一種注射用總蟾毒內酯固體脂質納米粒給藥系統及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種總蟾毒內酯納米制劑，具體是注射用總蟾毒內酯固體脂質納米粒 給藥系統及其制備方法，屬于藥物制劑領域。
【背景技術】
[0002] 總蟾毒內酯類化合物是一類在(Μ7β位連接有α-吡喃酮環（Ctpyrone) 的C-24留體或其苷，是一類脂溶性化合物，為傳統中藥干蟾皮發揮抗癌活性的 主要藥效成分。總蟾毒內酯主要含有蟾毒配基（resibufogenin)、華蟾酥毒基 (cinobufagin)、蟾毒靈（bufalin)、蟾毒它靈（Bufotalin)、日蟾毒它靈-3-半辛二酸酯 (Gamabufotalin-3-hydrogen Suberate)、蟾蜍靈-3- 丁二酰精氨酸酯、華蟾毒精-3- 丁二 酰精氨酸酯等內酯類成分。研究表明，總蟾毒內脂具有明顯的抗腫瘤作用，而且還能將腫瘤 細胞轉化為正常細胞（誘導腫瘤細胞分化）、誘導腫瘤細胞凋亡、抑制腫瘤細胞新生血管形 成、降低腫瘤轉移等作用。目前，臨床上已有類似總蟾毒內脂類注射劑且已廣泛應用于中晚 期腫瘤和慢性乙型肝炎病人。但在臨床應用過程中常出現靜脈輸注不暢、輸液部位紅腫、靜 脈內疼痛等血管刺激性不良反應。
[0003] 而固體脂質納米粒（lipid Solid nanoparticles，SLN)是20世紀90年代初發展 起來的新一代亞微粒給藥系統，粒徑在10~lOOOnm，以固態天然或合成的類脂如卵磷脂、 三酰甘油等為載體，將藥物包裹或夾嵌于類脂核中制成的固體膠粒給藥系統，以毒性低、 生物相容性好、生物可降解的固態天然或合成的類脂為載體，將藥物吸附或包裹于脂質膜 中制成的新一代納米粒給藥系統。因其在制備時使用的載體材料在室溫下是固體，使得其 既具有聚合物納米球和納米囊的物理穩定性高、藥物泄露少、具有緩釋性和靶向性、可以滅 菌等特點，又兼有減小藥物刺激性、毒性小、易于大規模生產等優點，是一種極有發展前景 的新型給藥系統。目前實驗室多采用微乳法、溶劑蒸發法、沉淀法以及注射法等方法來制備 SLN0

【發明內容】
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[0004] 本發明要解決的技術問題之一，是提供一種其中納米粒粒徑小于1000 nm的注射 用總蟾毒內脂固體脂質納米粒。
[0005] 本發明的目的在于研制和提供一種性質穩定并且可以采用工業化生產的注射用 總蟾毒內脂固體脂質納米粒及其固體制劑，本發明將總蟾毒內脂包裹于類脂核中，增加了 總蟾毒內脂的溶解度，減小了它的刺激性，可達到靶向、控釋等效果，并且物理化學性質穩 定。
[0006] 本發明的目的是提供注射用總蟾毒內脂固體脂質納米粒及其固體制劑的制備方 法。本發明的制備方法靈活多樣，均可以采用常規的方法和工藝設備，可進行工業化大生 產。本發明所述的固體脂質納米粒，含有下列單位為重量份的成分：
[0007] 總蟾毒內脂0· 01~10份
[0008] 脂質材料0· 1~50份
[0009] 脂溶性乳化劑〇· 1~50份
[0010] 水溶性乳化劑〇· 1~40份
[0011] 抗氧化劑0· 0005~10份
[0012] 糖 0.001 ~50 份
[0013] 其余為注射用水組成加至適量
[0014] 優選后，本發明所述的固體脂質納米粒，含有下列單位為重量份的成分：
[0015] 總蟾毒內脂0.01~5份
[0016] 脂質材料0· 1~30份
[0017] 脂溶性乳化劑0· 1~30份
[0018] 水溶性乳化劑0· 1~20份
[0019] 抗氧化劑0· 0025~5份
[0020] 糖 0.01 ~30 份
[0021 ] 其余為注射用水組成加至適量
[0022] 經過進一步優化后，本發明的注射用總蟾毒內脂固體脂質納米粒包括以下重量份 的組分：
[0023] 總蟾毒內脂0· 1~2份
[0024] 脂質材料0· 5~20份
[0025] 脂溶性乳化劑0. 5~15份
[0026] 水溶性乳化劑0. 5~10份
[0027] 抗氧化劑0· 002~2. 5份
[0028] 糖 0· 1 ~25 份
[0029] 其余為注射用水組成加至適量
[0030] 本發明所說的總蟾毒內脂是一類在C-17 β位連接有α -吡喃酮環（a pyrone)的 C-24留體或其苷，是一類脂溶性化合物。它是蟾皮的乙醇提取物，其提取工藝照專利《具有 抗腫瘤作用的總蟾毒內酯提取物、其制備方法及用途》（專利號：200610167378. 6)進行，提 取液經濃縮分離后得總蟾毒內酯提取物。
[0031] 本發明所說的脂質材料是指在SLN中作為載體材料、與生理相容性好、且室溫下 呈固態的類脂材料，如三酸甘油酯、混合甘油酯、脂肪酸、類固醇、蠟、磷脂等。為使本發明 注射用總蟾毒內脂固體脂質納米粒對總蟾毒內脂等有效成分具有較高的包封率及載藥量， 且考慮到其應用到臨床時，需適應不同使用途徑，特別是經血管，如靜脈注射時能減少局部 刺激及全身的副反應，以提高安全性，故本發明優選適于靜脈制劑的硬脂酸和三硬脂酸甘 油酯，經文獻調研發現原用于口服制劑的山榆酸甘油酯較多的被用于總蟾毒內脂SLN的制 備，故本發明對其制成的SLN進行了注射用藥安全性的考察，發現其安全性、綜合性均較 佳。因此，本發明脂質材料更優選山榆酸甘油酯。
[0032] 而本發明所說的乳化劑是具有乳化、穩定、分散作用的藥物輔劑。本發明乳化劑 由脂溶性乳化劑及水溶性乳化劑組成。其中，脂溶性乳化劑有磷脂類、膽酸鹽類、脫氧膽酸 鹽類、短鏈醇類，其中磷脂類包括卵磷脂、卵黃磷脂及其混合物；膽酸鹽類包括膽酸鹽、甘膽 酸鈉、牛黃膽酸鈉及其混合物；脫氧膽酸鹽類包括自脫氧膽酸鈉、去氧牛黃膽酸鈉及其混合 物；短鏈醇類包括丁醇、丁酸、甘油、異丙醇。本發明脂溶性乳化劑選用氫化大豆卵磷脂和卵 磷脂。水溶性乳化劑選自泊洛沙姆（Poloxamer)系列和土溫（Tween)系列。泊洛沙姆包 括泊洛沙姆108、182、188、407、908 ;聚山梨醇酷優選吐溫一 80、85、65、60、40。為更好地適 應于注射用藥，本發明乳化劑更優選氫化大豆卵磷脂和泊洛沙姆188的組合。
[0033] 本發明為注射用總蟾毒內脂固體脂質納米粒，因此還加入了注射劑常用的添加 劑，如等滲劑：甘油、葡萄糖等；抗氧劑：維生素 E、C及亞硫酸氫鈉等。本發明抗氧劑更優選 亞硫酸氫鈉，等滲劑優選葡萄糖。
[0034] 本發明要解決的另一技術問題是提供上述注射用總蟾毒內脂固體脂質納米粒的 制備方法。可以通過以下方法進行制備：
[0035] 方法一：乳化一沉淀法制備，稱取一定量總蟾毒內脂、脂質材料、脂溶性乳化劑溶 于一定量與水不混溶的有機溶劑（如正己烷、氯仿等）中，加入到水溶性乳化劑、抗氧化劑 及葡糖糖形成的均勻水相中進行乳化，然后蒸去有機溶劑，即可得到固體脂質納米粒分散 體系；
[0036] 方法二：微乳法制備，將脂質材料和脂溶性乳化劑熔融，加入總蟾毒內脂、水溶性 乳化劑、抗氧化劑、葡糖糖和注射用水制成外觀透明、熱力學穩定的0/W型微乳，然后在攪 拌條件下將微乳分散于冷水中即可制成固體脂質納米粒分散體系；
[0037] 方法三：熱高壓乳勻法制備，即將脂質材料、總蟾毒內脂及脂溶性乳化劑溶解或均 勻分散于熔融液中，然后將該熔融液在高速攪拌的條件下分散于溫度相近的含水溶性乳化 劑、抗氧化劑及葡糖糖的混合溶液中形成初乳，初乳該熔融溫度和100~2000Pa下經高壓 乳勻3次冷卻結晶后，即得；
[0038] 方法四：冷高壓乳勻法制備，即將脂質材料、脂溶性乳化劑與總蟾毒內脂共融并充 分混合后，在液氮等介質中迅速冷卻，經機械攪拌研磨，得到的固體脂質納米粒微粒在高速 攪拌下混入冷的含水溶性乳化劑、抗氧化劑及葡糖糖的混合溶液中得到初乳，再于室溫下 以更高壓力通過高壓乳勻機3個循環以上就得到固體脂質納米粒分散體系；
[0039] 方法五：超聲法制備，稱取一定量的總蟾毒內脂，脂質材料及脂溶性乳化劑于一定 量的有機溶劑中，在旋轉蒸發儀上減壓蒸干成膜，加入一定量含水溶性乳化劑、抗氧化劑及 葡糖糖的混合水溶液，超聲即得固體脂質納米粒分散體系。
[0040] 上述制備方法中所提到的有機溶劑可以選自氯仿、乙醇、乙醚、甲醇、乙酸乙酷、丙 酮、二氯甲烷。
[0041] 為延長總蟾毒內脂固體脂質納米粒的血液循環時間，提高它的生物利用度，降低 毒副作用，可以將總蟾毒內脂固體脂質納米粒修飾成隱形固體脂質納米粒A，隱形材料可以 選用非離子表面活性劑聚乙二醇（PEG)、泊洛沙姆（Poloxamer)、聚山梨酷80 (Tween80)。 [0042] 本發明為注射用固體脂質納米粒，其中注射方式可以是靜脈注射、靜脈滴注、皮下 注射、肌肉注射、腹腔注射。根據需要，還可以在總蟾毒內脂SLN中加入各種添加劑，如等滲 劑：甘油、葡萄糖等；抗氧劑：維生素 E、C及亞硫酸氫鈉等。
[0043] 為方便保存和運輸，本發明可通過冷凍干燥等干燥方法將水分散體系制成干粉 針。
[0044] 本發明以脂質為載體材料，以乳化劑為穩定劑，采用熔融法和高壓均質相結合的 方法，使藥物包載于脂質納米粒中。本發明采用高壓勻化則有利于工業化生產。
[0045] 本發明的注射用總蟾毒內脂固體脂質納米粒具有以下優點：
[0046] 1.該固體脂質納米粒毒性低，保證了用藥安全，提高了肌體的耐受性；
[0047] 2.該固體脂質納米粒將總蟾毒內脂包裹在類脂核中，增加了藥物的水溶性和穩定 性，可實現靶向、控釋效果，提高了藥物的生物利用度。
[0048] 3.該固體脂質納米粒可經表面修飾，提高藥物的治療效果。
[0049] 4.該固體脂質納米粒可噴霧干燥或冷凍干燥制成固體成品，延長存放時間、運輸 便捷，延長了產品的有效期，提高了產品的質量。
[0050] 5.該固體脂質納米粒制備工藝成熟。產品質量穩定，偏于工業化生產。
[0051] 對本發明的總蟾毒內脂固體脂質納米粒的粒徑和包封率等指標的評價實驗如 下：
[0052] (1)攝總蟾毒內脂固體脂質納米粒的透射電鏡（TEM)照片
[0053] 將本發明總蟾毒內脂納米粒混懸液適當稀釋，滴加在覆蓋碳膜的銅網上，用2. 0% 磷鎢酸鈉負染色液染色，用JEM-2010透射電子顯微鏡拍攝透射電鏡照片。
[0054] ⑵測定總蟾毒內脂固體脂質納米粒的粒徑大小及分布
[0055] 將