一種鐵蛋白修飾冬凌草甲素脂質體的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明公開了一種鐵蛋白修飾冬凌草甲素脂質體的制備方法，屬于藥劑領域。
【背景技術】
[0002]冬凌草是一種唇型科香茶菜屬的草本植物，其莖和葉可以作為藥用。該植物廣泛分布在黃河流域以南省區，其中河南濟源是該植物主要產地。冬凌草具有清熱解毒、消炎止痛，健胃活血及其抗腫瘤的功效。
[0003]冬凌草甲素，別名冬凌草素、延命草寧，是冬凌草的主要有效成分。冬凌草甲素屬7，20-環氧型對映-貝殼杉烷類二萜化合物，為淡黃色針狀結晶，味道極苦，微溶于水，可溶于甲醇、乙酸乙酯、丙酮等有機溶劑，現代藥理學、毒理學研究表明，冬凌草甲素對多種腫瘤細胞有明顯抑制或殺傷作用，能增強免疫，抗氧化、抗菌、抗炎、抗突變且毒副作用較小。由于冬凌草甲素不溶于水，吸收率低，體內生物半衰期短，限制了冬凌草甲素的臨床應用。制備冬凌草甲素合適的制劑，提高其生物利用度是藥劑學工作者亟待解決的問題。

【發明內容】

[0004]本發明主要解決的技術問題:針對目前冬凌草甲素不溶于水，吸收率低，體內生物半衰期短，限制了冬凌草甲素的臨床應用的問題，提供了一種鐵蛋白修飾冬凌草甲素脂質體的制備方法，本發明先制備出冬凌草甲素脂質體懸濁液，再從豬血中提取鐵蛋白，混合后加入有機溶劑，減壓蒸發得透明脂，加入磷酸鹽緩沖液后經過搖床振蕩、超聲處理、冷凍干燥即可，本發明制得的產品粒徑小，在水中的溶解度和溶解速度得到提高，吸收率高，具有生物膜黏附性，可延長藥物在體內的作用時間，而且藥物分布均勻，防止局部濃度過高而造成的局部刺激，臨床主要用于治療肝癌、食道癌、白血病等。
[0005]為了解決上述技術問題，本發明所采用的技術方案是:
(1)稱取100?200g冬凌草莖和100?200g冬凌草葉，將其斬碎，按固液比1:10 加入無水乙醇進行回流提取2?3h，提取2?3次后將提取液合并，在0.08?0.09MPa壓力下將提取液減壓蒸餾至原體積的5?8%，得濃縮液；
(2)將上述制備得到的濃縮液中分別加入3?5g卵磷脂、0.5?0.9g膽固醇和 150?20011^無水乙醇，再加入500?6001111^!1為7.3磷酸鹽緩沖溶液，混合均勻后，在50
?60 °C下進行減壓濃縮至原體積1/10，濃縮后用高速剪切機在8000?10000r/min轉速下預分散處理15?20min，處理后再用高壓均質機分別在200bar和400bar壓力下均質3?5次，在100bar壓力下均質10?15次，得到冬凌草甲素脂質體混懸液，并加入混懸液質量3?4%葡萄糖作為凍干保護劑，搖晃溶解后得冬凌草甲素脂質體懸濁液；
(3)量取500?600mL新鮮的豬血，向豬血中加入總質量0.5?0.8%梓檬酸鈉抗
凝劑，離心分離后取上清液，將上清液與濃度為0.lmol/L碳酸銨溶液混合至混合液pH為7.0?7.4，混合后邊攪拌邊滴加10?20mL濃度為0.lmol/L氯化鐵溶液，在O?4°C下繼續攪拌2?3h，將攪拌后得到的血清樣品置于冰箱中在O?4°C下冰箱保存10?12h; (4)向上述保存后的血清樣品在攪拌的條件下緩慢加入硫酸銨固體，混合至pH 為6.5?7.0，攪拌20min后離心分離得上清液；
(5)量取10?20mL上述上清液和步驟(2)的冬凌草甲素脂質體懸濁液按體積
1: 20混合并置于梨形瓶中，向瓶中加入總體積I?2倍的乙酸乙酯，在35?45°C下減壓蒸發得到透明脂；
(6)量取150?200mLpH7.5磷酸鹽緩沖液加入梨形瓶中，放入37°C恒溫空氣
浴搖床中，在1800?2200r/min轉速下振蕩2?3h，振蕩后再在120?150W下超聲處理15?20min，得到鐵蛋白修飾冬凌草甲素脂質體溶液，將其分裝于西林瓶中，冷凍干燥得到粉末，并置于O?4°C冰箱中保存即可。
[0006]本發明的應用的方法:本發明制得的產品能增強免疫，抗氧化、抗菌、抗炎、抗突變等多種作用，臨床主要用于治療肝癌、食道癌、白血病等，現代藥理學、毒理學研究表明，對多種腫瘤細胞有明顯抑制或殺傷作用。
[0007]本發明的有益效果是:
(1)本發明制得的產品粒徑小，在水中的溶解度和溶解速度得到提高，吸收率高；
(2)本發明制得的產品具有生物膜黏附性，可延長藥物在體內的作用時間，而且藥物分布均勻，防止局部濃度過高而造成的局部刺激。
【具體實施方式】
[0008]首先稱取100?200g冬凌草莖和100?200g冬凌草葉，將其斬碎，按固液比1:10 加入無水乙醇進行回流提取2?3h，提取2?3次后將提取液合并，在0.08?0.09MPa壓力下將提取液減壓蒸餾至原體積的5?8%，得濃縮液;將制備得到的濃縮液中分別加入3?5g卵磷脂、0.5?0.9g膽固醇和150?200mL無水乙醇，再加入500?600mLpH為7.3磷酸鹽緩沖溶液，混合均勻后，在50?600C下進行減壓濃縮至原體積1/10，濃縮后用高速剪切機在8000?10000r/min轉速下預分散處理15?20min，處理后再用高壓均質機分別在200bar和400bar壓力下均質3?5次，在100bar壓力下均質10?15次，得到冬凌草甲素脂質體混懸液，并加入混懸液質量3?4%葡萄糖作為凍干保護劑，搖晃溶解后得冬凌草甲素脂質體懸濁液;量取500?600mL新鮮的豬血，向豬血中加入總質量0.5?0.8%檸檬酸鈉抗凝劑，離心分離后取上清液，將上清液與濃度為0.lmol/L碳酸銨溶液混合至混合液pH為7.0?7.4，混合后邊攪拌邊滴加10?20mL濃度為0.lmol/L氯化鐵溶液，在O?4°C下繼續攪拌2?3h，將攪拌后得到的血清樣品置于冰箱中在O?4°C下冰箱保存10?12h;向保存后的血清樣品在攪拌的條件下緩慢加入硫酸銨固體，混合至pH為6.5?7.0，攪拌20min后離心分離得上清液;量取10?20mL上清液和冬凌草甲素脂質體懸濁液按體積1:20混合并置于梨形瓶中，向瓶中加入總體積I?2倍的乙酸乙酯，在35?45°C下減壓蒸發得到透明脂;量取150?200mLpH7.5磷酸鹽緩沖液加入梨形瓶中，放入37°C恒溫空氣浴搖床中，在1800?2200r/min轉速下振蕩2?3h，振蕩后再在120?150W下超聲處理15?20min，得到鐵蛋白修飾冬凌草甲素脂質體溶液，將其分裝于西林瓶中，冷凍干燥得到粉末，并置于O?4°C冰箱中保存即可。
[0009]實例I
首先稱取10g冬凌草莖和10g冬凌草葉，將其斬碎，按固液比1:10加入無水乙醇進行回流提取2h，提取2次后將提取液合并，在0.0SMPa壓力下將提取液減壓蒸餾至原體積的5%，得濃縮液;將制備得到的濃縮液中分別加入3g卵磷脂、0.5g膽固醇和150mL無水乙醇，再加入500mLpH為7.3磷酸鹽緩沖溶液，混合均勻后，在50 °C下進行減壓濃縮至原體積1/10，濃縮后用高速剪切機在8000r/min轉速下預分散處理15min，處理后再用高壓均質機分別在200bar和400bar壓力下均質3次，在I OOObar壓力下均質1次，得到冬凌草甲素脂質體混懸液，并加入混懸液質量3%葡萄糖作為凍干保護劑，搖晃溶解后得冬凌草甲素脂質體懸濁液；量取500mL新鮮的豬血，向豬血中加入總質量0.5%梓檬酸鈉抗凝劑，離心分離后取上清液，將上清液與濃度為0.lmol/L碳酸銨溶液混合至混合液pH為7.0，混合后邊攪拌邊滴加1mL濃度為0.lmol/L氯化鐵溶液，在(TC下繼續攪拌2h，將攪拌后得到的血清樣品置于冰箱中在(TC下冰箱保存1h;向保存后的血清樣品在攪拌的條件下緩慢加入硫酸銨固體，混合至pH為6.5，攪拌20min后離心分離得上清液;量取1