Egcg在制備對抗膿毒癥細菌內毒素靶向藥物中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于醫藥技術領域，具體設及一種EGCG在制備對抗脈毒癥細菌內毒素祀向 藥物中的應用。
【背景技術】
[0002] 革蘭陰性菌感染的危害性主要源自其釋放的內毒素LPS。內毒素WS結構在20世紀 90年代中期就已經研究清楚，由多糖0抗原、核屯、多糖和類脂Adipid A)=部分組成。核屯、 多糖由庚糖、半乳糖、2-酬基-3-脫氧辛酸（2-ket〇-3-deoxyoctonic acid，KD0)等組成，類 月旨A是葡萄胺二糖脂化形成特殊的糖脂化合物。其結構中類脂A是革蘭氏陰性細菌內毒素的 毒性成分。通常LPSW完整的形式存在于細菌細胞外膜上，當其從菌體上游離下來，成為可 溶性的游離WS時具有廣泛的生物活性，其活性是細胞壁上內毒素的50~100倍。研究還表明 細菌內毒素可通過兩種途徑進入血液循環導致內毒素血癥:一是外源性革蘭陰性菌感染， 二是腸道系統內源性革蘭陰性菌轉位。很多嚴重疾病(如損傷、燒傷、屯、、腎、消化系統、呼吸 系統、腫瘤、屯、血管手術、自動免疫等方面的疾病)都直接或間接與革蘭陰性菌感染及其釋 放的內毒素有關。
[0003] 已知細胞表面受體化R4是革蘭氏陰性細菌LPS于祀細胞表面特異性的結合受體， 而CD14是外周血中LPS特異性的受體，革蘭氏陰性細菌釋放LPS入血形成內毒素血癥，LPS通 過識別和結合外周血中CD14形成LPS-CD14復合物，LPS-CD14復合物是LPS進一步識別和結 合祀細胞表面受體化34所必需的；LPS借助CD14與化1?4結合形成LPS-llRA-CDM復合物，從 而激活TLR4信號系統，介導LPS誘導的炎癥反應及細胞巧超載損傷等脈毒癥反應。因此， CD14-化R4復合物是LPS活化化R4信號從而啟動致死性毒性反應的關鍵因素。如果能封閉 CD14的功能，就能最大限度的抑制WS對化R4的活化，從而阻斷WS介導的炎癥反應、巧超載 損傷，對于脈毒癥、感染性性休克的治療具有重要的臨床意義。
[0004] 表沒食子兒茶素EGCG(((-)-Epigallocatechingallate，EGCG)的主要作用具有 抗氧化、抗炎癥反應及調節機體免疫功能，但對WS誘導的CD14-TLR4活化W及細胞巧離子 代謝的作用沒有報道。

【發明內容】

[0005] 針對現有技術對治療脈毒癥存在的技術難題，本發明的目的在于提供一種EGCG在 制備對抗脈毒癥細菌內毒素祀向藥物中的應用。
[0006] 本發明具體通過W下技術方案實現： 本發明提供了 EGCG在制備對抗脈毒癥細菌內毒素祀向藥物中的應用，所述脈毒癥可W 為重癥脈毒癥、脈毒癥休克。
[0007] 所述EGCG特異性作用于CD14-TLR4受體復合物，是LPS誘導脈毒癥細胞巧超載的藥 物作用祀點。
[000引本發明所述EGCG加入其它治療脈毒癥的藥物中，起到祀向作用，其中所述其它治 療藥物為抗感染類藥物或重組人活化蛋白c，所述抗感染類藥物為抗生素類、抗真菌類、抗 病毒類、抗支原體類、抗腫瘤類或免疫抑制劑;其中所述抗生素類為e-內酷胺類、氨基糖武 類、四環素類、酷胺醇類或大環內脂類，所述抗真菌類為多締類、=挫類、喀晚類或棘白菌素 類。
[0009] 本發明所述EGCG可和適量藥學上可W接受的載體制備成藥物制劑，其中所述藥用 載體可W是pH緩沖系統，滲透壓調節劑，防腐劑，穩定劑等輔助成分，優選自：憐酸鋼 (Sodium Phosphate)、班巧酸鋼（SodiumSuccinate)、組氨酸（Histidine)、甘露醇 (Mannitol )、聚山梨醇醋 20/80(Polyso;rbate20/80)、氯化鋼（Sodium畑Ioride)、薦糖 (SucroseKS徑甲基氨基甲燒（Trometamol)和乳糖等。
[0010] 本發明所述藥物制劑為溶液制劑或干粉制劑，所述藥物制劑的給藥形式為靜脈給 藥，皮下注射，腹腔內注射或肌肉注射。
[0011]本發明的有益效果為：本發明發現了EGCG的新藥理作用，即EGCG特異性作用于 CD14-TLR4受體復合物，可顯著抑制外周血中CD14的水平，W及CD14-TLR4復合物水平，從而 阻斷LPS對LTR4信號的活化，抑制了化R4信號介導的炎癥反應介質的釋放，W及巧超載損 傷，降低脈毒癥小鼠的死亡率。
【附圖說明】
[0012] W下結合附圖所示實施例的【具體實施方式】，對發明的上述內容再作進一步的詳細 說明。
[001 ；3 ]圖巧小鼠肺血管內皮細胞的巧離子曲線。
[0014] 圖2為EGCG對內毒素血癥小鼠生存率(Survi val%)的影響。
【具體實施方式】
[0015] 下面結合實施例對本發明做進一步的說明，W下所述，僅是對本發明的較佳實施 例而已，并非對本發明做其他形式的限制，任何熟悉本專業的技術人員可能利用上述掲示 的技術內容加W變更為同等變化的等效實施例。凡是未脫離本發明方案內容，依據本發明 的技術實質對W下實施例所做的任何簡單修改或等同變化，均落在本發明的保護范圍內。
[0016] 本研究采用腹腔注射WS的方法構建WS誘導的BALB/c小鼠脈毒癥、內毒素血癥模 型，研究EGCG預處理脈毒癥小鼠外周血中的CDl4、肺組織中化R4、CD 14-化R4復合物，發現 CD14-TLR4顯著被抑制，脈毒癥小鼠的血管內皮細胞巧超載被顯著逆轉，從而證明EGCG能特 異性阻斷CD14-TLR4信號，及SOCE信號，逆轉LPS介導的內毒素血癥、巧超載及脈毒癥，并改 善脈毒癥小鼠的預后。
[0017] ( - )實驗材料； 1、構建LPS誘導小鼠脈毒癥模型:采用LPS腹腔注射的方法構建內毒素血癥、急性肺損 傷的脈毒癥模型。
[001引2、表沒食子兒茶素EGCG，濃度IOOuM/只，具有抗氧化、抗炎癥和調節免疫功能。
[0019] 3、CD14、TLR4等抗體、巧離子巧光探針，巧成像儀等。
[0020] 4、商品化的TLR4(-/-)基因敲除小鼠。
[0021] (二)實驗原理： 1、LPS誘導小鼠脈毒癥模型建立:采用WS腹腔注射的方法(LPS lOmg/kg)，構建小鼠脈 毒癥模型，LPS-次性注射后正常飼養，檢測外周血中LPS濃度，W及小鼠肺組織中的炎癥反 應，觀察小鼠的死亡率應達到90% W上。
[0022] 2、66〔6對〔014、化34、50〔6的抑制研究：觀察66〔6預處理脈毒癥小鼠外周血中 CD 14、化R4的水平，W及CD 14-TLR4復合物的水平，W及巨隧細胞巧離子內流情況。TLR4 (-/-)組小鼠平行進行研究作為TLR4正常表達小鼠的對照。
[0023] 3、EGCG對脈毒癥小鼠肺損傷的抑制研究：運用RT-PCR、Western blot、ELISA法檢 測EGCG處理過的脈毒癥小鼠肺組織中TLR4、NFkB、比-6及TNF的表達情況。
[0024] 4、EGCG對對脈毒癥小鼠的生存率的影響:BALB/c小鼠給予EGCG灌胃（lOOuM/只）， 連續灌胃3天后，LPS腹腔注射法制作小鼠脈毒癥模型，觀察5天，記錄小鼠死亡情況，計算生 存率。
[002引（立)研究結果： UEGCG預處理的脈毒癥小鼠外周血CD14、化R4被顯著抑制：與正常對照組比較，EGCG連 續灌胃組，給予EGCG藥物3天后，LPS腹腔注射制備脈毒癥模型，外周血中CD14的水平，W及 CD 14-化R4復合物水平顯著降低，如表1所示EGCG抑制外周血中CD 14的水平和表2所示EGCG 下調CD 14-TLR4復合物的水平。
[0026] 表1 EGCG抑制外周血中CD14的氷平(mean± s，im/ml)
表2 EGCG下調CD 14-TLR4復合物的水平(mean ± S)
表1和表2說明：正常BALB/c小鼠隨機分組，每組10只，分組情況：con化〇1即正常對照 組，無任何藥物干預;LPS組即WS對照組，即給予LPS(IOmgAg)制作小鼠脈毒癥模型;EGCG+ LPS分為3個劑量組：IOuM組，IOOuM組W及ImM組，