甲萘醌作為吲哚胺2,3-雙加氧酶-1抑制劑的用圖
【專利摘要】本發明通過甲萘醌或其藥學上可接受的鹽作為吲哚胺2,3?雙加氧酶?1抑制劑（IDO1）的用途，甲萘醌對于吲哚胺2,3?雙加氧酶?1的抑制作用，對IDO1在疾病發生發展中的促進作用進行阻礙和/或破壞，從而為治療IDO1介導的疾病提供良好的前景。
【專利說明】
甲萘醌作為吲哚胺2,3-雙加氧酶-1抑制劑的用途
技術領域
[0001] 本發明涉及甲萘醌(Menadione)作為吲哚胺2,3_雙加氧酶-I(IDOl)的新用途及其 在制備治療IDOl介導的疾病中的應用。
【背景技術】
[0002] 吲哚胺2,3_雙加氧酶-I [EC 1.13.11.17KID01)是一種在細胞內、單體的含血紅 素蛋白質，催化1-色氨酸（Trp)分解代謝成犬尿氨酸途徑的第一步。IDOl代謝產物，N-甲 酰犬尿氨酸(N-formyIkynurenine)，進一步代謝成其它生物活性分子。IDOl在多個組織有 表達，包括肺、小腸、胎盤、脾臟及中樞神經。IDOl在許多細胞類型中可由炎性細胞因子(如 干擾素 γ、大腸桿菌內毒素和腫瘤壞死因子等)刺激引起表達。IDOl也在宿主抗原提呈細 胞（APC)、單核細胞-巨噬細胞和腫瘤細胞中表達。
[0003] IDOl已作為免疫抑制和耐受性的一種重要機制，在自身免疫性疾病、移植排斥反 應中起到重要作用。IDOl通過消耗局部Trp的濃度，抑制T細胞和NK細胞的活性，誘導調節性 T細胞的形成。通過這些機制，IDO提供反饋控制的免疫反應。研究發現，如果IDO在卵巢癌、 結直腸癌及其他腫瘤細胞中高表達，則腫瘤病人預后較差，因而它可起到腫瘤治療的預測 作用。
[0004] IDOl作為靶點也可以在多種腫瘤中起作用。例如，在卵巢癌、大腸癌和子宮內膜腫 瘤中，IDOl表達水平升高。在臨床前的模型中，IDOl通過抑制抗腫瘤免疫反應促進腫瘤的生 長。在這些模型中，小分子抑制劑IDOl可以恢復腫瘤免疫排斥現象和提高常用化療藥物的 活性。這些數據支持IDOl抑制劑作為新型抗癌藥物，可與現有療法結合。除了治療癌癥， IDOl抑制劑對其他疾病，如膿毒癥誘發低血壓、精神分裂癥、阿爾茨海默氏癥和帕金森病、 白內障也起到作用。這些發現促使對IDO抑制劑藥物的開發興趣，特別是癌癥免疫治療。最 廣泛研究的IDO抑制劑是1-甲基-色氨酸。最近的實驗證明，1-甲基-色氨酸可與大量的臨床 相關的化療藥物聯合使用，起到協同作用。1-甲基-色氨酸與環磷酰胺、順鉑、阿霉素或紫杉 醇的組合可以治愈neu誘導的小鼠乳腺癌模型。
[0005] 目前，國際市場上有幾類IDOl抑制劑在臨床實驗，如新型IDOl抑制劑INCB024360 由Incyte公司開發治療晚期惡性腫瘤。然而，IDOl抑制劑總體上數量仍較少，并且實驗室或 臨床效果仍有待提尚。

【發明內容】

[0006] 本發明一方面涉及甲萘醌或其藥學上可接受的鹽作為一種吲哚胺2,3_雙加氧酶-1抑制劑（IDOl)的用途。
[0007] 本發明另一方面提甲萘醌或其藥學上可接受的鹽在制備治療IDOl介導的疾病的 藥物中的應用。
[0008] 在一些實施方式中，所述IDOl介導的疾病是指IDOl表達上調的疾病，包括但不限 于，腫瘤、膿毒癥誘發低血壓、精神分裂癥、阿爾茨海默氏癥和帕金森病和白內障。
[0009] 在一些實施方式中，所述腫瘤選自在卵巢癌、結直腸癌和子宮內膜腫瘤。在一些實 施方式中，所述疾病不包括腫瘤。
[0010] 甲萘醌的結構式如下式所示，現有文獻顯示其抑制腫瘤細胞生長的作用（馬馳. 聯合應用甲萘醌、維生素 C和鹽霉素治療膠質瘤的體外研究[D].吉林大學，2014)，并且與其 他抗腫瘤藥物聯合應用可以起到協同作用。甲萘醌可通過本領域技術人員已知的適當方法 制得，一種不例性的制備方法參見 Basak, Shyam and Mal，Dipakranjan, Tetrahedron, 72(14)， 1758-1772; 2016。
[0011]
本發明預期甲萘醌的"藥學上可接受的鹽"也具有相同的活性。通常，該鹽例如通過將 游離酸或堿形式的這些化合物與化學計算量的適當堿或酸在水中或在有機溶劑中或在兩 者的混合物中制備。通常，非水性介質如乙醚，乙酸乙酯，乙醇，異丙醇或乙腈是優選的。酸 加成鹽的實例包括無機酸加成鹽例如，鹽酸鹽，氫溴酸鹽，氫碘酸鹽，硫酸鹽，硝酸鹽，和有 機酸加成鹽，如例如乙酸鹽，馬來酸鹽，富馬酸鹽，檸檬酸鹽，草酸鹽，琥珀酸鹽，酒石酸鹽， 蘋果酸鹽，扁桃酸鹽和對甲苯磺酸鹽。堿加成鹽的實例包括無機鹽如鈉、鉀、鈣、銨、鎂、鋁和 鋰鹽；以及有機堿如乙二胺、乙醇胺、N，N-二烷基乙醇胺、三乙醇胺、葡糖胺和堿性氨基酸 鹽。
[0012] 本發明證實了甲萘醌對于吲哚胺2,3_雙加氧酶-1的抑制作用，對IDOl在疾病發生 發展中的促進作用進行阻礙和/或破壞，從而為治療IDOl介導的疾病提供良好的前景。
【具體實施方式】
[0013] 本發明現將結合以下實驗進一步闡釋，需要說明的是，這些實驗例不應解釋為對 本發明的限制。
[0014] 犬尿氨酸標準曲線繪制 1.標準培養基（20(^1〇:2(^1^的0.51磷酸鉀緩沖液(？!16.5)，終濃度為5〇111]\1;2(^1^ 的0.2M抗壞血酸，終濃度為20 mM;4yL的0.5mM亞甲藍，終濃度為10 μΜ;4μL的5mg/ml過氧 化氫酶，終濃度為l〇〇μg/ml;132 yL的dd-H20;20yL的犬尿氨酸溶液，終濃度分別為0，1， 5， 7.5， 10， 25， 50， 75及 100 mM。
[0015] 2.加入40yL的IM NaOH溶液后，離心培養基（ll，500rpm, 4°C, 15min)。
[0016] 3.將200yL的上清液轉移至96孔微量滴定板上，測定熒光強度(λΘΧ 360nm，Aem 480nm)〇
[0017] 蛋白質定量 通過BCA法測定蛋白質IDOl含量。在Amax 570nm處測定溶液吸收值，隨后以牛血清白蛋 白標準曲線(0-2 mg/ml)檢查，以獲得蛋白質濃度。
[0018] 活性實驗 1.標準實驗培養基(200卩1〇:2(^1^的0.51磷酸鉀緩沖液(？!16.5)，終濃度為50 1111;20 yL的0.2M抗壞血酸，終濃度為20 mM;4yL的0.5mM亞甲藍，終濃度為100 μg/ml;20yL的 2mM左旋色氨酸，終濃度為200 μΜ;112 yL的dd-H20;20yL的ID01，終濃度為0至10 μg/ml。
[0019] 2.對照：以20yL的dd-H20替代IDOl。
[0020] 3.加入40yL的IM NaOH溶液后，混合物60°C孵育15min，以將N-甲酰基犬尿氨酸水 解為犬尿氨酸。隨后離心培養基（ll，500rpm，4°C，15min)。
[0021] 4.將200yL的上清液轉移至96孔微量滴定板上，測定熒光強度(Aex 360nm，Aem 480nm)〇
[0022] 抑制試驗 1.標準實驗培養基(200卩1〇:2(^1^的0.51磷酸鉀緩沖液(？!16.5)，終濃度為50 1111;20 yL的0.2M抗壞血酸，終濃度為20 mM;4yL的0.5mM亞甲藍，終濃度為10 μΜ;4μL的5mg/ml 過氧化氫酶，終濃度為l〇〇μg/ml;112 yL的dd-H2〇;10yL的4mM左旋色氨酸，終濃度為200 μ Μ; 20yL的5 μg/ml IDOl和10 μL在DMSO中的抑制劑（1-甲基-L-色氨酸)溶液，終濃度分別 為0， 0.1， 0.5和ImM。
[0023] 2.對照（i):以IOyL的Cld-H2O替代L-色氨酸。
[0024] 3.對照（ii):以30yL的Cld-H2O替代L-色氨酸和IDOl。
[0025] 4.加入40yL的IM NaOH溶液后，混合物60°C孵育15min，以將N-甲酰基犬尿氨酸水 解為犬尿氨酸。隨后離心培養基（ll，500rpm，4°C，15min)。
[0026] 5.將200yL的上清液轉移至96孔微量滴定板上，測定熒光強度(λΘΧ 360nm，Aem 480nm)〇
[0027] 6.以公式（100-(A/Bx100 ))計算抑制率，其中A表示存在抑制劑時IDOl的活性，B 表示不存在抑制劑時IDOl的活性。結果見表1。
【主權項】
1. 甲萘醌或其藥學上可接受的鹽作為吲哚胺2,3-雙加氧酶-1抑制劑的用途。2. 甲萘醌或其藥學上可接受的鹽在制備治療ID01介導的疾病的藥物中的應用。3. 根據權利要求2所述的應用，其中所述ID01介導的疾病是指ID01表達上調的疾病。4. 根據權利要求2或3所述的應用，其中所述ID01介導的疾病選自腫瘤、膿毒癥誘發低 血壓、精神分裂癥、阿爾茨海默氏癥和帕金森病和白內障。5. 根據權利要求4所述的應用，其中所述腫瘤選自在卵巢癌、結直腸癌和子宮內膜腫 瘤。6. 根據權利要求4所述的應用，其中所述疾病不包括腫瘤。
【文檔編號】A61P27/12GK106074470SQ201610419123
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月13日 公開號201610419123.8, CN 106074470 A, CN 106074470A, CN 201610419123, CN-A-106074470, CN106074470 A, CN106074470A, CN201610419123, CN201610419123.8
【發明人】李慶, 王 忠
【申請人】中山大學