紅花籽粕降糖有效部位的制備方法及其用圖
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種紅花籽柏降糖有效部位的制備及其用途。
【背景技術】
[0002] 紅花籽，中藥稱"白平子"，是紅花Safflower (Carthamustinctorius L.)的種子。 紅花籽柏是紅花籽提取紅花油后的副產品。紅花是一種古老的1~2年生草本植物，在古 埃及已有4000年的歷史。現在公認的紅花屬有20~25個種。自張騫從西域把紅花引入 我國已有2100多年的栽培和用藥歷史。目前，紅花主要分布在河南、浙江、四川、云南、新 疆等20多個省（區），大多為紅花的花和油作藥用，對紅花籽柏很少利用，未引起足夠的重 視，許多資源浪費掉了。紅花籽脫脂后的籽柏部分在很多國家和地區多作為牲畜的飼料或 有機肥料，去油紅花籽柏中含較豐富的蛋白質，無毒、無異味，并含18種氨基酸，是一種較 優質的蛋白質。1966年Kopa等人報導：可用70-80%酒精脫除紅花籽餅粉的苦味和瀉藥成 分用于食品的濃縮蛋白。1970年Goodban等人的專利方法：紅花籽加熱到60-65°C，滾壓 將籽仁破碎，用己烷抽提，過濾，收集懸浮的蛋白得到食用蛋白粉。紅花籽柏中含有許多天 然抗氧化物質，對紅花籽柏的研宄大部分為針對5-羥色胺的制備，此類物質除具有極強的 抗氧化活性外，還可以調節機體內的免疫反應、抑制腫瘤和消炎抑菌作用、保護機體中的NK 細胞免受程序性死亡、強烈抑制黑色素生成等活性。紅花的花和紅花籽的含油部分是具有 軟化血管、降低血脂、膽固醇、防止動脈粥樣硬化等作用，關于這類降糖降脂有效部位制備 方法的研宄較多。但是，紅花籽柏的藥用和營養價值主要取決于脫殼程度，完全脫殼的紅花 籽餅柏具有很高的藥用和營養價值。目前研宄表明，脫脂并脫去紅花籽的苦味有多種方法， 如甲醇提取、氯仿提取等，并通過二、三次提取可脫去紅花籽粉中的苦味瀉藥成分和紅花籽 柏中剩余的酚基葡糖苷。除此之外，經過檢索，紅花降糖有效部位的制備研宄較多，但有關 紅花籽柏降糖除本課題組申請了"一種紅花籽柏提取物的降糖用途"和有關于其中含有的 5-羥基色胺具有降糖活性外，沒有發現紅花籽柏具有糖尿病防預活性的報道，但專利中的 方法中還涉及使用氯仿，在實際應用中具有一定的局限性。因此本課題組又進一步發明了 使用大孔樹脂的新制備方法。
[0003] 糖尿病是一種常見的世界性多發病。它是由人體自身分泌的胰島素不足的或胰島 素敏感性下降而引起。而胰島素的作用是調節人體內糖的代謝，即促進血糖合成糖元，加速 血糖分解，降低血糖濃度。維吾爾醫認為，糖尿病的發病原因除與四大"何里提"學說中的 膽汁質旺盛引起五臟虛弱有關外，其致病因素大多是綜合性的，尤以嗜煙、酒、過食肥甘和 精神過度緊張三者居多，腎虛為本，燥熱、瘀血為標。維吾爾醫治療糖尿病給予調理"何里 提"、降低血糖、增強體質、止渴、促進胰島素分泌、改善B細胞環境、增強胰島素敏感性、改善 胰島素抵抗、改善B細胞凋亡、助消化為基本原則上采取維吾爾醫飲食療法、藥物療法、非 藥物療法等系統的治療方式進行治療。
[0004] 隨著社會的進步以及人們生活水平的提高，糖尿病患者，尤其是II型糖尿病（非 胰島素依賴型糖尿病）人數成倍增長。蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP-1B，protein tyrosine phosphatase 1B)已有研宄表明蛋白酪氨酸磷酸酶IB (PTP-IB，protein tyrosine phosphatase 1B)在胰島素信號轉導與能量代謝過程中發揮重要的調節作用，是治療II型 糖尿病和肥胖癥的最有希望的藥物靶標之一。PTP-IB通過對胰島素受體激酶（insulin receptor kinase，IRK)或IRK活性片段的磷酸化酪氨酸殘基去磷酸化作用對胰島素信號 傳導進行負調節。在新生肝細胞中，PTP-IB的減少增加了 IRA/GLUT-4復合物，從而增加葡 萄糖的吸收。在肝臟中特異性刪除PTP-IB基因，可以改善代謝綜合癥的狀況和削弱飲食引 起的內質網壓力，Ali MI等人的研宄也指出刪除蛋白酪氨酸磷酸酶（PTP-IB)基因后會明 顯改善肥胖且瘦素抵抗的小鼠的外周胰島素抵抗和動脈血管功能。因此蛋白酪氨酸磷酸酶 (PTP-IB)是治療II型糖尿病、肥胖等疾病的重要靶點之一。
[0005] α -葡萄糖苷酶抑制劑是一類具有糖結構的新型抗糖尿病藥物，目前臨床上應用 的有阿卡波糖、伏格列波糖和米格列醇。現已作為治療2型糖尿病的首選藥和1型糖尿病 的輔助藥物普遍應用于臨床。α -葡萄糖苷酶位于小腸刷狀緣膜上皮細胞，它能將雙糖，如 蔗糖、麥芽糖等水解成可被小腸吸收的單糖，是食物中碳水化合物水解的關鍵酶。因此，抑 制該酶能夠延緩碳水化合物的消化，減少葡萄糖吸收入血，進而抑制餐后高血糖，改善對血 糖的控制，緩解高胰島素血癥，同時可以提高糖耐量，從而可達到防治糖尿病及其并發癥發 生的目的。
[0006] 本發明直接針對蛋白酪氨酸磷酸酶（PTP-IB)和α -葡萄糖苷酶為靶點進行篩選。

【發明內容】

[0007] 本發明目的在于，提供一種紅花籽柏降糖有效部位的制備方法及其用途，該方法 從紅花籽柏中采用有機溶劑回流提取，大孔樹脂分離純化獲得降糖有效部位，并闡明其醫 學用途，經初步的活性篩選試驗證明：通過本發明所述的方法獲得的紅花籽柏有效部位具 有蛋白酪氨酸磷酸酶IB(PTP-IB)和α-葡萄糖苷酶抑制抑制作用，可作為原料或輔助劑用 于防治糖尿病的藥物或保健品。
[0008] 本發明所述的一種紅花籽柏降糖有效部位的制備方法，該方法按下列步驟進行：
[0009] a、將紅花籽清洗，粉粹，按常規方法進行脫脂后，加入5-30倍量體積濃度為 50-75%乙醇水溶液，在溫度40-82°C的條件下加熱回流提取1-3次，每次為1-4小時，過濾， 合并濾液，減壓濃縮至無醇味，得到紅花籽柏提取物；
[0010] b、將得到的紅花籽柏提取物用水稀釋后加入預先準備好的大孔樹脂柱，以水洗至 還原糖反應陰性，再分別以濃度為10%、70%、95%乙醇溶液進行梯度洗脫，收集10%和 95%的流出液，濃縮即可得到具有降血糖活性的紅花籽柏有效部位。
[0011] 步驟 b 所用的大孔樹脂型號為 HPD100、HPD300、HPD500、HPD600、AB-8、DlOl 或 ADS-17。
[0012] 所述方法獲得的紅花籽柏有效部位在制備糖尿病藥物篩選靶點-蛋白質酪氨酸 磷酸酶IB具有抑制作用。
[0013] 所述方法獲得的紅花籽柏有效部位在制備糖尿病藥物篩選靶點α -葡萄糖苷酶 具有抑制作用。
[0014] 所述方法獲得的紅花籽柏有效部位在制備治療降血糖的保健品或其他功能性食 品中的用途。
【具體實施方式】 [0015] I
[0016] 實施例1
[0017] 取紅花籽400g進行清洗，粉碎，按常規方法進行脫脂后，置于圓底燒瓶中，加入5 倍量體積濃度為50 %的乙醇水溶液，溫度40°C，加熱回流提取3次，每次4h，過濾，合并提取 液，減壓濃縮至無醇味，得到紅花籽柏提取物29. 8g ;
[0018] 將紅花籽柏提取物加入水溶液溶解分散，加入預先處理好的大孔樹脂HPD100柱 中吸附，水洗至還原糖（MOLISH)反應陰性，再用5倍體積濃度為10%、70%、95%乙醇水溶 液梯度洗脫，收集10%和95%的流出液，濃縮后即可得到4. Ilg具有降血糖活性的紅花籽 柏有效部位。
[0019] 實施例2
[0020] 取紅花籽400g進行清洗，粉碎，按常規方法進行脫脂后，置于圓底燒瓶中，加入10 倍量體積濃度為55%的乙醇水溶液，溫度50°C，加熱回流提取3次，每次3h，過濾，合并提取 液，減壓濃縮至無醇味，得到紅花籽柏提取物32.