專利名稱：神經損傷治療劑的制作方法
技術領域：
本發明涉及神經損傷的治療劑，其中含有作為活性成分的低分子量糖類，所述低分子量糖類的組成中至少有葡萄糖醛酸和/或N-乙酰葡萄糖胺(特別的，低分子量透明質酸)或其可藥用鹽。
背景技術：
JP11-140103A披露包含透明質酸(HA)或其可藥用鹽的水溶液，用于脊髓灌注，其中描述所述灌注溶液可用于脊髓損傷的脊髓灌注治療。另外，平均分子量500,000到4,000,000的HA在文件中舉例說明。
然而，沒有披露或提示有關由至少由葡萄糖醛酸(GlcA)和/或N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)組成的低分子量糖類(特別是低分子量HA)的用途，因此沒有披露或提示這種低分子量糖類帶來更優秀的作用。

發明內容
首先將描述用于本發明的縮寫。
GlcNAcN-乙酰葡萄糖胺GlcA葡萄糖醛酸HA透明質酸DMSO二甲基亞砜PBS磷酸鹽緩沖液SCEP脊髓誘發電位本發明的目標是提供安全有用的神經損傷治療劑，其中含有作為活性成分的至少由GlcA和/或GlcNAc(特別是低分子量HA)組成的低分子量糖類或其可藥用鹽。
本發明的發明人已經做了大量研究以解決上述問題，并發現至少由GlcA和/或GlcNAc(特別是低分子量HA)組成的低分子量糖類對神經損傷特別是脊髓損傷具有極其優秀的作用。因而它們已經提供可以解決上述問題的神經損傷治療劑并已完成本發明。
也即，本發明提供神經損傷治療劑(以下稱為本發明的治療劑)，其中含有作為活性成分的至少由GlcA和/或GlcNAc組成的低分子量糖類或其可藥用鹽。
此處所用的“至少由GlcA和/或GlcNAc組成的低分子量糖類”優選是低分子量HA。同時，“低分子量HA”優選是HA二糖到HA2,500糖，更優選是HA二糖到HA 50糖，特別優選是HA四糖。
本發明的治療劑優選是脊髓損傷或神經創傷的治療劑。
本發明也提供治療神經損傷的方法，包括將有效量的至少由GlcA和/或GlcNAc組成的低分子量糖類或其可藥用鹽給予患有神經損傷的動物(特別是包括人在內的哺乳動物)。
本發明也提供至少由GlcA和/或GlcNAc組成的低分子量糖類或其可藥用鹽用于制造神經損傷治療劑的用途。


圖1是藥理學測試方法的示意圖。
圖2是舉例說明輕微損傷模型(A)和嚴重損傷模型(I)(B)的損傷程度的圖解(照片)。
圖3表示給予HA4的輕微損傷模型中SCEP測量結果。圖中的符號“*”代表與給予生理鹽水組比較的p＜0.05的顯著性差異(Dunnett′s多重比較檢驗)。
圖4表示給予HA4的嚴重損傷模型(I)中SCEP測量結果。MPSS表示給予甲基強的松龍琥珀酸鈉組。圖中的符號“*”、“**”、“***”分別代表與給予生理鹽水組比較的p＜0.05、p＜0.01、p＜0.0001的顯著性差異(Dunnett′s多重比較檢驗)。
圖5表示嚴重損傷模型(II)中SCEP測量結果。圖中的符號“*”代表與給予生理鹽水組比較的p＜0.05的顯著性差異(Tukey′s多重比較檢驗)。
圖6是舉例說明輕微損傷模型的給予PBS組中損傷位點的觀察結果的圖解(照片)。照片中的箭頭“b”表示髓鞘損失。
圖7是舉例說明輕微損傷模型的給予HA4組中損傷位點的觀察結果的圖解(照片)。橢圓表示損傷位點。
圖8表示損傷區域的測量方法。
圖9表示給予HA4的輕微損傷模型中“損傷區域”的測量結果。
圖10是從白質到灰質交界部分的觀察結果的圖解(照片)。照片(A)和(B)分別表示給予生理鹽水組和給予HA4組。箭頭表示跨白質到灰質的軸突。
圖11表示輕微損傷模型中跨白質到灰質的軸突(橫切)數目的測量結果。
圖12表示嚴重損傷模型(II)中脊髓損傷7天后后肢中滑倒數目的測量結果。圖(A)和(B)分別表示通過平衡木和通過金屬的結果。圖中的符號“***”代表與給予生理鹽水組比較的p＜0.0001的顯著性差異(Tukey′s多重比較檢驗)。
圖13表示嚴重損傷模型(II)中脊髓損傷7天后后肢運動功能測試的測量結果(BBB規范)。圖中的符號“***”代表與給予生理鹽水組比較的p＜0.0001的顯著性差異(Tukey′s多重比較檢驗)。
具體實施例方式
本發明將在下面詳細描述。
<1>本發明治療劑中的活性成分(1)至少由GlcA和/或GlcNAc組成的低分子量糖類或其可藥用鹽本發明中，“至少由GlcA和/或GlcNAc組成的低分子量糖類”包括“至少由GlcA組成的低分子量糖類”、“至少由GlcNAc組成的低分子量糖類”、和“至少由GlcA和GlcNAc組成的低分子量糖類”。“至少由GlcA組成的低分子量糖類”包括作為單糖的“GlcA”，而“至少由GlcNAc組成的低分子量糖類”包括作為單糖的“GlcNAc”。
GlcA優選是D-葡萄糖醛酸，而GlcNAc優選是N-乙酰-D-葡萄糖胺。
這樣的“至少由GlcA和/或GlcNAc組成的低分子量糖類”優選是低分子量HA。此外，這種低分子量糖類優選的沒有硫酸基。
在本描述中，“低分子量HA”是低分子量糖鏈，其組成與HA的二糖組成相似。具體的，它表示低分子量糖鏈，其中GlcA和GlcNAc可選的通過糖苷鍵連接。
如果低分子量HA是這樣的低分子量糖鏈，此處使用的“低分子量HA”包括具有GlcA非還原末端的糖鏈以及具有GlcNAc非還原末端的糖鏈。其中優選具有GlcA作為位于非還原末端的單糖的糖鏈。同樣，優選具有GLcNAc作為位于還原末端的單糖的糖鏈。
位于非還原末端的單糖可以是飽和糖(不含碳-碳雙鍵的單糖)或不飽和糖(含碳-碳雙鍵的單糖)。其中優選具有飽和糖作為位于非還原末端的單糖的糖鏈。
在本描述中，“低分子量”表示由本領域(特別是涉及糖胺聚糖的技術領域)普通技術人員識別為低分子量的分子量。平均分子量超過1,000kD的分子在本領域不被認為是具有“低分子量”的分子。
“低分子量HA”優選是HA二糖到HA 2,500糖，更優選是HA二糖到HA 2,000糖，還優選的是HA二糖到HA 1,500糖，非常更優選的是HA二糖到HA 1,000糖，特別優選的是HA二糖到HA 500糖，非常特別優選的是HA二糖到HA 250糖，極其優選的是HA二糖到HA 100糖。其中HA寡糖是極其優選的。
此處，“寡糖”表示由本領域普通技術人員識別為寡糖的糖鏈。“HA寡糖”的實例包括HA二糖到HA 50糖。HA寡糖優選是HA二糖到HA 30糖，更優選是HA二糖到HA 20糖，還優選的是HA二糖到HA 10糖，非常更優選的是HA四糖。
低分子量HA可以是具有不同分子量的糖的混合物。因此，上述HA四糖不僅包括HA四糖，也包括含HA四糖作為主要成分的HA寡糖的混合物。此處所用的HA寡糖包括上面舉例的HA寡糖混合物。
GlcA和GlcNAc之間的糖苷鍵優選是β1→3鍵，而GlcNAc和GlcA之間的糖苷鍵優選是β1→4鍵。
不特別限制用于本發明治療劑的“至少由GlcA和/或GlcNAc組成的低分子量糖類或其可藥用鹽”的來源。例如，在低分子量HA用作這種糖鏈的情況下，可以通過降解從公雞冠、臍帶、產生HA的微生物等中分離和純化的HA的方法(例如酶促降解方法、化學降解方法、熱處理方法、超聲處理方法等)或通過合成方法(例如化學合成方法或酶促合成方法)來生產。
酶促降解方法的實例包括用可降解HA的酶如透明質酸酶(源自睪丸)、透明質酸酶(源自鏈霉菌)、透明質酸酶SD、軟骨素酶ACI、軟骨素酶ACI、軟骨素酶ACII、軟骨素酶ACIII、或軟骨素酶ABC降解HA的方法(見Shin Seikagaku Jikken Koza(New BiochemicalExperiment Course)″Sugars II-Proteoglycan andGlycosaminoglycan-″p244-248，1991年出版，Tokyo Kagaku Dozin Co.，Ltd.，或Glycobiology，12，p421-426，2002)。為獲得低分子量HA，HA水解酶優選用作可降解HA的酶。
化學降解方法的實例包括堿降解方法和DMSO方法或其它類似方法。堿降解方法的實施可通過加堿如約1N氫氧化鈉到HA溶液中，加熱混合物幾小時以產生低分子量的HA，并加入酸如鹽酸以中和所述溶液。DMSO方法的實例包括Nagasawa等人描述的方法(Carbohyd.Res.，141，p99-110，1985)。超聲處理方法的實例包括Biochem.，33，p6503-6507(1994)中描述的方法或其它類似方法。
合成方法的實例包括Glycoconjugate J.，p453-439(1993)、WO93/20827中描述的方法或類似方法。
通過如上述的方法獲得含低分子量HA的組分，且組分還可以通過分離純化糖鏈的一般方法進一步純化。例如，可通過吸附層析、陰離子交換層析、疏水層析、凝膠過濾方法、凝膠滲透層析、紙電泳方法、紙層析、透析、有機溶劑分級分離、所述方法的組合或其它類似方法(Glycobiology，12，p421-426，2002)，但純化方法不限于這些方法。
這些方法使增加低分子量HA在組分中的含量并避免醫學不期望的物質污染成為可能。
由此獲得的低分子量HA優選是高度純化的HA，其中基本不合醫學不期望的物質。
例如，作為至少由GlcA和/或GlcNAc組成的低分子量糖類的可藥用鹽，可以使用的可藥用鹽選自堿金屬鹽(如鈉鹽、鋰鹽和鉀鹽)、堿土金屬鹽、無機鹽如銨鹽或有機鹽如二乙醇胺鹽、環己基銨鹽和氨基酸鹽。其中優選使用鈉鹽。
當使用上述至少由GlcA和/或GlcNAc組成的低分子量糖類或其可藥用鹽時，可以獲得具有極佳藥物作用的神經損傷治療劑。
在本發明的治療劑是液體制劑的情況下，用于本發明治療劑的至少由GlcA和/或GlcNAc組成的低分子量糖類或其可藥用鹽中的內毒素濃度優選是0.3EU/mL或更低。在本發明的治療劑不是液體制劑的情況下，內毒素濃度優選不超過相當于上述液體制劑中的內毒素含量的量。用本領域技術人員熟知且常用的內毒素測定方法，但優選是可通過使用鱟變形細胞裂解液成分而實施的鱟測試方法，可以確定本發明治療劑中的內毒素濃度。根據日本工業標準(JIS K8008)中的生化試劑一般規則可以測定并計算EU(內毒素單位)。同時，鐵含量優選是20ppm或更低。
(2)本發明的治療劑的劑量形式等只要本發明治療劑可以發揮對神經損傷的作用，不具體限制本發明治療劑的給藥方法。給藥途徑的實例包括注射(硬膜內、靜脈內、肌內、皮下、皮內、腹膜內等)、經鼻、口服、經皮和吸入。根據疾病或給予位點適當選擇給藥方法如通過注射到某個位點直接給藥或點滴給藥。如果經硬膜內給藥或類似方法，供藥物灌注的可植入泵可植入體內以進行連續給藥。
根據這樣的給藥途徑或給藥方法，適當配制上述低分子量糖類或其可藥用鹽以制備本發明的治療劑。劑型的實例包括注射劑(如溶液、懸劑、乳液和使用前溶解的固體制劑)、片劑、膠囊、液體制劑、顆粒、粉、脂制劑、軟膏、橡皮膏、洗劑、糊劑、貼膏、凝膠、栓劑、外用粉、噴霧劑和吸入粉劑。優選一種形式的液體制劑如注射劑。
例如，通過將至少由GlcA和/或GlcNAc組成的低分子量糖類或其可藥用鹽溶解于適當的水性溶劑或常用于藥物的溶劑，可以制造所述液體制劑。這種溶劑的實例包括蒸餾水、緩沖液、生理鹽水和含可與水互溶的有機溶劑的水或類似溶劑。
如果本發明的治療劑以注射劑提供，其形式可以是溶液、冷凍產品或凍干品。所述治療劑裝入并密封于適當的容器如安瓿、管形瓶或注射針中，供分銷或保存，且可以作為注射劑給藥。
為配制本發明的治療劑，可使用已知方法。配制治療劑時，可以使用其它活性成分(如抗炎藥、止痛劑、維生素制劑、抗茵劑、生長因子和粘附分子)或通常用于醫藥的成分如常規穩定劑、乳化劑、滲透調節劑、pH調節劑、緩沖劑、張力調節劑、防腐劑、soothing agents、著色劑、稀釋劑、粘合劑、潤滑劑和崩解劑，只要這些成分對上述糖類或其可藥用鹽沒有不利影響且對本發明的作用沒有影響。
本發明的治療劑含有至少由GlcA和/或GlcNAc組成的低分子量糖類或其可藥用鹽作為活性成分，使得治療劑只需包含至少由GlcA和/或GlcNAc組成的低分子量糖類或其可藥用鹽，還可進一步包含其它分子大小的糖類或其它種的糖類。
(3)待給予本發明治療劑的對象本發明治療劑目的是治療神經損傷，這樣它可用于處于需要治療神經損傷的狀況的動物，也即經受神經損傷的動物。
不具體限制“處于需要治療神經損傷的狀況”，但其實例包括脊髓損傷或神經創傷如頭部創傷、腦(嬰幼兒)癱、脊髓血管損害、頸椎強直、老年性癡呆、阿爾茨海默病、帕金森病和脊髓小腦退化(遺傳性痙攣性下肢輕癱)。其中所述治療劑優選用于脊髓損傷或神經創傷、更優選用于脊髓損傷。所述脊髓損傷的實例包括創傷性脊髓損傷、脊椎退行性疾病(椎關節強直等)、脊椎炎性疾病(脊椎炎、慢性類風濕性關節炎等)、腫瘤(脊髓腫瘤、脊柱腫瘤等)、血管疾病(脊髓出血、腦栓塞、由髓外血管損傷導致的脊髓癱瘓等)、脊髓炎(蛛網膜炎、病毒性脊髓炎、細菌性脊髓炎等)、多發性硬化癥、和肌萎縮性側索硬化癥。特別的，所述治療劑可有效用于創傷性脊髓損傷。
也就是說，本發明的治療劑優選是脊髓損傷或神經創傷的治療劑，更優選是脊髓損傷的治療劑，特別優選是創傷性脊髓損傷的治療劑。
如果本發明治療劑給予動物，待給予治療劑的動物優選是脊椎動物，特別優選是包括人在內的哺乳動物。通過本發明治療劑實施的“治療”目的不特別限制，但目標可以是抑制進展(預防惡化)、改善癥狀或使神經損傷愈合等。
本發明治療劑中至少由GlcA和/或GlcNAc組成的低分子量糖類或其可藥用鹽的混合量、每次給藥劑量、給藥間隔等不特別限制，例如，并根據給藥方法、給藥形式和使用本發明治療劑的意圖、患者的具體癥狀、年齡、性別和體重來單獨確定。至少由GlcA和/或GlcNAc組成的低分子量糖類或其可藥用鹽的臨床劑量的實例可以是100μg到1000mg/成人/次。
本發明治療劑的給藥間隔可以是約每天一次，或所述藥劑可每天兩次到三次給藥。同時，也可使用如上所述的供藥物灌注的可植入泵連續給予所述藥劑。
除了本發明的治療劑以外，本發明也包括治療神經損害的方法，包括將至少由GlcA和/或GlcNAc組成的低分子量糖類或其可藥用鹽給予要求神經損害治療的對象(動物)。
實施例以下將具體說明本發明的實施例。然而，本發明的范圍并不受此限制。
<材料等>
首先，將描述用于這些實施例中的物質等。
試劑等低分子量HA用作至少由GlcA和/或GlcNAc組成的低分子量糖類。
來自Seikagaku公司的HA用作所述低分子量HA。所述低分子量HA有以下結構并有以下特性(用于本實施例的縮寫表示于下面括號中。以下式子中，符號“-”代表糖苷鍵。)。
飽和HA四糖(以下稱為“HA4”)。
GlcA-GlcNAc-GlcA-GlcNAc根據Nagasawa等人描述的方法(Carbohyd.Res.，141，p99-110，1985)，通過用陰離子交換層析進行降解產物的大小分級分離獲得HA4，所述降解產物由用含鹽酸(HCl)的DMSO處理HA而獲得。
將HA4溶于PBS，以達到根據以下藥理試驗預定的濃度并使用。HA4溶于PBS中后，所有內毒素濃度是0.3EU/mL或更低，而所有鐵含量是20ppm或更低。
<藥理學試驗＞HA4對脊髓損傷的作用(1)制備脊髓損傷模型并給予HA4(圖1和2)圖1表示本實驗的示意圖。
Wister大鼠(SPF，雄性)用作動物，在戊巴比妥(50mg/kg)麻醉下用電動剪毛器從頸到臀部剃每只大鼠身體并用70％乙醇和Isodine(由Meiji Seika Kaisha，Ltd.制造)清潔。切開背部皮膚以暴露T5到T10胸椎，并對第6胸椎(T6胸椎)行偏側椎板切除術，在硬膜上制造一個小切口，隨后用利多卡因(由Astra Zeneca制造)進行局部麻醉。接著按如下制備兩個模型從背部插入壓舌板(尖端已加工到0.3mm)到T6位置直至尖端達到腹側中心并維持10分鐘以損傷脊髓(輕微損傷模型)；另外插入小鉗子(尖端已加工到0.3mm)直到尖端達到腹側中心，并從兩側夾住錐體部分維持10秒以損傷脊髓(嚴重損傷模型)。僅當測量到脊髓誘發電位時使用呼吸器。在1.0到2.0％氟烷麻醉下將呼吸器插入氣管并用肌肉松弛劑穩定。每個模型的損傷程度表示于圖2。
損傷后，立即用微注射器(25μl；由Seisakusyo Co.，Ltd.制造)將HA4(6μl)給予到硬膜內。隨后，填充入HA4并與滲透泵(1002型，由Alzet制造)連接的管子尖端(OD0.3mm)放置在損傷部位中尾側(rostral)的硬膜下，并連續給予HA47天。同時，在損傷后5分鐘、2小時、4小時和6小時，將30mg/kg甲基強的松龍琥珀酸鈉(MPSS，Parmacia制造)給予尾靜脈作為陽性對照。為了從周圍組織中分離損傷部位，放置明膠海綿(Gelform；Pharmacia制造)，傷口縫合后將大鼠放回飼養器中。
本測試的組結構如下。
1.輕微損傷模型(1)無損傷/未處理組(2)給予PBS組(給予生理鹽水組)(3)給予HA4(60μg/動物/天)組2.嚴重損傷模型(I)(1)無損傷/未處理組(2)給予PBS組(給予生理鹽水組)(3)給予甲基強的松龍(MPSS；30mg/kg體重/天x4次)組(4)給予HA4(0.6μg/動物/天)組(5)給予HA4(6.0μg/動物/天)組3.嚴重損傷模型(II)(1)通過在硬膜上制造小切口制備的假手術組(假)(2)給予PBS組(給予生理鹽水組)(3)給予HA4(6.0μg/動物/天)組
(2)效果狀態評價給予測試物質后，觀察效果狀態。對于給予PBS組，結果觀察到甚至在給藥7天后仍行走困難，而對給予HA4組，觀察到與正常大鼠大體相似的行走。
(3)HA4對脊髓誘發電位(SCEP)的影響脊髓損傷7天后測定脊髓誘發電位。在氟烷麻醉(初始時間4.0％，維持時間1.0)下將管子插入氣管并用肌肉松弛劑穩定。然后，固定頭部在俯臥位并用呼吸器維持大鼠。將導管電極插入第二/三頸椎骨之間和第十三胸椎骨/第一腰椎骨之間并使用肌電圖儀(Powerpoint；DANTEC DYNAMICS制造)施加超大刺激(刺激頻率1Hz，時間0.05msec)。然后測量脊髓誘發電位(SCEP)并計算“平均值士SD”。用第一電位的振幅作為指標評價得到的電位。圖3和4分別表示輕微損傷模型的結果和嚴重損傷模型的結果。圖中的符號“*”表示與給予生理鹽水組比較的p＜0.05的顯著差異(Dunnett′s多重比較檢驗)。
作為結果，在輕微損傷模型中，與給予生理鹽水組相比，給予HA4(60μg/動物/天)組中的SCEP振幅降低顯著減弱或SCEP振幅恢復(p＜0.05)。水平與正常水平相同(無損傷-未處理組)(圖3)。在嚴重損傷模型中，與給予PBS組相比，給予HA4(0.6μg/動物/天)組和給予HA4(6μg/動物/天)組中的SCEP振幅降低顯著減弱或SCEP振幅恢復(分別p＜0.05和0＜0.001；與正常水平相同的水平)，同時發現給予HA4(6μg/動物/天)組有比MPSS組更強的作用(圖4)。同時在嚴重損傷模型(II)中，以上述相同的方式測量SCEP。結果表示于圖5。作為結果，與給予生理鹽水組相比，給予HA4(6.0μg/動物/天)組中的SCEP幅度顯著恢復(p＜0.05)(圖5)。圖中的符號“*”表示與給予生理鹽水組比較的p＜0.05的顯著差異(Tukey’s多重比較檢驗)。
(4)從組織病理學觀點評價(輕微損傷模型)用中性緩沖福爾馬林固定并用石蠟包埋損傷位點周圍約2cm長的脊髓部分。從背部制備冠狀平面的系列切片，并進行Kluver-Barrera染色，其中髓鞘被染成藍色。在包括中央管的位置的組織樣品中，觀察(a)損傷位點區和(b)跨白質到灰質的軸突(軸突進入并離開第六胸椎脊髓)。圖6和7分別表示給予PBS組和給予HA組的結果。
作為結果，在給予PBS組的組織損傷區中不僅在損傷位點(損傷位點)而且在遠離開損傷位點1cm或更多的白質中觀察到水腫和髓鞘損失(圖6)。連續或分散的模式代表白質中的組織損傷(圖6)。對于給予HA4組，組織損傷僅僅出現在損傷位點附近，并且在白質中很少觀察到水腫和髓鞘損失(圖7)。
如圖8所示，在冠狀面中包括中央管的平面，包括頭側點和尾側點的在兩側和遠側的四個損傷點范圍內的正方形區域(圖8中的實框)被定義為“損傷區”，并確定損傷面積。作為結果，給予HA4組的面積顯著小于給予PBS組的面積(圖9)。
同時，測定跨白質到灰質的軸突(橫切)(在損傷位點頭/尾方向5mm范圍)的數目。并作為結果，給予HA4組的軸突數顯著大于給予生理鹽水組(圖10和11)。
(5)從行為學觀點評價(嚴重損傷模型II)在造成脊髓損傷前，通過用平衡木(3cm×100cm)和金屬網(20cm×100cm)進行橫跨測驗訓練動物5到7天。訓練完成后以和以上(1)-(3)所述相同的方式對每個動物制備脊髓嚴重損傷模型(II)。隨后腹膜內連續給予PBS或HA47天，并且每個動物允許跨過兩個障礙物四次。然后記錄后肢的滑倒次數，并評價其平均值(圖12)。對于通過在硬膜上制造小切口制備的假手術組，也測定后肢滑倒次數。
同時，脊髓損傷后，對給予PBS或HA4組和假手術組，每天進行后肢運動功能測試連續7天。根據Basso等人描述的方法，兩個測試實施人用Basso-Beeattie-Bresn(BBB)規范單獨用盲法評價，并定義平均值為最終結果(圖13)。
在平衡木或金屬網跨越中，由于兩個障礙引起的后肢滑倒次數顯著很低(p＜0.0001)(圖12)，而在用BBB規范的后肢運動功能測試中，與給予生理鹽水組比較，發現脊髓損傷后1到7天給予HA4(6μg/天)組的后肢運動功能顯著恢復(p＜0.0001)(圖13)。圖中的符號“***”表示與給予生理鹽水組比較的p＜0.0001的顯著差異(Tukey’s多重比較檢驗)。
上述結果顯示給予HA4抑制脊髓誘發電位的降低或恢復脊髓誘發電位。結果顯示HA4對由脊髓損傷引起的神經功能降低有抑制作用或對神經功能有恢復作用。實際上，已經確認給予HA4組的后肢運動功能顯著恢復。
在組織病理學評價中，給予HA4組中組織損傷受到抑制，同時還提示HA4對神經功能的作用與組織損傷抑制有關。特別的，已經顯示由HA4引起的髓鞘損失抑制(繼發損傷中的脫髓鞘)和軸突數目減少(由于損傷引起的神經細胞或少突膠質細胞凋亡，認為軸突消失)抑制是與由HA4引起的神經功能降低的抑制緊密相關的。
同時，上述使用動物的測試結果支持本發明治療劑的安全性。
上述結果顯示“低分子量HA”(特別是HA4)，它是“至少由GlcA和/或GlcNAc組成的低分子量糖類”或其可藥用鹽，對治療神經損傷(特別是神經創傷或脊髓損傷)極為有用且非常安全。
工業實用性本發明的治療劑是非常有用的，因為它對神經損傷，特別是脊髓損傷或神經創傷引起的神經損傷，具有極佳的作用，且使用安全。
權利要求
1.神經損傷治療劑，其中含有至少由葡萄糖醛酸和/或N-乙酰葡萄糖胺組成的低分子量糖類或其可藥用鹽作為活性成分。
2.根據權利要求1的治療劑，其中至少由葡萄糖醛酸和/或N-乙酰葡萄糖胺組成的低分子量糖類是低分子量透明質酸。
3.根據權利要求2的治療劑，其中低分子量透明質酸是透明質酸二糖到透明質酸2,500糖。
4.根據權利要求3的治療劑，其中低分子量透明質酸是透明質酸二糖到透明質酸50糖。
5.根據權利要求4的治療劑，其中低分子量透明質酸是透明質酸四糖。
6.根據權利要求1到5任意一項的治療劑，其中神經損傷由脊髓損傷或神經創傷引起。
7.治療神經損傷的方法，包括向患有神經損傷的動物給予至少由葡萄糖醛酸和/或N-乙酰葡萄糖胺組成的低分子量糖類或其可藥用鹽。
8.至少由葡萄糖醛酸和/或N-乙酰葡萄糖胺組成的低分子量糖類或其可藥用鹽用于制造神經損傷治療劑的用途。
全文摘要
本發明目的是提供由脊髓損傷、神經創傷等引起的神經損傷的治療劑，其中包含作為活性成分的低分子量糖類，所述低分子量糖類至少有葡萄糖醛酸和/或N－乙酰葡萄糖胺作為組成糖或其可藥用鹽。優選的，神經損傷治療劑中包含低分子量透明質酸(進一步優選透明質酸二糖到透明質酸2500糖，進一步優選透明質酸二糖到透明質酸50糖，特別優選透明質酸四糖)或者其可藥用鹽作為活性成分。
文檔編號C08B37/08GK1794999SQ200480014299
公開日2006年6月28日 申請日期2004年3月25日 優先權日2003年3月25日
發明者加藤忠彥, 淺利晃 申請人:生化學工業株式會社