專利名稱：：具有減弱的變應原性的多肽的制作方法
技術領域：
：本發明涉及具有減弱的變應原性的修飾多肽如蛋白或酶。本發明還涉及用于生產所述具有減弱的變應原性的修飾多肽及其組合物的方法。最后，本發明涉及所述具有減弱的變應原性的修飾多肽或其組合物的應用。日益增多的多肽，包括蛋白和酶正由微生物進行工業化生產，以便用于工業、家用、食品/飼料、潤膚劑或醫藥等用途。所述多肽在某些場合會產生潛在危險，特別是使處理生產出來的含有多肽的制品的雇員遭受危險，而且，還會在一定程度上對該產品的用戶，如發型師和潤膚劑和化妝品等的直接用戶造成危害。需要對這種潛在危險加以控制和/或限制。多肽的變應原性一般，多肽是人體免疫系統的潛在抗原，免疫系統在遇到它時會產生特異抗體。當這一過程能產生臨床上的有益反應時被稱為“免疫”，而這種反應導致過敏性時被稱為“致敏”。在初次處理時，開始特異B細胞克隆的克隆選擇和擴展，這意味著在進行下次處理之后在臨床上的唯一表現為保護性反應或變態反應。變態反應可以定義為由在低濃度下無害的制劑引起的病態免疫反應。導致IV型過敏性的致敏，其特征是形成特異的IgE抗體。目前，對于控制亞類變化的機理尚不十分了解。由激活的B細胞分泌的IgE能夠與位于肥大細胞和嗜堿性粒細胞表面的Fce受體結合，所述粒細胞中含有很多由化學介體，如組胺包裝的細胞質顆粒(J.Klein，“Immunology”，BlackwellSci.Pub.，London，1990；E.Benjamini&amp;S.Leskowitz，“Immunology”，Wiley-Liss，N.Y.1991)。在特應性個體中，上述細胞的每一個都具有大量的IgE分子同其表面結合，在這里它能在持續幾周的時間里與變應原相互作用。當接觸到變應原時，表面結合的IgE就與該變應原交叉接合，導致胞質顆粒釋放到該細胞附近，從而引起發炎性變態反應。業已證實IgE的作用與針對寄生蟲感染的天然免疫防御系統有關，而且，已證實變態反應的發展是該防御系統的不利副作用。可以根據其作用方式對能導致IgE介導的過敏性的天然變應原進行分類吸入性變應原(花粉、塵螨等)、攝食性變應原(乳汁、蛋類等)；接觸性變應原(如來自乳膠)和來自螯刺昆蟲(如蜜蜂、火蟻等)的變應原。氣源性變應原是迄今為止臨床上的最大的一類，會形成所述工業多肽的高危區。變態反應試驗可以以體內刺激方式進行，最常見的是通過若干體外試驗進行皮膚針刺試驗，該試驗主要基于外周血中的IgE含量。盡管已經對后一種方法做過大量研究，但診斷變態反應的最可靠的方法仍然是體內刺激，根據所選擇的靶器官，體內刺激的敏感度也不相同。例如，用變應原蛋白進行鼻內刺激可以引起變態反應，即使皮膚試驗和對特異血清IgE的放射線變應原吸附測定(RAST)為陰性(IvanRoitt，“E-ssentialImmunology”fifthedition，P.152和P.240，1984)。多肽變應原性的減弱目前，避免工業多肽產生的變態反應的方法是通過將所述產品固定、造粒、包衣或溶解，特別是避免形成氣載材料。總之，上述方法仍然存在在處理和加工期間生成塵埃和氣溶膠的危險，并隨之出現變態致敏的危險。總之，還有多肽塵埃或氣溶膠形式的溶解多肽的危險。因此，某些酶的釋放會導致可能的致敏并隨之導致變態反應。克服上述問題的其它方法是選擇生產來源于人的多肽，例如，在細菌、真菌、酵母或哺乳動物細胞培養物中。這可以減輕人所遇到的一些問題，但對動物則不然。另外，在許多情況下不能找到具有理想特性且來源于人的多肽，因此，不得不考慮其它來源。它也可以是人的多肽，其分子上的一個或幾個位置上作了改變，以產生想要的性能。它也可以是來自其它物種的分子，包括細菌、霉菌等。所有后一類產品都有在哺乳動物中進行免疫刺激的效力。降低變應原性的另一種方案是降低所述蛋白分子的大小(例如，見日本專利公開號4,112,753，或檢索公開號335,102)。然而，這種方案只有在所述蛋白的活性并不重要的場合才可行，或者在所述蛋白被降解但其活性依然被保存下來的罕見場合采用。蛋白質工程的應用，提出了可通過表位作圖隨后改變變應原表位來減弱蛋白的變應原性(見WO92/10755(NovoNordiskA/S))。該方法通常需要對生產和研究進行大的投入。在醫藥領域曾經提出過通過將聚合物分子同多肽結合以減弱多肽的免疫原性的方案。但這樣做通常會影響多肽與其它大分子結構的相互作用。這種綴合還可能產生新的特性例如，EP38154(BeechamGroup有限公司)中披露了將具有免疫抑制特性的聚肌氨酸同變應原綴合的方案。US專利4,179,337(Davis等)涉及非免疫原性多肽，如與聚乙二醇(PEG)或聚丙二醇結合的酶和肽激素。每摩爾多肽使用10-100摩爾的聚合物，而且至少保留15％的生理活性。另外，由于PEG綴合而增大了所述多肽的體積，循環的余隙時間得以延長。受保護的多肽以水溶液形式注射到哺乳動物的循環系統或肌內。通過皮膚內注射試驗評價免疫原性。US專利4,179,337涉及相應生理活性的治療應用和保留。在治療應用中，重要的是限制發生免疫原反應的危險，這種反應是因皮膚內、靜脈內或皮下注射變應原所致。不過，控制呼吸變應原并不重要。另外，與多肽綴合所需的聚合物量使得該方法成本很高。WO93/15189(Veronese等)涉及保持聚乙二醇修飾的蛋白酶的活性的方法，該方法是通過將所述蛋白酶與一種大分子化的抑制劑連接。這種綴合物可應用于醫學目的。業已發現，多肽與聚合物的接合一般會導致該多肽的活性減弱或引響該多肽與其底物之間的相互作用。EP183503(BeechanGroupPLC)披露了上述構思的一種發展，它提供了一種綴合物，該綴合物包括可以藥用的蛋白，其通過可逆的連接基與至少一種水溶性聚合物連接。GB專利1,183,257(Crook等)披露了通過三嗪環將酶與多糖綴合的化學方法。EP471125(Kanebo有限公司)披露了一種通過三嗪環同一種多肽連接的修飾蛋白酶，這樣一來可產生對抗原性和皮膚過敏性的抑制作用。所采用的多糖其平均分子量不低于10kDa。修飾蛋白酶表面氨基酸基團的修飾量不低于30％。一般認為，進入呼吸道的變應原其分子量必須低于約100kDa，以便能穿過質膜并引起變態反應。Folkeson等(ActaPhysiol.Scand，139，p.437-354，1990)證實，在滴入的蛋白標記的分子量與經呼吸道進入血流的轉移量(生物有效性)之間呈負相關。WO94/10191(NovoNordiskA/S)披露了一種生產低變應原性蛋白的方法，其中，單體型親代蛋白分子連接在一起形成低聚體。這種連接是通過諸如接頭或間隔分子之類的結構實現的，或是通過第一個單體的C-末端和第二個單體的N-末端之間的肽鍵將單體型分子連接在一起。EP215662(Masda，Hiroshi)涉及修飾的或未修飾的來自微生物的蛋白酶，它可用于諸如抗腫瘤劑之類的藥品中。對蛋白酶的修飾可以這樣進行例如，與糖結合，引入一個疏水聚合基團，與分子量低于2kDa的低分子量抗腫瘤劑綴合。聚合物的激活在文獻中對聚合物激活及蛋白綴合的方法及化學原理已作過深入的介紹。激活不溶性聚合物的常用方法包括用溴化氰、高碘酸鹽、戊二醛、雙環氧化物、表氯醇、二乙烯基砜、碳化二亞胺、磺酰鹵、三氯三嗪等激活官能團(見R.F.Taylor，(1991)，“Proteinimmobilisation.Fundamentalandapplications”，MarcelDekker，N.Y.；s.S.Wong，(1992)，“ChemistnyofProteinConjugationandCrosslinking”，CRCPress，BocaRaton；G.T.Hermanson等；(1993)，“ImmobilizedAffinityLigandTechniques”，AcademicPress，N.Y.)。上述方法中的一些涉及不可溶聚合物的激活，但也可應用于可溶性聚合物的激活，如高碘酸鹽、三氯三嗪、磺酰鹵、二乙烯基砜、碳化二亞胺等。所述官能團為聚合物上的氨基、羥基、硫羥基、羧基、醛基或巰基，而蛋白質上連接基團的選擇在選擇激活和綴合化學時必須考慮進去，這種選擇的組成一般為i)聚合物的活化，ii)綴合，和iii)殘余活性基團的封閉。關于活性聚乙二醇(PEGs)的合成已發表過幾篇綜述和專題研究(Harris，(1985)，JMS-REV.Macronol.Chem.Phys.C25，325-373；scouten，(1987)，MethodsinEnzymologyVol.135，Mosbach，K.，Ed.，AcademicPressOrlando，30-65；Wong等，(1992)，EnzymeMicrob.Technol.，14，866-874；Delgado等，(1992)，CriticalReviewsinTherapeuticDrugCarrierSystems，9，249-304；Zalipsky，(1995)，BioconjugateChem.，6，150-165)。聚合物的激活方法還披露于下列文獻中WO94/17039，US5,324,844，WO94/18247，WO94/04193，US5,219,564，US5，122,614，WO90/13540(Enzon)和US5,281,698(Cetus)，以及WO93/15189(Veronese)，還披露了活化聚合物與酶之間的綴合方法，所述的酶如凝固因子VIII(WO94/15625)，血紅蛋白(WO94/09027)、載氧分子(US4,412,989)、核糖核酸酶和超氧化物岐化酶(Veronese等，App.Biochem.Biotech.，11，P.141-45，1985)。相關的現有技術涉及減弱多肽、蛋白和/或酶在用于治療目的時的免疫反應或過敏性(變態反應)，這類反應與皮膚內、靜脈內或皮下出現的變應原相關。然而，現有技術與工業應用中出現的變應原無關，當直接用戶在使用時吸入或接觸到多肽時會引發潛在的變態反應，例如，在使用洗滌劑、清洗制劑、化妝品和其它個人護理品時。因此，希望能夠提供用于非治療用途的多肽、蛋白和/或酶，當其被吸入時具有減弱了的變態反應，而且，所述多肽能基本維持其催化活性。本發明現已驚人地提供具有減弱的變應原性、保留了催化活性的修飾多肽。首先，本發明涉及具有減弱的變應原性的多肽，它包括一種分子量在10-100kDa之間的親代多肽，該親代多肽與一種分子量在1-60kDa范圍內的聚合物綴合。在本發明的一種優選實施方案中，所述多肽是蛋白或酶。本發明還涉及用于生產所述具有減弱的變應原性的多肽的方法，包括將1-30個聚合物分子與一種親代多肽聚合的步驟。另外，本發明提供了包括所述多肽和/或其它酶/多肽和/或常用成分的組合物，所述常用成分例如用于包括洗碟洗滌劑和皂條的洗滌劑、家用物品、農用化學品、個人護理品(包括清洗制劑，如用于隱形眼鏡、潤膚劑、化妝品)、口服和皮膚用藥，提供了用于處理織物的組合物、用于生產食品，如用于焙烤，以及用于飼料的組合物。最后，本發明涉及將具有減弱的變應原性的多肽、蛋白或酶用于眾多的工業目的的用途。圖1是待在氣管內用酶進行處理的一只大鼠的截面圖。圖2表示在棕色挪威大鼠血清中IgE與修飾過的枯草蛋白酶Novo和親代枯草蛋白酶Novo的特異反應。圖3表示在棕色挪威大鼠血清中IgE與修飾過的Lipolase和親代Lipolase的特異反應。圖4表示在棕色挪威大鼠血清中IgE與修飾過的漆酶和親代漆酶的特異反應。圖5表示在棕色挪威大鼠血清中IgE與修飾過的Carezyme和親代Carezyme的特異反應。本發明人業已令人吃驚地成功提供了具有減弱的變應原性的修飾多肽，其中，其催化活性起碼被基本保留下來。本發明的上述具有減弱的變應原性的修飾多肽能解決上述問題中的一些，上述問題就是在若干非治療用途中的變應原被吸入時會引起變態反應。就非治療用途而言，必須強調的是，主要是吸入的變應原會引起變態反應的危險。因此，可以理解的是，本發明的主要優點是本發明人解決了多肽的眾多工業應用中的一些主要問題，如吸入問題，包括出現在氣管內和鼻內的變應原，這是變應原性方面的主要問題。這與現有技術解決方案不同，現有技術方案主要涉及當皮膚內、靜脈內或皮下出現的變應原成為主要問題時的治療用途。此外，變應原的吸入是更為敏感的問題。一般，當討論治療目的的生產時，其涉及的是公斤規模上的酶的生產，而工業目的的生產涉及的是好多個1000公斤規模上的生產。用于治療目的的技術并不總是能很好地應用于工業目的。“減弱的變應原性”是指與相應的親代多肽相比，當吸入本發明的修飾多肽時所產生的能導致變應狀態的IgE(對人而言，對特定動物而言則是具有相當作用的分子)的量降低了。下面對“免疫原”、“抗原”和“變應原”進行定義。“免疫原”是一個含義較寬的詞，它包括“抗原”和“變應原”。“免疫原”可定義為當進入動物，包括人體內時能激起免疫反應的物質。“抗原”是指那些在被識別為非自身分子后其本身能產生抗體的物質。另外，可將“變應原”定義為能通過IgE抗體(對人而言，對特定動物則為具有相當作用的分子)引起變態致敏或變態反應的抗原。如上所述，就包括用于工業目的的多肽在內的酶而言，區分能在諸如皮膚內引起變態反應的變應原和能通過接觸呼吸道里的細胞結合IgE而引起變態反應的呼吸道變應原是重要的，因為即使通過吸入試驗已引起了變態反應，皮內試驗也可能呈陰性。因此，變應原性的評估可以通過吸入試驗進行，比較氣管內(進入氣管)使用親代多肽和本發明的相應具有減弱的變應原性的修飾多肽的效果。現有多種用于評價多肽的變應原性的體外動物模型。這些模型中的一些為在人體中進行有害性評價提供了合適的基礎。合適的模型包括豚鼠模型和大鼠模型。所述模型能鑒定呼吸道變應原，其作用方式為能引發在預先敏化的動物體內誘發的反應。按照所述模型，將推定的變應原經氣管引入動物體內。一種合適的豚鼠品系-DunkinHartly品系，在產生變態反應時不是像人體那樣產生IgE抗體。然而，它能產生其它類型的抗體-IgG1A和IgG1B(例如，參見PrentΦ，AYLA，19，p.8-14，1991)，這些抗體在呼入包括酶在內的多肽時產生變態反應。因此，當采用DunkinHartley動物模型時，IgG1A和IgG1B的相對量是衡量變應原性水平的指標。適于在氣管內用多肽和酶處理的大鼠品系是棕色挪威品系。該棕色挪威品系在發生變態反應時產生IgE。在例22中所披露的本發明的驚人發現是，多肽，在特定情形下為酶的變應原性可通過提高所述酶的分子量而減弱，例如，通過將若干聚合物分子連接在所述多肽分子上。還可將其它諸如兔等類的其它動物用于比較研究。本發明的第一方面涉及具有減弱的變應原性的多肽，它包括一種分子量在10-100kDa之間的親代多肽，該多肽與一種分子量在1-60kDa范圍內的聚合物綴合。親代多肽根據本發明，親代多肽可以是能用于工業目的的任何多肽。其包括蛋白、酶、抗微生物多肽、配體、抑制劑、增強子和輔因子。在本發明的一種優選實施方案中，親代多肽是一種酶，它可選擇下文中提及的一組酶。親代蛋白酶親代蛋白酶(即按照國際生物化學和分子生物學聯合會(IUBMB)的建議(1992)可歸在酶分類號E.C.3.4之下的酶)包括該組里的蛋白酶。其例子包括是選自可歸入以下酶分類(E.C.)號之下的蛋白酶3.4.11(即所謂氨肽酶)，包括3.4.11.5(脯氨酰氨肽酶)、3.4.11.9(X-原氨肽酶)、3.4.11.10(細胞亮氨酰氨肽酶)、3.4.11.12(嗜熱氨肽酶)、3.4.11.15(賴氨酰氨肽酶)、3.4.11.17(色氨酰氨肽酶)、3.4.11.18(甲硫氨酰氨肽酶)。3.4.21(即所謂絲氨酸內肽酶)、包括3.4.21.1(胰凝乳蛋白酶)、3.4.21.4(胰蛋白酶)、3.4.21.25(黃瓜蛋白酶)、3.4.21.32(Brachyurin)、3.4.21.48(塞里維率(cerevisin))和3.4.21.62(枯草蛋白酶)；3.4.22(即所謂半胱氨酸內肽酶)，包括3.4.22.2(木瓜蛋白酶)、3.4.22.3(無花果蛋白酶)、3.4.22.6(木瓜凝乳蛋白酶)、3.4.22.7(蘿摩蛋白酶)、3.4.22.14(彌猴桃蛋白酶)、3.4.22.30(番木瓜蛋白酶)和3.4.22.31(菠蘿蛋白酶)；3.4.23(即所謂天冬氨酸內肽酶)，包括3.4.23.1(胃蛋白酶A)、3.4.23.18(曲酶屬胃蛋白酶I)、3.4.23.20(青霉屬胃蛋白酶)和3.4.23.25(酵母屬胃蛋白酶)；和3.4.24(即所謂金屬內肽酶)、包括3.4.24.28(Bacillolysin)。相關枯草蛋白酶的例子包括枯草蛋白酶BPN’、枯草蛋白酶amylosacchariticus、枯草蛋白酶168、枯草蛋白酶腸系膜輔肽酶(mesentericopeptidase)、Carlsberg枯草蛋白酶、枯草蛋白酶DY、枯草蛋白酶309、枯草蛋白酶147、thermitase、aqualysin、桿菌PB92蛋白酶、蛋白酶K、蛋白酶TW7、和蛋白酶TW3。上述易于獲得的商品化蛋白酶的具體例子包括Esperasa、Alcalase、Neutrase、Dyrazyme、Savinase、Pyrase、PancreaticTrypsinNovo(PTN)、Bio-FeedTMpro、Clear-LensPro(所有酶均可從NovoNordiskA/S購買)。其它商品化蛋白酶的例子包括由Gist-BrocadesN.V.出售的Maxtase、Maxacal、Maxapem，由SolvayetCie出售的Opticlean，和由GenencorInternational出售的Purafect。可以理解的是，蛋白酶的變體也可用作親代蛋白酶。所述蛋白酶變體的例子披露于以下文獻中EP130.756(Genentech)、EP214.435(Henkel)、WO87/04461(Amgen)、WO87/05050(Genex)、EP251.446(Genencor)、EP260.105(Genencor)、Thomas等，(1985)，Nature.318，P.375-376；Thomas等，(1987)，J.Mol.Biol.，193，pp.803-813；Russel等，(1987)，Nature，328，p.496-500；WO88/08028(Genex)；WO88/08033(Amgen)；WO89/06279(NoveNordiskA/S)；WO91/00345(NoveNordiskA/S)；EP525610(Solvay)和WO94/02618(Gist-BrocadesN.V.)。可按照如“MethodsofEnzymaticAnalysis”(第3版，1984，VerlagChemie，Weinheim，Vol.5)記載的方法測定蛋白酶的活性。親代脂酶親代脂酶(即按照IUBMB的推薦(1992)可歸入酶分類號E.C.3.1.1(羧酸酯水解酶)之下的酶)包括該組內的脂酶。其例子包括選自歸入以下酶分類(E.C.)號下的脂酶3.1.1(即所謂羧酸酯水解酶)，包括(3.1.1.3)三酰甘油酯脂酶、(3.11.4)磷脂酶A2。脂酶的例子包括來自以下微生物的脂酶。所標出的專利被收作本文的參考腐質霉屬(Humicola)，如短孢腐質霉(H.brevispora)、疏棉狀腐質霉(H.lanuginosa)、短腐質霉的熱變種(H.brevisvar.thermoidea)和H.insolens(US4,810,414)假單胞菌屬(Pseudomonas)、如草莓假單胞菌(Ps.fragi)、Ps.stutzeri、洋蔥假單胞菌(Ps.cepacia)和熒光假單胞菌(Ps.fiuorescens)(WO89/04361)、或Ps.plantarii或唐菖蒲假單胞菌(Ps.gladioli)(US4,950,417(Solvay酶))或產堿假單胞菌(Ps.alcaligenes)和類產堿假單胞菌(Ps.pseudoalcaligenes)(EP218,272)或門多薩假單胞菌(Ps.mendocina)(WO88/09367；US5,389,536)。鐮孢屬(Fusarium)、如尖鐮孢(F.oxysporum)(EP130,064)或皮塞腐皮鐮孢(F.solanipisi)(WO90/09446)。毛霉屬(Mucor)(也被稱為根毛霉屬(Rhizomucor))，如米黑毛霉(M.miehei)(EP238023)。毛桿菌屬(Chromobacterinm)(特別是粘稠色桿菌(C.viscosum))曲霉屬(Aspergillus)(特別是黑曲霉(A.niger))。假絲酵母屬(Candida)，例如，皺落假絲酵母(C.cylindracea)(也被稱為(C.rugosa))或南極假絲酵母(C.antarctica)(WO88/027775)或南極假絲酵母脂酶A或B(WO94/01541和WO89/02916)。地霉屬(Geotricum)，如白地霉(G.candidum)(Schimada等，(1989)，J.Biochem.，106，383-388)。青霉屬(Penicillium)，如沙門柏干酪青霉P.camembertii(Yamaguchi等，(1991)，Gene103，61-67)。Rhizopus，如R.delemar(Hass等，(1991)，Gene109，107-113)或R.niveus(Kugimiya等，(1992)Biosci.Biotech.Biochem.56，716-719)或R.oryzae。芽胞桿菌屬(Bacillus)、如枯草桿菌(B.subtilis)(Dartois等，(1993)，BiochemicaetBiophysicaacta1131，253-260)或嗜熱脂肪芽胞桿菌(B.stearothermophilus)(JP64/7744992)或短小芽胞桿菌(B.pumilus)(WO91/16422)。易獲得的商品化脂酶的具體例子包括Lipolase、LipolaseTMUltra、Lipozyme、Palatase、Novozym435，Lecitase(均可自NovoNordiskA/S購買)。其它脂酶的例子有購自Genencor國際公司的LumafastTM，門多薩假單胞菌脂酶，購自GistBrocades/Genencor國際公司的LipomaxTM，類產堿假單胞菌脂酶；購自Unilever的腐皮鐮孢脂酶(角質酶)；購自Solvay酶的芽胞桿菌脂酶。其它酶可自其它公司獲得。可以理解的是，脂酶的變體也可用作親代酶。例如，這種酶的例子披露于WO93/01285和WO95/22615中。可按照在“MethodsofEnzymaticAnalysis”(第3版，1984，VerlagChemie，Weinhein，Vol.4)中披露的方法或按照在AF95/5GB(可以向NovoNordiskA/S索取)中披露的方法測定脂酶的活性。親代氧化還原酶親代氧化還原酶(即按照IUBMB的推薦(1992)可歸入酶分類號E.C.l(氧化還原酶)之下的酶)包括該組內的氧化還原酶。其例子包括選自可歸入以下酶分類(E.C.)號的氧化還原酶甘油-3-磷酸脫氫酶(NAD+)(1.1.1.8)，甘油-3-磷酸脫氫酶〔NAD(P)+〕(1.1.1.94)，甘油-3-磷酸1-脫氫酶〔NADP〕(1.1.1.94)，葡萄糖氧化酶(1.1.3.4)，己糖氧化酶(1.1.3.5)，鄰苯二酚氧化酶(1.1.3.14)，膽紅素氧化酶(1.3.3.5)，丙氨酸脫氫酶(1.4.1.1)，谷氨酸脫氫酶(1.4.1.2)，谷氨酸脫氫酶〔NAD(P)+〕(1.4.1.3)，谷氨酸脫氫酶〔NADP+〕(1.4.1.4)，L-氨基酸脫氫酶(1.4.1.5)，絲氨酸脫氫酶(1.4.1.7)，纈氨酸脫氫酶〔NADP+〕(1.4.1.8)，亮氨酸脫氫酶(1.4.1.9)，甘氨酸脫氫酶(1.4.1.10)，L-氨基酸氧化酶(1.4.3.2)，D-氨基酸氧化酶(1.4.3.3)，L-谷氨酸氧化酶(1.4.3.11)，蛋白賴氨酸6-氧化酶(1.4.3.13)，L-賴氨酸氧化酶(1.4.3.14)，L-天冬氨酸氧化酶(1.4.3.16)，D-氨基酸脫氫酶(1.4.99.1)，蛋白二硫鍵還原酶(1.6.4.4)，硫氧還蛋白還原酶(1.6.4.5)，蛋白二硫鍵還原酶(谷胱甘肽)(1.8.4.2)，漆酶(1.10.3.2)，過氧化氫酶(1.11.1.6)，過氧化物酶(1.11.1.7)，脂氧合酶(1.13.11.12)，超氧化物岐化酶(1.15.1.1)。所述葡萄糖氧化酶可來自黑曲霉。所述漆酶可來自Polyporuspinsitus，嗜熱毀絲霉(Myceliophtorathermophila)、灰蓋鬼傘(Coprinuscinereus)、立枯絲核菌(Rhizoctoniasolani)、Rhizoctoniapraticola，Scytalidiumthermophilum和RhusVernicifera。膽紅素氧化酶可獲自疣孢漆斑菌(MyrothecheciumVerrucaria)。所述過氧化物酶可獲自大豆、辣根或灰蓋鬼傘。所述蛋白二硫鍵還原酶可以是丹麥專利申請No.768/93,265/94和264/94(NovoNordiskA/S)中任一次中提到的任一種還原酶，以上專利申請被收作本文的參考，所述還原酶包括來源于牛體內的蛋白二硫鍵還原酶，源于米曲霉(A.oryzae)或黑曲霉的蛋白二硫鍵還原酶，和源自大腸桿菌(E.coli)的DsbA或DsbC。易于獲得的商品化氧化還原酶的具體例子包括GluzymeTM(可從NovoNordiskA/S購買)。不過，其它氧化還原酶可從其它公司購買。可以理解的是，也可將氧化還原酶的變體用作親代酶。可按照在“MethodsofEnzymaticAnalysis”(第3版，1984，VerlagChemie，Weinheim，Vol.3)中披露的方法測定氧化還原酶的活性。親代糖酶親代糖酶可定義為所有能夠降解特別是5和6員環結構的糖鏈(如淀粉)的酶(即按照IUBMB的推薦(1992)可歸入酶分類號E.C.3.2(糖苷酸)下的酶)。還可歸入本發明的此類糖酶的有能夠將碳水化合物，如D-葡萄糖之類的六員環結構異構化為如D-果糖之類的五員環結構的酶。其例如包括選自歸入以下酶分類(E.C.)號下的糖酶α-淀粉酶(3.2.1.1)，β-淀粉酶(3.2.1.2)，葡聚糖1，4-α-葡糖苷酶(3.2.1.3)，纖維素酶(3.2.1.4)，內切-1，3(4)-β-葡聚糖酶(3.2.1.6)，內切-1，4-β-木聚糖酶(3.2.1.8)，葡聚糖酶(3.2.1.11)，殼多糖酶(3.2.1.14)，聚半乳糖醛酸酶(3.2.1.15)，溶菌酶(3.2.1.17)，β-葡糖苷酶(3.2.1.21)，α-半乳糖苷酶(3.2.1.22)，β-半乳糖苷酶(3.2.1.23)，淀粉-1，6-葡糖苷酶(3.2.1.33)，木聚糖-1，4-β-木糖苷酶(3.2.1.37)，葡聚糖內切-1，3-β-D-葡糖苷酶(3.2.1.39)，α-糊精內切-1，6-葡糖苷酶(3.2.1.41)，蔗糖α-葡糖苷酶(3.2.1.48)，葡聚糖內切-1，3-(α-葡糖苷酶(3.2.1.59)，葡聚糖1，4-β-葡糖苷酶(3.2.1.74)，葡聚糖內切-1，6-β-葡糖苷酶(3.2.1.75)，阿聚糖(arabinan)內切-1，5-α-阿糖苷酶(3.2.1.99)，乳糖酶(3.2.1.108)，殼多糖酶(Chitonanase)(3.2.1.132)和木糖異構酶(5.3.1.5)。有關糖酶的例子包括獲自Trichodenmaharzianum的α-1，3-葡聚糖酶；獲自一個擬青霉屬(Paecilomyces)菌株的α-1，6-葡聚糖酶；獲自枯草桿菌的β-葡聚糖酶；獲自Humicolainsolens的β-葡聚糖酶；獲自黑曲霉的β-葡聚糖酶；獲自一個木霉屬(Trichoderma)菌株的β-葡聚糖酶；獲自一個Oerskoviaxanthineolytica的β-葡聚糖酶；獲自黑曲霉的外切-1，4-α-D-葡糖苷霉(葡糖淀粉酶)；獲自枯草桿菌的α-淀粉酶；獲自解淀粉芽胞桿菌(B.amyloliquefaciens)的α-淀粉酶；獲自嗜熱脂肪芽胞桿菌的α-淀粉酶；獲自米曲酶的α-淀粉酶；獲自非致病性微生物的α-淀粉酶；獲自黑曲霉的α-半乳糖苷酶；獲自Humicolainsolens的戊聚糖酶、木聚糖酶、纖維二糖酶、纖維素酶、半纖維素酶；獲自Trichodermareesei的纖維素酶；獲自非致病性霉菌的纖維素酶；獲自黑曲霉的果膠酶、纖維素酶、阿糖酶(arabinase)、半纖維素酶；獲自薄青霉菌的葡聚糖酶；獲自非致病性霉菌的內切葡聚糖酶；獲自Bacillusacidopullyticus的支鏈淀粉酶；獲自脆壁克魯維酵母(Kluyveromycesfragilis)的β-半乳糖苷酶；獲自Trichodermareesei的木聚糖酶；易獲得的商品化糖酶的具體例子包括Alpha-GalTM，Bio-FeedTMAlpha，Bio-FeedTMBeta，Bio-FeedTMPlus，Bio-FeedTMPlus，Novozyme188，Carezyme，Celluclast，Cellusoft，Ceremyl，CitrozymTM，DenimaxTM，DezymeTM，DextrozymeTM，Finizym，FungamylTM，GamanaseTM，Glucanex，Lactozym，MaltogenaseTM，PentopanTM，pectinexTM，Promozyme，Pulpzyme，NovamylTM，Termamyl，AMG(AmyloglucosidaseNovo)，Maltogenase，Sweetzyone，Aquazym(所有的酶均可自NovoNordiskA/S購買)。其它糖酶可從其它公司購買。可以理解的是，也可將糖酶的變體用作親代酶。可按照“MethodsofEnzymaticAnalysis”中記載的方法(第3版，1984，VerlagChemie，Weinheim，vol.4)測定糖酶的活性。親代轉移酶親代轉移酶(即按照IUBMB的推薦(1992)可歸入酶分類號E.C.2之下的酶)包括該組內的轉移酶。親代轉移酶可以是以下轉移酶亞組內的任何轉移酶能轉移一個碳基的轉移酶(E.C.2.1)；能轉移醛或殘基的轉移酶(E.C.2.2)；酰基轉移酶(E.C.2.3)；葡糖基轉移酶(E.C.2.4)；能轉除甲基之外的烷基或芳基的轉移酶(E.C.2.5)；能轉移含氮基的轉移酶(2.6)。在一種優選實施方案中，親代轉移酶是一種轉谷氨酰胺酶E.C.2.3.2.13(蛋白谷氨酰胺μ-谷氨酰轉移酶)。轉谷氨酰胺酶是能夠催化酰基轉移反應的酶，在該反應中，一個肽結合的谷氨酰胺殘基的γ-羧基酰胺基團是酰基供體。多種化合物里的伯氨基可以作為酰基受體，從而形成肽結合谷氨酸的單取代γ-酰胺。當肽鏈中賴氨酸的ε-氨基作為酰基受體時，所述轉移酶形成分子內或分子間的γ-谷氨酰-ε-賴氨酰交聯鍵。轉谷氨酰胺酶的例子披露于未決丹麥專利申請(DK)No.990/94(NovoNordiskA/S)。親代轉谷氨酰胺酶可來源于人、動物(如牛)或微生物。所述親代轉谷氨酰胺酶的例子有來自動物的轉谷氨酰胺酶，FXIIIa；來自多頭絨泡菌(PhysarumPolycephalum)的微生物轉谷氨酰胺酶(Klein等，JournalofBacteriology，Vol.174，p.2599-2605)；來自鏈霉菌(Streptomycessp.)包括淡紫色鏈霉菌(S.lavendulae)、利嘉鏈霉菌(S.lydicus)(以前的S.libani)的轉谷氨酰胺酶；和輪枝鏈霉菌(Streptoverticilliumsp.)，包括S.mobaraense、S.cinnamoneum和S.griseocarneum的轉谷氨酰胺酶(Motoki等，US5,156,956；Andou等，US5,252,469；Kaempfer等，JournalofGeneralMicrobiology，Vol.137，p.1831-1892；Ochi等，InternationalJournalofSystematicBacteriologo，Vol.44，p.285-292；andou等，US5,252,469；Williams等，JournalofGeneralMicrobiology，Vol.129，p.1743-1813)。可以理解的是，轉移酶變體也可用作親代酶。可按照“MethodsofEnzymaticAnalysis”(第3版，1984，VerlagChemie，Weinheim，Vol.1-10)中披露的方法測定轉谷氨酰胺酶的活性。親代植酸酶親代植酸酶可歸入按照IUBMB的推薦(1992)的酶分類號E.C.3.1.3(磷酸單酯水解酶)下的酶類。植酸酶是由微生物產生的酶，它能催化植酸向肌醇和無機磷的轉化。能產生植酸酶的微生物包括細菌，如枯草桿菌、納豆芽胞桿菌(B.natto)和假單胞菌；酵母，如釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)；和真菌，如黑曲霉、無花果曲霉(Aspergillusficuum)，泡盛曲霉(A.awamori)、米曲霉、土曲霉(A.terreus)或構巢曲霉(A.nidulans)及各種其它曲霉菌。親代植酸酶的例子包括選自歸入以下酶分類(E.C.)號下的植酸酶3-植酸酶(3.1.3.8)和6-植酸酶(3.1.3.26)。可按照“MethodsofEnzymaticAnalysis”(第3版，1984，VerlagChemie，Weinheim，Vol.1-10)中披露的方法測定植酸酶的活性，或按照在EP-A1-0420358(例2A)中披露的方法測定。親代抗微生物多肽親代抗微生物多肽可以是任何具有抗微生物活性的多肽，如抗真菌活性、抗細菌活性和/或抗殺蟲劑活性。所述多肽也可具有其它活性、如酶解活性。本發明的抗微生物多肽的例子包括在WO94/01459中披露的來自霉菌的彎孢屬(Curvularia)的具有殺真菌活性的多肽(NovoNordiskA/S)；在EP403.458(KabigenAB)中披露的抗細菌多肽；在WO92/15691(ImperialChemInd.PLC)中披露的從Mirabilis種子中提取的抗微生物蛋白；在WO92/22578(Boman等)中披露的從豬小腸提取物中分離的抗細菌多肽；披露于JP-60130599中的由漢遜酵母菌(Hansenulaspp.)產生的具有酵母致死作用的多肽；披露于US5,348,865(JinRoLTD)中的Phytolaccainsularis抗病毒蛋白，可將其用作抗微生物劑；披露于US5,354,681(NovoIndustriA/S)中的獲自Nocardiopsisdassonvillei的溶菌酶制劑。其它抗微生物多肽的例子有爪蟾抗菌肽、protegrin、防衛素、假霉菌素(pseudomycin)、變溶菌素和N-乙酰溶菌酶。本發明的相關親代多肽、蛋白或酶是能引起變態反應的多肽、蛋白或酶。據信，所述多肽、蛋白或酶的分子量在10-100kDa之間，最好在15-80kDa之間，或在20-70kDa之間，或在25-60kDa之間，或在28-55kDa之間，或在30-50kDa之間。采用不同于親代酶的具有其它連接基團，如氨基的變體也落入本發明的范圍。采用這種變體是有利的，因為這種變體能更有效地防止所述酶被免疫系統識別出來。聚合物合適的聚合物的例子包括選自下列一組聚合物中的聚合物聚亞烷基氧化物(PAO)，如聚亞烷基二醇(PAG)，包括聚乙二醇(PEG)、甲氧基聚乙二醇(mPEG)和聚丙二醇，PEG-縮水甘油醚(Epox-PEG)，PEG-氧羰基咪唑(CDI-PEG)，Star-PEGs，BrancedPEGs，聚乙烯醇(PVA)，聚羧酸酯，聚乙烯吡咯烷酮，聚-D，L-氨基酸，葡聚糖，包括羧甲基葡聚糖，纖維素，包括甲基纖維素，羧甲基纖維素，乙基纖維素，羥乙基纖維素，羧乙基纖維素和羥丙基纖維素，脫乙酰殼多糖的水解產物，淀粉如羥乙基淀粉和羥丙基淀粉，糖原，瓊脂糖及其衍生物，瓜耳膠，支鏈淀粉，菊粉，噸膠，角叉菜膠，果膠，藻膠水解產物和生物聚合物。StarPEGs是多臂的PEG分子，它是由一個交聯的二乙烯基苯核心通過乙醚分子的聚合而生成的(Gnanou等，(1988)，Makromol.Chem.198，2885；Rein等，(1993)，ActaPolymer，44，225)。StarPEGs和BrancedPEGs可從ShearwaterInc.USA購買)。Epox-PEGs(或PEG-縮水甘油醚)是一種在其末端有一個環氧化物作為活性偶聯基團的PEGs。它能與蛋白的氨基、羥基和硫羥基發生反應/結合(Elling和Kula，(1991)，Biotech.Appl.Biochem.13，354)。Epox-PEG可從ShearwaterInc.購買，例如，以甲氧基-PEG-環氧化物和PEG-(環氧化物)2形式獲得。CDI-PEGs(或PEG氧羰基咪唑)是以一個羰基咪唑作為活性端基的PEGs。所述活性/活化結合基通過氨基甲酸乙酯鍵與蛋白綴合(Beauchamp等，(1993)，Anal.Biochem.，131，125)。CDI-PEGs可從ShearwaterInc.USA購買，例如，以甲氧基-PEG-CDI和PEG-(CDI)2形式獲得。上述合適的易于獲得的聚合物(其中一些為活化聚合物)的例子包括聚乙二醇(如購自Merck)，其平均分子量在大約1-35kDa之間；甲氧基聚乙二醇(如，購自Sigma)，其平均分子量約為5kDa；和葡聚糖(如購自Fluka)，其平均分子量在約1-60kDa之間，甚至更多。盡管所有上述聚合物均可用于本發明中，但優選采用甲氧基聚乙二醇。這是因為甲氧基乙二醇只有一個能與多肽綴合的活性末端。因此，交聯的危險不那么明顯。另外，它還使得該產品更均勻，而且聚合物與多肽的反應也更容易控制。按照本發明，可采用分子量(Mr)在1-60kDa之間的聚合物。優選分子量(Mr)在2-35kDa之間的聚合物，尤其是分子量在2-25kDa之間的聚合物，如大約為5kDa或大約為15kDa。注意，本申請所提到的聚合物分子量都是平均分子量。在本發明的一種優選實施方案中，所述聚合物是一種聚乙二醇(PEG)，如甲氧基聚乙二醇(mPEG)。聚合物的活化如果用于同多肽綴合的聚合物是非活性的，就必須用合適方法將其活化。在“發明背景”部分提及的方法是可用于本發明的方法的例子。不過，最適方法可隨分子不同而不同，這取決于例如多肽鏈上所具備的接合基團的不同。在以下的其它方法中，將對合適的聚合物活化方法加以簡要說明。不過，應當理解的是，其它方法也可以采用。聚合物與酶的游離酸基的結合可以借助二酰亞胺實現，例如，氨基-PEG或肼-PEG(Pollak等，(1976)，J.Amr.Chem.Soc.98，289-291)或重氮乙酸酯/酰胺(Wong等，(1992)，同上)。一般，聚合物同羥基的結合是極為困難的，因為這種結合必須在水中進行。一般水解反應要超過與羥基的反應。聚合物與游離巰基的結合可通過特殊基團，如馬來酰亞胺基或鄰吡啶基二硫化物實現。乙烯砜(US5,414,135，(1995)，Snow等)特選巰基，但其選擇性不如所提到的其它基團強。多肽鏈上可及的精氨酸殘基可由包括兩個鄰位羰基的基團定向結合。還可采用涉及將親電子的活性PEGs與賴氨酸的氨基連接的技術。許多常見的醇的離去基團形成胺鍵。例如，可采用磺酸烷基酯，如三甲苯磺酸酯(tresylates)(Nilsson等，(1984)，MethodsinEnzymologyVol.104，Jacoby，W.B.，Ed.，AcademicBressOrlando，P.56-66；Nilsson等，(1987)，MethodsinEnzymologyVol.135；Mosbach，K.，Ed.；AcademicPressOrlando，pp.65-79；scouten等，(1987)，MethodsinEnzymologyVol.135，Mosbach，K.，Ed.，AcademicPressOrlando，1987；pp.79-84；Crossland等，91971)，J.Amr.Chem.Soc.1971，93，pp.4217-4219)，甲磺酸酯(mesylates)(Harris，(1985)，同上；Harris等，(1984)，J.Polym.Sci.Polym.Chem.Ed.22，pp341-352)，芳基磺酸酯，如甲苯磺酸酯和磺酸對硝基苯酯。有機磺酰氯，如三氟乙磺酰氯能將多種聚合物，如PEG上的羥基轉化成良好的離去基團(磺酸酯)，當該基團與多肽上的親核體，如氨基反應時可在聚合物和多肽之間形成穩定的連鍵。除了高綴合產率之外，反應條件總體上是溫和的(中性或稍偏堿性的pH，以避免變性并很少或不破壞其活性)，并能滿足對多肽無破壞性的要求。甲苯磺酸鹽比甲磺酸鹽更為活躍，但也更不穩定，能分解成PE，二噁烷和磺酸(Zalipsky，(1995)，同上)。環氧化物也可用于產生胺鍵，但不如上述基團活躍。將PEG轉化成氯甲酸酯與碳酰氯，能產生與細胞溶素的甲氨酸酯連鍵。這一過程可以很多變型進行，用N-羥基琥珀酰亞胺(US5,122,614，(1992)，Zalipsky；Zalipsky等，(1992)，Biotechnol-Appl.Biochem.，15，p.100-114；Monfardini等，(1995)，BioconjugateChem.6，62-60)、咪唑(Allen等，(1991)，Carbohydr.Res.213，pp309-319)、對硝基苯酚、DMAP(EP632082A1(1993)，Looze，Y.)等取代氯。其衍生物通常是用氯甲酸酯與想要的離去基團反應制成的。所有這些基團形成與肽的甲氨酸酯連鍵。另外，可將異氰酸鹽和異硫氰酸鹽分別用于產生脲和硫脲。可以用上面提到的離去基團和環狀亞胺座(thrones)(US5,349,001，(1994)，Greenwald等)由PEG酸獲得酰胺。這種化合物的活性極高，但也可能使得水解作用加快。也可采用與琥珀酐反應制成的PEG琥珀酸酯，由此產生的酯基，使得所形成的綴合更易遭受水解(US5,122,614，(1992)，Zalipsky)。該基團能被N-羥基琥珀酰亞胺活化。另外，還可引入一個特殊的接頭。最古老的一種是氰尿酰氯(Abuchowski等，(1997)，J.Biol.Chem.，252，3578-3581；US4,179,337，(1979)，Davis等；Shafer等，(1986)，J.Polym.Sci.Polym.Chem.Ed.，24，375-378)。將PEG與一種芳香胺結合，隨后再進行重氮化，能產生一種極為活躍的重氮鹽，該重氮鹽可在原位與肽發生反應。通過使PEG的一種吖內酯衍生物反應也可獲得酰胺鍵(US5,321,095，(1994)，Greenwald，R.B.)從而引入另一個酰胺鍵。由于某些肽中并不是含有很多賴氨酸，因此，將一個以上的PEG與同一個賴氨酸連接是有利的。例如，可以用1，3-二氨基-2-丙醇實現上述目的。PEGs也可通過甲氨酸酯連鍵與多肽上的氨基結合(WO95/11924，Greenwald等)。也可將賴氨酸殘基用作主鏈。綴合物按照本發明，修飾多肽綴合物的總分子量在50-500kDa范圍內，較好為50-400kDa，更好為50-250kDa，尤其是100-250kDa，如80-200kDa。本發明的修飾多肽具有高度穩定性。對于包括個人護理應用在內的大部分用途來說，所述修飾酶最好不可逆地與聚合物綴合，從而使得該產品具有極微弱的解離傾向，這種解離會導致回復到能引起變態反應的狀態。然而，在其它場合下，理想的是在生產和/或散裝狀態下酶保持與聚合物綴合，隨后當該酶不再有接觸人或動物的危險時解離。本發明綴合的修飾多肽的解離可通過物理條件活化，如pH、離子強度、溫度、氧化勢或還原勢等。其例子之一是溶解一種洗滌劑配方時解離。另外，特殊化合物的存在也會導致其解離成諸如綴合度較小的分子和/或親代形式的分子。尤其是當多肽、蛋白或酶在綴合形式下活性減弱時，解離可能是有利的。本發明還涉及一種用于生產具有減弱的變應原性的多肽的方法，該方法包括將親代多肽與1-30個聚合物分子綴合的步驟，特別與1-25個，如1-10個聚合物分子綴合。可用于本發明中的所述聚合物的例子如上文所述。理想的是，每個多肽分子綴合1-25個聚合物分子。這一數量低于相關現有技術中的量。因此，聚合物方面的費用得以降低。它還在一定程度上使多肽、蛋白或酶的活性基本得到維持，正如所預料的，其活性與綴合在多肽鏈上的聚合物的數量和大小成反比例地變化。按照本發明，多肽活性可保留5％以上，在大多數情況下保留大約20-50％，50-70％較好，70-80％更好，可高達80-90％，甚至達100％。組合物本發明還涉及一種包括至少一種本發明的多肽、蛋白或酶的組合物。該組合物還可以包括其它多肽、蛋白或酶和/或常用成分，所述常用成分用于例如包括皂條的洗滌劑、家用物品、農用化學品、個人護理品，如洗滌制劑，例如用于隱形眼鏡、潤膚劑、化妝品、口服和皮膚用藥物，還涉及處理織物用的組合物，用于生產食品，如烘烤和飼料等的組合物。所述多肽/蛋白/酶的例子包括具有蛋白酶、脂酶、氧化還原酶、糖酶、轉移酶、如轉谷氨酰胺酶、植酸酶和/或抗微生物多肽活性的酶。這些酶可以活性減弱的綴合物形式存在。按照本發明，還可組合使用具有相同活性和不同特異性的綴合酶。洗滌劑組合物如果本發明的多肽是一種酶，通常可將其用在洗滌劑組合物中。它可以以無粉塵顆粒、穩定化液體或被保護酶的形式包含在所述洗滌劑組合物中。無粉塵顆粒可按照披露于US4,106,991和4,661,452(均屬NovoIndustriA/S)中的方法生產，并可選擇性地按照本領域的公知方法進行包衣。蠟質包衣材料的例子包括平均分子量為1000-20000的聚(環氧乙烷)制品(聚乙二醇，PEG)；具有16-50個環氧乙烷單位的乙氧基化壬基酚；乙氧基化脂族醇，其中，該醇含12-20個碳原子，并且有15-80個環氧乙烷單位；脂族醇；脂肪酸；和脂肪酸的單-、雙-和三甘油酯。在專利GB1483591中披露了適用于流化床技術的成膜包衣材料的例子。可將液體酶制劑穩定化，例如，可根據已建立的方法通過添加多羥基化合物，如聚丙二醇，糖或糖醇，乳酸或硼酸的方式將其穩定化。其它的酶穩定劑在本領域中廣為人知。可按照披露于EP238,216中的方法制備被護酶。該洗滌劑組合物可以為任何常見形式，例如，為粉狀、顆粒狀、糊狀或液體。液體洗滌劑可以是含水的或不含水的，含水的液體洗滌劑通常含有高達70％的水和0-30％有機溶劑。所述洗滌劑組合物含有一種或幾種表面活性劑，各自為陰離子型、非離子型、陽離子型或兩性離子型。該洗滌劑通常含有0-50％的陰離子表面活性劑，如直鏈烷基苯磺酸鹽(LAS)、α-烯烴磺酸鹽(AOS)、烷基硫酸鹽(脂族醇硫酸鹽)(AS)、脂肪醇乙氧基硫酸鹽(AEOS或AES)、仲烷基磺酸鹽(SAS)、α-磺基脂肪酸甲基酯，烷基-或烯基琥珀酸，或皂。它還可以含有0-40％的非離子型表面活性劑，如脂肪醇乙氧基化物(AEO或AE)、羧基化脂肪醇乙氧基化物、壬基酚乙氧基化物、烷基聚糖苷、烷基二甲基胺氧化物、乙氧基化脂肪酸單乙醇酰胺、脂肪酸單乙醇酰胺，或多羥基烷基脂肪酸酰胺(如在WO92/06154中所披露的)。所述洗滌劑組合物還可以包括-種或幾種其它的酶，如蛋白酶、淀粉酶、脂酶、角質酶、纖維素酶、過氧化物酶、氧化酶，以及其它的抗微生物的多肽。所述洗滌劑可以含有1-65％的洗滌助劑或配位劑，如沸石、焦磷酸鹽、三磷酸鹽、磷酸鹽、檸檬酸鹽、次氮基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亞乙基三胺五乙酸(DTMPA)、烷基-或烯基琥珀酸、可溶性硅酸鹽或層狀硅酸鹽(如購自Hoechst的SKS-6)。所述洗滌劑也可以是未復配的，如基本上無洗滌助劑。所述洗滌劑可包括一種或幾種聚合物。聚合物的例子包括羧甲基纖維素(CMC)、聚(乙烯基吡咯烷酮)(PVP)、聚乙二醇(PEG)、聚(乙烯基醇)(PVA)、聚羧酸酯，如聚丙烯酸酯，馬來酸/丙烯酸共聚物和十二烷基異丁烯酸/丙烯酸共聚物。所述洗滌劑可以包括一個漂白系統，該系統包括一個H2O2源，如過硼酸鹽或過碳酸鹽，它可以與一種過酸生成漂白激活劑，如四乙酰乙二胺(TAED)或壬酰基苯酚磺酸鹽(NOBS)混合。另外，該漂白系統可包括諸如酰胺、酰亞胺或砜之類的過氧酸。所述包括本發明多肽的洗滌劑組合物可以用常見的穩定劑穩定，例如，多羥基化合物，如丙二醇或甘油、糖或糖醇、乳酸、硼酸或硼酸衍生物，如芳族硼酸酯，而且，該組合物可以按照在WO92/19709和WO92/19708中披露的方法配制。所述洗滌劑還可以含有其它的常見洗滌成分，例如織物調理劑，包括粘土、泡沫促進劑、抑泡劑、抗腐蝕劑、污垢懸浮劑、抗污垢再沉積劑、染料、殺菌劑、熒光增白劑或香料。pH(在使用濃度下在水溶液中測得)通常為中性或堿性，例如在7-11范圍內。本發明范圍內的洗滌劑組合物的具體形式包括1)一種制成顆粒狀的洗滌劑組合物，其堆積密度至少為600g/l，它含有-直鏈烷基苯磺酸鹽(以酸計算)7-12％-脂肪醇乙氧基硫酸鹽(如C12-18醇，1-1-4％2EO)或烷基硫酸鹽(如C16-18)-脂肪醇乙氧基化物(如C14-15醇，7EO)5-9％-碳酸鈉(Na2CO3)14-20％-可溶性硅酸鹽(Na2O，2SiO2)2-6％-沸石(NaAlSiO4)15-22％-硫酸鈉(Na2SO4)0-6％-檸檬酸鈉/檸檬酸(C6H5Na3O7/C6H8O7)0-15％-過硼酸鈉(NaBO3·H2O)11-18％-TAED2-6％-羧甲基纖維素0-2％-聚合物(如馬來酸/丙烯酸共聚物，0-3％PVP、PEG)-酶0-5％-微量成分(如抑泡劑、香料、熒光增白劑0-5％光漂白劑)2)一種制成顆粒狀的洗滌劑組合物，其堆積密度至少為600g/l，它含有-直鏈烷基苯磺酸鹽(以酸計算)6-11％-脂肪醇乙氧基硫酸鹽(如C12-18醇，1-3％1-2EO)或烷基硫酸鹽(如C16-18)-脂肪醇乙氧基化物(如C14-15醇，7EO)5-9％-碳酸鈉(Na2CO3)15-21％-可溶性硅酸鹽(Na2O，2SiO2)1-4％-沸石(NaAlSiO4)24-34％-硫酸鈉(Na2SO4)4-10％-檸檬酸鈉/檸檬酸(C6H5Na3O7/C6H8O7)0-15％-羧甲基纖維素0-2％-聚合物(如馬來酸/丙烯酸共聚物，PVP，PEG)1-6％-酶0-5％-微量成分(如抑泡劑、香料)0-5％3)一種制成顆粒狀的洗滌劑組合物，其堆積密度至少為600g/l，它含有-直鏈烷基苯磺酸鹽(以酸計算)5-9％-脂肪醇乙氧基化物(如C12-15醇，7EO)7-14％-皂，如脂肪酸(如C16-22脂肪酸)1-3％-碳酸鈉(Na2CO3)10-17％-可溶性硅酸鹽(Na2O，2SiO2)3-9％-沸石(NaAlSiO4)23-33％-硫酸鈉(Na2SO4)0-4％-過硼酸鈉(NaBO3·H2O)8-16％-TAED2-8％-膦酸鹽(如EDTMPA)0-1％-羧甲基纖維素0-2％-聚合物(如馬來酸/丙烯酸共聚物，PVP，PEG)0-3％-酶0-5％-微量成分(如抑泡劑，香料，熒光增白劑)0-5％4)一種制成顆粒狀的洗滌劑組合物，其堆積密度至少為600g/l，它包括-直鏈烷基苯磺酸鹽(以酸計算)8-12％-脂肪醇乙氧基化物(如C12-15醇，7EO)10-25％-碳酸鈉(Na2CO3)14-22％-可溶性硅酸鹽(Na2O，2SiO2)1-5％-沸石(NaAlSiO4)25-35％-硫酸鈉(Na2SO4)0-10％-羧甲基纖維素0-2％-聚合物(如馬來酸/丙烯酸共聚物，PVP，PEG)1-3％-酶0-5％-微量成分(如抑泡劑，香料)0-5％5)一種含水液體洗滌組合物，包括-直鏈烷基苯化物(以酸計算)15-21％-脂肪醇乙氧基化物(如C12-15醇，12-18％7EO或C12-15醇，5EO)-皂，如脂肪酸(如油酸)3-13％-烯基琥珀酸(C12-14)0-13％-氨基乙醇8-18％-檸檬酸2-8％-膦酸鹽0-3％-聚合物(如PVP，PEG)0-3％-硼酸鹽(B4O7)0-2％-乙醇0-3％-丙二醇8-14％-酶0-5％-微量成分(如分散劑，抑泡劑，香料，熒光增白劑)0-5％6)一種水結構液體洗滌劑組合物，包括-直鏈烷基苯磺酸鹽(以酸計算)15-21％-脂肪醇乙氧基化物(如C12-15醇，3-9％7EO或C12-15醇，5EO)-皂，如脂肪酸(如油酸)3-10％-沸石(NaAlSiO4)14-22％-檸檬酸鉀9-18％-硼酸鹽(B4O7)0-2％-羧甲基纖維素0-2％-聚合物(如PVP，PEG)0-3％-粘固用聚合物，如十二烷基異丁烯0-3％酸/丙烯酸共聚物；摩爾比25∶1；MW3800-甘油0-5％-酶0-5％-微量成分(如分散劑，抑泡劑，香料，熒光增白劑)0-5％7)一種制成顆粒狀的洗滌劑組合物，其堆積密度至少為600g/l，它包括-脂肪醇硫酸鹽5-10％-乙氧基化脂肪酸單乙醇酰胺3-9％-皂，如脂肪酸0-3％-碳酸鈉(Na2CO3)5-10％-可溶性硅酸鹽(Na2O，2SiO2)1-4％-沸石(NaAlSiO4)20-40％-硫酸鈉(Na2SO4)2-8％-過硼酸鈉(NaBO3·H2O)12-18％-TAED2-7％-聚合物(如馬來酸/丙烯酸共聚物，PEG)1-5％-酶0-5％-微量成分(如熒光增白劑，抑泡劑，香料)0-5％8)一種制成顆粒狀的洗滌劑組合物，包括-直鏈烷基苯磺酸鹽(以酸計算)8-14％-乙氧基化脂肪酸單乙醇酰胺5-11％-皂，如脂肪酸0-3％-碳酸鈉(Na2CO3)4-10％-可溶性硅酸鹽(Na2O，2SiO2)1-4％-沸石(NaAlSiO4)30-50％-硫酸鈉(Na2SO4)3-11％-檸檬酸鈉(C6H5Na3O7)5-12％-聚合物(如PVP，馬來酸/丙烯酸共聚物，PEG)1-5％-酶0-5％-微量成分(如抑泡劑，香料)0-5％9)一種制成顆粒狀的洗滌劑組合物，包括-直鏈烷基苯磺酸鹽(以酸計算)6-12％-非離子型表面活性劑1-4％-皂，如脂肪酸2-6％-碳酸鈉(Na2CO3)14-22％-沸石(NaAlSiO4)18-32％-硫酸鈉(Na2SO4)5-20％-檸檬酸鈉(C6H5Na3O7)3-8％-過硼酸鈉(NaBO3·H2O)4-9％-漂白激活劑(如NOBS或TAED)1-5％-羧甲基纖維素0-2％-聚合物(如聚羧酸酯或PEG)1-5％-酶0-5％-微量成分(如熒光增白劑，香料)0-5％10)一種水成液體洗滌劑組合物，包括-直鏈烷基苯磺酸鹽(以酸計算)15-23％-脂肪醇乙氧基硫酸鹽(如C12-15醇，2-3EO)8-15％-脂肪醇乙氧基化物(如C12-15醇，3-9％7EO，或C12-15醇，5EO)-皂，如脂肪酸(如月桂酸)0-3％-氨基乙醇1-5％-檸檬酸鈉5-10％-水溶助長劑(如甲苯磺酸鈉)2-6％-硼酸鹽(B4O7)0-2％-羧甲基纖維素0-1％-乙醇1-3％-丙二醇2-5％-酶0-5％-微量成分(如聚合物，分散劑，0-5％香料，熒光增白劑)11)一種水成液體洗滌劑組合物，包括-直鏈烷基苯磺酸鹽(以酸計算)20-32％-脂肪醇乙氧基化物(如C12-15醇，6-12％7EO，或C12-15醇，5EO)-氨基乙醇2-6％-檸檬酸8-14％-硼酸鹽(B4O7)1-3％-聚合物(如馬來酸/丙烯酸共聚物，粘固用聚合0-3％物，如十二烷基異丁烯酸/丙烯酸共聚物)-甘油3-8％-酶0-5％-微量成分(如水溶助長劑，分散劑，香料，熒光增白劑)0-5％12)一種制成顆粒狀的洗滌劑組合物，其堆積密度至少為600g/l，它包括-陰離子型表面活性劑(直鏈烷基苯磺酸鹽，烷基25-40％磺酸鹽，α-烯烴磺酸鹽，α-磺基脂肪酸甲基酯，烷基磺酸鹽，皂)-非離子型表面活性劑(如脂肪醇乙氧基化物)1-10％-碳酸鈉(Na2CO3)8-25％-可溶性硅酸鹽(Na2O，2SiO2)5-15％-硫酸鈉(Na2SO4)0-5％-沸石(NaAlSiO4)15-28％-過硼酸鈉(NaBO3·4H2O)0-20％-漂白激活劑(TAED或NOBS)0-5％-酶0-5％-微量成分(如香料，熒光增白劑)0-3％13)在1)-12)中所公開的洗滌劑配方，其中，全部或部分直鏈烷基苯磺酸鹽被(C12-18)烷基硫酸鹽替代。14)一種制成顆粒狀的洗滌劑組合物，其堆積密度至少為600g/l，它包括-(C12-C18)烷基硫酸鹽9-15％-脂肪醇乙氧基化物3-6％-聚羥基烷基脂肪酸酰胺1-5％-沸石(NaAlSiO4)10-20％-層狀二硅酸鹽(如購自Hoechst的SK56)10-20％-碳酸鈉(Na2CO3)3-12％-可溶性硅酸鹽(Na2O，2SiO2)0-6％-檸檬酸鈉4-8％-過碳酸鈉13-22％-TAED3-8％-聚合物(如聚羧酸酯和PVP)0-5％-酶0-5％-微量成分(如熒光增白劑，光漂白劑，0-5％香料，抑泡劑)15)一種制成顆粒狀的洗滌劑組合物，其堆積密度至少為600g/l，它包括-(C12-C18)烷基硫酸鹽4-8％-脂肪醇乙氧基化物11-15％-皂1-4％-沸石MAP或沸石A35-45％-碳酸鈉(Na2CO3)2-8％-可溶性硅酸鹽(Na2O，2SiO2)0-4％-過碳酸鈉13-22％-TAED1-8％-羧甲基纖維素0-3％-聚合物(如聚羧酸酯和PVP)0-3％-酶0-5％-微量成分(如熒光增白劑，膦酸鹽，香料)0-3％16)在1)-15)中所公開的洗滌劑配方，它含有一種穩定化的或包衣的過酸，或作為一種添加成分或作為一種已知漂白系統的替代品。17)在1)、3)、7)、9)和12)中所公開的洗滌劑組合物，其中，過硼酸被過碳酸所替代。18)在1)、3)、7)、9)、12)、14)和15)中所公開的洗滌劑組合物，它還含有一種錳催化劑。該錳催化劑可以是bleaching”，Nature，369，p.637-639，1994中的化合物之一。19)洗滌劑組合物，被制成一種無水洗滌劑液，它包括一種液體非離子型表面活性劑，如直鏈烷氧基化伯醇，一個助劑系統(如磷酸鹽)、酶和堿。該洗滌劑還可以包括陰離子型表面活性劑和/或漂白系統。本發明的酶可以在洗滌劑中以常用的濃度摻入。在本發明的洗滌劑組合物中，所述具有減弱的變應原性的酶能以相當于每升洗滌液0.001-100mg酶的用量加入。洗碟用組合物另外，本發明的修飾酶還可用于洗碟用洗滌劑中。洗碟用組合物包括一種表面活性劑，它可以是陰離子型、非離子型、陽離子型、兩性離子型或以上類型的組合。該洗滌劑含有0-90％的非離子型表面活性劑，如低泡至無泡乙氧基化、丙氧基化直鏈脂肪醇。所述洗滌劑組合物還可以含有無機和/或有機類洗滌助劑鹽。洗滌助劑可分為含磷型和無磷型。該洗滌劑組合物通常含有1-90％的洗滌助劑。當存在含磷的無機堿性洗滌助劑時，其例子包括水溶性鹽，特別是堿金屬焦磷酸鹽、正磷酸鹽和多磷酸鹽。當存在含磷的有機堿性洗滌助劑時，其例子包括水溶性膦酸鹽。當存在無磷無機助劑時，其例子包括水溶性堿金屬碳酸鹽、硼酸鹽和硅酸鹽以及各種類型的水不溶性結晶或非晶形硅鋁酸鹽，其中，沸石是最廣為人知的代表。合適的有機助劑的例子包括堿金屬、銨和取代銨、檸檬酸鹽、琥珀酸鹽、丙二酸鹽、脂肪酸磺酸鹽、羧甲氧基琥珀酸鹽、聚乙酸銨、羧酸鹽、聚羧酸鹽、氨基聚羧酸鹽、聚乙酰羧酸鹽和多羥基磺酸鹽。其它合適有機助劑包括已知其具有助劑特性的高分子量的聚合物和共聚物，例如合適的聚丙烯酸、聚馬來酸和聚丙烯酸/聚馬來酸共聚物及其鹽。所述洗碟用洗滌劑組合物可含有氯/溴型或氧型漂白劑。無機氯/溴型漂白劑的例子有次氯酸鋰、鈉或鈣和次溴酸鋰、鈉或鈣，以及氯化磷酸鈉。有機氯/溴型漂白劑的例子有雜環N-溴和N-氯酰亞胺，如三氯異氰尿酸、三溴異氰尿酸、二溴異氰尿酸和二氯異氰尿酸，及其具有水溶性陽離子，如鉀和鈉的鹽。也可采用乙內酰脲化合物。優選有氧漂白劑，例如無機過酸鹽形式的漂白劑，最好具有一種漂白劑前體或為過氧酸化合物。合適的過氧漂白化合物的典型例子為堿金屬過硼酸鹽的四水合物和一水合物，堿金屬過碳酸鹽、過硅酸鹽和過磷酸鹽。優選的活化材料為TAED和三乙酸甘油酯。本發明的洗碟用洗滌劑組合物可以用常用來穩定酶的穩定劑進行穩定，例如多羥基化合物，如丙二醇、糖或糖醇、乳酸、硼酸、或硼酸衍生物，如芳族硼酸酯。本發明的洗碟用洗滌劑組合物還可以含有其它常見的洗滌劑成分，如抗絮凝劑、填充材料、抑泡劑、抗腐蝕劑、污垢懸浮劑、螯合劑、抗污垢再沉積劑、脫水劑、染料、殺菌劑、熒光劑、增稠劑和香料。最后，本發明的酶可用于常規洗碟用洗滌劑中，如用于披露于以下任一項專利中的洗滌劑EP518719，EP518720，EP518721，EP516553，EP516554，EP516555，GB2200132，DE3741617，DE3727911，DE4212166，DE4137470，DE3833047，WO93/17089，DE4205071，WO52/09680，WO93/18129，WO93/04153，WO92/06157，WO92/08777，EP429124，WO93/21299，US5141664，EP561452，EP561446，GB2234980，WO93/03129，EP481547，EP530870，EP533239，EP554943，EP346137，US5112518，EP318204，EP318279，EP271155，EP271156，EP346136，GB2228945，CA2006687，WO93/25651，EP530635，EP414197，US5240632.本發明范圍內的洗碟用洗滌劑組合物的具體形式包括1)粉狀自動洗碟用組合物粉狀自動洗碟用組合物粉狀自動洗碟用組合物5)粉狀自動洗碟用組合物6)粉狀和液體狀具有清潔表面活性劑系統的洗碟用組合物無水十八烷基N-氧化二(羥乙基)胺與無水十六烷基N-氧化二(羥乙基)胺的7030(wt)C18/C16混合物0-5％平均乙氧基化度為3的C13-C15烷基乙氧基硫酸鹽0-10％平均乙氧基化度為3的C12-C15烷基乙氧基硫酸鹽0-5％平均乙氧基化度為12的C13-C15乙氧基化脂肪醇0-5％平均乙氧基化度為9的C12-C15乙氧基化脂肪醇的混合物0-6.5％平均乙氧基化度為30的C13-C15乙氧基化脂肪醇的混合物0-4％二硅酸鈉0-33％三聚磷酸鈉0-46％檸檬酸鈉0-28％檸檬酸0-29％碳酸鈉0-20％一水合過硼酸鈉0-11.5％四乙酰乙二胺(TAED)0-4％馬來酸/丙烯酸共聚物0-7.5％硫酸鈉0-12.5％酶，包括修飾酶0.0001-0.5％8)無水液體洗碟用組合物9)觸變性液體自動洗碟用組合物</tables>10)液體自動洗碟用組合物</tables>11)含有被護漂白顆粒的液體自動洗碟用組合物</tables>11)在1)、2)、3)、4)、6)和10)中所公開的自動洗碟用組合物，其中，過硼酸鹽被過碳酸鹽所替代。12)在1)-6)中所公開的自動洗碟用組合物，它還含有一種錳催化劑。例如，該錳催化劑可以是在“Efficientmanganesecatalystsforlow-temperaturebleaching”，Nature，369，(1994)，p.637-639)中所披露的化合物之一。易于獲得的用于洗滌劑的含蛋白酶的制品的例子包括Alcalase、Esperase、Savinase和Durazym(均可自NovoNordiskA/S購買)；用于洗滌劑的脂酶包括Lipolase和LipolaseTMUltra(可從NovoNordiskA/S購買)；用于洗滌劑中的纖維素酶，如Celluzyme；用于洗滌劑中的α-淀粉酶，如Termamyl。個人護理用途本發明的綴合多肽也可用于個人護理目的。蛋白酶蛋白酶是用于清洗隱形眼鏡的公知活性成分。它能水解鏡片上的蛋白類污垢，并使其可溶。對配戴的舒適性而言，除去蛋白污垢是必不可少的。蛋白酶也是皮膚清洗制品的有效成分，它能清除上層死亡的角蛋白酶類皮膚細胞，從而使得皮膚看上去更亮麗、更柔嫩。蛋白酶還可用于口腔護理品，特別是用于清潔牙齒，也可用于牙粉中。另外，蛋白酶還可用于化妝品、洗浴和淋浴用品，包括洗發水、護發素、洗劑、面乳、皂條、香皂和液體皂。脂酶脂酶可用于潤膚劑中，作為皮膚清潔用品和抗痤瘡用品的活性成分，用于清除多余的皮膚類脂，并作為皮膚護理的活性成分用在洗浴和淋浴用品中，如乳油和洗液。脂酶還可用于潔發用品(如洗發水)中，用于有效清除頭發表面的皮脂及其它脂類物質。脂酶也是清潔隱形眼鏡用品的有效成分，它可以除掉沉積在鏡片表面上的類脂。氧化還原酶用于個人護理目的最常見的氧化還原酶是一種帶有底物(如葡萄糖)的氧化酶(通常為葡萄糖氧化酶)，它能確保產生H2O2，由過氧化物酶(通常為乳糖過氧化物酶)開始對諸如SCN-或I-的氧化，將其氧化成抗微生物劑(SCNO-或I2)。這種酶促復合體本身是由例如乳和唾液得知的。它被商品化應用于口腔護理用品(漱口水、牙粉、口香膠)，作為抗微生物系統，它還能與淀粉葡糖苷酶一起產生葡萄糖。該系統還被用于潤膚劑的防腐。抗微生物系統包括一種氧化酶與一種過氧化物酶的組合，它們是已知用于清洗隱形眼鏡的酶。氧化還原酶的另一種用途是用氧化酶、過氧化物酶和漆酶進行的氧化性染發。已知在皮膚(和頭發)表面形成的自由基與皮膚的衰老過程有關(頭發變壞)。自由基能激活導致脂膜、膠原和細胞破壞的鏈式反應。將自由基清除劑，如超氧化物歧化酶用于化妝品中的技術是眾所周知的(R.L.Gol-demberg，DCI，Nov.93，p.48-52)。蛋白二硫鍵異構酶(PDI)也是一種氧化還原酶。可將其用于卷發(還原和再氧化頭發中的二硫鍵)和修復損壞的頭發(這種損壞主要是由還原現有的二硫鍵造成的)。糖酶在牙齒表面形成的斑主要是由多糖組成。它附著在牙齒和微生物的表面。所述多糖主要為α-1，6鍵葡萄糖(葡聚糖)和α-1，3鍵葡萄糖(mutan)。不同類型葡聚糖酶，如mutanase和葡聚糖酶(dextranase)的應用有助于水解斑垢的粘性基質，使其能通過機械作用較容易地除去。還可以通過葡聚糖酶的作用清除其它類型的生物膜，如在鏡片上形成的生物膜。抗微生物多肽抗微生物多肽具有廣泛的用途，如用于化妝品、抗痤瘡用品、除臭劑和洗發水的防腐。此外，這種多肽還可用于隱形眼鏡用品。食品和飼料另外，還可將本發明具有減弱的變應原性的綴合酶或多肽很好地用于食品和飼料的生產。蛋白酶小麥面粉里的谷蛋白是面粉可被用作焙制食品的必須成分。有時需要蛋白酶改變面團的谷蛋白的狀態，例如，硬的小麥面粉可用蛋白酶軟化。Neutrase是一種商品化的中性金屬蛋白酶，它可用于保證均勻的面團質量和面包質地，并可以改善口味。所述谷蛋白被適中地或更深入地降解成肽，因此，為了避免面團的過分軟化，必須進行精確控制。蛋白酶還可用于乳蛋白改性。在制酪時為了使乳里的酪蛋白凝固，可采用諸如粗制凝乳酶或凝乳酶之類的蛋白酶。在啤酒釀造業中，蛋白酶被用于由未麥芽糖化的谷物釀酒，并用于控制氮的含量。在動物飼料制品中，蛋白酶被用于擴大動物的消化系統。脂酶脂酶在焙烤業中的應用還相當新。添加脂酶會產生改善的面團特性，和改善的面包制造品質，體現在較大的體積、改進的面包瓤結構和較白的面包瓤顏色。所觀察到的結果其機理可解釋為脂酶在和面期間改變谷蛋白與某些類脂片段間的相互作用。由此可產生改進的面筋結構。花色干酪(blueroancheese)(如Danablue)、某些意大利式干酪及其它含乳脂肪的乳制品的香味形成取決于乳脂肪降解成游離脂肪酸。脂酶可用于在這類食品中產生香味。在油脂制造業中，脂酶被用于，例如減少不需要的副產品的量，通過酯交換對脂肪進行改性并合成酯。氧化還原酶另外，本發明具有減弱的變應原性的氧化還原酶還可用于食品和飼料生產。有幾種氧化還原酶可用于焙烤業，如葡萄糖氧化酶、脂氧合酶、過氧化物酶、過氧化氫酶及其組合。通常，面包師通過添加抗壞血酸和溴酸鉀來強化面筋。某些氧化還原酶可用于代替面團系統中的溴酸鹽，這種酶可以氧化谷蛋白中的游離巰基。從而形成二硫鍵，使所得到的面團更堅韌、更有彈性，抗性也更大。GluzymeTM(NovoNordiskA/S)是具有過氧化氫酶活性的葡萄糖氧化酶制劑，可用它替代溴酸鹽。對強化的面團進行測定，其對機械沖擊的耐受力更強，具有更好的面團上烤爐性能和較大的面包體積。糖酶具有不同淀粉酶含量的面粉會產生不同的焙烤特性。為了使面粉標準化，必須添加淀粉酶。淀粉酶和戊聚糖酶通常能提供酵母發酵所需的糖，改善面包體積，延遲淀粉老化，降低變陳速度和由戊聚糖膠所產生的粘性。糖酶的例子如下文所述。某些生麥淀粉酶可用于延長面包的貨架壽命兩天或兩天以上，而不會導致產品里的粘合性。可以選擇性地修飾凝膠化淀粉，切開淀粉分子的非還原端；并修飾低分子量糖類和糊精。對淀粉進行的修飾使其不易發生老化。所產生的低分子量糖類可以改善焙烤食品的保水能力而又不會產生中等長度的糊精，這種糊精會導致成品中的粘合性。在面包焙烤期間所述酶被失活，所以這種方法可被視為無須在標簽上對以上情況加以說明的哪種。可基本排除Novamyl的超量問題。可用真菌α-淀粉酶增加面包體積，它還能使面包瓤具有良好、均勻的結構。所述α-淀粉酶是能夠產生麥芽糖、糊精和葡萄糖的胞內酶。在高于淀粉糊化溫度的溫度下可使谷類和某些細菌α-淀粉酶失活，因此，當其被加入小麥面團中時，會產生低的面包體積和粘的面包瓤。Fungamyl的優點是不耐熱，并能在糊化溫度以下失活。具有若干戊聚糖酶和半纖維素酶活性的酶制劑可以改善面團的可操作性和穩定性，并能改善新鮮度、面包瓤結構和面包體積。通過水解面粉中的戊聚糖成分，可使其喪失很大一部分水結合能力，這些水可為淀粉和谷蛋白所用。谷蛋白會變得更為柔韌、伸展性更大，而淀粉變得更易于糊化。戊聚糖酶可與乳化劑組合使用，或用于取代乳化劑。另外，糖酶還可用于由淀粉生產糖漿，這種糖漿被普遍用于軟飲料、甜食、肉制品、乳制品、面包制品、冰淇淋、嬰兒食品、果醬等中。淀粉轉化一般是分三步進行的。首先將淀粉液化，使用α-淀粉酶。得到主要由寡糖和糊精組成的麥芽糖糊精。然后用淀粉葡糖甘酶處理所述混合物，以便將寡糖和糊精水解成葡萄糖。由此獲得一種較甜的產品。如果需要較高的麥芽糖糖漿，可以單用β-淀粉酶或組合使用β-淀粉酶和支鏈淀粉酶(脫枝酶)。通過異構化使葡萄糖轉化為果糖，可使上述葡萄糖混合物變得更甜。在制糖業中，加快蔗汁中淀粉的降解是一種常用措施。從而使粗糖中的淀粉含量降低，在精制廠中進行的過濾便于進行。另外，葡聚糖酶被用于降解原糖汁和糖漿中的葡聚糖。在酒精業中，α-淀粉酶可很好地用于稀釋餾出糖化醪中的淀粉。在啤酒釀造業中，α-淀粉酶被用于輔助液化。在乳品業中，在生產供患有乳糖吸收障礙的患者使用的低乳糖乳時使用β-半乳糖甘酶(乳糖酶)。當用乳糖酶處理的乳生產香味乳品飲料時，可以減少糖的加入量而又不會降低產品的甜度。在生產煉乳時，通過乳糖酶處理可以避免乳糖結晶，并由此降低由乳糖結晶中酪蛋白凝固所致的增稠的危險。當用乳糖酶處理過的乳(或乳清)生產冰淇淋時，不會產生乳糖結晶，而且不會出現缺陷和砂狀結晶。另外，已知木聚糖酶可用于若干食品/飲料目的，如在WO94/21785(NovoNordiskA/S)中所披露的。在動物飼料業中，α-淀粉酶被添加到含谷物的飼料中，以改善淀粉的可消化性。抗微生物多肽某些溶菌酶被用于在肉類包裝業中洗滌動物胴體(參見屬于NovoIndustriA/S的專利US5,354,681)。轉移酶本發明具有減弱的變應原性的轉谷氨酰胺酶能很好地應用于食品及飼料的生產。轉谷氨酰胺酶具有交聯蛋白的能力。這一特性可用于含蛋白水相的糊化。可將其用于生產糊狀食品(屬于NovoNordiskA/S的丹麥專利申請DK1071/84)。轉谷氨酰胺酶被用于改善面粉的焙烤性能，例如，對用于生產糕點的面粉進行改性，使其具有改善了的特性，如改善的味道、凹痕、口感和較高體積(見JP1-110147)。另外，還可用于生產糊狀食品，例如，在諸如冰淇淋、糕點裝飾物、冰凍甜食、蛋黃醬和低脂肪涂抹食品之類的食品中用作脂肪的替代品(見屬于NovoNordiskA/S的WO93/22930)。另外，還可用于由乳及乳狀制品生產酸牛奶、木斯、干酪、布丁和橙汁的凝膠，并與肉餡結合以改善食品蛋白的口味和質地(見WO94/21120和WO94/21129，均為NovoNordiskA/S所擁有)。本發明的植酸酶能很好地用于生產食品，如早餐谷物食品、糕點、甜食、飲料、面包或湯等，并用于生產動物飼料。植酸酶可用于利用存在于植物蛋白源中的植酸鹽/植酸上結合的磷，或用于利用結合在植酸復合物上的重要營養礦物質。可將來自微生物的植酸酶加入單胃動物的飼料中，以免向飼料中補充無機磷(US3,297,548)。另外，還可將植酸酶用于大豆加工。大豆粉中可能含有高水平的反營養因子植酸鹽，它使得這種蛋白源不適于用作嬰兒食品和魚、牛及其它非反芻動物的飼料，因為植酸鹽能螯合其中的基本礦物質(見EP0420358)。植酸酶也可用于焙烤目的。將含有小麥面粉等和植酸酶的面團分割成片，可制成具有較好品質的面包(見JP-0-3076529-A)。已知具有高植酸酶活性的日本清酒曲霉菌可用于生產精制清酒(見JP-0-6070749-A)。織物應用蛋白酶蛋白酶被用于絲綢的脫膠和砂洗。脂酶在織物的整理階段，脂酶被用于清除含有疏水酯類(如三甘油酯)的脂類物質(見WO93/13256，屬于NovoNordiskA/S)。氧化還原酶在對織物進行漂白清洗時，過氧化氫酶可用于清除多余的H2O2。糖酶纖維素裂解酶被廣泛用于整理粗斜布服裝，以便形成織物顏色密度的局部變化(能促進“石洗”的酶)。纖維素裂解酶還可用于生物拋光工藝。生物拋光是對紗線表面的一種特殊處理，它能改善織物的手感和外觀方面的品質，而又不會損失織物的可織性。可以采用諸如披露于WO93/20278中的方法實現生物拋光。在織物的紡織過程中，紗線要承受相當大的機械拉力。為了防止斷裂，通過涂敷(上漿)凝膠類物質(漿料)加強紗線。最常見的上漿劑是天然或改性形式的淀粉。只須除去織物上的漿料(所謂退漿)即可實現均勻持久的整理。用含有淀粉或改性淀粉的漿料上漿的織物的退漿最好是由淀粉裂解酶進行。口服和皮膚用藥物蛋白酶將不同的高度純化的蛋白酶(如胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶)用于口服藥物和皮膚用藥物中，用于治療炎癥、水腫和損傷。制革轉移酶已知轉谷氨酰胺酶可作為硬化劑用于皮革的酪蛋白整理(見WO94/13839，屬于NovoNordisk)。硬表面清洗清洗硬表面，如在食品業中清洗硬表面通常是困難的，因為用于生產乳品、肉、海產品、飲料等的設備通常具有復雜的形狀。已證實采用凝膠和泡沫形式的含酶表面活性劑組合物能促進并改善對硬表面的清洗。可加入這種表面活性劑組合物中的酶最好是蛋白酶、脂酶、淀粉酶和纖維素酶。這種含酶的表面清洗組合物也能很好地用于運輸工具清洗，如清洗汽車和用于一般船只的清液。最后，本發明涉及將本發明的綴合物或組合物用于含多肽的產品中。首先，本發明的綴合物或組合物能很好地用于個人護理用品中，如頭發護理和頭發處理用品。其中包括洗發水、香脂、護發素、卷發組合物、染發組合物、生發油、發液、發油、洗發水、潤絲劑、噴發劑。另外，還可用于口腔護理品，如牙粉、漱口水、口香膠。還可用于皮膚護理用品和化妝品，如護膚油、護膚乳、清潔霜、清洗液、清潔乳、冷霜、霜皂、營養香皂、皮膚洗液、乳狀洗液、蘆甘石洗劑、護手霜、皂粉、透明皂、防曬油(Sunoil)、防曬霜、剃須泡沫、剃須膏、嬰兒用油、口紅、唇膏、乳狀粉底、面部用粉、粉狀眼影、粉、粉底、化妝底霜、香粉、增白粉。本發明的綴合物還能很好地用作隱形眼鏡的衛生用品。該用品包括隱形眼鏡清洗用品和消毒用品。還可將其用于洗滌劑，如洗潔粉、皂、皂條、液體皂。材料和方法材料酶底物Suc-AAPF-pNA(琥珀酰-丙氨酸-丙氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸-對-硝基苯胺。Sigmano.S-7388，Mw624.6g/mole)二甲基酪蛋白(CM-酪蛋白)(Sigma)三丁酸甘油酯(Merek1958)Cellazyme-C(Megazyme)羧甲基纖維素(Sigma)聚合物聚乙二醇(PEG-35.000)，購自Fluka聚乙二醇(PEG-5.000)，由三氟乙磺酰氯(2，2，2-三氟乙磺酰氯)活化(Sigma，St.louis，USA；M-3038)單甲氧基聚乙二醇(mPEG-5.000)，購自ShearwaterPolymerInc.USA。單甲氧基聚乙二醇(mPEG-15.000)，購自ShearwaterPolymerInc.USA.mPEG-NH2-5.000(ShearwaterPolymerInc.，USA)酶Esperase(可購自NovoNordiskA/S)枯草蛋白酶A(NovoNordiskA/S)枯草蛋白酶Novo(枯草蛋白酶BNP’)(NovoNordiskA/S)Lipolase疏棉狀腐質霉脂酶，披露于EP305216中(可自NovoNordiskA/S購買)Lipolase變型A具有E87K/D254K突變的Lipolase(可自NovoNordiskA/S購買)南極假絲酵母脂酶B(可向NovoNordiskA/S索取)。披露于由NovoNordisk生物技術公司申請的PCT/US95/07536中的Polyporuspinsitus漆酶。灰蓋鬼傘過氧化物酶(可向NovoNordiskA/S索取)。Carezyme(NovoNordiskA/S)溶液終止溶液(DMG-緩沖液)硼酸鈉，硼砂(Sigma)3，3-二甲基戊二酸(Sigma)CaCl2(Sigma)三氟乙磺酰氯(2，2，2-三氟乙磺酰氯)(Fluka)Tween20聚氧乙烯山梨糖單月桂酸酯(Merckcatno.822184)1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺(EDC)(Fluka)N-羥基琥珀酰亞胺(Flukaart.56480)光氣(Flukaart.79380)示蹤分子生物素酰化的小鼠抗大鼠IgE(zymed，no.03-9740)染色底物OPD鄰苯二胺(Kementeccatno.4260)動物棕色挪威大鼠(獲自CharlesRiver，DE)設備XCELII(Novex)ELISA讀數器(UVmax，MolecularDevices)HPLC(Waters)PFLC(Pharmacia)Superdex柱，Mono-Q，MonoS，購自Pharmacia，SW.Superdex-75柱(Pharmacia，SW)SLTFotometer，購自SLTLabInstruments大小排阻層析(SpherogelTSK-G2000SWG)大小排阻層析(Superdex200，Pharmacia，SW)方法以酪蛋白為底物的蛋白酶活性按照披露于“AF219/1-GB(獲自NovoNordiskA/S)中的方法，以酪蛋白為底物測定Esperase的活性。用Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA進行蛋白酶活性分析蛋白酶，尤其是胰凝乳蛋白酶裂解肽與對-硝基苯胺之間的連鍵，能在405nm處產生可見的黃色光吸收。緩沖液例如Britton和Robinson緩沖液，pH8.3底物將100mgSuc-AAPF-pNA溶于1ml二甲基亞砜(DMSO)中。用Britton和Robinson緩沖液將100μl的上述溶液稀釋到10ml。分析將底物與蛋白酶溶液混合，并在405nm波長處以時間和ABS405nm/分為函數監測光吸收。控制溫度(20-50℃，取決于蛋白酶)。這是對樣品中蛋白酶活性的測定。脂酶活性按照在“AF95/5GB(可向NovoNordiskA/S索取)中披露的方法分析脂酶活性。氧化還原酶活性按照在“AF219/1-GB(獲自NovoNordiskA/S)中披露的方法，以酪蛋白為底物測定氧化還原酶活性。漆酶活性根據在需氧條件下對丁香醛連氮的氧化作用測定漆酶活性。在530nm處對所產生的紫色進行光測定。分析條件為19μM丁香醛連氮，23.2mM乙酸緩沖液，pH5.5，30℃，反應時間1分鐘。1個漆酶單位(LACU)是在上述條件下每分鐘催化1μmole丁香醛連氮轉化的酶用量。漆酶的漆酶活性披露于AF239GB中，其被收作本文的參考(可向NovoNordisk索取)。過氧化物酶活性測定過氧化物酶的酶活性，以PODU(過氧化物酶單位)表示。1PODU是在一個系統中每分鐘催化1μmolH2O2轉化的酶用量，即氧化2，2’-連氮-雙[3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸]，ABTS。可以索取NovoNordisk分析方法的詳細說明(AF279/1GB)。纖維素酶活性根據從天青蛋白交聯的HE-纖維素中釋放的藍色染料測定Carezyml的酶促活性(Cellazyme-C)。反應是在40℃下，在20mM磷酸鈉(pH7)中進行10分鐘。通過在一臺UVmaxElisa-讀數器上在595nm處讀取光吸收測染料的釋放。另外，按照在“EAL-SM-0373.01/01”(可向NovoNordisk索取)中披露的方法測定纖維素裂解活性。ELISAIgE測試系統將一種三層夾心ELISA用于測定特異抗體的相對濃度。將免疫分子用作包被抗原，濃度為10μg/ml，用量為50μl/孔，溶于中性磷酸緩沖液中，在4℃下溫育過夜。用2％的脫脂乳封閉殘留在孔表面上的所有結合斑，每孔用量為200μl，用磷酸緩沖液配制，在室溫(RT)下至少溫育30分鐘。用一個8-路移液管將所有待用該抗原測試的血清以每孔50μl的用量加至所述板上，進行10X和3X的系列稀釋。稀釋是在含有0.5％脫脂乳和0.05％Tween20的磷酸緩沖液中進行，在室溫下，在振蕩平臺上溫育2小時。“示蹤”分子是生物素酰化的小鼠抗大鼠IgE，50μl/孔，并在含有0.5％脫脂乳和0.05％Tween20的磷酸緩沖液中稀釋2000X，在室溫下，在振動平臺上溫育2小時。對照(空白)的測試順序相同，但沒有大鼠血清。以50μl/孔的量加入稀釋2000x的鏈霉親和素辣根過氧化物酶，在振蕩平臺上溫度1小時。染色底物為溶于每10ml檸檬酸緩沖液(pH5.2)中的OPD(6mg)和H2O2(4μl30％的溶液)，用量為50μl/孔。每孔加100μl2NH2SO4終止反應。將在486nm和620nm處在SLT上所得到的所有讀數作為參考。計算數據，并在Lotus中給出。對大鼠的氣管內(IT)刺激將具有2.5”長金屬探針的一次性注射器用于IT服用分子。該探針插入氣管(見圖1)，位于會厭下面約1cm處(見圖1)，將0.1ml的分子溶液滴入氣管。對動物進行4次刺激，在末次刺激與放血之間隔5天時間。動物為棕色挪威大鼠，分成4組。開始時的重量在250g以上，結束時的重量約為450g。分子量測定通過標準方法，用4-20％梯度SDS聚丙烯酰胺凝膠(Novex)進行蛋白質的電泳分離。通過銀染檢測蛋白。參比購自Novex的Mark12寬范圍分子量標準的遷移率，測定分子量。實施例例1用三氟乙磺酰氯活化PEG35.000活化方法援自Nilson，K.等(1984)，同上。使用的所有溶劑均為Merck分析級。將4.0gPEG35.000溶于無水二氯甲烷(10ml)中。將吡啶(0.25ml)和三氟乙磺酰氯(0.22ml)加進去。在環境溫度下攪拌90分鐘后，將得到的黃色混合物蒸干，并溶于熱乙醇(60ml)中，用HCl調至酸性。將該混合物放在冰箱中在-18℃下過夜，得到大量白色沉淀。400g離心20分鐘，回收沉淀，用冷的酸性乙醇(60ml乙醇，0.5ml濃HCl)反復洗滌(6次)。將溶劑蒸發掉，直至為恒重，得到活化PEG-35.000的灰白色粉末，產率為77％。活化PEG-35.000的特征為熔點59-61℃，NMR分析表明三氟乙磺酰化度(tresylation)為30-35％。在以96％的產率進行上述方法的放大合成之后，得到熔點為59-60℃的淡黃色片狀物。NMR分析顯示，三氟乙磺酰化度在40％以上。例2用三氟乙磺酰氯活化mPEG15.000將mPEG15.000(10.0g)溶于二氯甲烷(無水，35ml)中，其中餾出15ml，以便除去任何微量水。冷卻之后，將三乙胺(900μl，10當量)和三氟乙磺酰氯(350μl，5當量)加至表面以下。該溶液變為淡黃色，并有一些三乙胺氫氯化物析出。90分鐘之后將該溶液傾入盛于細注射器里的乙醚(250ml)中并攪拌。攪拌3分鐘之后將淡黃色沉淀濾掉，并用乙醚(20ml)洗滌，干至11.3g，NMR顯示有80-90％被活化，并有大量NHEt3Cl。在乙酸乙酯(325ml)中對其進行再結晶，熱過濾，以除去大部分的鹽。緩慢冷卻至室溫后，將該懸浮液放置在冰箱中進行進一步結晶。得到9.3g(93％)白色結晶。1H-NMR(CDCl3)δ1.42t(I＝6.5CH3iHNEt3Cl)，3.10dq(I＝4.6CH2iHNEt3Cl)，3.38s(I＝2.6CH3iOMe)，3.40*dd(I＝4.5‰，13C伴峰)，3.64bs(I＝1364主峰)，3.89*dd(I＝4.8‰，13C伴峰)，4.24q(I＝9.0Hz，I＝1.8，三氟乙磺酰基中的CH2)，4.53*dd(I＝1.5CH2-O-三氟乙磺酰基)。表明活化度為80-90％，僅有6‰(w/w)HNEt3Cl。例3用N-琥珀酰亞胺碳酸酯活化mPEG15.000將mPEG15.000懸浮于甲苯(4ml/gmPEG)中，在常壓下餾出20％，以便對反應物進行共沸干燥。當溶液冷卻至30℃時加入二氯甲烷(干燥1ml/gmPEG)和溶于甲苯中的光氣(1.93M5mole/molemPEG)，在室溫下攪拌混合物過夜。將該混合物蒸干，得到想要的產物，呈蠟質塊狀。蒸發之后，加入二氯甲烷和甲苯(1∶2；干3ml/gmPEG)，將白色固體再次溶解。加入固體形式的N-羥基琥珀酰亞胺(2mole/molemPEG)，再加入三乙胺(1.1mole/molemPEG)。攪拌該混合物3小時，開始為不透明的，然后澄清，最后有少量沉淀。將混合物蒸干，并在乙酸乙酯(10ml)中進行再結晶，熱過濾以除去鹽和不溶性物質。將空白液體放在環境溫度下緩慢冷卻16小時，然后放在冰箱中過夜。將白色沉淀濾掉，并用少量冷的乙酸乙酯洗滌，干燥，得率為98％(w/w)。NMR顯示活化度為80-90％，有5‰(w/w)HNEt3Cl。對mPEG15000進行的1H-NMR(CDCl3)δ1.42t(I＝4.8CH3iHNEt3Cl)，2.84s(I＝3.7琥珀酰亞胺)，3.10dq(I＝3.4CH2iHNEt3Cl)，3.38s(I＝2.7CH3iOMe)，3.40*dd(I＝4.5‰，13C伴峰)，3.64bs(I＝1364主峰)，3.89*dd(I＝4.8‰，13C伴峰)，4.47dd(I＝1.8，PEG中的CH2)。在22℃下，在干燥器中存放4個月未發生變化。例4用N-琥珀酰亞胺碳酸酯活化mPEG5.000按照例3中所述方法用N-琥珀酰亞胺碳酸酯對mPEG5.000進行活化。例5蛋白酶與由三氟乙磺酰氯活化的PEG35.000的綴合將70mg高度純化的Esperase與855mg按例1方法制備的活化PEG35.000的混合物(7.5ml)在0.1M硼酸鈉(pH9.2)中，在室溫下溫育過夜，并用磁力攪拌。加入乙醇胺(0.01ml)終止反應。通過大小排阻層析純化所得到的EsperasePEG35.000綴合物，方法是用Superdex-75柱進行HPLC。與親代酶相比，該綴合物在以Suc-AAPF-pNA為底物進行的肽分析中還保留有68％的殘余酶活性，而在以酪蛋白為底物進行的分析中有39％的殘余酶活性。例6采用與上述例1和6相同的方法和化學試劑，得到約10倍的活化PEG35.000，如42mgEsperase和480mg活化PEG，與親代酶相比，以Suc-AAPF-pNA為底物時的殘余活性為80％，而以酪蛋白為底物時的殘余活性為46％。例7蛋白酶與活化mPEG5.000的綴合將200mg枯草蛋白酶Novo和1.8g由N-琥珀酰亞胺碳酸酯活化的mPEG5.000(按例4方法制備)放入50mM硼酸鈉(pH10)中溫育，終體積為20ml。反應在室溫下進行，用磁力進行攪拌。反應時間為1小時。加入DMG緩沖液終止反應，使終濃度為5mM戊二酸二甲酯，1mMCaCl2和50mM硼酸鹽，pH5.0。所得衍生物的分子量約為100kDa，相當于每摩爾枯草蛋白酶Novo結合12摩爾的PEG。與親代酶相比，對肽底物(Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-對硝基苯胺)的殘余活性接近100％，而對CM-酪蛋白的活性接近64％。例8蛋白酶與活化mPEG15.000的綴合將200mg枯草蛋白酶Novo和5.5g由N-琥珀酰亞胺碳酸酯活化的mPEG15.000(按例3方法制備)一起放入50mM硼酸鈉(pH10)中溫育，終體積為20ml。反應在室溫下進行，用磁力進行攪拌。反應時間為1小時。加入DMG緩沖液終止反應，使終濃度為5mM戊二酸二甲酯，1mMCaCl2和50mM硼酸鹽，pH5.0。所得衍生物的分子量在200kDa以上，相當于每摩爾枯草蛋白酶Novo結合12摩爾的PEG。與親代酶相比，對肽底物(Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-對硝基苯胺)的殘余活性接近100％，而對CM-酪蛋白的活性為71％。例9脂酶與三氟乙磺酰氯活化的PEG35.000的綴合將40mg高度純化的Lipolase與440mg按例1方法制備的活化PEG35.000的混合物(3.4ml)放入0.1M硼酸鈉中溫育，在室溫下過夜，用磁力攪拌。加入乙醇胺(0.01ml)終止反應。通過大小排阻層析純化所得到的Lipolase-PEG35.000綴合物，方法是用Superdex-75柱進行HPLC。與親代脂酶相比，以三丁酸甘油酯為底物時該綴合物有56％的殘余酶活性。例10脂酶與三氟乙磺酰氯活化的PEG5.000的綴合將25mg高度純化的Lipolase和363mg三氟乙磺酰氯活化的PEG5.000的混合物(2ml)一起放入0.1M硼酸鈉(pH9.2)中溫育，在室溫下過夜，用磁力攪拌。加入乙醇胺(0.01ml)終止反應。通過大小排阻層析純化所得到的Lipolase-PEG5.000綴合物，方法是用Superdex-75柱進行HPLC。與親代酶相比，以三丁酸甘油酯為底物時該綴合物有48％的殘余酶活性。例11脂酶與三氟乙磺酰氯活化的mPEG15.000的綴合將25mg南極假絲酵母脂酶B與2.82g由三氟乙磺酰氯按例2方法活化的mPEG15.000一起放在25ml0.1M硼酸鹽，1MNaCl，pH9.2中，在室溫下溫育3小時。加入1ml2M甘氨酸終止反應，并通過大小排阻層析(SpherogelTSK-G2000SWG)純化所得衍生物。與親代南極假絲酵母脂酶B相比，在以三丁酸甘油酯為底物時該衍生物具有83％左右的殘余酶活性。例12脂酶與三氟乙磺酰氯活化的mPEG15.000的綴合將27mgLipolase變體A與417.4mg按例2方法由三氟乙磺酰氯活化的mPEG15.000一起放入6ml0.1M硼酸鹽，0.8MNaCl，pH9.2中，在室溫下溫育3小時。加入139μl2M甘氨酸終止反應，并通過大小排阻層析(SpherogelTSK-G2000SWG)純化該衍生物。與親代Lipolase變體相比，以三丁酸甘油酯為底物時該衍生物的殘余酶活性為36％。例13脂酶與三氟乙磺酰氯活化的mPEG15.000的綴合將170mgLipolase與2.19g按例2方法活化的mPEG15.000一起在17ml0.1M硼酸鹽，0.8MNaCl，pH9.2中，在室溫下溫育3小時。加入730μl2M甘氨酸終止反應，通過大小排阻層析(SpherogelTSK-G2000SWG)純化該衍生物。與親代Lipolase相比，以三丁酸甘油酯為底物時該衍生物具有64％的殘余酶活性。例14脂酶與N-琥珀酰亞胺碳酸酯活化的mPEG15.000的綴合將100mgLipolase與按照例3方法用N-琥珀酰亞胺碳酸酯活化的2.576gmPEG-15.000一起放入9ml0.1M硼酸鹽，1MNaCl，pH9.2中溫育3小時。加入859μl2M甘氨酸終止反應，并通過大小排阻層析(SpherogelTSK-G2000SWG)純化該衍生物。與親代Lipolase相比，以三丁酸甘油酯為底物時該衍生物具有約60％的殘余酶活性。通過SDS-PAGE測得所得綴合物的分子量約為150kDa。例15由碳化二亞胺介導的脂酶與mPEG-NH2-5.000的綴合將0.4mgLipolase與400mgmPEG-NH2-5.000和125mg1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺(EDC)一起放入5ml50mMMES緩沖液，0.2MNaCl，pH5.0中，在室溫下溫育3小時。通過大小排除層析(Superdex200，Pharmacia)純化該衍生物。與親代Lipolase相比，以三丁酸甘油酯為底物時該衍生物具有約1％的殘余酶活性。例16漆酶與N-琥珀酰亞胺碳酸酯活化的mPEG15.000的綴合將100mgPolyporuspintitus漆酶與按照例3方法用N-琥珀酰亞胺碳酸酯活化的1.155gmPEG15.000一起放入10ml0.1M硼酸鹽，0.5MNaCl，pH9.2中，在室溫下溫育2小時，加入200μl2M甘氨酸終止反應，并通過大小排阻層析(Superdex200)純化該衍生物，并用50mM硼酸鹽(pH9.0)透析。由SDS-PAGE測得分子量在150-200kDa范圍內。與親代漆酶相比，該衍生物具有55％左右的殘余酶活性。例17灰蓋鬼傘過氧化物酶與N-琥珀酰亞胺碳酸酯活化的mPEG15。000的綴合將75mg過氧化物酶與按照例3方法用琥珀酰亞胺碳酸酯活化的1.579gmPEG一起在7.5ml0.1M硼酸鹽，0.5NaCl，pH9.2中，在室溫下溫育2小時。加入200μl2M甘氨酸終止反應，通過大小排阻層析(Superdex200)純化該衍生物，并用0.1M磷酸鈉(pH7.0)透析。由SDS-PAGE測得分子量范圍為150-200kDa。與親代過氧化物酶相比，該衍生物保留了79％左右的殘余酶活性。例18纖維素酶與三氟乙磺酰氯活化的PEG5.000的綴合將27.2mgCarezyme與115.2mg三氟乙磺酰氯活化的PEG5.000一起在50mM碳酸鈉緩沖液(pH8.5)中溫育。在室溫下進行反應，用磁力攪拌。反應時間為1小時。該衍生物的分子量(根據變性蛋白在SDS聚丙烯酰胺凝膠中的相對遷移率測得)為53-63kDa，相當于每摩爾Carezyme結合2-4摩爾PEG。與內標(親代酶的高度純化制劑)相比，該衍生物保持63％的殘余活性。例19底物保護纖維素酶與活化mPEG5.000的綴合為了在mPEG綴合期間保護酶的活性位點，將該酶在羧甲基纖維素溶液(0.5％w/v)中稀釋至與例3相同的終緩沖液濃度和蛋白濃度(4ml碳酸鈉，pH8.5，6.8mg/mlCarezyme，115.2mgN-琥珀酰亞胺碳酸酯活化的mPEG5.000)。該反應在4℃下進行1小時。與例18相同，通過用4-20％的梯度聚丙烯酰胺凝膠進行SDS電泳測定衍生化程度，隨后進行銀染色。該衍生物的表觀分子量為53-63kDa，相當于每摩爾Carezyme結合2-4摩爾PEG。該衍生物的催化活性相當于親代酶的90％。例20產物穩定的纖維素酶與活化mPEG5.000的綴合為了保護Carezyme的活性位點，以80mM的終濃度加入Cellobiose(Sigma，C7292)，相當于以5.000倍的摩爾數超出。在有Cellobiose的條件下N-琥珀酰亞胺碳酸酯活化的mPEG5.000與Carezyme綴合，并按上文所述方法對所得產物進行鑒定。該衍生物的表觀分子量為53-63kDa，相當于每摩爾Carezyme結合2-4摩爾PEG。該衍生物保留100％的殘余活性。例21纖維素酶與N-琥珀酰亞胺碳酸酯活化的mPEG15.000的綴合將20mgCarezyme和54.3mg按例3方法用N-琥珀酰亞胺碳酸酯活化的mPEG15.000一起放入1ml0.1M硼酸鹽，1mMCaCl2，pH10.0中，在室溫下溫育3小時。加入18μl2M甘氨酸終止反應，并通過大小排阻層析(Superdex200)純化該衍生物。與親代Carezyme相比，修飾的Carezyme保留了66％左右的殘余酶活性。例22大鼠氣管內(IT)試驗分別用修飾的枯草蛋白酶Novo、Lipolase，Polyporuspinsitus漆酶和Carezyme對棕色挪威大鼠進行氣管內(IT)刺激，所有的酶均以上述方式與N-琥珀酰亞胺碳酸酯活化的mPEG15.000綴合，并以相應的親代酶為對照。在一種特異IgEELISA中測驗來自免疫動物的血清(如上文所述)，以驗證所述分子是否已滲透過肺上皮細胞并激活了免疫應答系統，產生特異的IgE反應(見圖2，3，4和5)。如圖所示，與用親代酶進行氣管內刺激的大鼠相比，用修飾的酶進行氣管內刺激的大鼠的反應減弱。對本領域技術人員來說，顯而易見的是，在以上說明的提示，在不脫離本發明的實質或范圍的前提下實施本發明時可對本發明進行多種改變和改進。因此，本發明的范圍是由所附的權利要求書限定的。權利要求1.一種具有減弱的變應原性的修飾多肽，它包括與分子量在1-60kDa之間的聚合物綴合的分子量在5-100kDa之間的親代多肽。2.如權利要求1的修飾多肽，其中，所述多肽是一種蛋白質，特別是具有抗微生物活性或催化活性的蛋白質。3.如權利要求2的修飾多肽，其中，所述多肽是一種酶。4.如權利要求3的修飾多肽，其中，所述酶選自包括蛋白酶、脂酶、氧化還原酶、糖酶、轉移酶、植酸酶的一組酶。5.如權利要求1的修飾多肽，其中，所述聚合物選自下列一組聚合物聚亞烷基氧化物(PAO)，如聚亞烷基二醇(PAG)，包括聚乙二醇(PEG)、甲氧基聚乙二醇(mPEG)和聚丙二醇，PEG縮水甘油醚(Epox-PEG)，PEG-氧羰基咪唑(CDI-PEG)，Star-PEGs，BrancedPEGs，聚乙烯醇(PVA)，聚羧酸酯，聚乙烯吡咯烷酮，聚-D，L-氨基酸，葡聚糖，包括羧甲基葡聚糖，纖維素，包括甲基纖維素，羧甲基纖維素，乙基纖維素，羥乙基纖維素，羧乙基纖維素和羥丙基纖維素，脫乙酰殼多糖的水解產物，淀粉，如羥乙基淀粉和羥丙基淀粉，糖原，瓊脂糖及其衍生物，瓜耳膠，支鏈淀粉，菊粉，呫噸膠，角叉菜膠，果膠，藻酸水解產物和生物聚合物。6.如權利要求5的修飾蛋白酶，其中，所述聚合物是聚乙二醇(PEG)，特別是甲氧基聚乙二醇。7.如權利要求5和6的修飾蛋白酶，其中，所述聚合物的分子量(Mr)在1-60kDa之間，優選為2-35kDa，特別是在2-25kDa之間。8.如權利要求1-7中任一項的修飾蛋白酶，其中，所述綴合物的分子量范圍為50-500kDa，優選為50-400kDa，50-250kDa更好，特別是100-250kDa，如80-200kDa。9.一種用于生產權利要求1-8中任一項的具有減弱的變應原性的多肽的方法，包括將親代蛋白酶同1-30個聚合物分子，尤其是1-25個分子，如1-10個聚合物分子聚合的步驟。10.如權利要求9的方法，其中，所述親代蛋白酶與2-15個聚合物分子綴合。11.一種根據權利要求9和10的用于生產多肽的方法，其中，所述親代多肽的分子量在10-100kDa之間。12.一種根據權利要求10和11的用于生產多肽的方法，其中，所述活化聚合物與一種分子量在1-60kDa之間的活化聚合物反應。13.一種根據權利要求9-12中任一項的用于生產多肽的方法，其中，所述親代多肽與一種活化聚合物反應。14.一種組合物，包括權利要求1-8中任一項的多肽，還包括其它多肽、蛋白或酶和/或常用成分，所述常用成分用于包括皂條在內的洗滌劑、家用物品、農用化學品、個人護理用品，包括用于隱形眼鏡的清洗制劑和皮膚及頭發清洗制劑，潤膚劑、化妝品、口腔及皮膚用藥物，用于處理織物的組合物，和用于生產食品和飼料的組合物。15.如權利要求14的組合物，包括選自蛋白酶、脂酶、氧化還原酶、糖酶、轉移酶，如轉谷氨酰胺酶、抗微生物多肽和植酸酶中的至少一種多肽或酶。16.將權利要求1-8的具有減弱的變應原性的多肽或其如權利要求14和15的組合物用于減弱含有多肽的工業應用的產品的變應原性的用途。17.如權利要求16的用途，用于個人護理用品中。18.如權利要求17的用途，用于頭發護理或處理用品中。19.如權利要求18的用途，用于洗發水、香脂、護發素、卷發組合物、染發組合物、生發油、發液、發油、洗發水、潤絲劑、噴發劑。20.如權利要求17的用途，用于口腔護理用品。21.如權利要求20的用途，用于牙粉、瀨口水、口香膠。22.如權利要求17的用途，用于皮膚護理品。23.如權利要求22的用途，用于護膚油、護膚乳、清潔霜、清洗液、清潔乳、冷霜、霜皂、營養香精、皮膚洗液、乳狀洗液、蘆甘石洗液、護手霜、皂粉、透明皂、防曬油、防曬霜、剃須泡沫、剃須膏、和嬰兒用油。24.如權利要求17的用途，用于潤膚劑中。25.如權利要求24的用途，用于口紅、唇膏、乳狀粉底、面部用粉、粉狀眼影、粉、粉底、化妝底霜、香粉、增白粉。26.如權利要求16的用途，用于隱形眼鏡的衛生用品。27.如權利要求26的用途，用于隱形眼鏡的清洗及消毒用品。28.如權利要求16的用途，用于洗滌劑中。29.如權利要求28的用途，用于洗潔粉中。30.如權利要求28的用途，用于液體洗滌劑中。31.如權利要求28的用途，用于洗碟用洗滌劑中。32.如權利要求28的用途，用于皂、皂條、液體皂中。33.如權利要求16的用途，用于口腔及皮膚用藥物。34.如權利要求16的用途，用于農用化學品中。35.如權利要求16的用途，用于食品或飼料中。36.如權利要求35的用途，用于焙烤制品。37.如權利要求16的用途，用于處理織物用產品中。38.如權利要求16的用途，用于清洗硬表面用的組合物中。全文摘要本發明涉及具有減弱的變應原性的修飾多肽，包括分子量在10-100kDa之間的親代多肽，該親代多肽與一種分子量(Mr)在1-60kDa范圍內的聚合物綴合。所述修飾多肽是用這一種方法生產的該方法包括將1-30個聚合物分子與親代多肽綴合的步驟。本發明還涉及含有所述多肽和其它常用于洗滌劑中的成分的組合物，用于處理織物的和用于生產食品及飼料的組合物，所述洗滌劑包括洗碟用洗滌劑和皂條、家用物品、農用化學品、個人護理品、潤膚劑、化妝品、口腔藥和皮膚用藥。最后，本發明涉及將具有減弱的變應原性的多肽或其組合物用于降低大量工業用產品的變應原性的用途。文檔編號A61Q1/00GK1168694SQ95196667公開日1997年12月24日申請日期1995年12月7日優先權日1994年12月7日發明者A·A·奧爾森,L·B·L·翰森,T·C·貝克申請人:諾沃挪第克公司