本發明涉及一(yi)種雙(shuang)組分快速止血(xue)凝膠及其應用。

(二)

背景技術：

快速(su)止(zhi)(zhi)血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)是(shi)臨床醫學中一個重(zhong)要的(de)需求，直接關系到(dao)病人(ren)的(de)生命(ming)安危，快速(su)止(zhi)(zhi)血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)材料的(de)使(shi)(shi)用可以有(you)效降(jiang)低(di)出血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)人(ren)員的(de)死(si)亡率。根據止(zhi)(zhi)血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)機理，目(mu)(mu)前(qian)通(tong)常(chang)使(shi)(shi)用的(de)有(you)以下4種止(zhi)(zhi)血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)方式：一是(shi)通(tong)過(guo)促進(jin)血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)管收縮(suo)，降(jiang)低(di)毛細血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)管通(tong)透性、減少血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)流量，促進(jin)血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)液凝(ning)(ning)結(jie)。二是(shi)通(tong)過(guo)增加(jia)血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)小板數量，增強其聚(ju)集粘附，促進(jin)血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)小板釋放凝(ning)(ning)血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)因(yin)子達(da)到(dao)止(zhi)(zhi)血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)的(de)目(mu)(mu)的(de)。三是(shi)促進(jin)凝(ning)(ning)血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)系統激活凝(ning)(ning)血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)酶原(yuan)(yuan)形成凝(ning)(ning)血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)酶，凝(ning)(ning)血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)酶催化纖維蛋白(bai)原(yuan)(yuan)形成纖維蛋白(bai)，從而達(da)到(dao)止(zhi)(zhi)血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)的(de)目(mu)(mu)的(de)。四是(shi)通(tong)過(guo)抑制纖維蛋白(bai)溶解止(zhi)(zhi)血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)。

目前國內外主(zhu)要的(de)止血(xue)材料(liao)包括纖維蛋(dan)白膠、明膠、膠原(yuan)、氧(yang)化纖維素、殼(ke)聚(ju)糖及藻酸(suan)鈣等，這些產(chan)品(pin)多以海綿(mian)狀、纖維狀、粉狀、膜(mo)狀等形(xing)式出(chu)現。這些產(chan)品(pin)雖(sui)然能(neng)夠(gou)滿足一般創傷快速止血(xue)的(de)需求，但臨床創傷的(de)傷口形(xing)式和(he)形(xing)狀復(fu)雜，這些產(chan)品(pin)可(ke)塑(su)性差，不能(neng)完全滿足患者不同傷口類型和(he)出(chu)血(xue)量等情(qing)況。

近年來，水(shui)凝(ning)(ning)(ning)(ning)膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)因其操作方便，可塑性強，同時又能(neng)(neng)(neng)夠維持傷口(kou)濕潤的(de)(de)外部環境等特(te)點(dian)，受(shou)到(dao)了(le)研究者(zhe)的(de)(de)廣泛關注。Rutledge G.Ellis-Behnke等人利用一(yi)(yi)種多肽自組(zu)裝形(xing)成(cheng)的(de)(de)纖(xian)維凝(ning)(ning)(ning)(ning)膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)作為快速(su)止(zhi)血凝(ning)(ning)(ning)(ning)膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)，這(zhe)(zhe)種自組(zu)裝的(de)(de)多肽纖(xian)維能(neng)(neng)(neng)夠促進(jin)血小(xiao)板的(de)(de)凝(ning)(ning)(ning)(ning)結(jie)，從而在(zai)15秒(miao)內使血液(ye)快速(su)凝(ning)(ning)(ning)(ning)固(R.G.Ellis-Behnke,Y.-X.Liang,D.K.C.Tay,P.W.F.Kau,G.E.Schneider,S.Zhang,W.Wu,K.-F.So,Nano hemostat solution:immediate hemostasis at the nanoscale,Nanomedicine:Nanotechnology,Biology and Medicine,2(2006)207-215.)。日本清水(shui)慶彥等公開了(le)一(yi)(yi)種膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)原水(shui)凝(ning)(ning)(ning)(ning)膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)，先將膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)原與一(yi)(yi)定比例的(de)(de)聚谷氨酸充分混合，攪拌均勻后加入一(yi)(yi)定體積的(de)(de)水(shui)性碳化二亞胺水(shui)溶(rong)液(ye)，經過5-120秒(miao)后制備得到(dao)膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)原水(shui)凝(ning)(ning)(ning)(ning)膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)，該水(shui)凝(ning)(ning)(ning)(ning)膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)具(ju)有成(cheng)膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)速(su)度快、粘結(jie)力(li)好(hao)、生物相容(rong)性好(hao)等特(te)點(dian)(清水(shui)慶彥。膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)原凝(ning)(ning)(ning)(ning)膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)。專利申(shen)請(qing)號：98805532.5)。Keumyeon Kim等人利用羥基改性的(de)(de)聚乙二醇和單(dan)寧酸形(xing)成(cheng)一(yi)(yi)種TAPE-OH凝(ning)(ning)(ning)(ning)膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)，這(zhe)(zhe)種凝(ning)(ning)(ning)(ning)膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)能(neng)(neng)(neng)通過氫(qing)鍵與組(zu)織形(xing)成(cheng)較強的(de)(de)粘附(fu)力(li)，并且能(neng)(neng)(neng)夠在(zai)30秒(miao)內止(zhi)血(K.Kim,M.Shin,M.-Y.Koh,J.H.Ryu,M.S.Lee,S.Hong,H.Lee,TAPE:A Medical Adhesive Inspired by a Ubiquitous Compound in Plants,Adv.Funct.Mater.,25(2015)2402-2410.)。

然而，上述的(de)(de)(de)幾種凝(ning)膠(jiao)其本(ben)(ben)身的(de)(de)(de)力學強度和(he)組(zu)織(zhi)的(de)(de)(de)結合力仍然有待改(gai)善，同時(shi)存在無(wu)法長期保存等(deng)問題。本(ben)(ben)發明(ming)利用醛基(ji)(ji)和(he)氨基(ji)(ji)能夠反應形成強力化(hua)(hua)學鍵(jian)的(de)(de)(de)原理，醛基(ji)(ji)化(hua)(hua)的(de)(de)(de)天(tian)然多糖既能與創口周邊的(de)(de)(de)組(zu)織(zhi)結合，強力粘合在創口表面(mian)，又能黏住血(xue)液中的(de)(de)(de)血(xue)紅(hong)細胞和(he)血(xue)小板等(deng)形成血(xue)凝(ning)塊(kuai)，同時(shi)和(he)氨基(ji)(ji)改(gai)性(xing)的(de)(de)(de)天(tian)然生物高分子發生交(jiao)聯(lian)，增加凝(ning)膠(jiao)的(de)(de)(de)強度，防(fang)止(zhi)因血(xue)液流動被沖走，是一種理想的(de)(de)(de)雙組(zu)份止(zhi)血(xue)凝(ning)膠(jiao)材料(liao)。

(三)

技術實現要素：

本(ben)發明目(mu)的(de)是提供一(yi)種雙(shuang)組分快速止血凝(ning)膠(jiao)及(ji)其(qi)制(zhi)備方(fang)法與應用，改(gai)善現有凝(ning)膠(jiao)力(li)學強度和組織結合力(li)不佳的(de)問題。

本發明采用的技術方案是：

本(ben)發明提供(gong)一(yi)種雙(shuang)組分(fen)快速(su)止血凝(ning)膠(jiao)，所述凝(ning)膠(jiao)由質(zhi)量濃度(du)1～20％醛基(ji)化(hua)(hua)天(tian)然(ran)(ran)(ran)多(duo)(duo)(duo)(duo)糖(tang)(tang)(tang)(tang)溶(rong)液和(he)質(zhi)量濃度(du)1～20％氨(an)基(ji)改(gai)(gai)性(xing)天(tian)然(ran)(ran)(ran)生(sheng)物(wu)高(gao)(gao)分(fen)子溶(rong)液以體(ti)積比1:0.1-1混(hun)合組成(cheng)；所述醛基(ji)化(hua)(hua)天(tian)然(ran)(ran)(ran)多(duo)(duo)(duo)(duo)糖(tang)(tang)(tang)(tang)溶(rong)液以去(qu)離(li)子水或pH值(zhi)6～6.5的(de)(de)水為(wei)溶(rong)劑制成(cheng)，其(qi)中醛基(ji)化(hua)(hua)天(tian)然(ran)(ran)(ran)多(duo)(duo)(duo)(duo)糖(tang)(tang)(tang)(tang)以天(tian)然(ran)(ran)(ran)多(duo)(duo)(duo)(duo)糖(tang)(tang)(tang)(tang)為(wei)底(di)物(wu)進行醛基(ji)化(hua)(hua)反(fan)(fan)應而(er)成(cheng)，使(shi)得醛基(ji)理論(lun)質(zhi)量含量為(wei)醛基(ji)化(hua)(hua)天(tian)然(ran)(ran)(ran)多(duo)(duo)(duo)(duo)糖(tang)(tang)(tang)(tang)質(zhi)量的(de)(de)20-50％(優(you)選30～50％)，天(tian)然(ran)(ran)(ran)多(duo)(duo)(duo)(duo)糖(tang)(tang)(tang)(tang)為(wei)殼聚糖(tang)(tang)(tang)(tang)、葡聚糖(tang)(tang)(tang)(tang)、透明質(zhi)酸(suan)、海藻酸(suan)鈉、羧(suo)甲(jia)基(ji)纖維(wei)素或硫(liu)酸(suan)軟骨(gu)素中的(de)(de)一(yi)種；所述氨(an)基(ji)改(gai)(gai)性(xing)天(tian)然(ran)(ran)(ran)生(sheng)物(wu)高(gao)(gao)分(fen)子溶(rong)液以去(qu)離(li)子水或pH值(zhi)6～6.5的(de)(de)水為(wei)溶(rong)劑制成(cheng)，其(qi)中氨(an)基(ji)改(gai)(gai)性(xing)天(tian)然(ran)(ran)(ran)生(sheng)物(wu)高(gao)(gao)分(fen)子是(shi)以天(tian)然(ran)(ran)(ran)生(sheng)物(wu)高(gao)(gao)分(fen)子為(wei)底(di)物(wu)進行氨(an)基(ji)化(hua)(hua)反(fan)(fan)應而(er)成(cheng)，使(shi)得氨(an)基(ji)的(de)(de)理論(lun)質(zhi)量接枝量為(wei)氨(an)基(ji)改(gai)(gai)性(xing)天(tian)然(ran)(ran)(ran)生(sheng)物(wu)高(gao)(gao)分(fen)子質(zhi)量的(de)(de)30-60％(優(you)選40～60％)，天(tian)然(ran)(ran)(ran)生(sheng)物(wu)高(gao)(gao)分(fen)子為(wei)透明質(zhi)酸(suan)、明膠(jiao)、海藻酸(suan)鈉、硫(liu)酸(suan)軟骨(gu)素、絲(si)膠(jiao)或膠(jiao)原中的(de)(de)一(yi)種。

進一步，所(suo)述(shu)(shu)醛基(ji)化(hua)(hua)天(tian)(tian)然(ran)(ran)多(duo)糖(tang)按如下方法(fa)制備：將(jiang)(jiang)天(tian)(tian)然(ran)(ran)多(duo)糖(tang)溶(rong)于水(shui)或(huo)(huo)pH值6～6.5的(de)水(shui)配成質量濃度1～10％的(de)天(tian)(tian)然(ran)(ran)多(duo)糖(tang)溶(rong)液(ye)(ye)，待完(wan)全溶(rong)解后(hou)(hou)，加入(ru)氧(yang)化(hua)(hua)劑，20-35℃避(bi)光反應1～24h(優選30～35℃反應12～24h)，之后(hou)(hou)加入(ru)乙(yi)二醇(chun)(優選乙(yi)二醇(chun)加入(ru)量與(yu)天(tian)(tian)然(ran)(ran)多(duo)糖(tang)等質量)終止反應；將(jiang)(jiang)反應液(ye)(ye)倒(dao)入(ru)透(tou)(tou)析袋(透(tou)(tou)過分子(zi)量為(wei)(wei)8000-14000Da)中(zhong)，以(yi)去離子(zi)水(shui)為(wei)(wei)透(tou)(tou)析液(ye)(ye)，15-35℃透(tou)(tou)析2～7天(tian)(tian)(優選20～35℃透(tou)(tou)析3～7天(tian)(tian))，之后(hou)(hou)取(qu)截留液(ye)(ye)放(fang)置(zhi)在(zai)-20℃下保存0.5～3小時，隨(sui)后(hou)(hou)在(zai)-80℃放(fang)置(zhi)5～12小時，再(zai)在(zai)-50℃、1～99Pa的(de)條件下凍干24～96小時，獲得(de)醛基(ji)化(hua)(hua)天(tian)(tian)然(ran)(ran)多(duo)糖(tang)；所(suo)述(shu)(shu)氧(yang)化(hua)(hua)劑為(wei)(wei)高碘酸(suan)(suan)鈉(na)、高氯酸(suan)(suan)鈉(na)、高碘酸(suan)(suan)鉀或(huo)(huo)高氯酸(suan)(suan)鉀中(zhong)的(de)一種(zhong)；所(suo)述(shu)(shu)氧(yang)化(hua)(hua)劑與(yu)天(tian)(tian)然(ran)(ran)多(duo)糖(tang)質量比為(wei)(wei)0.5-1：1(優選1:1)。

進一步，所述氨基(ji)(ji)改性(xing)天(tian)(tian)然生(sheng)物(wu)(wu)(wu)高(gao)(gao)(gao)分(fen)(fen)子(zi)按(an)如(ru)下方法制(zhi)(zhi)備(bei)：將(jiang)天(tian)(tian)然生(sheng)物(wu)(wu)(wu)高(gao)(gao)(gao)分(fen)(fen)子(zi)溶于去離子(zi)水(shui)制(zhi)(zhi)成10mmol/L溶液(ye)，加入酰(xian)肼類(lei)(lei)有(you)機物(wu)(wu)(wu)，完全混合后，加入催(cui)化(hua)劑，調(diao)節pH值(zhi)為(wei)3～7并維持4～8h，隨后攪拌反應(ying)24h～48h，將(jiang)反應(ying)液(ye)倒入透(tou)析袋(dai)(透(tou)過分(fen)(fen)子(zi)量為(wei)8000-14000Da)中，以(yi)去離子(zi)水(shui)為(wei)透(tou)析液(ye)，4-35℃透(tou)析2～7天(tian)(tian)(優選20～35℃透(tou)析3～7天(tian)(tian))，在-50℃、1～99Pa的(de)條件下凍干24～96小時(shi)，獲得(de)氨基(ji)(ji)改性(xing)天(tian)(tian)然生(sheng)物(wu)(wu)(wu)高(gao)(gao)(gao)分(fen)(fen)子(zi)；所述酰(xian)肼類(lei)(lei)有(you)機物(wu)(wu)(wu)為(wei)聯氨或己二酸二酰(xian)肼，所述催(cui)化(hua)劑為(wei)等(deng)摩爾比的(de)1-(3-二甲(jia)氨基(ji)(ji)丙基(ji)(ji))-3-乙(yi)基(ji)(ji)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和(he)N-羥基(ji)(ji)丁(ding)二酰(xian)亞胺(NHS)的(de)混合物(wu)(wu)(wu)或等(deng)摩爾比的(de)1-(3-二甲(jia)氨基(ji)(ji)丙基(ji)(ji))-3-乙(yi)基(ji)(ji)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和(he)1-羥基(ji)(ji)苯并三氮唑水(shui)合物(wu)(wu)(wu)(HOBt)的(de)混合物(wu)(wu)(wu)；所述酰(xian)肼類(lei)(lei)有(you)機物(wu)(wu)(wu)與天(tian)(tian)然生(sheng)物(wu)(wu)(wu)高(gao)(gao)(gao)分(fen)(fen)子(zi)物(wu)(wu)(wu)質(zhi)的(de)量之(zhi)比為(wei)1-30:1(優選10-30:1)，所述催(cui)化(hua)劑與天(tian)(tian)然生(sheng)物(wu)(wu)(wu)高(gao)(gao)(gao)分(fen)(fen)子(zi)物(wu)(wu)(wu)質(zhi)的(de)量之(zhi)比為(wei)1-10:1(優選4-10:1)。

進(jin)一(yi)步，優選所(suo)述醛基化天然多糖溶液質量濃(nong)(nong)度10～20％，所(suo)述氨基改(gai)性(xing)天然生物高分(fen)子溶液質量濃(nong)(nong)度5～15％。

進(jin)一步，優選所述凝膠由質量(liang)濃度(du)(du)10～20％醛基化(hua)天然多(duo)糖溶(rong)液(ye)和質量(liang)濃度(du)(du)5～15％的(de)氨(an)基改性天然生物高分子溶(rong)液(ye)以體積(ji)比(bi)1:0.5-1組成(cheng)。

本發明還提供一種所述雙組分快速止血(xue)凝膠(jiao)在止血(xue)中的應用(yong)，具體所述應用(yong)方法為：將質量濃(nong)度1～20％的醛基化天(tian)然(ran)多糖(tang)溶液和(he)質量濃(nong)度1～20％的氨基改(gai)性天(tian)然(ran)生(sheng)物高分子溶液按體積比1:0.1～1用(yong)雙膛注(zhu)射器涂抹于(yu)創口(kou)處，實(shi)現成膠(jiao)止血(xue)。

與現(xian)(xian)有技術相比，本發(fa)明(ming)有益(yi)效果主要體現(xian)(xian)在(zai)：

本發(fa)明的(de)雙組分(fen)快(kuai)速止血凝膠(jiao)(jiao)的(de)黏稠(chou)度和(he)成(cheng)膠(jiao)(jiao)時(shi)間，可(ke)以通過醛(quan)(quan)基(ji)化(hua)天(tian)(tian)(tian)然(ran)多(duo)糖(tang)(tang)中醛(quan)(quan)基(ji)含(han)量(liang)、氨基(ji)改性(xing)天(tian)(tian)(tian)然(ran)生(sheng)物高分(fen)子(zi)中氨基(ji)的(de)接(jie)(jie)枝(zhi)量(liang)、醛(quan)(quan)基(ji)化(hua)天(tian)(tian)(tian)然(ran)多(duo)糖(tang)(tang)溶液濃度和(he)氨基(ji)改性(xing)天(tian)(tian)(tian)然(ran)生(sheng)物高分(fen)子(zi)溶液濃度來控制。通過增加(jia)天(tian)(tian)(tian)然(ran)多(duo)糖(tang)(tang)中醛(quan)(quan)基(ji)含(han)量(liang)和(he)提高醛(quan)(quan)基(ji)化(hua)天(tian)(tian)(tian)然(ran)多(duo)糖(tang)(tang)溶液濃度可(ke)以增加(jia)凝膠(jiao)(jiao)的(de)黏稠(chou)度和(he)降低(di)成(cheng)膠(jiao)(jiao)時(shi)間。通過增加(jia)氨基(ji)改性(xing)天(tian)(tian)(tian)然(ran)生(sheng)物高分(fen)子(zi)中氨基(ji)的(de)接(jie)(jie)枝(zhi)量(liang)和(he)氨基(ji)改性(xing)的(de)天(tian)(tian)(tian)然(ran)高分(fen)子(zi)溶液濃度，可(ke)以減少(shao)成(cheng)膠(jiao)(jiao)時(shi)間。本法(fa)發(fa)明采(cai)用改性(xing)的(de)天(tian)(tian)(tian)然(ran)多(duo)糖(tang)(tang)和(he)天(tian)(tian)(tian)然(ran)生(sheng)物高分(fen)子(zi)，生(sheng)物安全性(xing)好，用法(fa)簡單可(ke)用于醫用止血領域(yu)，可(ke)以在10～600秒內成(cheng)膠(jiao)(jiao)止血。

(四)附圖說明

圖1為本發(fa)明(ming)成膠后的(de)照片。

圖2為(wei)本發明涂(tu)抹到大鼠肝臟創口止(zhi)血后(hou)的(de)照(zhao)片(左邊為(wei)未做任(ren)何處(chu)理(li)，右邊為(wei)加止(zhi)血凝膠(jiao)處(chu)理(li))。

圖3為本發明涂抹到大(da)鼠(shu)骨動(dong)脈創口止血(xue)形成血(xue)凝塊的照片。

(五)具體實施方式

下(xia)面結合具體實施(shi)例對本(ben)發明進(jin)(jin)行進(jin)(jin)一步描(miao)述，但本(ben)發明的(de)保護范圍并(bing)不僅限于此：

實施例1

1)將(jiang)1g殼(ke)聚(ju)糖溶于(yu)100ml pH為(wei)6的水配制成質(zhi)量(liang)(liang)濃(nong)度1％溶液(ye)，待完全溶解后(hou)，加(jia)入0.5g高(gao)碘酸(suan)鈉，20℃避光(guang)反(fan)(fan)應1h，之后(hou)加(jia)入0.9ml乙二醇終(zhong)止(zhi)反(fan)(fan)應。將(jiang)反(fan)(fan)應液(ye)倒入透(tou)析(xi)袋(透(tou)過分(fen)子量(liang)(liang)為(wei)8000-14000Da)中以去(qu)離子水為(wei)透(tou)析(xi)液(ye)，15℃透(tou)析(xi)2天(tian)(tian)，之后(hou)取截留液(ye)放置在(zai)-20℃下保(bao)存0.5小(xiao)(xiao)時(shi)，隨后(hou)在(zai)-80℃放置5小(xiao)(xiao)時(shi)，再于(yu)冷(leng)凍干燥機中-50℃、1Pa的條件下凍干24小(xiao)(xiao)時(shi)，獲得醛(quan)(quan)基(ji)(ji)化殼(ke)聚(ju)糖，醛(quan)(quan)基(ji)(ji)氧化率(lv)(即醛(quan)(quan)基(ji)(ji)理論質(zhi)量(liang)(liang)含(han)量(liang)(liang)占醛(quan)(quan)基(ji)(ji)化天(tian)(tian)然多糖質(zhi)量(liang)(liang))為(wei)40％。

2)將(jiang)(jiang)1mmol透(tou)(tou)明(ming)質酸(suan)溶于100ml去(qu)(qu)離子(zi)水(shui)(shui)，隨后加入1mmol聯(lian)氨(an)(an)(an)。完全混合后，加入1mmol的(de)1-(3-二甲氨(an)(an)(an)基(ji)丙(bing)基(ji))-3-乙基(ji)碳二亞(ya)胺鹽酸(suan)鹽(EDC)和1mmol的(de)N-羥基(ji)丁(ding)二酰亞(ya)胺(NHS)的(de)混合物，調(diao)節pH到3并維持4h，隨后攪拌反應(ying)24h。將(jiang)(jiang)反應(ying)液倒入透(tou)(tou)析袋(透(tou)(tou)過分子(zi)量(liang)(liang)為(wei)(wei)8000-14000Da)中以(yi)去(qu)(qu)離子(zi)水(shui)(shui)為(wei)(wei)透(tou)(tou)析液，10℃透(tou)(tou)析2天，再(zai)于冷凍干(gan)燥機中-50℃、1Pa的(de)條(tiao)件下凍干(gan)24小(xiao)時，獲得氨(an)(an)(an)基(ji)改性(xing)透(tou)(tou)明(ming)質酸(suan)，氨(an)(an)(an)基(ji)接(jie)枝率(即氨(an)(an)(an)基(ji)的(de)理論質量(liang)(liang)接(jie)枝量(liang)(liang)為(wei)(wei)氨(an)(an)(an)基(ji)改性(xing)天然生(sheng)物高分子(zi)質量(liang)(liang)的(de))為(wei)(wei)80％。

3)將步驟1)制備(bei)的(de)醛(quan)基(ji)(ji)化殼(ke)聚糖(tang)用(yong)(yong)去離(li)子水(shui)配制成(cheng)質(zhi)(zhi)量(liang)濃度1％醛(quan)基(ji)(ji)化殼(ke)聚糖(tang)溶(rong)液；將步驟2)制備(bei)的(de)氨基(ji)(ji)改(gai)性(xing)透(tou)明質(zhi)(zhi)酸用(yong)(yong)去離(li)子水(shui)配制成(cheng)質(zhi)(zhi)量(liang)濃度1％氨基(ji)(ji)改(gai)性(xing)透(tou)明質(zhi)(zhi)酸溶(rong)液。按(an)體積比1:0.1的(de)比例，將1ml醛(quan)基(ji)(ji)化殼(ke)聚糖(tang)溶(rong)液和0.1ml氨基(ji)(ji)改(gai)性(xing)透(tou)明質(zhi)(zhi)酸溶(rong)液用(yong)(yong)雙膛注射(she)器涂抹于創口(kou)處，可(ke)以在600秒內成(cheng)膠止血。

實施例2

1)將10g葡聚糖(tang)溶(rong)(rong)于100ml去離(li)子水配制(zhi)成(cheng)質量濃度10％溶(rong)(rong)液(ye)，待完全(quan)溶(rong)(rong)解后，加入10g高氯酸鈉，25℃避光反應3h，之后加入9ml乙(yi)二醇終止反應。將反應液(ye)倒入透析(xi)袋(透過分(fen)子量為8000-14000Da)中(zhong)以去離(li)子水為透析(xi)液(ye)，25℃透析(xi)7天，之后放置在-20℃下保(bao)存3小(xiao)時(shi)，隨后在-80℃放置12小(xiao)時(shi)，再于冷凍干燥機中(zhong)以-50℃、99Pa的條(tiao)件下凍干96小(xiao)時(shi)，獲得(de)醛基化(hua)葡聚糖(tang)，醛基氧化(hua)率為50％。

2)將(jiang)(jiang)1mmol明(ming)膠(購自sigma)溶(rong)于(yu)100ml去離(li)子水，隨后加入(ru)30mmol己二酸(suan)二酰肼。完全混合后，加入(ru)5mmol 1-(3-二甲氨(an)基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽(yan)酸(suan)鹽(yan)(EDC)和(he)5mmol 1-羥基苯并(bing)三氮唑水合物(wu)(HOBt)的混合物(wu)，調節pH到7并(bing)維持8h，隨后攪(jiao)拌反(fan)(fan)應(ying)48h。將(jiang)(jiang)反(fan)(fan)應(ying)液(ye)倒入(ru)透析(xi)袋(透過(guo)分子量為8000-14000Da)中以去離(li)子水為透析(xi)液(ye)，20℃透析(xi)7天，再于(yu)冷凍干(gan)燥機中-50℃、99Pa的條件下凍干(gan)96小時，獲得氨(an)基改性明(ming)膠，氨(an)基接枝率為75％。

3)將(jiang)(jiang)(jiang)步(bu)驟1)制(zhi)備的(de)(de)醛基(ji)化葡(pu)聚糖用(yong)去離子配(pei)制(zhi)成(cheng)質量濃(nong)度(du)(du)20％的(de)(de)醛基(ji)化葡(pu)聚糖溶(rong)液；將(jiang)(jiang)(jiang)步(bu)驟2)制(zhi)備的(de)(de)氨(an)基(ji)改(gai)性明(ming)膠(jiao)用(yong)去離子水配(pei)制(zhi)成(cheng)質量濃(nong)度(du)(du)20％的(de)(de)氨(an)基(ji)改(gai)性明(ming)膠(jiao)溶(rong)液。按體積比(bi)1:1的(de)(de)比(bi)例，將(jiang)(jiang)(jiang)0.5ml醛基(ji)化葡(pu)聚糖溶(rong)液和0.5ml氨(an)基(ji)改(gai)性明(ming)膠(jiao)溶(rong)液用(yong)雙膛注射(she)器涂(tu)抹于創口處，可以(yi)在10秒內成(cheng)膠(jiao)止血(xue)。

實施例3

1)將2g透(tou)明(ming)質(zhi)酸(suan)溶于100ml去離子水配制(zhi)成質(zhi)量濃度(du)2％溶液，待完全溶解(jie)后(hou)，加入2g的(de)(de)高(gao)碘酸(suan)鉀(jia)，30℃避(bi)光反應12h，之后(hou)用1.8ml的(de)(de)乙二醇終止反應。將反應液倒入透(tou)析袋(dai)(透(tou)過分子量為(wei)8000-14000Da)中以去離子水為(wei)透(tou)析液，15℃透(tou)析4天，之后(hou)放置(zhi)在-20℃下保存1.5小時，隨后(hou)在-80℃放置(zhi)10小時，再于冷凍(dong)干燥(zao)機中-50℃、50Pa的(de)(de)條件下凍(dong)干48小時，獲(huo)得(de)醛基(ji)化透(tou)明(ming)質(zhi)酸(suan)，醛基(ji)氧(yang)化率為(wei)42％。

2)將1mmol海藻酸(suan)鈉溶于100ml去離(li)子(zi)水(shui)，隨(sui)后(hou)加(jia)(jia)入15mmol己二(er)(er)酸(suan)二(er)(er)酰肼(jing)。完(wan)全混(hun)合后(hou)，加(jia)(jia)入3mmol1-(3-二(er)(er)甲(jia)氨基(ji)丙(bing)基(ji))-3-乙基(ji)碳(tan)二(er)(er)亞胺鹽(yan)(yan)酸(suan)鹽(yan)(yan)(EDC)和3mmol N-羥基(ji)丁二(er)(er)酰亞胺(NHS)的混(hun)合物，調(diao)節pH到5并維持(chi)6h，隨(sui)后(hou)攪拌反(fan)應36h。將反(fan)應液倒入透(tou)析袋(透(tou)過(guo)分子(zi)量(liang)為8000-14000Da)中以去離(li)子(zi)水(shui)為透(tou)析液，25℃透(tou)析4天，以-50℃、50Pa的條(tiao)件下(xia)凍干72小時，獲得氨基(ji)改(gai)性海藻酸(suan)鈉，氨基(ji)接枝率為65％。

3)將步驟1)制(zhi)備的(de)(de)醛(quan)(quan)基化透明質(zhi)(zhi)酸(suan)用去離子水(shui)配制(zhi)成(cheng)質(zhi)(zhi)量(liang)濃度10％的(de)(de)醛(quan)(quan)基化透明質(zhi)(zhi)酸(suan)溶液；將步驟2)制(zhi)備的(de)(de)氨(an)基改(gai)性海藻(zao)酸(suan)鈉用去離子水(shui)配制(zhi)成(cheng)質(zhi)(zhi)量(liang)濃度10％的(de)(de)氨(an)基改(gai)性海藻(zao)酸(suan)鈉溶液。按體積比1:0.5的(de)(de)比例，將1ml醛(quan)(quan)基化透明質(zhi)(zhi)酸(suan)溶液和0.5ml氨(an)基改(gai)性海藻(zao)酸(suan)鈉溶液用雙膛注射(she)器涂抹(mo)于創口處，可以在60秒內(nei)成(cheng)膠止血。

實施例4

1)將(jiang)5g海藻酸(suan)鈉(na)溶(rong)于100ml去離子水配制成(cheng)質(zhi)量(liang)濃度5％溶(rong)液，待(dai)完全(quan)溶(rong)解后(hou)(hou)，加(jia)入5g高氯酸(suan)鉀，35℃避光反應(ying)18h，之后(hou)(hou)用4.5ml的(de)乙二(er)醇終(zhong)止反應(ying)。將(jiang)反應(ying)液倒入透析袋(透過分子量(liang)為8000-14000Da)中(zhong)(zhong)以(yi)去離子水為透析液，30℃透析6天，之后(hou)(hou)放(fang)置在(zai)-20℃下保存2小時(shi)(shi)，隨后(hou)(hou)在(zai)-80℃放(fang)置10小時(shi)(shi)，再于冷凍干燥機中(zhong)(zhong)-50℃、99Pa的(de)條(tiao)件下凍干48小時(shi)(shi)，獲得醛基化(hua)海藻酸(suan)鈉(na)，醛基氧化(hua)率為35％。

2)將1mmol硫酸軟骨素溶于100ml去離子(zi)水，隨(sui)后加入20mmol己(ji)二(er)酸二(er)酰肼。完全混合(he)后，加入2mmol1-(3-二(er)甲氨基(ji)丙(bing)基(ji))-3-乙基(ji)碳二(er)亞胺鹽酸鹽(EDC)和2mmol1-羥基(ji)苯并三氮(dan)唑水合(he)物(HOBt)的(de)混合(he)物。調節(jie)pH到7并維持(chi)5h，隨(sui)后攪拌反應(ying)48h。將反應(ying)液(ye)倒入透析(xi)袋(透過(guo)分子(zi)量(liang)為8000-14000Da)中以去離子(zi)水為透析(xi)液(ye)，25℃透析(xi)6天，以-50℃，99Pa的(de)條(tiao)件下凍干72小時，獲得氨基(ji)改性硫酸軟骨素，氨基(ji)接(jie)枝(zhi)率為80％。

7)將(jiang)步(bu)驟1)制備的醛基(ji)(ji)化(hua)(hua)海(hai)(hai)藻(zao)(zao)酸(suan)鈉(na)(na)用(yong)去離子(zi)水(shui)配(pei)制成(cheng)質量(liang)濃度15％的醛基(ji)(ji)化(hua)(hua)海(hai)(hai)藻(zao)(zao)酸(suan)鈉(na)(na)溶(rong)(rong)液；將(jiang)步(bu)驟2)制備的氨(an)基(ji)(ji)改性(xing)(xing)(xing)硫(liu)酸(suan)軟骨素用(yong)去離子(zi)水(shui)配(pei)制成(cheng)質量(liang)濃度15％的氨(an)基(ji)(ji)改性(xing)(xing)(xing)硫(liu)酸(suan)軟骨素溶(rong)(rong)液。按(an)體積比(bi)1:0.6的比(bi)例(li)，將(jiang)1ml醛基(ji)(ji)化(hua)(hua)海(hai)(hai)藻(zao)(zao)酸(suan)鈉(na)(na)溶(rong)(rong)液和(he)0.6ml氨(an)基(ji)(ji)改性(xing)(xing)(xing)硫(liu)酸(suan)軟骨素溶(rong)(rong)液用(yong)雙膛注射器涂抹(mo)于創(chuang)口(kou)處，可以在30秒內成(cheng)膠止(zhi)血(xue)。

實施例5

1)將3g羧甲基(ji)(ji)纖維(wei)素溶(rong)于100ml去離(li)子(zi)(zi)水配制成質量(liang)濃度3％溶(rong)液，待完全溶(rong)解(jie)后，加入3g高碘酸鈉，25℃避光(guang)反應24h，之后用2.7ml的乙二醇終(zhong)止反應。將反應液倒入透(tou)析袋(透(tou)過分子(zi)(zi)量(liang)為8000-14000Da)中以去離(li)子(zi)(zi)水為透(tou)析液，15℃透(tou)析3天(tian)，之后放置在(zai)-20℃下(xia)保存2小時，隨后在(zai)-80℃放置5小時，再于冷凍干燥機(ji)中-50℃、1Pa的條件下(xia)凍干96小時，獲得(de)醛基(ji)(ji)化(hua)羧甲基(ji)(ji)纖維(wei)素，醛基(ji)(ji)氧化(hua)率為30％。

2)將1mmol絲膠溶于100ml去離(li)子水(shui)，隨后(hou)加(jia)入10mmol己二酸二酰肼。完全(quan)混(hun)合后(hou)，加(jia)入2mmol 1-(3-二甲氨基(ji)(ji)(ji)丙基(ji)(ji)(ji))-3-乙基(ji)(ji)(ji)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和2mmol N-羥基(ji)(ji)(ji)丁二酰亞胺(NHS)混(hun)合物(wu)，調節pH到7并(bing)維持4h，隨后(hou)攪拌反應24h。將反應液(ye)倒入透(tou)析(xi)袋(dai)(透(tou)過分子量為8000-14000Da)中以(yi)去離(li)子水(shui)為透(tou)析(xi)液(ye)，25℃透(tou)析(xi)4天，以(yi)-50℃，1Pa的(de)條(tiao)件下凍干96小時，獲得氨基(ji)(ji)(ji)改(gai)性絲膠，氨基(ji)(ji)(ji)接枝率(lv)為70％。

3)將(jiang)(jiang)步驟(zou)1)制備的(de)(de)羧(suo)(suo)甲(jia)基(ji)纖維(wei)素(su)(su)用去離子水(shui)(shui)配(pei)制成質(zhi)量濃度1％的(de)(de)羧(suo)(suo)甲(jia)基(ji)纖維(wei)素(su)(su)溶液(ye)；將(jiang)(jiang)步驟(zou)2)制備的(de)(de)氨(an)基(ji)改性(xing)(xing)(xing)絲(si)膠(jiao)用去離子水(shui)(shui)配(pei)制成質(zhi)量濃度20％的(de)(de)氨(an)基(ji)改性(xing)(xing)(xing)絲(si)膠(jiao)溶液(ye)。按體(ti)積比1:1的(de)(de)比例(li)，將(jiang)(jiang)0.5ml醛基(ji)化羧(suo)(suo)甲(jia)基(ji)纖維(wei)素(su)(su)溶液(ye)和0.5ml氨(an)基(ji)改性(xing)(xing)(xing)絲(si)膠(jiao)溶液(ye)用雙膛注射器涂抹于創口處，可以在500秒內成膠(jiao)止血。

實施例6

1)將(jiang)3g硫酸軟骨素(su)溶(rong)于100ml去離子水配制成質量濃度3％溶(rong)液(ye)，待完全溶(rong)解后(hou)，加入3g的高碘酸鈉(na)，30℃避光(guang)反應(ying)24h，之后(hou)用2.7ml的乙二醇終止反應(ying)。將(jiang)反應(ying)液(ye)倒入透析(xi)袋(透過分子量為(wei)8000-14000Da)中(zhong)以(yi)去離子水為(wei)透析(xi)液(ye)，20℃透析(xi)7天(tian)，之后(hou)放置在-20℃下保存3小(xiao)(xiao)時(shi)，隨后(hou)在-80℃放置7小(xiao)(xiao)時(shi)，于冷(leng)凍干燥機中(zhong)-50℃、99Pa的條件(jian)下凍干96小(xiao)(xiao)時(shi)，獲得醛基(ji)(ji)化硫酸軟骨素(su)，醛基(ji)(ji)氧化率為(wei)35％。

2)將(jiang)(jiang)1mmol(購自sigma)膠(jiao)原溶(rong)于(yu)100ml去(qu)離子水(shui)，隨(sui)后(hou)加(jia)入(ru)30mmol的己二(er)(er)酸二(er)(er)酰(xian)肼。完全(quan)混合后(hou)，加(jia)入(ru)5mmol1-(3-二(er)(er)甲(jia)氨(an)(an)基(ji)丙(bing)基(ji))-3-乙基(ji)碳(tan)二(er)(er)亞(ya)胺(an)鹽酸鹽(EDC)和5mmol N-羥基(ji)丁二(er)(er)酰(xian)亞(ya)胺(an)(NHS)的混合物，調(diao)節pH到6并維持(chi)8h，隨(sui)后(hou)攪拌反應(ying)48h。將(jiang)(jiang)反應(ying)液倒入(ru)透析袋(透過分子量為8000-14000Da)中以去(qu)離子水(shui)為透析液，25℃透析7天，再于(yu)冷凍干燥機中-50℃、99Pa的條(tiao)件下凍干96小時，獲得氨(an)(an)基(ji)改性膠(jiao)原，氨(an)(an)基(ji)接枝率為67％。

3)將(jiang)步(bu)驟(zou)1)制(zhi)備(bei)的醛(quan)基(ji)(ji)化硫(liu)酸(suan)軟(ruan)骨素用去(qu)離子水(shui)配制(zhi)成(cheng)質量(liang)濃度20％的醛(quan)基(ji)(ji)化硫(liu)酸(suan)軟(ruan)骨素溶液；將(jiang)步(bu)驟(zou)2)制(zhi)備(bei)的氨基(ji)(ji)改性(xing)膠(jiao)原(yuan)用去(qu)離子水(shui)配制(zhi)成(cheng)質量(liang)濃度1％的氨基(ji)(ji)改性(xing)膠(jiao)原(yuan)溶液。按體積比1:1的比例，將(jiang)0.5ml醛(quan)基(ji)(ji)化硫(liu)酸(suan)軟(ruan)骨素溶液和0.5ml氨基(ji)(ji)改性(xing)膠(jiao)原(yuan)溶液用雙膛注射器涂抹于創口處，可以在200秒內成(cheng)膠(jiao)止血(xue)。