專利名稱：一種苦馬豆素的制備方法
技術領域：
本發明屬于天然產物分離領域，特別是涉及一種苦馬豆素的制備方法。
背景技術：
苦馬豆素是一種吲哚類生物堿，化學名是1，2，8—三羥基八氫吲哚茲啶，高純度苦馬豆素為白色針狀結晶，熔點144°C _145°C，分子式C8H15NO3,分子量173，酸解離常數7. 4， 易溶于水。苦馬豆素是最初從灰苦馬豆中分離出來一種毒性成分，是導致動物中毒的瘋草的主要成分。現代醫學研究表明，苦馬豆素能激活動物腹腔吞噬細胞的細胞結合活性，從而可抑制腫瘤細胞，對治療腫瘤、感染性疾病、免疫抑制性疾病有重要意義。最新研究表明，苦馬豆素能有效逆轉致死性輻照或高劑量化療所造成的骨髓抑制。在世界范圍內，苦馬豆素作為一種新的天然抗腫瘤藥物越來越受到重視。文獻“苦馬豆素研究進展”和《陜西日報》對其做了詳細論述。當前，苦馬豆素的來源主要有三類一是從微生物菌絲體或發酵液中進行提取； 二是化學合成；三是從植物中提取。微生物發酵和化學合成反應條件苛刻和繁瑣，很難批量生產。從植物中制備，原料是一種毒草，而且易得，是一種變廢為寶的做法。瘋草包括棘豆屬和黃芪屬兩屬有毒植物，國內外均有廣泛分布。在我國主要分布于西北、西南、華北的主要牧區。家畜采食后可引起中毒、死亡、流產等危害。現有從植物中提取苦馬豆素方法，多采用有萃取法和硅膠柱分離。如“瘋草中苦馬豆素提取的提純工藝”(專利申請號02114590. 3)公開的方法是采用陽離子交換法提取出大極性生物堿粗品，再用堿性氯仿抽提，抽提部分經硅膠柱層析分離得到苦馬豆素粗品，最后分步升華獲得苦馬豆素純品。但是生產中會產生了很多酸、堿廢水污染嚴重，硅膠柱分離重現性差。還有“從甘肅棘豆中分離提取苦馬豆素的工藝方法”(專利申請號 200610104918. 3)該方法也是采用硅膠柱分離純化。而“一種從豆科棘豆屬或黃芪屬植物中提純苦馬豆素的工藝”(專利申請號200810018178. 3)，該專利公開的方法是先超聲進行提取，再過大孔樹脂分離粗品，最后用升華的方法獲得精品。但是工藝采用水提取，也是存在污染嚴重問題。專利(專利申請號200710017M2.X) “連續柱層析法提純苦馬豆素的工藝”，該專利公開的方法是采用大孔樹脂、硅膠柱和高效液相連續柱層析，得到苦馬豆素。該方法工業操作復雜，制備量較小。

發明內容
本發明的目的是解決現有技術的不足，提供一種苦馬豆素的制備方法。本發明目的是通過以下技術方案來實現的
一種苦馬豆素的制備方法，其特征在于將瘋草原料粉碎，加入甲醇浸泡提取2-3次， 每次提取2-3小時，提取液進行濃縮，濃縮后加水進行分散，然后過濾，濾液加入大孔樹脂柱，收集柱通過液減壓濃縮，濃縮液加適量氨水，用二氯甲烷萃取，萃取液濃縮至小體積，以氯仿-甲醇-丁醇-水作為溶劑系統，采用高速逆流色譜分離，收集流分回收試劑，真空干燥即得產品。所述的甲醇浸泡提取條件為甲醇為80-90%甲醇溶液，提取溫度為45_55°C。所述的大孔樹脂可選非極性大孔樹脂。所述的高速逆流色譜分離條件為溶劑系統為氯仿-甲醇-丁醇-水，比例 30-25:1:17:12,上相為流動相，下相為固定相，轉速800_950r/min，流速Uml/min。
本發明優點是采用高濃度甲醇熱浸提取可以減少極性物質的溶出，有利于純化，減少廢水的產生；大孔樹脂純化，利用水溶性生物堿在大孔樹脂中不吸附的原理，吸附雜質，簡化了后續純化步驟；高速逆流色譜分離，樣品無損失，制備量大，重現性高，還不產生廢液。下面將結合具體實施方式
進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。
具體實施例方式實施例1
瘋草原料粉碎20目，取^cg,加入10L80%甲醇加熱到45°C保溫提取3小時，濾出液體， 再加10L80%甲醇提取3小時，合并提取液濃縮至無醇，加適量的水進行分散，過濾，濾液加入HPD100大孔樹脂柱，收集柱通液，減壓濃縮，濃縮液加氨水調節pH至10，然后加入200mL 二氯甲烷進行萃取，萃取2次，萃取液濃縮至小體積。取氯仿、甲醇、丁醇、水溶劑，按比例 27:1:17:12混合，取上相為流動相，下相為固定相，把固定相注入高速逆流色譜儀柱內，開啟機器，調節主機轉速800r/min，流速lml/min，注入樣品分離，收集目標成分，真空減壓干燥得白色苦馬豆素83mg，含量99. m。實施例2
瘋草原料粉碎40目，取4kg，加入30L90%甲醇加熱到55°C保溫提取2小時，濾出液體， 再加20L90%甲醇提取2小時，合并提取液濃縮至無醇，加適量的水進行分散，過濾，濾液加入AB-8大孔樹脂柱，收集柱通液，減壓濃縮，濃縮液加氨水調節pH至12，然后加入300mL 二氯甲烷進行萃取，萃取2次，萃取液濃縮至小體積。取氯仿、甲醇、丁醇、水溶劑，按比例 30:1:17:12混合，取上相為流動相，下相為固定相，把固定相注入高速逆流色譜儀柱內，開啟機器，調節主機轉速950r/min，流速％il/min，注入樣品分離，收集目標成分，真空減壓干燥得白色苦馬豆素180mg，含量98. 1%。實施例3:
瘋草原料粉碎60目，取10kg，加入60L90%甲醇加熱到50°C保溫提取2小時，濾出液體， 再加60L90%甲醇提取2小時，合并提取液濃縮至無醇，加適量的水進行分散，過濾，濾液加入HZ816大孔樹脂柱，收集柱通液，減壓濃縮，濃縮液加氨水調節pH至11，然后加入300mL 二氯甲烷進行萃取，萃取3次，萃取液濃縮至小體積。取氯仿、甲醇、丁醇、水溶劑，按比例 25:1:17:12混合，取上相為流動相，下相為固定相，把固定相注入高速逆流色譜儀柱內，開啟機器，調節主機轉速900r/min，以流速2ml/min，注入樣品分離，收集目標成分，真空減壓干燥得白色苦馬豆素43ang，含量98. 5%。實施例4:
瘋草原料粉碎40目，取20kg，加入100L80%甲醇加熱到50°C保溫提取2小時，提取3次，合并提取液濃縮至無醇，加適量的水進行分散，過濾，濾液加入HZ816大孔樹脂柱，收集柱通液，減壓濃縮，濃縮液加氨水調節PH至12，然后加入600mL 二氯甲烷進行萃取，萃取3 次，萃取液濃縮至小體積。取氯仿、甲醇、丁醇、水溶劑，按比例觀1:17:12混合，取上相為流動相，下相為固定相，把固定相注入高速逆流色譜儀柱內，開啟機器，調節主機轉速900r/ min，流速2ml/min，注入樣品分離，收集目標成分，真空減壓干燥得白色苦馬豆素85aiig，含量 98. 3%ο
權利要求
1.一種苦馬豆素的制備方法，其特征在于將瘋草原料粉碎，加入5-8倍量甲醇浸泡提取2-3次，每次提取2-3小時，提取液回收甲醇，濃縮液加適量水分散，過濾，濾液加入大孔樹脂柱，收集柱通過液減壓濃縮，濃縮液加適量氨水，加入二氯甲烷萃取，萃取液濃縮至小體積，再采用高速逆流色譜分離，收集流分回收試劑，真空干燥即得產品。
2.如權利要求1所述的苦馬豆素的制備方法，其特征在于所述的甲醇浸泡提取條件為甲醇為80-90%甲醇溶液，提取溫度為45-55°C。
3.如權利要求1所述的苦馬豆素的制備方法，其特征在于所述的大孔樹脂可選非極性大孔樹脂。
4.如權利要求1所述的苦馬豆素的制備方法，其特征在于所述的高速逆流色譜分離條件為溶劑系統為氯仿-甲醇-丁醇-水，比例30-25:1:17:12,上相為流動相，下相為固定相，轉速 800-950r/min，流速 l_4ml/min。
全文摘要
本發明提供一種苦馬豆素的制備方法，方法是將瘋草原料粉碎，加入甲醇浸泡提取，將提取液濃縮，加適量的水進行分散，過濾，濾液加入大孔樹脂，收集柱通過液，減壓濃縮，濃縮至近干，濃縮液加適量氨水，用二氯甲烷萃取，萃取液濃縮至小體積，采用高速逆流色譜分離，收集流分回收試劑，真空干燥即得產品。本方法具有工藝操作簡單、產品無損失、制備量大、污染小的特點。
文檔編號C07D471/04GK102329316SQ201110210609
公開日2012年1月25日 申請日期2011年7月26日 優先權日2011年7月26日
發明者劉東鋒, 李法慶 申請人:蘇州寶澤堂醫藥科技有限公司