中(zhong)間(jian)(jian)體(ti)與2.51g(10mmol)5-甲基-1-苯乙(yi)基靛紅(hong)置(zhi)于(yu)反(fan)(fan)應(ying)器中(zhong),加(jia)(jia)(jia)(jia)入50mL乙(yi)醇,繼續加(jia)(jia)(jia)(jia)熱、攪(jiao)拌(ban),80℃下回(hui)流反(fan)(fan)應(ying)4小時(shi)。TCL跟(gen)蹤至反(fan)(fan)應(ying)完(wan)全(quan),停(ting)止加(jia)(jia)(jia)(jia)熱,撤去(qu)冷凝裝置(zhi)。將(jiang)反(fan)(fan)應(ying)體(ti)系的固液混合物(wu)減壓濃縮,冷卻(que)至室(shi)溫后過濾(lv)(lv),濾(lv)(lv)餅(bing)用溫水(shui)洗滌(di)(di),得到(dao)不(bu)對稱(cheng)雙取代靛紅(hong)西佛(fo)堿(9)粗品。將(jiang)該粗品加(jia)(jia)(jia)(jia)入到(dao)反(fan)(fan)應(ying)器中(zhong),加(jia)(jia)(jia)(jia)入25mL乙(yi)醇進行重結晶(jing),過濾(lv)(lv),干燥得到(dao)淡黃色(se)結晶(jing)性粉(fen)末(3.66克(ke)),總(zong)收率75.5%。

淡黃色結晶粉末,M.P.231.2℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.94(1H,s,J=0.4Hz),8.76(1H,d,J=7.5Hz),8.23(1H,s,J=7.5Hz),7.76(1H,d,J=7.5Hz),7.42-7.12(10H,m,),4.96(2H,s),2.36(3H,s);13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):163.7,155.9,152.6,150.5,144.6,138.2,136.5,134.3,129.8,128.7,127.0,126.8,122.5,120.8,117.8,116.3,112.6,109.9,61.8,47.5,21.4,14.6,12.5,-2.5;HRMS(ESI)for(M+Na)+:calcd:485.1854,found:485.1857.

實施例10

本(ben)發明化合物的抗(kang)腫瘤活性測(ce)試(shi)

對本發明的(de)化合(he)物進行了腫瘤細胞增殖抑制試驗(yan),試驗(yan)方法采用常規的(de)MTT法。

細(xi)胞(bao)(bao)株選用(yong):人肝癌(ai)細(xi)胞(bao)(bao)(HepG2),人肺(fei)癌(ai)細(xi)胞(bao)(bao)(A-549),人胃(wei)癌(ai)細(xi)胞(bao)(bao)(SGC-7901)。培養液為DMEM+15%NBS+雙抗。

樣品液的(de)(de)(de)配制:用DMSO(Merck)溶(rong)解后(hou),加(jia)入PBS(-)配成的(de)(de)(de)100μmol/L的(de)(de)(de)溶(rong)液或(huo)者均勻(yun)的(de)(de)(de)混懸液,然(ran)后(hou)用DMSO的(de)(de)(de)PBS(-)稀釋,最終(zhong)濃(nong)度(du)分別(bie)為(wei)0.1,1,10,20,40,60,80,100μmol/L。

將上(shang)市的(de)抗腫瘤藥物阿糖胞苷(Ara-C)以同樣的(de)條(tiao)件配(pei)成對照品溶液。

細胞培養:貼壁生長腫瘤細胞細胞培養于含10%滅活新生牛血清和青霉素、鏈霉素(各100萬U/L)的1640培養液中,置于37℃,5%CO2,飽和濕(shi)度(du)的(de)二(er)氧化(hua)碳(tan)培(pei)(pei)養箱(xiang)中(zhong)培(pei)(pei)養。細(xi)胞(bao)貼壁生(sheng)長,每2~3天傳(chuan)代(dai)1次,傳(chuan)代(dai)時首先倒出培(pei)(pei)養液(ye),PBS洗(xi)2次,胰酶消化(hua)后(hou),加入新鮮的(de)培(pei)(pei)養液(ye)吹打均勻,調整細(xi)胞(bao)至適當濃度(du)移入新的(de)培(pei)(pei)養瓶中(zhong),添加培(pei)(pei)養液(ye)至適量(liang)。取對數(shu)生(sheng)長期細(xi)胞(bao)用于實驗。

MTT法檢測細胞活性及IC50的測定:

實驗原理:活細胞線(xian)粒體中脫氫酶能(neng)將黃色(se)的(de)MTT還原成(cheng)不溶于水(shui)的(de)藍紫色(se)產物(wu)甲臜(MTT formazan),并沉積在細胞中,生成(cheng)的(de)量(liang)與活細胞數目(mu)成(cheng)正比(bi),而死(si)細胞沒有(you)這種(zhong)功(gong)能(neng)。DMSO能(neng)溶解藍紫色(se)結晶物(wu),顏(yan)色(se)深淺與所含的(de)量(liang)成(cheng)正比(bi),因此用(yong)酶標儀測定的(de)光(guang)吸收值可反映細胞存活率(lv)。

實驗方法:取對數生長期細胞,消化、計數,以2×104/mL的密度接種于96孔培養板中,每孔100μl。培養24小時后,將待測化合物以0.1,1,10,20,40,60,80,100μmol/L濃度處理細胞。實驗組每個濃度設5個復孔,以含0.4%DMSO的培養液作對照。藥物作用48小時后,去上清,每孔加入100μl MTT(2-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-3,5-二苯基-2H-四唑氫溴酸鹽)(1mg/mL),繼續培養4小時,棄上清,每孔加入100μl DMSO,振蕩混勻,用酶標儀在570nm處測定吸光度值,采用IC50計算軟件求出半數抑制濃度(IC50)。

試驗結(jie)果詳(xiang)見表1,其(qi)中(zhong),樣品是指相應實(shi)(shi)施例中(zhong)制備的(de)不對(dui)稱雙(shuang)取代靛紅席夫堿類(lei)化合物(wu),樣品編號對(dui)應制備實(shi)(shi)施例中(zhong)所得(de)到的(de)化合物(wu)的(de)具體編號。

表1化合物對不同腫瘤細胞的半數抑制濃度IC50(單位(wei):μmol/L)

化合(he)物(wu)9在所測試的(de)3種細胞株(zhu)中(zhong)均表現出了良(liang)好的(de)抗(kang)(kang)腫瘤(liu)活(huo)性(xing),化合(he)物(wu)5和7次之,在不(bu)同的(de)細胞株(zhu)中(zhong)也表現出了良(liang)好的(de)抗(kang)(kang)腫瘤(liu)活(huo)性(xing)。以上實驗結果表明,本發明的(de)化合(he)物(wu)具有良(liang)好的(de)抗(kang)(kang)腫瘤(liu)活(huo)性(xing),特別(bie)是(shi)部分不(bu)對稱雙(shuang)取(qu)代靛紅席夫堿類(lei)化合(he)物(wu)的(de)活(huo)性(xing)在特定細胞株(zhu)中(zhong)抗(kang)(kang)腫瘤(liu)活(huo)性(xing)優于或等同于阿糖胞苷,可用(yong)于抗(kang)(kang)腫瘤(liu)藥(yao)物(wu)的(de)研究。

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