專利名稱：用于診斷阿耳茨海默病的放射藥物的制作方法
技術領域：
本發明涉及用于診斷阿耳茨海默病的新放射藥物。
過去已進行了多次嘗試來設計能夠用作阿耳茨海默病死前診斷之診斷劑的放射藥物。
Bornebroek等人報道，在罹患腦淀粉狀蛋白病的患者的腦皮質并可能在血管壁中低水平地累積標記有123I的淀粉狀蛋白相關蛋白--血清淀粉狀蛋白P組分(SAP)(Bomebroek，M.等人，Nucl.Med.Commun.(1996)，第17卷929-933頁)。
Saito等人提出125I標記的Aβ1-40通過載體介導可透過血腦屏障進行轉運。具報道，碘代Aβ1-40結合組織切片中的Aβ淀粉樣斑塊(Saito，Y.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1995，第92卷10227-10231頁)。
U.S.專利5,231,000公開了對阿耳茨海默病患者的腦中存在的A4淀粉樣多肽具有特異性的抗體。但是，沒有描述如何跨過血腦屏障轉運這些抗體的方法。
Zhen等人描述了稱為“Congo RedTM”的淀粉狀蛋白結合染料的改性方法，以及這些改性分子與锝和錸的絡合物。具有放射活性離子的絡合物被認為是阿耳茨海默病的潛在造影劑(Zhen等人，J.Med.Chem.(1999)，第42卷2805-2815頁)。但是，該絡合物跨過血腦屏障的可能性是有限的。
美國賓夕法尼亞大學(the University of Pennsylvania)的一個小組(Skovronsky，M.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.2000，第97卷7609-7614頁)已研制出Congo Red的熒光標記衍生物，該衍生物可透過腦部，而且非特異性地結合淀粉樣物質(即、β折疊中的肽)。該化合物需要進行放射標記，然后在臨床測試之前進行藥物代謝動力學和毒性的臨床前篩選。
Klunk等人報道了用Congo RedTM的衍生物--Chrysamine G(CG)進行的試驗。據報道，CG在體外非常好地結合合成性β淀粉狀蛋白，而且在正常的小鼠中可跨過血腦屏障(Klunk等人，Neurobio1.Aging(1994)，第15卷，第6號，691-698頁)。
Bergstrm等人報道了用123I標記的化合物作為顯影阿耳茨海默病的M1和M2毒蠅堿性乙酰膽堿受體的潛在放射配體(Bergstrm等人，Eur.J.Nucl.Med.(1999)，第26卷1482-1485頁)。
近來已經發現，阿耳茨海默病患者腦中的某些特異性趨化因子受體被正向調節(Horuk，R.等人，J.Immunol.(1997)，第158卷2882-2890頁；Xia等人，J.NeuroVirol.(1999)，第5卷32-41頁)。另外，最近的報道還表明在晚期阿耳茨海默病患者的腦中趨化因子CCR1被正向調節，而且在正常年齡的腦中則不存在(Halks-Miller等人，阿耳茨海默病腦中的CCR1免疫活性(CCR1 Immunoreactivity in Alzheimer’s Disease Brains)，Society for Neuroscience Meeting Abstract，#787.6，第24卷，1998)。在PCT專利申請公開WO 98/56771中已描述了CCR1受體的拮抗劑及其作為抗炎劑的應用。
上述文獻中提到的化合物沒有一個可用作早期診斷阿耳茨海默病的顯影劑。因此，在臨床上仍需要能夠可靠并能早期診斷阿耳茨海默病的診斷劑。
因此，在一個方面中，本發明涉及式(I)的化合物或其藥物學上可接受的鹽 其中X1和X2相互獨立地是鹵素；R1和R2相互獨立地是氫或烷基；以及R3是氫、氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、單芳烷基氨基、烷基羰基氨基、烯基羰基氨基、鹵代烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、烷氧基烷基羰基氨基、烷氧基羰基烷基羰基氨基、甘氨酰胺基、單烷基甘氨酰胺基、芳基羰基甘氨酰胺基、氨基羰基甘氨酰胺基、(氨基羰基)(烷基)甘氨酰胺基、(烷氧基烷基羰基)甘氨酰胺基、脲基、單烷基脲基、單芳基脲基、單芳烷基脲基、或者丙氨酰胺基(alaninamido)；而且X1或X2之一選自于以下組中123I、125I、128I、131I、75Br、76Br、80Br和18F；或者該化合物中的碳原子之一是11C。
在另一個方面中，本發明涉及是(II)的化合物或其藥物學上可接受的鹽 其中X1和X2相互獨立地是鹵素；R1和R2相互獨立地是氫或烷基；以及R4是氫；R5包括能夠結合放射活性金屬原子的螯合劑，所述金屬原子選自于99mTc、186Re和188Re；或者是與99mTc、186Re和188Re的絡合物。
在另一個方面中，本發明涉及診斷人阿耳茨海默病的方法，其包括向需要此等診斷的人給藥如上所述的式(I)或式(II)的化合物，然后通過gamma照相機或者正電子發射斷層掃描(PET)測量給藥化合物引起的放射活性。
在另一個方面中，本發明涉及本發明的化合物在制備用于診斷人阿耳茨海默病的放射藥物中的應用。
在另一個方面中，本發明涉及制備本發明化合物的方法。
圖2顯示了阿耳茨海默病腦組織中的CCR1抗體特異性。
圖3顯示了CCR1-Aβ1-40雙標記的組織切片。
圖4顯示了用于CCR1和Aβ1-42雙標記的神經炎斑塊。
圖5顯示了在阿耳茨海默病腦中的擴散Aβ1-42染色。
圖6是CCR1和Aβ1-40之間的CDR級數關系圖。
圖7是CCR1和Aβ1-42之間的CDR級數關系圖。
圖8是顯示總腦放射活性隨時間下降的圖。
圖9是顯示在腦和血漿中注射劑量的百分數的圖。


圖10是顯示在其他神經變性疾病中CCR1表達的圖。
“烷基羰基氨基”是指式-N(H)-C(O)-Ra的基團，其中Ra是如上定義的烷基，如乙酰基氨基、乙基羰基氨基、正丙基羰基氨基等。
“烯基”是指僅由碳和氫組成的直鏈或支鏈的單價或二價基團，其包括至少一個雙鍵，而且具有2-8個碳原子，例如乙烯基、丙-1-烯基、丁-1-烯基、戊-1-烯基、戊-1，4-二烯基等。
“烯基羰基氨基”是指式-N(H)-C(O)-Rc的基團，其中Rc是如上定義的烯基，例如乙烯基羰基氨基、丙-2-烯基羰基氨基、丁-2-烯基羰基氨基等。
“烷氧基”是指式-ORa的基團，其中Ra是如上定義的烷基，例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、1-甲基乙氧基(異丙氧基)、正丁氧基、正戊氧基、1，1-二甲基乙氧基(叔丁氧基)等。
“烷氧基羰基烷基羰基氨基”是指式-N(H)-C(O)-Ra-C(O)ORa的基團，其中各Ra相互獨立地是如上定義的烷基，例如乙氧基羰基甲基羰基氨基、甲氧基羰基甲基羰基氨基、(2-乙氧基羰基乙基)羰基氨基、(2-甲氧基羰基乙基)羰基氨基等。
“(烷氧基烷基羰基)甘氨酰胺基”是指式-N(H)-C(O)-CH2-N(H)-C(O)-Ra-O-Ra的基團，其中各Ra相互獨立地是如上定義的烷基，例如(甲氧基乙酰基)甘氨酰胺基、(乙氧基乙酰基)甘氨酰胺基等。
“氨基”是指基團-NH2。
“氨基羰基甘氨酰胺基”是指式-N(H)-C(O)-CH2-N(H)C(O)-NH2的基團。
“(氨基羰基)(烷基)甘氨酰胺基”是指式-N(H)-C(O)-CH2-N(Ra)-C(O)-NH2的基團，其中Ra是如上定義的烷基。
“芳基”是指苯基或萘基。在說明書中除非另有說明，術語“芳基”或者前綴“芳-”(例如在“芳烷基”中)是指包括任選被一個或者多個選自于以下組中的取代基取代的芳基鹵素、烷基、烷氧基、鹵代烷基、鹵代烷氧基、硝基、氨基、單烷基氨基、和二烷基氨基，這些取代基的定義如上所述。
“芳基羰基氨基”是指式-N(H)-C(O)-Rb的基團，其中Rb是如上定義的芳基，例如(4-甲氧基苯基)羰基氨基、(4-氟苯基)羰基氨基、(4-氯苯基)羰基氨基等。
“芳基羰基甘氨酰胺基”是指式-N(H)-C(O)-CH2-N(H)-C(O)-Rb的基團，其中Rb是如上定義的芳基，例如苯基羰基甘氨酰胺基、(4-氟-3-三氟甲基苯基)羰基甘氨酰胺基、(4-氟苯基)羰基甘氨酰胺基等。
“芳烷基”是指式-RaRb的基團，其中Ra是如上定義的烷基，而Rb是如上定義的芳基，例如芐基等。
“烷氧基烷基羰基氨基”是指式-N(H)-C(O)-Ra-O-Ra的基團，其中各Ra是如上定義的烷基，例如甲氧基甲基羰基氨基、乙氧基乙基羰基氨基、甲氧基乙基羰基氨基等。
“丙氨酰胺基”是指式-N(H)-C(O)-C(CH3)H-NH2的基團。
“芐基”是指式-CH2-Rh的基團，其中Rh是任選被一個或者多個選自于以下組中的取代基取代的苯基鹵素、烷基、鹵代烷基、烷氧基、硝基、氨基、單烷基氨基、和二烷基氨基。
“二烷基氨基”是指式-N(Ra)Ra的基團，其中各Ra相互獨立地是如上定義的烷基，例如二甲基氨基、甲基乙基氨基、二乙基氨基、二丙基氨基、乙基丙基氨基等。
“甘氨酰胺基”是指式-N(H)-C(O)-CH2-NH2的基團。
“鹵素”是指溴、氯、碘或氟。
“鹵代烷基”是指被一個或者多個鹵素取代的如上所述的烷基，例如三氟甲基、二氟甲基、三氯甲基、2-三氟乙基、1-氟甲基-2-氟乙基、3-溴-2-氟丙基、1-溴甲基-2-溴乙基等。
“鹵代烷基羰基氨基”是指式-N(H)-C(O)-Rf的基團，其中Rf是如上定義的鹵代烷基，例如三氟甲基羰基氨基、三氟甲基羰基氨基、2-溴乙基羰基氨基等。
“單烷基氨基”是指式-N(H)Ra的基團，其中Ra是如上定義的烷基，例如甲基氨基、乙基氨基、丙基氨基等。
“單芳烷基氨基”是指式-N(H)Rd的基團，其中Rd是如上定義的芳烷基，例如芐基氨基、(3，4，5-三甲氧基芐基)氨基、(4-氯芐基)氨基等。
“單烷基甘氨酰胺基”是指式-N(H)-C(O)-CH2-N(H)Ra的基團，其中Ra是如上定義的烷基。
“單烷基脲基”是指式-N(H)-C(O)-N(H)Ra的基團或者式-N(Ra)-C(O)-NH2的基團，其中Ra是如上定義的烷基。
“單芳基脲基”是指式-N(H)-C(O)-N(H)Rb的基團或者式-N(Rb)-C(O)-NH2的基團，其中Rb是如上定義的芳基。
“單芳烷基脲基”是指式-N(H)-C(O)-N(H)Rd的基團或者式-N(Rd)-C(O)-NH2的基團，其中Rd是如上定義的芳烷基。
“任選”(optional或optionally)是指隨后所述的的事件可能發生或不發生，該定義包括了所述事件發生或不發生的兩種可能。例如，“選擇性取代的芳基”是指芳基可被取代或未被取代，該定義包括取代的芳基和無取代基的芳基。
“藥學上可接受的鹽”包括酸加成鹽和堿加成鹽。
“藥學上可接受的酸加成鹽”是指保留其生物功效和游離堿性能的那些鹽，其不會在生物上或其它方面產生不希望的性能。所述鹽是與無機酸形成的，無機酸的實例為鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等，或者是與有機酸形成的，有機酸的實例為乙酸、丙酸、丙酮酸、馬來酸、丙二醇、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸、水楊酸等。
“藥學上可接受的堿加成鹽”是指保留其生物功效和游離酸性能的那些鹽，其不會在生物上或其它方面產生不希望的性能。這些鹽可通過使無機堿或有機堿與游離酸進行加成來制備。由無機堿得到的鹽包括但不限于鈉、鉀、鋰、銨、鈣、鎂、鐵、鋅、銅、錳、鋁鹽等。優選的無機鹽為銨、鈉、鉀、鈣和鎂鹽。由有機堿得到的鹽包括但不限于下述堿的鹽伯胺、仲胺、叔胺、取代的胺包括天然取代的胺、環狀胺和堿性離子交換樹脂，如異丙基胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二甲基氨基乙醇、2-二乙基氨基乙醇、三甲胺(trimethamine)、二環己胺、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、咖啡因、普魯卡因、哈胺青霉素G、膽堿、甜菜堿、乙二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可堿、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、聚胺樹脂等。特別優選的有機堿為異丙基胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二環己胺、膽堿和咖啡因。
“脲基”是指式-N(H)-C(O)-NH2的基團。
由上述定義以及包括取代烷基的實施例中應理解的是，其上的任何取代可在烷基的任意一個碳原子上發生。
本發明的化合物或其藥物學上可接受的鹽在它們的結構中有可能具有不對稱的碳原子。因此，本發明的化合物有可能以對映異構體、非對映異構體、外消旋體或者對映異構體和非對映異構體的混合物的形式存在。所有此等單個的對映異構體、非對映異構體以及它們的混合物都在本發明的范圍內。化合物中某些碳原子的絕對構型如果是已知的，可用合適的絕對標記R或S標記。應用和給藥在此描述的本發明化合物是CCR1趨化因子受體的拮抗劑，而且能夠跨過血腦屏障。因此，本發明的化合物適合作為顯影阿耳茨海默病的體內診斷劑。放射活性的檢測可根據本領域技術人員已知的方法通過gamma照相機或者正電子發射斷層掃描(PET)來進行。
優選的是，在作為診斷劑的藥物制劑中使用本發明化合物的游離堿或者藥物學上可接受的鹽，例如單鹽酸鹽或者二鹽酸鹽。包含本發明化合物的藥物制劑任選包含本領域已知的輔劑，如緩沖劑、氯化鈉、乳酸、表面活性劑等。在使用前還可在無菌條件下通過過濾對藥物制劑進行滅菌。
放射活性劑量在每次給藥時應在1-100mCi的范圍內，優選為5-30mCi，并最優選為5-20mCi。測試本發明化合物作為阿耳茨海默病顯影劑的適用性可通過本領域技術人員已知的試驗規程來證實。例如，CCR1受體在阿耳茨海默病腦中的正向調節可如以下實施例中所述，通過由阿耳茨海默病患者收集的解剖用腦組織的免疫化學染色試驗來證實。本發明化合物結合CCR1受體的能力以及跨過血腦屏障的能力也可如以下實施例中所述，按照已知的體外和體內分析法進行評估。具體而言，實施例10描述了一個大的研究，其是用于評估在不同的阿耳茨海默病階段中CCR1的表達程度。由50個尸體解剖病例中得到的腦組織表明在阿耳茨海默病的臨床嚴重程度(癡呆)與營養不良神經軸突中的CCR1表達之間存在相互關聯。在臨床正常個體的腦中，在斑塊樣結構中CCR1的表達是非常少見的。同樣，在沒有阿耳茨海默病并發癥(特別是斑塊中的Aβ1-42)的其他神經變性疾病的個體的腦中也沒有發現中CCR1表達。
更優選的是以下式(I)化合物，其中R3是在苯環的2位上，而R1是哌嗪環2位處的甲基，R2是哌嗪環5位處的甲基。同樣優選的式(I)化合物是，其中R3是在苯環的2位上，而R1是哌嗪環2位處的甲基，R2是氫。
進一步優選的是這些優選化合物的單氯化物鹽或者二氯化物鹽。
在本發明的各個方面中，優選某些式(II)的化合物。具體而言，優選以下的式(II)化合物，中-N(R4)R5是在苯環的2位，而R1是在哌嗪環的2位，R2是在哌嗪環的5位。同樣優選的是，在式(II)的化合物中，-N(R4)R5是在苯環的2位，而R1是在哌嗪環的2位處的甲基，R2是氫。
更優選的是以下式(II)化合物，其中R5包括根據以下式(III)或式(IV)的螯合劑 以及它們與99mTc、186Re和188Re的絡合物。在這些優選的化合物中，更優選的是以下的式(II)化合物，其中R5包括根據式(III)或者式(IV)的螯合劑，而且該螯合劑通過連接基團連接在式(II)非放射活性化合物的-N(R4)R5基團中的氮上，所述連接基團包括具有1-10個碳原子的烷基，而且該烷基可任選包含1-10個-C(O)-基團、1-10個-C(O)N(R)-基團、1-10個-N(R)C(O)-基團、1-10個-N(R)-基團、1-10個-N(R)2基團、1-10個羥基、1-10個-C(O)OR基團、1-10個氧原子、1-10個硫原子、1-10個氮原子、1-10個鹵原子、1-10個芳基、以及1-10個飽和或不飽和雜環，其中R是氫或烷基。優選的連接基團是-C(O)-CH2-N(H)-。
在本發明的化合物中，最優選的式(I)化合物是選自于以下組中的化合物1-(5-氯-2-{2-[(2R)-4-(4-氟-18F-芐基)-2-甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)脲；N′-(巰基乙-1-基)-N′-(5-巰基-3-氮雜-2-氧代戊-1-基)-N-{5-氯-2-[2-[4-(4-氟芐基)-2-(2R)-甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基]苯-1-基}甘氨酰基甘氨酰胺，锝-99m絡合物；1-(2-{2-[(2R)-4-(4-氟芐基)-2-甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}-5-碘-123I-苯基)脲；N′-(2-巰基乙-1-基)-N′-(5-巰基-3-氮雜-2-氧代戊-1-基)-N-{5-氯-2-[2-[4-(4-氟芐基)-2-(2R)-甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基]苯-1-基}甘氨酰胺，锝-99m絡合物；N′-(2-巰基乙-1-基)-N′-(5-巰基-3-氮雜-戊-1-基)-N-{5-氯-2-[2-[4-(4-氟芐基)2-(2R)-甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基]苯-1-基}甘氨酰胺，锝-99m絡合物；2-(2-氨基-4-氯苯氧基)-1-[(2SR，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]乙烷-1-酮；2-(2-氨基-4-氯苯氧基)-1-[(2RS，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]乙烷-1-酮；2-(2-氨基-4-氯苯氧基)-1-[(2SR，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]乙烷-1-酮；2-(2-氨基-4-氯苯氧基)-1-[(2RS，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]乙烷-1-酮；2-[4-氯-2-(二乙基氨基)苯氧基]-1-[(2SR，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5二甲基哌嗪-1-基]乙烷-1-酮；2-[4-氯-2-(二乙基氨基)苯氧基]-1-[(2RS，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5二甲基哌嗪-1-基]乙烷-1-酮；2-[4-氯-2-(二乙基氨基)苯氧基]-1-[(2SR，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5二甲基哌嗪-1-基]乙烷-1-酮；2-[4-氯-2-(二乙基氨基)苯氧基]-1-[(2RS，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5二甲基哌嗪-1-基]乙烷-1-酮；1-(5-氯-2-{2-[(2RS，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-3-(2，4-二氯苯基)脲；1-(5-氯-2-{2-[(2SR，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-3-(2，4-二氯苯基)脲；1-(5-氯-2-{2-[(2RS，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-3-(2，4-二氯苯基)脲；1-(5-氯-2-{2-[(2SR，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-3-(2，4-二氯苯基)脲；1-(5-氯-2-{2-[(2RS，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)脲；1-(5-氯-2-{2-[(2SR，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)脲；1-(5-氯-2-{2-[(2RS，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)脲；1-(5-氯-2-{2-[(2SR，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)脲；1-(5-氯-2-{2-[(2RS，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)脲；1-(5-氯-2-{2-[(2SR，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)脲；1-(5-氯-2-{2-[(2RS，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)脲；1-(5-氯-2-{2-[(2SR，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)脲；1-[(2SR，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-(2-異戊基氨基-4-氯苯氧基)乙烷-1-酮；1-[(2RS，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5，-二甲基哌嗪-1-基]-2-(2-異戊基氨基-4-氯苯氧基)乙烷-1-酮；1-[(2SR，5SR)-4-(4-氟18F-芐基)-2，5，-二甲基哌嗪-1-基]-2-(2-異戊基氨基-4氯苯氧基)乙烷-1-酮；1-[(2RS，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5，-二甲基哌嗪-1-基]-2-(2-異戊基氨基-4-氯苯氧基)乙烷-1-酮；N-(5-氯-2-{2-[(2SR，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-甲基丙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2RS，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-甲基丙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2SR，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-甲基丙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2RS，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-甲基丙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2SR，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-(甲氧基)乙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2RS，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-(甲氧基)乙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2SR，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-(甲氧基)乙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2RS，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-(甲氧基)乙酰胺；(E)-N-(5-氯-2-{2-[(2RS，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-丁烯酰胺；(E)-N-(5-氯-2-{2-[(2SR，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-丁烯酰胺；(E)-N-(5-氯-2-{2-[(2RS，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-丁烯酰胺；(E)-N-(5-氯-2-{2-[(2SR，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-丁烯酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2SR，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)琥珀酸甲酯；N-(5-氯-2-{2-[(2RS，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)琥珀酸甲酯；N-(5-氯-2-{2-[(2SR，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)琥珀酸甲酯；N-(5-氯-2-{2-[(2RS，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)琥珀酸甲酯；N-(5-氯-2-{2-[(2SR，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)琥珀酸乙酯；N-(5-氯-2-{2-[(2RS，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)琥珀酸乙酯；N-(5-氯-2-{2-[(2SR，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)琥珀酸乙酯；N-(5-氯-2-{2-[(2RS，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)琥珀酸乙酯；N-(5-氯-2-{2-[(2SR，5RS)-4-(4-氟-18F芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)乙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2RS，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)乙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2SR，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)乙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2RS，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)乙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2SR，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)丙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2RS，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)丙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2RS，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)丙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2RS，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)丙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2SR，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-3-氟苯甲酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2RS，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-3-氟苯甲酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2SR，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-3-氟苯甲酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2RS，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-3-氟苯甲酰胺；1-(5-氯-2-{2-[(2SR，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-3-(對甲苯基)脲；1-(5-氯-2-{2-[(2RS，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-3-(對甲苯基)脲；1-(5-氯-2-{2-[(2SR，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-3-(對甲苯基)脲；1-(5-氯-2-{2-[(2RS，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-3-(對甲苯基)脲；1-(5-氯-2-{2-[(2RS，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-3-乙基脲；1-(5-氯-2-{2-[(2SR，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-3-乙基脲；1-(5-氯-2-{2-[(2RS，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-3-乙基脲；1-(5-氯-2-{2-[(2SR，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-3-乙基脲；1-芐基-3-(5-氯-2-{2-[(2SR，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)脲；1-芐基-3-(5-氯-2-{2-[(2RS，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)脲；1-芐基-3-(5-氯-2-{2-[(2SR，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)脲；1-芐基-3-(5-氯-2-{2-[(2RS，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)脲；1-(5-氯-2-{2-[(2RS，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-3-(4-硝基苯基)脲；1-(5-氯-2-{2-[(2SR，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-3-(4-硝基苯基)脲；1-(5-氯-2-{2-[(2RS，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-3-(4-硝基苯基)脲；1-(5-氯-2-{2-[(2SR，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-3-(4-硝基苯基)脲；2-(2-芐基氨基-4-氯苯氧基)-1-[(2SR，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]乙烷-1-酮；2-(2-芐基氨基-4-氯苯氧基)-1-[(2RS，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]乙烷-1-酮；2-(2-芐基氨基-4-氯苯氧基)-1-[(2SR，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]乙烷-1-酮；2-(2-芐基氨基-4-氯苯氧基)-1-[(2RS，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]乙烷-1-酮；N-(5-氯-2-{2-[(2RS，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)甘氨酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2SR，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)甘氨酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2SR，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)甘氨酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2RS，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)甘氨酰胺；1-(5-氯-2-{2-[(2R)-4-(4-氟-18F-芐基)-2-甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)脲；1-(5-氯-2-{2-[(2S)-4-(4-氟-18F-芐基)-2-甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)脲；N-(5-氯-2-{2-[(2RS，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-(甲基氨基)乙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2SR，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基-哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-(甲基氨基)乙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2RS，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-(甲基氨基)乙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2SR，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基-哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-甲基氨基)乙酰胺；2-溴-N-(5-氯-2-{(2SR，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基}-2-氧代乙氧基)苯基)乙酰胺；2-溴-N-(5-氯-2-{(2RS，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基}-2-氧代乙氧基)苯基)乙酰胺；2-溴-N-(5-氯-2-{(2SR，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基}-2-氧代乙氧基)苯基)乙酰胺；2-溴-N-(5-氯-2-{(2RS，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基}-2-氧代乙氧基)苯基)乙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2RS，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-(脲基)乙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2SR，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-(脲基)乙酰胺；N-(5-氯-2-{2-{(2RS，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基}-2-氧代乙氧基}苯基)-2-(脲基)乙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2SR，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-(脲基)乙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2RS，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-(1-甲基脲基)乙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2SR，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-(1-甲基脲基)乙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2RS，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-(1-甲基脲基)乙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2SR，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-(1-甲基脲基)乙酰胺；(2RS)-N-(5-氯-2-{2-[(2RS，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-氨基丙酰胺；(2SR)-N-(5-氯-2-{2-[(2RS，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-氨基丙酰胺；(2RS)-N-(5-氯-2-{2-[(2SR，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-氨基丙酰胺；(2SR)-N-(5-氯-2-{2-[(2SR，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-氨基丙酰胺；(2RS)-N-(5-氯-2-{2-[(2RS，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-氨基丙酰胺；(2SR)-N-(5-氯-2-{2-[(2RS，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-氨基丙酰胺；(2RS)-N-(5-氯-2-{2-[(2SR，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-氨基丙酰胺；(2RS)-N-(5-氯-2-{2-[(2SR，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-氨基丙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2SR，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-(2，4-二氟苯甲酰基氨基)乙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2RS，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-(2，4-二氟苯甲酰基氨基)乙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2SR，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-(2，4-二氟苯甲酰基氨基)乙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2RS，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-(2，4-二氟苯甲酰基氨基)乙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2SR，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-(甲氧基乙酰基氨基)乙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2RS，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-(甲氧基乙酰基氨基)乙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2SR，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-(甲氧基乙酰基氨基)乙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2RS，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-(甲氧基乙酰基氨基)乙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2SR，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-(2-碘苯甲酰基氨基)乙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2RS，5RS)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-(2-碘苯甲酰基氨基)乙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2SR，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-(2-碘苯甲酰基氨基)乙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2RS，5SR)-4-(4-氟-18F-芐基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-(2-碘苯甲酰基氨基)乙酰胺；N-(5-氯-2-{2-[(2R)-4-(4-氟-18F-芐基)-2-甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)甘氨酰胺；以及N-(5-氯-2-{2-[(2S)-4-(4-氟-18F-芐基)-2-甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)甘氨酰胺；以及這些化合物的單鹽酸鹽和二鹽酸鹽。本發明化合物的制備A、式(I)化合物的制備通常情況下，根據本發明的式(I)放射活性顯影劑是通過使放射活性的4-鹵芐基衍生物與哌嗪衍生物反應而制得的。對于PET顯影，18F標記的4-氟芐基衍生物是優選的。制備4-氟-18F-芐基鹵化物的通常方法描述在以下文獻中Iwata等人，Applied Radiation andIsotopes(2000)，第52卷87-92頁。
18F標記的4-氟芐基衍生物是通過式(a)的苯甲醛衍生物與18F離子反應制備的，得到式(b)的苯甲醛化合物 其中LG是離去基團，例如溴、氯、碘、硝基、或者N(R)3+X-(其中R是烷基，而X是鹵離子，如Br-、Cl-、或I-；鏈烷酸的離子，如乙酸根離子(CH3C(O)O-)；或者烷基磺酸或鹵代烷基磺酸的離子，如三氟甲磺酸根離子(CF3SO3-))。LG優選是三氟甲磺酸根離子。由式(b)的化合物起始，在制備式(I)化合物時可有多個合成路線。
在第一個合成路線中，式(b)的化合物用NaBH4還原，得到式(c)的化合物 式(c)的化合物然后與HI、P2I4或者Ph3PBr2反應，得到式(d)或式(e)的碘代或者溴代化合物 所得式(d)和(e)化合物的放射化學產率為50-60％。放射化學純度大于95％。化合物的特異性活性每1nmol為5mCi。
式(d)或(e)的化合物然后可與哌嗪衍生物(f)反應，得到式(g)的化合物(一種式(I)的化合物) 式(f)的化合物可根據本領域技術人員已知的方法制備，而且詳細描述在PCT專利申請公開WO 98/56771中。
在第二個合成路線中，用還原劑使式(b)的化合物直接與式(f)的化合物反應，所述還原劑例如是甲酸、甲酸銨、NaBH4、或NaBH3CN，得到式(g)的化合物(一種式(I)的化合物) B、制備式(II)的化合物對于單光子發射計算機斷層掃描(SPECT)，99mTc標記的化合物是優選的。這些化合物是式(II)的化合物。這些化合物的常規合成路線是由式(II)化合物的非放射活性類似物起始，這些類似物與結合99mTc的螯合劑如N2S2螯合劑反應。式(II)化合物的非放射活性類似物的的制備詳細描述在PCT專利申請公開WO 98/56771中。螯合劑的合成是按照以下標準方法進行的，例如在以下文獻中描述的方法A.Mahmood等人，A N2S2-Tetradentate Chelate for Solid-Phase SynthesisTechnetium，Rhenium in Chemistry and Nuclear Medicine(1999)，第5卷71頁，或者Z.P.Zhuang等人，Bioconjugate Chemistry(1999)，第10卷159頁。
優選的螯合劑是以下式(III)或(IV)的螯合劑 螯合劑之一直接連接在式(II)非放射活性化合物的-N(R4)R5基團中的氮上，或者通過連接基團連接在式(II)非放射活性化合物的-N(R4)R5基團中的氮上，所述連接基團包括具有1-10個碳原子的烷基，而且該烷基可任選包含1-10個-C(O)-基團、1-10個-C(O)N(R)-基團、1-10個-N(R)C(O)-基團、1-10個-N(R)-基團、1-10個-N(R)2基團、1-10個羥基、1-10個-C(O)OR基團、1-10個氧原子、1-10個硫原子、1-10個氮原子、1-10個鹵原子、1-10個芳基、以及1-10個飽和或不飽和雜環，其中R是氫或烷基。優選的連接基團是-C(O)-CH2-N(H)-。
以下實施例用于進一步說明本發明，但絕不是對本發明范圍的限制。實施例1制備1-(5-氯-2-{2-[(2R)-2-甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)脲 A、將DIEA(19.10mL，110mmol)添加至(R)-(-)-2-甲基哌嗪(10g，100mmol)在250 mL二氯甲烷中的溶液內。將該溶液冷卻至-10℃。將BOC酸酐溶解在250mL二氯甲烷中，然后將該溶液在1小時內添加至冷卻的哌嗪溶液中。使反應溶液溫熱至室溫共16小時。過濾反應混合物以除去固體，而濾液用500mL水洗滌，在硫酸鎂上干燥，過濾并蒸發至油狀。該油通過快速柱色譜純制，得到11.0g式(a)的化合物。
B、式(a)的化合物(11.0g，55mmol)和DIEA(10.5mL，60.4mmol)溶解在100mL二氯甲烷中。所得溶液冷卻至-10℃。將氯乙酰基氯(4.37mL，55mmol)滴加至該溶液中，并同時保持溫度為-10℃。攪拌1小時后，反應混合物用100mL水洗滌，在硫酸鎂上干燥，過濾并蒸發至油狀。該油通過快速柱色譜純制，得到14.8g式(b)的化合物。
C、式(b)的化合物(14.8g，53.5mmol)和式(e)的化合物(9.98g，53.5mmol)溶解在75mL的DMSO中，然后向該溶液中添加碳酸鉀(18.48g，133.7mmol)。所得混合物加熱至50℃共3小時。將該混合物冷卻至30℃，然后傾倒在700mL的水中。水用200mL乙酸乙酯萃取3次。乙酸乙酯萃取液合并，然后用200mL的1 N KOH以及鹽水洗滌。有機層在硫酸鎂上干燥，過濾并蒸發至泡沫狀。該泡沫通過快速柱色譜純制，得到19.6g式(c)的化合物。
D、式(c)的化合物(7.68g，18mmol)溶解在40mL乙酸乙酯中。所得溶液在冰浴中冷卻，然后在溶液中吹入氯化氫氣體5分鐘。使混合物在室溫下放置1小時，同時產物沉淀出來。過濾收集該產物，然后在過濾器上用新乙酸乙酯洗滌，在室溫下真空干燥至恒定重量，得到5.9g的1-(5-氯-2-{2-[(2R)-2-甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)脲，其為式(d)的化合物，為白色固體。
NMR(2 rotomers)(400MHz，DMSO)9.7(m，0.5H)，9.2(m，0.5H)，8.16(s，1H)，8.13(s，0.5H)，6.8(s，2H)，4.9(m，2H)，4.4(m，5H)，3.8(bs，0.5H)，3.4，(bs，0.5H)，3.2，(m，2.5H)，3.0(m，2H)1.2-1.4(m，3H)ppm.
B、按照類似的方法，制備其他包含18F原子的式(I)化合物。實施例4制備N-(5-氯-2-{2-[((2R)-4-(4-氟芐基)-2-甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基]苯基}甘氨酰胺 A、向(R)-(-)-2-甲基哌嗪(2.0g，20mmol)在20mL CH2Cl2中的溶液內添加DIEA(5.2g，40mmol)和4-氟芐基氯(2.39mL，20mmol)。所得混合物在室溫下攪拌15小時。反應完全后，反應混合物用水(3×20mL)和鹽水洗滌，然后在硫酸鈉上干燥，過濾并真空濃縮，得到式(f)的化合物(2.2g)，其為白色固體。
B、向式(f)的化合物(2.2g，10mmol)在50mL CH2Cl2中的溶液內添加氯乙酰基氯(0.84mL，10mmol)。所得混合物在室溫下攪拌10分鐘，然后添加三乙基胺(3mL，21mmol)。30分鐘后，混合物用水(3×20mL)和鹽水洗滌，然后在硫酸鈉上干燥，過濾并真空濃縮，得到一油狀物。通過快速柱色譜純制，得到式(g)的化合物(2.5g)。
C、向式(g)的化合物在(2.4g，8.4mmol)在50mL DMF中的溶液內添加K2CO3(2.5g，17mmol)、NaI(0.2g)和4-氯-2-硝基苯酚(1.3g，8.4mmol)。所得混合物在70-80℃下加熱。1小時后，混合物真空濃縮，然后溶解在乙酸乙酯(150mL)中，并用水(3×100mL)和鹽水洗滌。分離有機層，在硫酸鈉上干燥，過濾并真空濃縮，得到一油狀物。在快速柱色譜上純制，得到式(h)的化合物(3.1g)D、向式(h)的化合物(1.1g，2.6mmol)在10mL乙醇中的溶液內添加二水合氯化錫(II)(3.0g，13mmol)在5mL乙醇中的溶液。所得混合物在75℃下加熱。1小時后，反應物真空濃縮，溶解在乙酸乙酯(100mL)中，用1 N NaOH水溶液在(3×100mL)和鹽水洗滌。有機層分離，在硫酸鈉上干燥，過濾并真空濃縮，得到一油狀物。在快速柱色譜上純制，得到式(i)的化合物(0.75g)。
E、向式(i)的化合物(0.7g，1.78mmol)在10mL DMF中的溶液內添加BOC-Gly-OSU(0.58g，2.13mmol)。所得混合物50-60℃下加熱。24小時后，真空濃縮混合物，然后溶解在乙酸乙酯(150mL)，用水(3×100mL)和鹽水洗滌。分離有機層，在硫酸鈉上干燥，過濾并真空濃縮，得到一油狀物。在快速柱色譜上純制，得到式(j)的化合物(0.7g)。
F、向式(j)的化合物(0.6g，1.1mmol)在10 mL CH2Cl2中的溶液內添加TFA(5mL)。所得混合物在室溫下加熱。反應完成1小時后，反應液真空濃縮，溶解在乙酸乙酯(100mL)中，用1 N NaOH水溶液(2×100mL)和鹽水洗滌。分離有機層，在硫酸鈉上干燥，過濾并真空濃縮，得到一油狀物。通過快速柱色譜純制，得到N-(5-氯-2-{2-[(2R)-4-(4-氟芐基)-2-甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}苯基)甘氨酰胺，式(k)的化合物(0.45g)，為白色固體。
NMR(CDCl3)10.2(s，1)，8.5(s，1)，7.3(m，2)，7.0(m，3)，6.8(d，1)，4.7(m，2)，3.4-3.6(m，5)，3.0(m，1)，2.8(m，1)，2.6(d，1)，2.2(m，1)，2.0(m，2)，1.2-1.4(m，3)ppm.
元素分析計算C 69.93 H 5.87 N 7.20 O 6.85 S 5.49實測C 69.69 H 6.05 N 7.01 O S 5.32B、將如上制得的N′-(S-三苯甲基-2-sulfanyl乙-1-基)-N′-(S-三苯甲基-5-巰基-3-氮雜-2-氧代戊-1-基)-N-{5-氯-2-[2-[4-(4-氟芐基)-2-(2R)-甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基]苯-1-基}甘氨酰基甘氨酰胺(116.8mg，0.1mmol)溶解在5mL三氟乙酸中。添加三乙基硅烷(481，0.3mmol)后，所得懸浮液在室溫下攪拌15分鐘。濾液進行減壓蒸發，而殘留物用7mL的二乙基醚研磨。沉淀物在室溫下攪拌1小時，然后過濾，得到所希望的產物N′-(巰基乙基-1-基)-N′-(5-巰基-3-氮雜-2-氧代戊-1-基)-N-{5-氯-2-[2-[4-(4氟芐基)-2-(2R)-甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基]苯基-1-基}甘氨酰基甘氨酰胺雙三氟乙酸鹽(87mg，95.5％)，其為白色固體。
元素分析計算C 44.81 H 4.65 N 9.22 O 15.80 S 7.04實測C 44.54 H 4.91 N 8.99 O S 6.80C、將酒石酸二鈉(1mg)和如上制得的N′-(巰基乙-1-基)-N′-(5-巰基-3-氮雜-2-氧代戊-1-基)-N-{5-氯-2-[2-[4-(4-氟芐基)-2-(2R)-甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基]苯-1-基}甘氨酰基甘氨酰胺雙三氟乙酸鹽(100μg)溶解在500μl磷酸鈉緩沖液(0.1M，pH＝8.5)中。添加37MBq99mTc產生器的流出物后，添加5μl的氯化錫(II)溶液，混合物加熱10分鐘至100℃。HPLC分析表明主要的峰為所希望的產物N′-(巰基乙-1-基)-N′(5-巰基-3-氮雜-2-氧代戊-1-基)-N-{5-氯-2-[2-[4-(4-氟芐基)-2-(2R)-甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基]苯基-1-基}glycyl甘氨酰胺，锝-99m絡合物，其中RCP＞90％。
B、向式(g)的化合物(0.3g，1.05mmol)(如上所述制備)在10mLDMF中的溶液內添加K2CO3(0.45g，3.2mmol)。NaI(0.01g)和2-硝基-4碘苯酚(0.28g，1.05mmol)。所得混合物在70-80℃下加熱。1小時后，真空濃縮混合物，然后溶解在乙酸乙酯(150mL)中并用水(3×100mL)以及鹽水洗滌。分離有機層，在硫酸鈉上干燥，過濾并真空濃縮，得到一油狀物。用快速柱色譜純制，得到0.28的式(I)的化合物。
C、向式(I)的化合物(0.28g，0.55mmol)在5mL乙醇中的溶液內添加二水合氯化錫(II)(0.616g，2.73mmol)在5mL乙醇中的溶液。所得混合物在75℃下加熱。1小時后，真空濃縮反應物，然后溶解在乙酸乙酯(100mL)中，用1 N NaOH水溶液(3×100mL)和鹽水洗滌。分離有機層，在硫酸鈉上干燥，過濾并真空濃縮，得到一油狀物。在快速柱色譜上純制，得到式(m)的化合物(0.25g)。
D、向式(m)的化合物(0.25g，0.52mmol)在3mL AcOH中的溶液內添加水(6mL)。所得混合物攪拌在室溫下10分鐘，然后滴加KOCN(0.085g，1.0mmol)在1mL水中的溶液。反應混合物在室溫下攪拌10分鐘，然后在55℃下加熱5分鐘。反應完成后，反應混合物真空濃縮，溶解在CH2Cl2(50mL)中，用洗滌2N NaOH水溶液(2×100mL)和鹽水洗滌。分離有機層，在硫酸鈉上干燥，過濾并真空濃縮，得到一油狀物。在快速柱色譜上純制，得到式(n)的化合物(0.16g)，其為白色固體。
NMR(CDCl3)9.0(s，1)，8.6(s，1)，7.3(m，2)，7.0(t，3)，6.6(d，1)，4.9(s，2)，4.7(m，2)，4.4(m，1)，3.4-3.6(m，3)，3.0(m，1)2.8(m，1)，2.6(d，1)，2.2(m，1)，2.0(m，1)，1.2-1.4(m，3)ppm.實施例7制備1-(2-{2-[(2R)-4-(4-氟芐基)-2-甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}-5-碘-123I-苯基)脲A、向如上制得的式(n)化合物(1mg)和10μg硫酸銅(II)在300μl DMF中的溶液內添加1mCi碘化鈉[123I]溶液。所得反應混合物加熱過夜至100℃。添加1mL半飽和NaHCO3水溶液后，產物用2mL CH2Cl2萃取。有機層在氮氣流中蒸發至干。使用RP柱[洗脫劑EtOH/水(2∶1)]純制，得到所希望的產物1-(2{2-[(2R)-4-(4-氟芐基)-2-甲基哌嗪-2-基]-2-氧代乙氧基}-5-碘-123I-苯基)脲B、按照與上述類似的方法，制得其他式(I)的化合物。
元素分析計算C 71.36 H 5.90 N 6.30 O 5.76 S 5.77實測C 71.08 H 6.13 N 6.05 O S 5.52B、N′-(S-三苯甲基-2-巰基乙-1-基)-N′-(S-三苯甲基-5-巰基-3-氮雜-2-氧代戊-1-基)-N-{5-氯-2-[2-[4-(4-氟芐基)-2-(2R)-甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基]苯-1-基]甘氨酰胺(111.1mg，0.1mmol)溶解在5mL三氟乙酸中。添加48μl(0.3mmol)三乙基硅烷后，所得懸浮液在室溫下攪拌15分鐘。濾液減壓蒸發，殘留物用7mL二乙基醚研磨。沉淀物在室溫下攪拌1小時，過濾，得到所希望的產物N′-(2-巰基乙-1-基)-N′-(5-巰基-3-氮雜-2-氧代戊-1-基)-N-{5-氯-2-[2-[4-(4-氟芐基)-2-(2R)-甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基]苯-1-基}甘氨酰胺雙三氟乙酸鹽(75mg，87.8％)，為白色固體。
元素分析計算C 44.99 H 4.60 N 8.20 O 14.98 S 7.51實測C 44.71 H 4.89 N 8.03 O S 7.22C、酒石酸二鈉(1mg)和N′-(2-巰基乙-1-基)-N′-(5-巰基-3-氮雜-2-氧代戊-1-基)-N-{5-氯-2-[2-[4-(4-氟芐基)-2-(2R)-甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基]苯-1-基}甘氨酰胺雙三氟乙酸鹽(100μg)溶解在500μl磷酸鈉緩沖液(0.1M，pH＝8.5)中。添加37.5MBq99mTc發生器流出物后，添加5μl氯化錫(II)溶液，該混合物加熱10分鐘至100℃。HPLC分析顯示主要的峰為所希望的產物N′-(2-巰基乙-1-基)-N′-(5-巰基-3-氮雜-2-氧代戊-1-基)-N-{5-氯-2-[2-[4-(4-氟芐基)2-(2R)-甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基]苯-1-基}甘氨酰胺，锝-99m絡合物，其中RCP＞91％。
元素分析計算C 51.53 H 4.72 N 8.19 O 5.76實測C 51.28 H 4.99 N 7.92 OB.在攪拌下將N-{5-氯-2-[2-[4-(4-氟芐基)-2-(2R)-甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基]苯-1-基}-2-溴乙酰胺(165mg，0.42mmol)和N，N′-二-(S-(4-甲氧基芐基)-2-巰基乙-1-基)乙二胺(841.3mg，2mmol)(根據以下文獻合成Z.P.Zhuang等人，Bioconjugate Chem.(1999)，第10卷159頁)溶解在1，4-二噁烷(5mL)中，然后在攪拌下加熱回流24小時。所得反應混合物減壓蒸發。殘留物溶解在15mL二氯甲烷中，然后用飽和碳酸鈉水溶液洗滌。在硫酸鎂上干燥后，減壓蒸發溶劑。在硅膠上進行色譜分離后(洗脫劑二氯甲烷/甲醇，99∶1)，得到所希望的產物N′-(S-(4-甲氧基芐基)-2-巰基乙-1-基)-N′-(S-(4′-甲氧基芐基)-5-巰基-3-氮雜-戊-1-基)-N-{5-氯-2-[2-[4-(4-氟芐基)-2-(2R)-甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基]苯-1-基}甘氨酰胺(154mg，43％)，為白色粉末。
元素分析計算C 61.99 H 6.50 N 8.22 O 9.38 S 7.52實測C 61.71 H 6.58 N 8.03 O S 7.28C、在0℃下將N′-(S-(4-甲氧基芐基)-2-巰基乙-1-基)-N′-(S-(4′-甲氧基芐基)-5-巰基-3-氮雜-戊-1-基)-N-{5-氯-2-[2-[4-(4-氟芐基)-2-(2R)-甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基]苯-1-基}甘氨酰胺(140mg，0.164mmol)溶解在5mL三氟乙酸中。添加Hg(OAc)2(104.5mg，0.328mmol)后，所得混合物在0℃下攪拌30分鐘，然后用H2S飽和15分鐘。過濾后，減壓蒸發溶劑。所得黃色油用3mL二乙基醚研磨。過濾后，得到所希望的產物N′-(2-巰基乙-1-基)-N′-(5-巰基-3-氮雜-戊-1-基)-N-{5-氯-2-[2-[4-(4-氟芐基)-2-(2R)-甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基]苯-1-基}甘氨酰胺三-三氟乙酸鹽(126mg(80.5％))，為白色粉末。
元素分析計算C 42.79 H 4.44 N 7.34 O 15.09 S 6.72實測C 42.48 H 4.73 N 7.02 O S 6.76D、酒石酸二鈉(1mg)和N′-(2-巰基乙-1-基)-N′-(5-巰基-3-氮雜-戊-1-基)-N-{5-氯-2-[2-[4-(4-氟芐基)-2-(2R)-甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基]苯-1-基}甘氨酰胺三-三氟乙酸鹽(100μg)溶解在500μl磷酸鈉緩沖液(0.1M，pH＝8.5)中。添加37.5MBq99mTc發生器流出物后，添加5μl氯化錫(II)溶液，該混合物加熱10分鐘至100℃。PLC分析顯示主要的峰為所希望的產物N′-(2-巰基乙-1-基)-N′-(5-巰基-3-氮雜-戊-1-基)-N-{5-氯-2-[2-[4-(4-氟芐基)-2-(2R)-甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基]苯-1-基}甘氨酰胺，锝-99m絡合物，其中RCP＞95％。
載玻片在二甲苯中脫蠟，然后用包含0.005％Triton X100的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS-T)進行水合。對于光顯微鏡(使用DAB作為色原)，使載玻片與0.01％H2O2的甲醇溶液溫育30分鐘，由此阻斷內原性過氧化物酶活性。在10％正常山羊血清(NGS)的PBS溶液中阻斷30分鐘，由此降低非特異性的結合。在PBS-T中稀釋原抗體(兔抗CCR1(N端肽)；鼠抗神經絲；鼠抗GFAP；鼠抗Tau(AT8)；鼠抗CD68(克隆KP1)；鼠抗β-淀粉狀蛋白(Boehringer Mannheim，#1 381 431)；兔抗CCR8(N端肽))，載玻片在室溫下溫育過夜。使用Biogenex ABC試劑盒完成染色。所有洗滌都用PBS-T。DAB反應完全后，載玻片略微用Gill蘇木精進行對比染色，然后脫水，并用Permount進行overslipped。在overslipping前，一些載玻片使用相同的方法用抗A β肽的抗體重新染色，但色原為True Blues。對于免疫熒光雙標記研究，載玻片進行脫蠟，用10％NGS阻斷，然后與兩個原抗體的混合物溫育過夜。載玻片用PBS-T洗滌，然后與山羊次級抗體的混合物溫育，每種抗體為1/50稀釋度。為避免內原性(黃-綠)組織熒光導致的混亂，次級抗體分別結合Cy3(Emax＝565nm；山羊抗鼠，Amersham)或Cy5(Emax＝700nm；山羊抗兔，Amersham)。載玻片用氪-氬激光(2010型，Dynamics，Sunnyvale，CA)在共焦顯微鏡上觀察。
隨后，得到第二組腦組織，包括10個認知正常的老年病例和40個阿耳茨海默病患者的病例，其中阿耳茨海默病患者的病例已進行了臨床癡呆級別(CDR)評估。接著用第二組的腦組織評估CCR1的免疫組織化學表達。樣品進行CCR1和其他如上所述標記物的染色，但由Dr.UrsulaMoenning處得到對Aβ1-42特異性的單克隆抗體(克隆#6D5)(擴散標記物，早期淀粉樣沉積物以及用于更為成熟的神經炎斑塊)。這些抗體用Vector RedTM(Vector Labs)顯色。Dr Moenning還提供了對于Aβ1-40特異性的單克隆抗體(克隆#13E9)，其是用于晚期疾病中存在的斑塊的標記物，并用True Blue顯色。結果在這兩組腦組織中，具有阿耳茨海默病病理的區域顯示了特征性的染色圖案。在海馬形成和腦皮質中，都發現CCR1免疫活性與神經炎(如老年)相關。免疫染色結構為圓至卵圓形，而且通常不與細胞體有關。它們在尺寸上有變化，而且似乎填充有尖的顆粒性物質。發現這些結構在老年斑中的淀粉樣沉積物周圍形成“日冕”，但與Aβ本身不同(圖1-4)。圖1中的上圖顯示了具有CCR1陽性過程之“日冕”的神經炎斑塊。在阿耳茨海默病病例中，某些CA1和CA3神經元的神經元細胞體有時被CCR1抗體染色。圖1中下圖說明了該發現。這種染色雖然通常出現在具有這些變性改變的神經元體中，但與神經原纖維纏繞(NFT)或者粒狀空泡體不同。
如圖2所示，抗體與CCR1受體蛋白之細胞外(N-端)區域的16聚多肽預先溫育，完全阻斷了所有組織染色。具體而言，圖2的頂部圖象顯示了阿耳茨海默病腦中缺乏CCR1抗體染色，該抗體預先與多肽溫育，而圖2的底部圖象則顯示了在姊妹切片中許多被未溫育抗體染色的CCR1陽性結構。
如圖4所示，雙標記研究表明幾乎所有的CCR1陽性結構都與包含Aβ1-42的神經炎斑塊有關。擴散斑塊中的Aβ1-42(圖5)通常不與CCR1或者任何明顯的細胞應答有關。在阿耳茨海默病更晚期的病例中，看見更多的Aβ1-40陽性斑塊。如圖3所示，這些斑塊中的一些但不是全部，與CCR1染色有關。在一些情況下，CCR1陽性斑塊完全沒有Aβ1-40染色。
在嚴重的阿耳茨海默病病例中，看見明顯的神經元丟失和神經膠質瘤病，此時腦下腳和內鼻皮質中的活性星形細胞也是CCR1陽性的。在略微輕一些的病例中，CCR1陽性的活性星形細胞是不常見的。
雙標記切片的共焦顯微鏡圖象顯示CCR1免疫反應活性與神經絲陽性過程共同集中。巨噬細胞/小神經膠質標記物--CD68與CCR1染色無關，而且抗異常磷酸化T蛋白的AT8抗體也如此。由光學顯微鏡研究可預期，CCR1免疫反應活性與星形神經膠質增生區域中的GFAP共同集中。
在阿耳茨海默病和對照腦組織中，腦血管中的白細胞都是非常強的CCR1陽性，可作為染色方法的陽性內部對照。在圖5中注意到兩個血管內細胞的CCR1陽性染色(箭頭)。在星號標記處，也看見了一些CCR1陽性物質，但是，通常情況下擴散斑塊與CCR1無關。
在使用第二研究中的海馬組織(其中患者根據CDR級別分為已知臨床類別)時，對海馬中CCR1陽性斑塊樣結構進行定量評估。相對于臨床(CDR)情況，在盲試條件下進行單個切片的組織學評估。使用無偏差計算機法(unbiased computerized methods)進行體積分析。
圖3證實了在CCR1陽性的營養不良性神經炎(棕色染色)與包含Aβ1-40的神經炎斑塊(藍色染色)之間的組織學關系。注意到在圖3中CCR1陽性過程與淀粉狀蛋白不同。包含Aβ1-40的斑塊是不連續的而且容易計數，如CCR1陽性神經炎簇類似。為得到CCR1陽性“日冕”的數量、Aβ1-40陽性斑塊的數量和包含兩種標記物的斑塊的數量，對海馬的載玻片進行評估。在整個海馬形成的區域(如CA3、CA1和腦下腳)中計數結構，包括鼻內皮質，然后計算總和。該數值是5μm厚海馬形成截面所代表的海馬中的結構數量的相對估算值。圖6顯示了CCR1與Aβ1-40之間在CDR級別上的關系Aβ1-42數量的定量需要不同的技術，這是因為Aβ1-42更為豐富，而且形成不易計數的“擴散”斑塊(見圖5)。對于這些載玻片，使用計算機輔助方法(CAST體視學系統)估算Aβ1-42占據的鼻內皮質面積。該面積用載玻片上總面積的百分比表示。神經炎和擴散斑塊占據的明膠單獨計數。計算機驅動的顯微鏡工作站確保組織切片的隨機(無偏差)評估。Aβ1-42所占據的鼻內皮質的體積百分數(擴散和神經炎)與圖7中姊妹切片的鼻內皮質中的CCR1陽性斑塊的數量進行比較。
圖6顯示了海馬中CCR1陽性的營養不良性神經炎的片劑數量隨著阿耳茨海默病的CDR級別而增加。早期阿耳茨海默病(CDR 0.5)中陽性結構數量的增加超過了對照(CDR 0)的水平。雖然在對照組和阿耳茨海默病組之間的差異在組CDR 2之前還沒有變為統計學顯著的，但是這些表達方式支持以下結論甚至在非常早期的阿耳茨海默病階段，在營養不良性神經元過程中被正向調節。注意到，Aβ1-40斑塊的數量直到該疾病的晚期才開始升高。因此，腦組織中的CCR1表達被認為是阿耳茨海默病相對早期的指標。
鼻內皮質中CCR1陽性斑塊的數量與Aβ1-42量之間的相互關系示于圖7中。通常情況下，鼻內皮質中的CCR1水平隨著疾病狀態的增加而增加；但取樣區域大大小于圖6中的取樣區域。然而注意到，Aβ1-42在疾病的早期就升高。
從小鼠的全血制備血漿樣品，并分析其放射活性含量。如圖9所示，比較每個劑量時等體積的腦和血漿中的放射活性量隨時間的變化。每毫升血漿中存在的注射劑量(i.d.)百分數隨時間下降，在2小時后達到可以忽略的水平。為與腦水平進行比較，每個腦的DPM總數相對于腦重量的克數進行歸一化，并表示為每克腦組織的i.d.百分數。注意到鼠腦專利平均為450mg，這樣圖中1g鼠腦的i.d.百分數超過了真實值的兩倍多。很清楚，類似物在腦中的水平與血漿水平和諧地下降。雖然該類似物是親脂性的，但正常的鼠腦不會出現CCR1拮抗劑的沉積部位。
所有6例帕金森氏病和所有3例Guam帕金森癡呆對于CCR1都是陰性的。在所有4例大腦血管淀粉樣變性、4例DLBD中有3例、4例PSP中有2例、以及4例MID和4例皮克病中各有1例觀察到類似于阿耳茨海默病中所發現的CCR1陽性斑塊樣結構。
雙標記研究證實了以下假設如純粹的阿耳茨海默病(實施例10)中所發現的，這些CCR1陽性斑塊樣結構與Aβ1-42有關。圖10顯示了用棒圖表示的所有疾病(不包括帕金森氏病，其對于腦的CCR1是陰性的)的病理學評估結果。基本上，在腦組織樣品中中從沒有發現CCR1表達，除非同時存在Aβ1-42陽性神經炎斑塊。
在打斷編碼后，發現皮克病中顯示CCR1表達的1例也診斷為阿耳茨海默病。兩個具有CCR1的PSP病例也診斷為伴隨有阿耳茨海默病。大腦血管淀粉樣變性和DLBD都是與阿耳茨海默病病理學緊密相關的疾病。因此，它們也具有與Aβ1-42相關的高水平CCR1表達就不足以令人驚奇。在老年人口中，阿耳茨海默病與其他疾病過程重疊是常見的情況。這在4個MID病例中的1個中有發現。這些結果表明CCR1是與阿耳茨海默病病理學(特別是Aβ1-42陽性神經炎斑塊)緊密相關的標記物，無論在腦中是否存在其他伴隨的病理學過程。因此，其對阿耳茨海默病病理學是高度特異性的，而且可用作疾病發展過程的診斷替代標記物。
*****雖然已參考具體的實施方案對本發明進行了描述，但應理解到，本領域普通技術人員在不偏離本發明真實的精神和范圍的情況下還可進行各種改變。另外，對于具體的情況、材料、組成、方法、步驟，仍可進行許多改進以適應本發明的目的、精神和范圍。所用這些改進也在本發明的范圍之內。
權利要求
1.式(I)的化合物或其藥物學上可接受的鹽 其中X1和X2相互獨立地是鹵素；R1和R2相互獨立地是氫或烷基；以及R3是氫、氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、單芳烷基氨基、烷基羰基氨基、烯基羰基氨基、鹵代烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、烷氧基烷基羰基氨基、烷氧基羰基烷基羰基氨基、甘氨酰胺基、單烷基甘氨酰胺基、芳基羰基甘氨酰胺基、氨基羰基甘氨酰胺基、(氨基羰基)(烷基)甘氨酰胺基、(烷氧基烷基羰基)甘氨酰胺基、脲基、單烷基脲基、單芳基脲基、單芳烷基脲基、或者丙氨酰胺基；而且X1或X2之一選自于以下組中123I、125I、128I、131I、75Br、76Br、80Br和18F；或者該化合物中的碳原子之一是11C。
2.式(II)的化合物或其藥物學上可接受的鹽 其中X1和X2相互獨立地是鹵素；R1和R2相互獨立地是氫或烷基；以及R4是氫；R5包括能夠結合放射活性金屬原子的螯合劑，所述金屬原子選自于99mTc、186Re和188Re；或者是與99mTc、186Re和188Re的絡合物。
3.如權利要求1或2所述的化合物，其中，所述化合物結合趨化因子受體CCR1并透過血腦屏障。
4.如權利要求1或2所述的化合物，其中，R1是哌嗪環2位處的甲基，而R2是哌嗪環5位處的甲基。
5.如權利要求1或2所述的化合物，其中，R1是哌嗪環2位處的甲基，而R2是氫。
6.如權利要求1或2所述的化合物，其中，X1是苯環4位上的氯，而X2是苯環4位上的18F原子。
7.如權利要求2所述的化合物，其中，R5是式(III)的螯合劑
8.如權利要求2所述的化合物，其中，R5是式(IV)的螯合劑
9.如權利要求7或8所述的化合物，其中R5還包括連接基團，該連接基團包括具有1-10個碳原子的烷基，而且該烷基可任選包含1-10個-C(O)-基團、1-10個-C(O)N(R)-基團、1-10個-N(R)C(O)-基團、1-10個-N(R)-基團、1-10個-N(R)2基團、1-10個羥基、1-10個-C(O)OR基團、1-10個氧原子、1-10個硫原子、1-10個氮原子、1-10個鹵原子、1-10個芳基、以及1-10個飽和或不飽和雜環，其中R是氫或烷基。
10.如權利要求9所述的化合物，其中，所述連接基團是-C(O)-CH2-N(H)-。
11.如權利要求1-10之一所述化合物的單氯化物鹽。
12.如權利要求1-10之一所述化合物的二氯化物鹽。
13.診斷人阿耳茨海默病的方法，其包括向需要此等診斷的人給藥如權利要求1-12之一所述的化合物，然后通過gamma照相機或者正電子發射斷層掃描(PET)測量給藥化合物引起的放射活性。
14.如權利要求1-12之一所述的化合物在制備用于診斷人阿耳茨海默病的放射藥物中的應用。
15.制備如權利要求1所述的式(I)化合物的方法，其包括在還原劑存在下使式(f)的化合物 其中R1、R2、R3和X1如權利要求1中所定義，與式(b)的化合物反應
全文摘要
本發明涉及式(I)的放射藥物在診斷阿耳茨海默病中的應用。具體而言，本發明的放射藥物能夠透過血腦屏障，而且可結合阿耳茨海默病患者腦組織中存在的CCR1受體。
文檔編號C07B59/00GK1473158SQ01818409
公開日2004年2月4日 申請日期2001年11月1日 優先權日2000年11月6日
發明者克里斯托夫－斯特凡·希格爾, 貝恩德·約翰森, 約爾格·施泰因巴赫, 彼得·馬丁, 梅雷迪斯·哈爾克斯－米勒, 里查德·霍魯克, 哈拉爾德·丁特爾, 拉朱·莫漢, 約瑟夫·E·赫塞爾格塞爾, E 赫塞爾格塞爾, 施泰因巴赫, 約翰森, 霍魯克, 克里斯托夫-斯特凡 希格爾, 德 丁特爾, 斯 哈爾克斯-米勒, 莫漢, 馬丁 申請人:舍林股份公司