專利名稱：用于治療胃腸疾病的1-[(4-[苯甲酰基(甲基)氨基]-3-(苯基)丁基]氮雜環丁烷衍生物的制作方法
技術領域：
本發明涉及如上定義的式I化合物及其鹽。用于藥物組合物的鹽是藥學上可接受的鹽，但可將其它鹽用于式I化合物的制備。
本發明的化合物能與各種無機酸和有機酸成鹽，并且這些鹽也在本發明的范圍之內。這些酸加成鹽的實例包括乙酸鹽、己二酸鹽、抗壞血酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、環己基氨基磺酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、谷氨酸鹽、羥乙酸鹽、半硫酸鹽、2-羥乙基磺酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、羥基馬來酸鹽(hydroxymaleate)、乳酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽(palmoate)、過硫酸鹽、苯乙酸鹽、磷酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、奎尼酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、氨基磺酸鹽、對氨基苯磺酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、甲苯磺酸鹽(對-甲苯磺酸鹽)和十一酸鹽。
可以通過常規方法由相應的酸制備藥學上可接受的鹽。非藥學上可接受的鹽可用作中間體，其作為本發明的另一個方面。
酸加成鹽還可以是聚合物鹽(polymeric salts)的形式，比如聚合物磺酸鹽(polymeric sulfonates)。
可以通過常規方法成鹽，比如通過使產物的游離堿形式與一個或更多個當量的合適酸在其中所述鹽難溶的溶劑或介質中反應，或者溶劑(比如水)中反應，所述溶劑在真空下或通過冷凍干燥或在合適的離子交換樹脂上通過將現有鹽的陰離子交換成另一種陰離子而除去。
式I化合物具有一個手性中心，應當理解，本發明包括所有光學異構體和對映體。根據式(I)的化合物可以是單一的立體異構體即單一的對映體(R-對映體或S-對映體)形式。根據式(I)的化合物還可以是外消旋混合物的形式，即對映體的等摩爾混合物形式。
所述化合物可以作為構象異構體的混合物而存在。本發明的化合物包括構象異構體的混合物以及單一的構象異構體。
藥物制劑 根據本發明的一個方面，提供了一種藥物制劑，其包含式I化合物的作為游離堿或其藥學上可接受的鹽的單一對映體、外消旋體或其混合物，用于預防和/或治療呼吸疾病、心血管疾病、神經疾病、疼痛疾病、腫瘤疾病、炎性疾病和/或胃腸疾病。
本發明的藥物組合物可以以所期望治療的病癥的標準方式施用，例如通過口服、局部、胃腸外、口含、鼻內、陰道內或直腸施用或通過吸入或噴灑(insufflation)。為了這些目的，可利用本領域已知的方法將本發明的化合物配制成以下形式例如片劑、丸劑、膠囊、水溶液或油溶液、混懸劑、乳劑、霜劑、軟膏劑、凝膠劑、噴鼻劑、栓劑、用于吸入的微細粉末或氣霧劑或噴霧劑、以及用于胃腸外施用(包括靜脈內、肌肉內或輸注)的無菌水溶液或油溶液或混懸劑或無菌乳劑。
除了本發明的化合物以外，本發明的藥物組合物還可以包含在治療本文中所涉及的一種或多種病癥中具有價值的一種或多種藥理學活性劑(pharmacological agent)，或者與所述的一種或多種藥理學活性劑共施用(同時或順序)。
通常按照式I化合物的日劑量為0.01～25mg/kg體重將本發明的藥物組合物施用給人。或者，以日劑量為0.1～5mg/kg體重施用式I化合物。必要時，此日劑量可以以分劑量形式給予，根據本領域的公知原則，所施用化合物的精確量和施用途徑取決于被治療患者的重量、年齡和性別，以及被治療的具體病癥。
通常，單位劑型含有約1mg～500mg的本發明化合物。例如用于口服施用的片劑或膠囊可合宜地含有高達250mg(通常5～100mg)的式I化合物或其藥學上可接受的鹽。在另一個實例中，對于通過吸入施用而言，可以按5～100mg的日劑量以單次劑量或分成每日2～4個劑量施用式I化合物或其藥學上可接受的鹽。在另一個實例中，對于通過靜脈內或肌肉內注射或輸注施用而言，可使用包含高達10％w/w(通常5％w/w)的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽的無菌溶液或混懸液。
醫藥用途 本發明提供了一種治療或預防其中速激肽對NK受體發揮拮抗作用是有益的病癥的方法，其包括給對象施用有效量的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽。本發明還提供了式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽在制備用于其中速激肽對NK受體發揮拮抗作用是有益的病癥的藥物中的用途。
式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物可用于制備用于預防或治療呼吸疾病、心血管疾病、神經疾病癥、疼痛疾病、腫瘤疾病和/或胃腸疾病的藥物。
這些疾病的實例有哮喘、過敏性鼻炎、肺病、咳嗽、感冒、炎癥、慢性阻塞性肺病、氣道反應性、蕁麻疹、高血壓、類風濕性關節炎、水腫、血管生成、疼痛、偏頭痛、緊張性頭痛、精神病(psychose)、抑郁癥、焦慮、阿爾茨海默病、精神分裂癥、亨廷頓病、膀胱活動過度、尿失禁、進食障礙、躁狂型抑郁癥、物質依賴、運動障礙、認知障礙、肥胖癥、應激障礙、排尿障礙、躁狂癥、輕躁狂和攻擊、雙相障礙、腫瘤、癌、纖維肌痛、非心源性胸痛、胃腸運動過強、胃性哮喘、克羅恩病、胃排空障礙、潰瘍性結腸炎、腸易激綜合征(IBS)、炎性腸病(IBD)、嘔吐、胃性哮喘、胃動力障礙、胃食道反流病(GERD)或功能性消化不良。
制備方法 另一個方面，本發明提供了一種用于制備式(I)化合物或其鹽的方法，所述方法包括 a)使式(II)化合物與式(III)化合物反應
其中R1、R2和X如上所定義；條件是使得式(II)化合物的還原烷基化在式(II)化合物的氮雜環丁烷基的氮原子與式(III)化合物的醛基的碳原子之間形成N-C鍵；或者 b)使式(II)的化合物與式(IV)的化合物反應
其中X如上述所定義；L是使得式(II)化合物的烷基化在式(II)化合物的氮雜環丁烷基的氮原子與式(IV)化合物的鄰近所述L基團的碳原子之間形成N-C鍵的基團；或者 c)使式(V)化合物與式(VI)化合物反應
其中R1、R2和X如上所定義，L’是離去基團； 以及任選地形成藥學上可接受的鹽。
使式(II)和式(III)化合物在還原烷基化條件下反應。所述反應通常在非極端溫度下(例如0～10℃)于基本上惰性的溶劑(例如二氯甲烷)中進行。代表性的還原劑包括硼氫化物如氰基硼氫化鈉。
使式(II)和式(IV)化合物在烷基化條件下反應。通常，在式(IV)化合物中，L是離去基團如鹵素或烷基磺酰氧基。所述反應通常在升高的溫度(例如30～130℃)下于基本上惰性的溶劑(例如DMF)中進行。
可通過常規方法制備式(II)化合物，例如通過使式VII化合物
與式(VIII)化合物
反應，其中R1和R2如上述所定義；L”是使得式(VII)化合物的烷基化在式(VII)化合物的哌啶基的氮原子與式(VIII)化合物的鄰近所述L”基團的碳原子之間形成N-C鍵的基團；并且隨后例如通過催化加氫反應除去保護基(-CH(Ph)2)。
可以例如通過使式(IX)化合物與式(VI)化合物在常規酰化條件下反應而制備式(III)化合物
其中R1如上述所定義。
可以通過例如使式(VI)化合物與式(X)化合物在常規酰化條件下反應而制備式(IV)化合物
其中L如上述所定義。
式(V)和式(VI)化合物可以在常規酰化條件下反應，其中
是酸或活化酸衍生物。這樣的活化酸衍生物在文獻中是眾所周知的。它們可以由酸來原位形成或者可以制備、分離它們并隨后使其反應。通常L’是氯，從而形成酰氯。通常，所述酰化反應在非親核性堿(例如N，N-二異丙基乙胺)的存在下在基本上惰性的溶劑(比如二氯甲烷)中于非極端溫度下進行。
式(VII)和式(VIII)化合物是已知的，或者可通過常規方法制備。
實施例 應當強調，由于構象異構體的存在，本發明化合物常常表現出非常復雜的NMR圖譜。推測這是由于酰胺鍵和/或芳基鍵的緩慢旋轉而導致的結果。以下縮寫用于表示化合物的NMR數據s-單峰；d-雙峰；t-三重峰；qt-四重峰；qn-五重峰；m-多重峰；b-寬峰；cm-可包含寬峰的復雜多重峰。
以下實施例將描述而非限制本發明。
以下縮寫用于實驗中DIPEA(N，N-二異丙基乙胺)、TBTU(N，N，N′，N′-四甲基-O-(苯并三唑-1-基)脲四氟硼酸鹽)、DMF(N，N-二甲基甲酰胺)、THF(四氫呋喃)和RT(室溫)。
實施例1 N-[(2S)-4-{3-[4-(氮雜環丁烷-1-基羰基)哌啶-1-基]氮雜環丁烷-1-基}-2-(4-氟苯基)丁基]-3-溴-N-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺
將3-溴-N-[(2S)-2-(4-氟苯基)-4-氧代丁基]-N-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(參見方法1；0.16g，0.36mmol)和1-氮雜環丁烷-3-基-4-(氮雜環丁烷-1-基羰基)哌啶(參見方法2；0.10g，0.47mmol)與少量無水甲醇(0.2mL)一起溶于二氯甲烷(10mL)中。向所得溶液中加入DIPEA(0.14g，1.08mmol)和三乙酰氧基硼氫化鈉(0.15g，0.72mmol)。將所述混合物在RT下于氮氣下攪拌4小時。將混合物用二氯甲烷稀釋并以飽和NaHCO3水溶液清洗2次，然后再以鹽水清洗。通過分相器過濾有機相，通過蒸發除去溶劑。將產物通過硅膠色譜純化(甲醇-二氯甲烷，10:1)。得到0.14g(59％)白色泡沫的標題化合物。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ 1.4-1.8(cm，6H)，2.1(m，1H)2.2(qn，2H)，2.3-2.4(cm，2H)，2.5-3.5(cm，14H)，3.6(d，1H)，3.9(t，2H)，4.1(t，2H)，6.8-7.4(cm，6H)，7.7(s，1H)；LCMSm/z 654(M+1)+. 實施例2 1-{1-[(3S)-4-[[3-溴-5-(三氟甲基)苯甲酰基](甲基)氨基]-3-(4-氟苯基)丁基]氮雜環丁烷-3-基}-N，N-二甲基哌啶-4-甲酰胺二甲酸鹽
將3-溴-N-[(2S)-2-(4-氟苯基)-4-氧代丁基]-N-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(參見方法1；0.178g，0.40mmol)、1-氮雜環丁烷-3-基-N，N-二甲基哌啶-4-甲酰胺(參見方法3；0.084g，0.40mmol)、乙酸(0.3mL)、(聚苯乙烯基甲基)三甲基氰基硼氫化銨(0.098g，0.52mmol)和甲醇的混合物在RT下攪拌6小時。濾除樹脂并以甲醇清洗。通過蒸發除去濾液的溶劑，將產物通過反相色譜(C8)利用乙腈和甲酸銨/甲酸水溶液(0.1M NH4CO2H，0.1M HCO2H，pH 4)作為洗脫劑純化。得到0.23g(77％)標題化合物。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ 1.6-2.0(cm，6H)，2.6-4.2(cm，24H)，7.0-8.0(cm，6H)，8.4(s，1H)；LCMSm/z 642(M+1)+. 實施例3 1-{1-[(3S)-4-[[3-溴-5-(三氟甲基)苯甲酰基](甲基)氨基]-3-(4-氟苯基)丁基]氮雜環丁烷-3-基}哌啶-4-甲酰胺
將3-溴-N-[(2S)-2-(4-氟苯基)-4-氧代丁基]-N-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(參見方法1；1.00g，2.24mmol)、1-氮雜環丁烷-3-基哌啶-4-甲酰胺(參見方法4；0.49g，2.69mmol)和三乙胺(1.24mL，9.0mmol)溶于二氯甲烷(30mL)與甲醇(5mL)中。向所得混合物中加入氰基硼氫化鈉(0.21g，3.36mmol)并在RT下攪拌混合物20分鐘。通過蒸發除去溶劑，將殘余物在二氯甲烷和飽和NaHCO3水溶液之間分配。通過分相器過濾有機相并通過蒸發除去溶劑。將產物通過硅膠色譜純化(氨水飽和的甲醇/二氯甲烷，1～20％甲醇)。得到0.24g(17％)標題化合物。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ 1.4-3.8(cm，23H)，5.7(b，1H)，5.8(b，1H)，6.8-7.4(cm，6H)，7.7(s，1H)；LCMSm/z 614(M+1)+. 實施例3a 為獲得關于已有的固形混懸物的其它信息，在室溫下于不同溶劑中進行了結晶。在約2周后利用XRPD檢驗所述固形物。在甲醇、乙醇、異丙醇、丙酮和氯仿中漿化的樣品顯示非常相似的XRPD圖譜，其不同于原始樣品的圖譜。新形式樣品的結晶性顯然更好。混懸于乙基甲基酮中的物質顯示了十分獨特的圖譜。對混懸于異丙醇中的樣品進行的熱臺XRPD(hot-stage XRPD)表明X射線粉末圖譜在120℃以上時發生了改變。此新圖譜也與原始樣品的不同。
1-{1-[(3S)-4-[[3-溴-5-(三氟甲基)苯甲酰基](甲基)氨基]-3-(4-氟苯基)丁基]氮雜環丁烷-3-基}哌啶-4-甲酰胺的馬來酸鹽 將1-{1-[(3S)-4-[[3-溴-5-(三氟甲基)苯甲酰基](甲基)氨基]-3-(4-氟苯基)丁基]氮雜環丁烷-3-基}哌啶-4-甲酰胺(2.0g，3.26mmol)溶于熱丙酮(20mL)中。將馬來酸(0.74g，6.4mmol)溶于熱甲醇(4mL)中，然后將此溶液加入到前述溶液中。將此合并溶液室溫下放置過夜而不能分離出有用的沉淀。用甲醇稀釋混合物，通過蒸發除去溶劑。將殘留物加入到甲苯(17mL)和2-丙醇(50mL)的混合物中。加入甲醇(20mL)，加熱混合物直到得到澄清溶液。將溶液冷卻至室溫，然后在制冷器中保存過夜。通過過濾分離出白色沉淀，然后減壓干燥48小時。得到2.4g作為白色粉末的標題化合物。產物的1HNMR分析表明樣品大約由以下物質組成1.5～2摩爾馬來酸/摩爾1-{1-[(3S)-4-[[3-溴-5-(三氟甲基)苯甲酰基](甲基)氨基]-3-(4-氟苯基)丁基]氮雜環丁烷-3-基}哌啶-4-甲酰胺。1HNMR(500MHz，D2O)δ 1.2(d，1.6H)，1.8-2.2(cm，5.8H)，2.6-2.7(m，1H)，2.7(s，1H)，2.8-3.2(cm，5.1H)，3.2-3.3(m，1H)，3.3-3.5(cm，2.3H)，3.5-3.8(m，1.4H)，3.9-4.1(m，0.6H)，4.2-4.7(cm，4.6H)，6.3(s，2.9H)，6.9-7.3(m，4.2H)，7.4(m，1H)，8.0(s，0.6H). 通過提供X射線粉末衍射圖譜表征1-{1-[(3S)-4-[[3-溴-5-(三氟甲基)苯甲酰基](甲基)氨基]-3-(4-氟苯基)丁基]氮雜環丁烷-3-基}哌啶-4-甲酰胺的馬來酸鹽，其基本上表現出了以下d值的主峰(d值晶格中連續平行的hkl平面間的間距)
從1-{1-[(3S)-4-[[3-溴-5-(三氟甲基)苯甲酰基](甲基)氨基]-3-(4-氟苯基)丁基]氮雜環丁烷-3-基}哌啶-4-甲酰胺馬來酸鹽的衍射圖中獲得通過由Bragg方程和強度計算的d值而確認的峰。相對強度較不可靠，使用以下定義代替數值 ＊相對強度來自利用可變狹縫測量的衍射圖。
所述原始形式還可以在室溫下于水、正庚烷、乙腈、異辛烷、THF和甲基異丁基酮中漿化后得到。
漿化后的1-{1-[(3S)-4-[[3-溴-5-(三氟甲基)苯甲酰基](甲基)氨基]-3-(4-氟苯基)丁基]氮雜環丁烷-3-基}哌啶-4-甲酰胺的馬來酸鹽形式 在甲醇、乙醇、異丙醇、丙酮和氯仿中漿化的樣品顯示了非常相似的XRPD圖譜，其不同于原始樣品的圖譜。通過提供X射線粉末衍射圖譜表征此形式，其基本上表現出了以下d值的主峰(d值晶格中連續平行的hkl平面間的間距)
從得自1-{1-[(3S)-4-[[3-溴-5-(三氟甲基)苯甲酰基](甲基)氨基]-3-(4-氟苯基)丁基]氮雜環丁烷-3-基}哌啶-4-甲酰胺馬來酸鹽的衍射圖中獲得通過由Bragg方程和強度計算的d值而確認的峰。相對強度較不可靠，使用以下定義代替數值 ＊相對強度來自利用可變狹縫測量的衍射圖。
熱臺XRPD后的1-{1-[(3S)-4-[[3-溴-5-(三氟甲基)苯甲酰基](甲基)氨基]-3-(4-氟苯基)丁基]氮雜環丁烷-3-基}哌啶-4-甲酰胺的馬來酸鹽形式 針對混懸于異丙醇中的樣品進行的XPRD表明X射線粉末圖譜在120℃以上時發生了變化。新圖譜也與原始樣品的圖譜不同。
通過提供X射線粉末衍射圖譜表征此形式，其基本上表現出了以下d值的主峰(d值晶格中連續平行的hkl平面間的間距)
熱臺XRPD后從得自1-{1-[(3S)-4-[[3-溴-5-(三氟甲基)苯甲酰基](甲基)氨基]-3-(4-氟苯基)丁基]氮雜環丁烷-3-基}哌啶-4-甲酰胺馬來酸鹽的衍射圖中獲得通過由Bragg方程和強度計算的d值而確認的峰。相對強度較不可靠，使用以下定義代替數值 ＊相對強度來自利用可變狹縫測量的衍射圖。
混懸于甲基乙基酮中后的1-{1-[(3S)-4-[[3-溴-5-(三氟甲基)苯甲酰基](甲基)氨基]-3-(4-氟苯基)丁基]氮雜環丁烷-3-基}哌啶-4-甲酰胺的馬來酸鹽形式 在混懸于甲基乙基酮中后，獲得了1-{1-[(3S)-4-[[3-溴-5-(三氟甲基)苯甲酰基](甲基)氨基]-3-(4-氟苯基)丁基]氮雜環丁烷-3-基}哌啶-4-甲酰胺的另一種形式。通過提供X射線粉末衍射圖譜表征此形式，其基本上表現出了以下d值的主峰(d值晶格中連續平行的hkl平面間的間距)
從得自1-{1-[(3S)-4-[[3-溴-5-(三氟甲基)苯甲酰基](甲基)氨基]-3-(4-氟苯基)丁基]氮雜環丁烷-3-基}哌啶-4-甲酰胺馬來酸鹽的衍射圖中獲得通過由Bragg方程和強度計算的d值而確認的峰。相對強度較不可靠，使用以下定義代替數值 ＊相對強度來自利用可變狹縫測量的衍射圖。
X射線粉末衍射法(XRPD) 在具有Bragg-Brentano幾何儀并配有

位敏探測器(PSD)的D8型Advance衍射儀(Bruxer AXS GmbH，卡爾斯魯厄，德國)上進行XRPD實驗。使用鎳濾過的Cu Kα輻射。將約10mg樣品固定在零背景的支架(硅晶)上。利用2θ范圍在1-50°、步長為0.017°和步長時間為0.5秒的連續掃描模式采集樣品數據。相應于3.47°寬的檢測器窗口，使用可變(V20)發散狹縫和12mm的檢測器狹縫。
使用所附的與Ansyco溫度控制器相連的MRI室的類似設置(Bruxer AXS GmbH，卡爾斯魯厄，德國)在上述儀器上進行熱臺XRPD。
實施例4 3-溴-N-((2S)-2-(4-氟苯基)-4-{3-[4-(嗎啉-4-基羰基)哌啶-1-基]氮雜環丁烷-1-基}丁基)-N-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺
將3-溴-N-[(2S)-2-(4-氟苯基)-4-氧代丁基]-N-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(參見方法1；0.14g，0.31mmol)和4-[(1-氮雜環丁烷-3-基哌啶-4-基)羰基]嗎啉(參見方法5；0.11g，0.42mmol)溶于二氯甲烷(10mL)和無水甲醇(0.2mL)中。向所得溶液中加入DIPEA(0.12g，0.94mmol)和三乙酰氧基硼氫化鈉(0.13g，0.63mmol)。將混合物在氮氣下于RT下攪拌4小時。將混合物以二氯甲烷稀釋，以飽和NaHCO3水溶液清洗兩次，然后以鹽水清洗。通過分相器過濾有機相，通過蒸發除去溶劑。將產物通過硅膠色譜純化(甲醇-二氯甲烷，10:1)。得到0.11g(53％)白色泡沫的標題化合物。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ 1.4-3.8(cm，32H)，6.8-7.4(cm，6H)，7.7(s，1H)；LCMSm/z684(M+1)+. 原材料的制備 上述實施例的原材料可商購得到，或者可通過標準方法由已知原料容易地制得。例如，以下反應是一些原材料的舉例說明而非限制。
方法1 3-溴-N-[(2S)-2-(4-氟苯基)-4-氧代丁基]-N-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺
(a)3-溴-N-[(2S)-2-(4-氟苯基)戊-4-烯-1-基]-N-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺 向[(2S)-2-(4-氟苯基)戊-4-烯-1-基]甲胺(參見Bioorg.Med.Chem.Lett；2001；265-270；0.54g，2.8mmol)和3-溴-5-三氟甲基苯甲酸(0.81g，3.0mmol)在DMF(7mL)中的溶液中加入TBTU(0.96g，3.0mmol)和DIPEA(1.41g，10.9mmol)。將反應混合物在RT下在氮氣下攪拌過夜，然后在乙酸乙酯和NaHCO3水溶液中分配。用乙酸乙酯萃取水相三次(trice)，合并的有機溶液用水清洗三次(trice)，然后通過分相器柱干燥。通過蒸發除去溶劑，將產物通過硅膠色譜純化(乙酸乙酯-庚烷10％～17％)。得到0.86g(68％)3-溴-N-[(2S)-2-(4-氟苯基)戊-4-烯-1-基]-N-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺。
1H NMR(500MHz，CDCl3)2.1-3.8(cm，8H)，4.9-5.1(m，2H)，5.5-5.8(m，1H)，6.8-7.4(cm，6H)，7.8(s，1H).LCMSm/z 445(M+1)+. (b)3-溴-N-[(2S)-2-(4-氟苯基)-4-氧代丁基]-N-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺 向3-溴-N-[(2S)-2-(4-氟苯基)戊-4-烯-1-基]-N-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(0.86g，1.9mmol)在丙酮(45mL)中的溶液中加入OsO4(2.5％，在叔丁醇中，0.49mL，0.039mmol)和4-甲基嗎啉-4-氧化物(0.41g，3.5mmol)。將溶液在氮氣下于RT下攪拌過夜，然后加入NaHSO3水溶液(39％，45mL)。將混合物攪拌2小時，以水稀釋，然后以二氯甲烷萃取兩次。將合并的有機溶液通過分相器柱分離，通過蒸發除去溶劑。將殘留物(1.08g)溶于THF(18mL)和水(4.5mL)中，向所得溶液中加入NaIO4(0.73g，3.4mmol)。將混合物在氮氣下于RT下攪拌過夜。在二氯甲烷和水之間分配混合物。以二氯甲烷萃取水相，然后將合并的有機溶液以鹽水清洗并通過分相器柱進行分離。通過蒸發除去溶劑。得4到0.78g(90％)的標題化合物。
1HNMR(500MHz，CDCl3)2.4-4.4(cm，8H)，6.2-8.2(cm，7H)，9.8(s，1H)；LCMSm/z 447(M+1)+. 方法2 1-氮雜環丁烷-3-基-4-(氮雜環丁烷-1-基羰基)哌啶
(a)4-(氮雜環丁烷-1-基羰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯 將1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-羧酸(0.40g，1.75mmol)溶于無水DMF(5mL)中，向該溶液中加入DIPEA(1.22mL，7.0mmol)、TBTU(0.67g，2.1mmol)和氮雜環丁烷(0.12g，2.1mmol)。在RT下攪拌反應混合物12小時。將混合物以二氯甲烷稀釋，然后以HCl水溶液(2M)清洗，然后以NaHCO3水溶液(飽和)清洗。通過分相器柱分離相，通過蒸發除去溶劑。得到0.50g(100％)粗固體的4-(氮雜環丁烷-1-基羰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
1HNMR(500MHz，CDCl3)1.4-1.5(s，9H)，1.6-1.9(m，5H)，2.2-2.4(m，3H)，2.6-2.8(m，2H)，3.9-4.2(m，5H). (b)4-(氮雜環丁烷-1-基羰基)哌啶 將4-(氮雜環丁烷-1-基羰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.50g，1.86mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，向該溶液中加入三氟乙酸(2.12g，18.6mmol)。在RT下攪拌混合物過夜，然后通過蒸發除去溶劑。將殘留物溶于少量甲醇和THF中，將溶液加樣到陽離子交換吸附劑(

SCX-2；10g)上。用THF清洗所述柱，然后用氨水飽和的甲醇洗脫產物。通過蒸發除去溶劑，得到0.32g(100％)4-(氮雜環丁烷-1-基羰基)哌啶。
1HNMR(500MHz，CDCl3)1.4-1.5(m，4H)，2.0-2.2(m，3H)，2.4-2.5(m，2H)，2.9-3.0(d，2H)，3.7-3.8(t，2H)，3.9(s，1H)，4.0(t，2H). (c)4-(氮雜環丁烷-1-基羰基)-1-[1-(二苯基甲基)氮雜環丁烷-3-基]哌啶 向4-(氮雜環丁烷-1-基羰基)哌啶(0.34g，2.0mmol)和1-(二苯基甲基)氮雜環丁烷-3-酮(參見Bioorg.Med.Chem.Lett.；13；2003；2191-2194，0.37g，1.6mmol)、甲醇(5mL)和乙酸(0.1mL)的混合物中加入(聚苯乙烯基甲基)三甲基氰基硼氫化銨(4.1mmol/g，0.61g)。利用微波單節點加熱(single node heating)在120℃下加熱反應混合物10分鐘，然后通過分相器過濾。通過蒸發除去溶劑，將產物通過硅膠色譜純化(甲醇-二氯甲烷，5:95)。得到0.42g(70％)無色泡沫的4-(氮雜環丁烷-1-基羰基)-1-[1-(二苯基甲基)氮雜環丁烷-3-基]哌啶。 1HNMR(500MHz，CDCl3)1.6-1.7(m，2H)，1.7-1.8(m，4H)，2.0-2.1(m，1H)，2.2(qn，2H)，2.7-2.8(m，2H)，2.8-3.0(m，3H)，3.4(t，2H)，4.0(t，2H)，4.1(t，2H)，4.4(s，1H)，7.1-7.2(t，2H)，7.2-7.3(t，4H)，7.4(d，4H)；LCMSm/z 390(M+1)+. (d)1-氮雜環丁烷-3-基-4-(氮雜環丁烷-1-基羰基)哌啶 將4-(氮雜環丁烷-1-基羰基)-1-[1-(二苯基甲基)氮雜環丁烷-3-基]哌啶(0.42g，1.1mmol)溶于乙醇中，向所得溶液中加入氫氧化鈀碳(0.15g)和甲酸銨(0.28g，4.4mmol)。利用微波單節點加熱在120℃下加熱反應混合物4分鐘。通過分相器濾出催化劑，用乙醇清洗濾餅。通過蒸發除去溶劑，將殘留物溶于甲醇(1mL)和THF(10mL)中。將溶液加樣到陽離子交換吸附劑(

SCX-2；10g)上。用THF清洗所述柱，將產物用氨水飽和的甲醇進行清洗。通過蒸發除去溶劑，得到0.25g無色油的標題化合物。
1H NMR(500MHz，CD3OD)2.0-2.2(m，4H)，2.3-2.4(m，2H)，2.6-2.8(m，3H)，3.2-3.3(d，2H)，3.8(qn，1H)，4.3(t，2H)，4.4(m，2H)，4.5(m，2H)，4.6(t，2H)；LCMSm/z 224(M+1)+. 方法3 1-氮雜環丁烷-3-基-N，N-二甲基哌啶-4-甲酰胺
(a)1-[1-(二苯基甲基)氮雜環丁烷-3-基]哌啶-4-羧酸 向哌啶-4-羧酸(0.13g，1.0mmol)和1-(二苯基甲基)氮雜環丁烷-3-酮(參見Bioorg.Med.Chem.Lett.；13；2003；2191-2194，0.24g，1.0mmol)、甲醇(3mL)和乙酸(0.3mL)的混合物中加入(聚苯乙烯基甲基)三甲基氰基硼氫化銨(4.1mmol/g，0.25g)。利用微波單節點加熱在120℃下加熱反應混合物5分鐘。加入甲醇，然后濾除樹脂。通過蒸發除去溶劑。得到0.35g(100％)1-[1-(二苯基甲基)氮雜環丁烷-3-基]-哌啶-4-羧酸。
1HNMR(500MHz，CDCl3)1.6-1.8(m，2H)，1.9-2.0(m，4H)，2.3-2.4(m，1H)，2.7-2.8(m，2H)，2.9-3.0(m，3H)，3.4(t，2H)，4.4(s，1H)，7.2(t，2H)，7.2-7.3(t，4H)，7.4(d，4H)；LCMSm/z 351(M+1)+. (b)1-[1-(二苯基甲基)氮雜環丁烷-3-基]-N，N-二甲基哌啶-4-甲酰胺 將1-[1-(二苯基甲基)氮雜環丁烷-3-基]哌啶-4-羧酸(0.35g，0.9mmol)溶于DMF(8mL)中，并向該溶液中加入TBTU(0.39g，1.2mmol)、DIPEA(0.21mL，1.2mmol)和二甲胺的溶液(3.0mL，2M在THF中，6mmol)。在RT下攪拌混合物14小時。加入NaHCO3水溶液，用二氯甲烷萃取混合物三次。以鹽水清洗合并的有機層，并以MgSO4干燥。通過蒸發除去溶劑，利用乙腈和乙酸銨水溶液(0.1M)作為洗脫劑通過反相色譜(C8)純化產物。得到0.20g(59％)1-[1-(二苯基甲基)氮雜環丁烷-3-基]-N，N-二甲基哌啶-4-甲酰胺。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ 1.6-2.0(cm，6H)，2.4-2.5(m，1H)，2.8(m，2H)，2.9-3.0(m，5H)，3.1(s，3H)，3.4(t，2H)，4.4(s，1H)，7.2(t，2H)，7.3(t，4H)，7.4(d，4H)；LCMSm/z 378(M+1)+. (c)1-氮雜環丁烷-3-基-N，N-二甲基哌啶-4-甲酰胺 將氫氧化鈀碳(0.10g)置于5mL瓶中旨在用于微波合成。將1-[1-(二苯基甲基)氮雜環丁烷-3-基]-N，N-二甲基哌啶-4-甲酰胺(0.20g，0.53mmol)溶于甲醇(3mL)中，加入乙酸(0.3mL)。在氫氣(1.6巴)和RT下攪拌混合物4天。通過硅藻土(

)層過濾混合物。通過蒸發除去溶劑，得到0.11g(53％)標題化合物。
方法4 1-氮雜環丁烷-3-基哌啶-4-甲酰胺
(a)1-[1-(二苯基甲基)氮雜環丁烷-3-基]哌啶-4-甲酰胺 向哌啶-4-甲酰胺(1.05g，8.2mmol)、1-(二苯基甲基)氮雜環丁烷-3-酮(參見Bioorg.Med.Chem.Lett.；13；2003；2191-2194，1.94g，8.2mmol)、甲醇(30mL)和乙酸(3mL)的混合物中加入(聚苯乙烯基甲基)三甲基氰基硼氫化銨(4.1mmol/g，1.9g)。利用微波單節點加熱在120℃下加熱反應混合物5分鐘。濾除樹脂，通過蒸發除去溶劑。得到2.85g(99％)1-[1-(二苯基甲基)氮雜環丁烷-3-基]哌啶-4-甲酰胺。
1HNMR(500MHz，CDCl3)1.6-1.9(m，6H)，2.1-2.2(m，1H)，2.7-2.8(d，2H)，2.9-3.0(m，3H)，3.4(t，2H)，4.4(s，1H)，5.7-5.8(b，1H)，6.2(b，1H)，7.2(t，2H)，7.2-7.3(t，4H)，7.4(d，4H)；LCMSm/z 350(M+1)+. (b)1-氮雜環丁烷-3-基哌啶-4-甲酰胺二鹽酸鹽 將1-[1-(二苯基甲基)氮雜環丁烷-3-基]哌啶-4-甲酰胺(1.4g，4.1mmol)、甲酸銨(0.77g，12mmol)和乙醇(15mL)加樣到25mL瓶中旨在用于微波合成。加入氫氧化鈀碳(0.55g)，利用微波單節點加熱在120℃下加熱反應混合物2分鐘。將仍含有原材料的此混合物過濾，向濾液中加入另一部分的氫氧化鈀碳以及乙酸和乙醇(1:10)的混合物。在氫氣(5巴)和室溫下攪拌反應混合物4小時，然后通過硅藻土

層過濾混合物。通過蒸發除去溶劑，將殘留物在甲苯和稀鹽酸之間進行分配。將水相凍干，然后將粘稠的殘留物與甲苯共蒸發，重新溶解于水中，然后凍干。得到1.35g(65％)的標題化合物。
1HNMR(500MHz，CD3OD)δ 1.6-2.0(cm，6H)，2.2-2.3(m，1H)，2.8(m，2H)，3.4(m，1H)，3.9-4.1(m，4H). 方法5 4-[(1-氮雜環丁烷-3-基哌啶-4-基)羰基]嗎啉
(a)4-({1-[1-(二苯基甲基)氮雜環丁烷-3-基]哌啶-4-基}羰基)嗎啉 將4-(哌啶-4-基羰基)嗎啉(0.30g，1.26mmol)和1-(二苯基甲基)氮雜環丁烷-3-酮(參見Bioorg.Med.Chem.Lett.；13；2003；2191-2194，0.30g，1.5mmol)溶于甲醇(5mL)和乙酸(0.1mL)的混合物中。加入(聚苯乙烯基甲基)三甲基氰基硼氫化銨(4.1mmol/g，0.38g)，利用微波單節點加熱在120℃下加熱反應混合物10分鐘。通過分相器過濾混合物，以甲醇清洗樹脂。通過蒸發除去溶劑，將殘留物溶于二氯甲烷中。以飽和NaHCO3溶液清洗溶液兩次。通過分相器過濾有機相并通過蒸發除去溶劑。通過硅膠色譜純化(甲醇/二氯甲烷，5％甲醇)產物。得到0.44g(83％)無色油的4-({1-[1-(二苯基甲基)氮雜環丁烷-3-基]哌啶-4-基}羰基)嗎啉。
1HNMR(500MHz，CDCl3)1.6-1.7(m，2H)，1.7-1.9(m，4H)，2.2(m，1H)，2.7-2.8(m，2H)，2.8-3.0(m，4H)，3.3-3.5(m，3H)，3.5-3.7(m，6H)，4.4(s，1H)，7.1-7.2(t，2H)，7.2-7.3(t，4H)，7.4(d，4H)；LCMSm/z 420(M+1)+. (b)4-[(1-氮雜環丁烷-3-基哌啶-4-基)羰基]嗎啉 將4-({1-[1-(二苯基甲基)氮雜環丁烷-3-基]哌啶-4-基}羰基)嗎啉(0.44g，1.0mmol)溶于乙醇中，向所得溶液中加入氫氧化鈀碳(0.15g)和甲酸銨(0.27g，4.2mmol)。利用微波單節點加熱在120℃下加熱反應混合物2分鐘。通過分相器濾除催化劑，以乙醇清洗濾餅。通過蒸發除去溶劑，將殘留物溶于甲醇(1mL)和THF(10mL)中。將溶液加樣到陽離子交換吸附劑(

SCX-2；10g)上。以THF清洗所述柱，然后用氨水飽和的甲醇洗脫產物。通過蒸發除去所收集級分中的溶劑，得到0.11g無色油的標題化合物。
1HNMR(500MHz，CD3OD)1.7-1.8(m，4H)，1.9-2.0(m，2H)，2.6-2.9(m，4H)，3.3-3.4(m，1H)，3.5-3.7(m，8H)，3.8-4.0(m，3H)；LCMSm/z 254(M+1)+. 藥理學 用于FLIPR和結合試驗中的細胞的轉染和培養 利用人NK2受體(hNK2R cDNA在pRc/CMV中，Invitrogen)或人NK3受體(hNK3R在pcDNA 3.1/Hygro(+)/IRES/CD8中，Invitrogen載體修飾于英國Alderley Park的AstraZeneca EST-Bio)穩定轉染中國倉鼠卵巢(CHO)K1細胞(得自ATCC)。利用陽離子脂質試劑LIPOFECTAMINETM(Invitrogen)轉染所述細胞，利用1mg/ml的遺傳霉素(Geneticin，G418，Invitrogen)選擇hNK2R轉染的細胞；利用500μg/ml的潮霉素(Hygromycin，Invitrogen)選擇hNK3R轉染的細胞。借助熒光活化細胞分選儀(FACS)收集單細胞克隆，以FLIPR法(參見下面)測試功能，培養擴增并低溫儲存備用。被人NK1受體穩定轉染的CHO細胞來自于美國威爾明頓的AstraZeneca R&D。將人NK1受體cDNA(通過RNA-PCR從肺組織中獲得)亞克隆到pRcCMV(Invitrogen)中。轉染通過磷酸鈣來進行并利用1mg/ml G418進行選擇。
將利用hNK1R、hNK2R和hNK3R穩定轉染的CHO細胞在含有Glutamax I、10％胎牛血清(FBS)、1％青霉素/鏈霉素(PEST)的NutMix F12(HAM)中于5％ CO2的潮濕培養箱中培養，對表達hNK1R和hNK2R的細胞而言，所述Nut Mix F12中添加200μg/ml遺傳霉素，對表達hNK3R的細胞而言，所述Nut Mix F12中添加500μg/ml潮霉素。細胞在T175培養瓶中生長，當達到70～80％匯合度時進行常規傳代，傳代高達20～25代。
評價所選的測試化合物抑制人NK1/NK2/NK3受體活化的活性(FLIPR法) 通過以下方法評價本發明化合物抑制NK1/NK2/NK3受體活化的活性，所述活性通過NK1/NK2/NK3介導的細胞內Ca2+的增加而測定 將利用人NK1、NK2或NK3受體穩定轉染的CHO細胞以3.5×104個細胞/孔在黑色壁/透明底的96孔板(Costar 3904)中鋪板并在37℃下于CO2培養箱中在普通生長培養基中培養約24小時。
在進行所述FLIPR法之前，在37℃的CO2培養箱中于負載基質(loading media)中保持黑暗1小時以將每個96孔板的細胞負載4μM的Ca2+敏感型染料Fluo-3(TEFLABS 0116)，所述負載基質由含有Glutamax I的Nut Mix F 12(HAM)、22mM HEPES、2.5mM丙磺舒(Sigma P-8761)和0.04％普流尼克F-127(Pluronic F-127)(SigmaP-2443)組成。然后利用多道移液器(multi-channel pipette)在測定緩沖液(含有20mM HEPES、2.5mM丙磺舒和0.1％ BSA的Hanks平衡鹽溶液(HBSS))中清洗細胞三次，在最后一次清洗結束時保留150μl。通過FLIPR(熒光成像板閱讀儀)將測試緩沖液(最終DMSO濃度保持小于1％)中測試化合物的系列稀釋液自動吸取移入每一測試孔中，在2分鐘的預孵育階段中通過FLIPR CCD照相機記錄熒光強度(激發波長488nm，發射波長530nm)。然后通過FLIPR向每一已含有200μl測試緩沖液(含有測試化合物或載體)的孔中加入50μl P物質(NK1特異性的)、NKA(NK2特異性的)或Pro-7-NKB(NK3特異性的)激動劑溶液(最終濃度相當于約EC60濃度)，再連續監測熒光2分鐘。在添加激動劑后測定峰值相對熒光作為響應值，對每種化合物由十個點的濃度-響應曲線計算出IC50。然后利用下式將IC50轉化為pKB值 KB＝IC50/1+(測試中所用的激動劑的EC60濃度/EC50激動劑) pKB＝-log KB 測定用于人NK1/NK2/NK3受體的化合物的解離常數(Ki)(結合法) 根據以下方法，由利用人NK1、NK2或NK3受體穩定轉染的CHO細胞制備膜。
利用

溶液分散細胞，通過離心收集在含有5％ FBS的PBS中，在PBS中清洗兩次，以1×108個細胞/ml的濃度重新懸于pH 7.4的50mM Tris-HCl、300mM KCl、10mM EDTA-N2中(4℃)。利用UltraTurrax將細胞懸液以12.000rpm勻漿30秒。以38.000×g于4℃離心勻漿物，將濾餅重新懸于pH 7.4的50mM Tris-HCl中。重復進行勻漿一次，并將勻漿物在冰上孵育45分鐘。如上所述將勻漿物再次進行離心，并重新懸于pH 7.4的50mM Tris-HCl中。此離心步驟總共重復3次。在最后一次離心步驟后，將濾餅重新懸于50mM Tris-HCl中，并利用Dual Potter以10個沖程將其勻漿成均勻溶液，取出等量份用于蛋白質測定。將膜分成等量份并冷凍于-80℃備用。
在室溫下于其中最終分析體積為200μl/孔的96孔微量滴定板(非結合表面板，Corning 3600)中在孵育緩沖液中進行放射配體結合分析，所述孵育緩沖液為50mM Tris緩沖液(pH 7.4，RT)，其含有0.1％ BSA、40mg/L桿菌肽、不含EDTA的完全蛋白酶抑制劑混合片20片/L(Roche)和3mM MnCl2。通過加入遞增量的測試化合物而得到競爭性結合曲線。將測試化合物溶于DMSO中并以DMSO連續稀釋，在該分析中，最終DMSO濃度為1.5％。加入50μl未標記的ZD 6021(非選擇性NK拮抗劑，最終濃度10μM)用于測定非特異性結合。對于總結合而言，使用50μl在孵育緩沖液中的1.5％ DMSO(最終濃度)。[3H-Sar，Met(O2)-P物質](最終濃度4nM)用于對hNK1r的結合實驗中；[3H-SR48968](最終濃度3nM)用于對hNK2r的結合實驗中；[3H-SR142801](最終濃度3nM)用于對hNK3r結合實驗中。將50μl放射配體、3μl在DMSO中稀釋的測試化合物以及47μl孵育緩沖液與5～10μg細胞膜在100μl孵育緩沖液中混合，并在微孔板振蕩器上室溫下孵育30分鐘。
然后通過利用Micro 96收集器(katron Instruments，挪威)在Filtermat B(Wallac)(預先浸泡于0.1％ BSA和0.3％聚乙二胺(SigmaP-3143)中)上快速過濾收集膜。通過收集器利用冰冷清洗緩沖液(50mM Tris-HCl，pH 7.4，4℃，含有3mM MnCl2)清洗濾器，并在50℃干燥30-60分鐘。利用Microsealer(Wallac，Finland)將Meltilex閃爍器片熔化在過濾器上，并在β-液體閃爍計數器(1450 Microbeta，Wallac，Finland)中計數。
利用Cheng-Prusoff方程計算未標記配體的Ki值(Biochem.Pharmacol.223099-3108，1973)其中L是所用的放射性配體的濃度，Kd是通過飽和結合測定的放射性配體與受體的親和力。
利用Excel擬合法將數據擬合成四參數方程。
Ki＝IC50/(1+(L/Kd)) 結果 一般而言，所測試的本發明化合物在pKB 7-8的范圍內表現出對NK1受體具有統計學顯著意義的拮抗活性。對于NK2受體而言，pKB的范圍為7-9。一般而言，對NK3受體的拮抗活性為pKB 7-9。
一般而言，所測試的本發明化合物在低水平時表現出有統計學顯著意義的CYP3A4抑制作用。根據Bapiro et al；Drug Metab.Dispos.29，30-35(2001)測定的IC50值通常大于10μM。
抗hERG活性 可根據Kiss L，et al.Assay Drug Dev Technol.1(2003)，127-35“High throughput ion-channel pharmacologyplanar-array-basedvoltage clamp”測定式I化合物的抗hERG編碼的鉀通道的活性。
一般而言，所測試的本發明化合物在低水平時表現出有統計學顯著意義的hERG活性。上述測定的IC50值通常大于8μM。
代謝穩定性 可按下述方法測定式I化合物的代謝穩定性 可根據代謝物形成或母體化合物消失的速率來測定生物轉化速率。實驗設計包括將低濃度的底物(通常1.0μM)與肝微粒體(通常0.5mg/ml)一起孵育并在不同時間點(通常為0、5、10、15、20、30、40分鐘)取出等量份。通常將測試化合物溶于DMSO中。孵育混合物中DMSO的濃度通常為0.1％或更低，因為較多的溶劑可顯著降低一些CYP450的活性。孵育是在pH 7.4的100mM磷酸鉀緩沖液中于37℃下進行的。乙腈或甲醇用于終止反應。通過HPLC-MS分析母體化合物。根據所計算的半衰期t1/2，并考慮微粒體蛋白濃度和肝重量，估算出內在清除率Clint。
一般而言，本發明化合物在高水平時具有體外代謝穩定性。如上所述測定的內在清除率值通常低于25μl/分鐘/mg蛋白質。
下表舉例說明了本發明化合物的性質 N-[(2S)-4-{3-[4-(氮雜環丁烷-1-基羰基)哌啶-1-基]氮雜環丁烷-1-基}-2-(4-氟苯基)丁基]-3-溴-N-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(實施例1) 生物學評價 沙土鼠足拍打(NK1特異性試驗模型) 從德國的Charles River購買雄性蒙古沙土鼠(60-80g)。抵達時，將其以10只分組置于控溫控濕度的飼養室內，自由進食和飲水。在進行實驗前使動物適應居住環境至少7天。每只動物僅使用一次，在實驗后通過心臟穿刺或施用致死劑量的戊巴比妥鈉而迅速進行安樂死。
利用異氟烷麻醉沙土鼠。腹膜內、靜脈內或皮下施用可透過中樞神經系統的潛在NK1受體拮抗劑。在利用激動劑刺激之前在不同時間點(通常30-120分鐘)給予所述化合物。
利用異氟烷使沙土鼠輕度麻醉，在前鹵上的皮膚中切開小口。使用針頭長為4mm的Hamilton注射器經腦室內注射(icv)施用體積為5μl的10pmol的ASMSP(一種選擇性NK1受體激動劑)。夾閉傷口，將動物置于小塑料籠舍中直到醒來。所述籠舍置于一段充滿水的塑料管上，并通過壓力傳導器與計算機相連。記錄后足拍打的次數。
血淚癥模型(NK1特異性試驗模型) 可利用所謂的血淚癥模型在沙土鼠體內評價拮抗劑對外周NK1受體的作用(Bristow LJ，Young L.Chromodacryorrhea and repetitivehind paw tappingmodels of peripheral and central tachykinin NK1receptor activation in gerbils.Eur J Pharmacol 1994；253245-252)。簡而言之，由于哈氏腺分泌卟啉，給麻醉的沙土鼠全身性(靜脈內)施用NK1受體激動劑導致紅/褐色眼淚的大量分泌。NK1受體拮抗劑阻滯NK1激動劑誘導的血淚癥。
糞粒排出(NK2特異性試驗模型) 例如The Journal of Pharmacology and ExperimentalTherapeutics(2001)，pp.559-564中所述，可利用沙土鼠測定NK2受體激動劑誘導的糞粒排出而測定式I化合物的體內作用(NK2)。
結直腸擴張模型 如前面在大鼠和小鼠(Tammpere A，Brusberg M，Axenborg J，Hirsch I，Larsson H，

E.Evaluation of pseudo-affectiveresponses to noxious colorectal distension in rats by manometricrecordings.Pain 2005；116220-226；Arvidsson S，Larsson M，LarssonH，

E，Martinez V.Assessment of visceralpain-relatedpseudo-affective responses to colorectal distension in mice byintracolonic manometric recordings.J Pain 2006；7108-118)中所述并稍作修改，在沙土鼠中進行結直腸擴張(CRD)。簡而言之，實驗前每天將沙土鼠在Bollmann籠舍中適應30-60分鐘，連續三天，以減少由于束縛應激而產生的運動假象(motion artefact)。在輕度異氟烷(

，Abbott Scandinavia AB，索爾納，瑞典)麻醉期間將帶有連接導管的2cm聚乙烯氣囊(自制)插入遠端結腸內，所述氣囊底部距肛門2cm。用帶子將導管固定于尾部。氣囊與壓力傳導器(P-602，CFM-k33，100mmHg，Bronkhorst HI-TEC，Veenendal，荷蘭)相連。在開始實驗前，允許沙土鼠在Bollmann籠舍中從鎮靜狀態中恢復過來至少15分鐘。
使用定制的恒壓器(AstraZeneca，

瑞典)控制充氣和氣囊壓力。使用在標準計算機上運行的定制計算機軟件(PharmLabon-line 4.0)控制恒壓器并進行數據采集。所用的擴張范式由在80mmHg下的12個重復的時相性擴張組成，其中脈沖持續時間為30秒，間隔為5分鐘。在進行CRD范式之前腹膜內(i.p.)注射施用化合物或其各自載體。在實驗之間，每只沙土鼠在至少兩天內的不同場合下接受載體和化合物。因此，每只沙土鼠各自用作其自身載體對照。
以不同的采樣速率對模擬輸入通道進行采樣，并對信號進行數字過濾。以50個樣本/秒對氣囊壓力信號進行采樣。使用1Hz下的高通過濾器分離來自恒壓器產生的緩慢變化壓力的收縮誘導的壓力變化。壓力發生器和壓力傳導器之間的氣流中的阻抗進一步增加了由動物腹部收縮誘導的壓力變化。使用定制的計算機軟件(PharmLab off-line 4.0)來定量高通過濾的氣囊壓力信號的大小。計算脈沖之前(即基線響應)和脈沖期間的所述高通過濾的氣囊壓力信號的平均調整值(ARV)30秒。當計算所述高通過濾氣囊壓力信號的大小時，排除每個脈沖的第一秒和最后一秒，因為它們反映的是在充氣和放氣過程中由恒壓器產生的而非由動物產生的假信號。
權利要求
1.式(I)化合物及其藥學上和藥理學上可接受的鹽以及式I化合物的對映體和其鹽
其中
R1和R2各自獨立地選自氫、甲基、乙基或者R1和R2與酰胺氮一起形成四元、五元或六元環，所述環任選地包含氧原子；
X是溴或氯。
2.根據權利要求1的化合物，其中R1是氫。
3.根據權利要求1的化合物，其中R1是甲基。
4.根據權利要求1的化合物，其中R1是乙基。
5.根據權利要求1-4中任一項的化合物，其中R2是氫。
6.根據權利要求1-4中任一項的化合物，其中R2是甲基。
7.根據權利要求1-4中任一項的化合物，其中R2是乙基。
8.根據權利要求1的化合物，其中R1和R2與酰胺氮一起形成嗎啉環。
9.根據權利要求1的化合物，其中R1和R2與酰胺氮一起形成氮雜環丁烷環。
10.根據權利要求1的化合物，其中R1和R2與酰胺氮一起形成吡咯烷環。
11.根據權利要求1的化合物，其中R1和R2與酰胺氮一起形成異噁唑烷環。
12.根據權利要求1的化合物，其中R1和R2與酰胺氮一起形成噁唑烷環。
13.根據權利要求1-9中任一項的化合物，其中所述化合物是(S)-對映體。
14.根據權利要求1的化合物，其為1-{1-[(3S)-4-[[3-溴-5-(三氟甲基)苯甲酰基](甲基)氨基]-3-(4-氟苯基)丁基]氮雜環丁烷-3-基}哌啶-4-甲酰胺馬來酸鹽。
15.根據權利要求14的化合物，其特征在于提供了基本上表現為具有以下d值的主峰的X射線粉末衍射圖譜
16.根據權利要求14的化合物，其為異丙醇溶劑化物。
17.根據權利要求16的化合物，其特征在于提供了基本上表現為具有以下d值的主峰的X射線粉末衍射圖譜
18.根據權利要求14的化合物，其特征在于提供了基本上表現為具有以下d值的主峰的X射線粉末衍射圖譜
19.根據權利要求14的化合物，其為甲基乙基酮溶劑化物。
20.根據權利要求19的化合物，其特征在于提供了基本上表現為具有以下d值的主峰的X射線粉末衍射圖譜
21.根據權利要求1的化合物，其選自
N-[(2S)-4-{3-[4-(氮雜環丁烷-1-基羰基)哌啶-1-基]氮雜環丁烷-1-基}-2-(4-氟苯基)丁基]-3-溴-N-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺；
1-{1-[(3S)-4-[[3-溴-5-(三氟甲基)苯甲酰基](甲基)氨基]-3-(4-氟苯基)丁基]氮雜環丁烷-3-基}-N，N-二甲基哌啶-4-甲酰胺；
1-{1-[(3S)-4-[[3-溴-5-(三氟甲基)苯甲酰基](甲基)氨基]-3-(4-氟苯基)丁基]氮雜環丁烷-3-基}哌啶-4-甲酰胺；和
3-溴-N-((2S)-2-(4-氟苯基)-4-{3-[4-(嗎啉-4-基羰基)哌啶-1-基]氮雜環丁烷-1-基}丁基)-N-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺。
22.根據權利要求1-21中任一項的化合物用于治療。
23.權利要求1-21中任一項的化合物在制備用于治療功能性胃腸疾病的藥物中的用途。
24.權利要求1-21中任一項的化合物在制備用于治療IBS的藥物中的用途。
25.權利要求1-21中任一項的化合物在制備用于治療功能性消化不良的藥物中的用途。
26.一種藥物組合物，其包含作為活性成分的根據權利要求1-21中任一項的化合物以及藥學上可接受的載體或稀釋劑。
27.選自以下的化合物
1-氮雜環丁烷-3-基-4-(氮雜環丁烷-1-基羰基)哌啶；
4-(氮雜環丁烷-1-基羰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯；
4-(氮雜環丁烷-1-基羰基)哌啶；
4-(氮雜環丁烷-1-基羰基)-1-[1-(二苯基甲基)氮雜環丁烷-3-基]哌啶；
1-氮雜環丁烷-3-基-4-(氮雜環丁烷-1-基羰基)哌啶；
1-氮雜環丁烷-3-基-N，N-二甲基哌啶-4-甲酰胺；
1-[1-(二苯基甲基)氮雜環丁烷-3-基]哌啶-4-羧酸；
1-[1-(二苯基甲基)氮雜環丁烷-3-基]-N，N-二甲基哌啶-4-甲酰胺；
1-氮雜環丁烷-3-基-N，N-二甲基哌啶-4-甲酰胺；
1-氮雜環丁烷-3-基哌啶-4-甲酰胺；
1-[1-(二苯基甲基)氮雜環丁烷-3-基]哌啶-4-甲酰胺；
1-氮雜環丁烷-3-基哌啶-4-甲酰胺二鹽酸鹽；
4-[(1-氮雜環丁烷-3-基哌啶-4-基)羰基]嗎啉；
4-({1-[1-(二苯基甲基)氮雜環丁烷-3-基]哌啶-4-基}羰基)嗎啉；和
4-[(1-氮雜環丁烷-3-基哌啶-4-基)羰基]嗎啉。
全文摘要
本發明涉及式(I)的新化合物及其鹽和對映體，其中R1、R2和X如說明書中所定義。本發明還涉及包含所述化合物的藥物組合物以及所述化合物在治療中(例如在胃腸疾病的治療中)的用途。本發明還涉及制備所述化合物的方法。所述化合物是神經激肽(NK)受體拮抗劑。
文檔編號C07D401/04GK101472910SQ200780022773
公開日2009年7月1日 申請日期2007年5月16日 優先權日2006年5月18日
發明者安德斯·約翰遜, 約翰·約翰遜, 卡爾-古斯塔夫·西格弗里德遜 申請人:阿爾比里奧公司