專利名稱：重組人干擾素α2b含片及其制法的制作方法
技術領域：
本發明涉及具有藥用抗病毒、調節免疫功能的作用的干擾素，尤其涉及重組人干擾素α2b含片及其制法。
背景技術：
干擾素有抑制病毒復制，抗細胞增殖和調節免疫應答等多種生物學效應。廣泛應用于治療和預防病毒感染性、免疫功能失調性等疾病。干擾素包括α、β、γ三大類型，最近又發現了ω和Γ兩類干擾素。α干擾素可分為許多亞型，分別命名為α1、α2、α3……，其中α2又包括α2a和α2b兩種亞型。
從其生產制備方法上來分，干擾素可分為天然干擾素和重組干擾素。天然干擾素是通過培養人的白細胞并利用適當的刺激原(如雞瘟病毒、仙臺病毒)對其進行刺激誘導，使其產生干擾素，再利用生化方法進行純化而得到。重組干擾素則是通過基因重組的方法，將干擾素基因整合到適當的表達系統中(如大腸桿菌)，在通過發酵或細胞培養的方法使干擾素得到大量表達，然后通過分離純化而得到。重組人干擾素α2b就是利用此方法，將人的干擾素α2b基因整合到大腸桿菌中，通過發酵，純化而得到高純度、高產量的重組人干擾素α2b。重組人干擾素與天然干擾素相比，具有純度高、產量大、成本低等優點，其氨基酸序列與天然干擾素略有差別。
現有的α干擾素研究均采用天然干擾素，如中國專利申請98105384.x公開了一種復方干擾素含片及其制備方法，但采用的是天然α干擾素與白細胞介素2的混合物。中國專利申請95111433.6公開了一種人白細胞干擾素口含片及其制法，但采用的人白細胞干擾素，系由健康人白細胞通過仙臺病毒誘導、提純，并經特殊滅活病毒處理制成。中國專利申請98105383.1公開了一種β干擾素含片及其制備方法，但采用的是β干擾素。這些天然α干擾素含片具有抗病毒、調節免疫功能的作用，如抗流感病毒、抗SARS冠狀病毒、乙肝、丙肝病毒、使用的劑量為小劑量，在10000IU以下，以100IU～500IU較多。
重組人干擾素α2b目前有注射劑、滴眼劑、栓劑、凝膠劑、軟膏劑等。常用的注射劑具有增加病人痛苦、副作用大、價格昂貴的不足。尚無重組人干擾素含片劑型的研究報道。因此，研究和開發含片劑型，充分發揮該劑型服藥方便、病人耐受性好、價格低廉等優點，成為人們期盼。

發明內容
本發明的目的在于提供一種安全有效劑量、療效好、副作用小、服用方便的重組人干擾素α2b含片及其制造方法。
為了達到以上目的，本發明提供了一種重組人干擾素α2b含片，其中包含作為有效成份的重組人干擾素α2b，以及藥學上認可的輔料，包括乳糖、糖粉、淀粉、羥丙甲纖維素、微粉硅膠等。
上述小劑量含片的重組人干擾素α2b含量為每片100IU～1000IU，優選400IU～750IU，上述大劑量含片的重組人干擾素α2b含量為每片10000IU～100000IU，優選40000IU～75000IU。上述輔料的重量配比是乳糖40％～75％，糖粉10％～40％，羥丙甲纖維素2％～15％，淀粉2％～12％，微粉硅膠2％～10％。
乳糖和糖粉為主要填充劑，能改變含片的味覺性能，增加含片的硬度，羥丙甲纖維素和微粉硅膠為粘合劑，使含片能更好的壓縮成型，延長崩解時限，確保干擾素在口腔粘膜處有充分的作用時間，淀粉以淀粉漿的形式加入，它既是粘合劑，又是崩解劑。
本發明的制備工藝是，先將乳糖、糖粉、淀粉、羥丙甲纖維素、微粉硅膠充分混合，過篩、將淀粉制成淀粉漿加入上述混合輔料中，干擾素加入淀粉漿中一起加入或配成溶液單獨加入，然后制成濕顆粒，干燥，壓片。
本發明也可以使用其它適宜的添加劑如防腐劑和矯味劑。
本發明的重組人干擾素α2b含片經一系列實驗研究表明安全有效，具有抗病毒，調節免疫功能等功效。可用于治療和預防嚴重急性呼吸道綜合癥流感、乙肝、丙肝、病毒性心肌炎、多發性硬化癥等疾病的作用。
下面通過實施例的方式進一步說明本發明，并不因此將本發明限制在所述的實施例范圍之中。
(2)將淀粉制成20％的淀粉漿，加入上述混合粉中。
(3)將重組人干擾素α2b制成一定濃度的溶液，噴霧的方式加入上述粉末中。
(4)充分混合，過14目篩，制成濕顆粒。
(5)30～50℃的溫度烘干3～8小時。
(6)干顆粒中再加入少量硬脂酸鎂，混合均勻。
(7)壓片，得干擾素含片。實施例6本實例為實施例1～4的另一種制造工藝過程(1)乳糖、糖粉、羥丙甲纖維素、按倍比稀釋法進行混合，過80目篩。
(2)將淀粉制成20％的淀粉漿。
(3)將重組人干擾素α2b加入淀粉漿中，然后將淀粉漿加入上述混合粉中。
(4)充分混合，過14目篩，制成濕顆粒。
(5)30～50℃的溫度烘干3～8小時。
(6)干顆粒中再加入少量硬脂酸鎂，混合均勻。
(7)壓片，得干擾素含片。
試驗實施例1 藥效學試驗實驗目的觀察重組人干擾素α2b含片對流感病毒的抑制作用，為臨床用藥效性提供依據。
實驗材料1、藥品重組人干擾素α2b含片，5000IU/片，由深圳海王英特龍生物公司提供。
2、病毒流感病毒A/FM/1/47(H1N1)。
3、稀釋液普通馬丁肉湯，0.85％生理鹽水。
4、動物昆明小鼠雌雄各半，體重18-22g，由長春生物制品所動物室提供，9日齡雞胚。
實驗方法一、雞胚培養法抗病毒試驗1、病毒原液(100EID50)1ml馬丁肉湯稀釋液，稀釋成10EID50濃度備用。
2、取5片重組人干擾素α2b含片溶入2.5ml生理鹽水中，取1ml上清液備用。
3、取1ml病毒稀釋液，加1ml重組人干擾素α2b含片溶液，混勻，置4℃冰箱過夜備用。
4、接種取9日齡雞胚10只，均分成對照組和重組人干擾素α2b含片組。含片組接種上述混合液0.1ml，置35℃培養箱培養3天，收取雞胚尿囊液，測定血凝效價。對照組雞胚接種0.1ml生理鹽水，同法培養及取尿囊液。
5、測定雞胚尿囊液稀釋倍數，原液1ml加29ml生理鹽水，倍比稀釋成30、60、120、240、480、960、1920倍，向每管中加1滴雞紅血球，室溫下放置30分鐘，判定標準如下

終點以5號管++為陽性判定各樣本出現陽性結果的最高稀釋倍數，進行組間tr檢驗。
二、抗小鼠流感肺炎試驗1、分組、給藥將15只小鼠均分三組，分別為模型組、感染前給藥組、感染后給藥組。感染前給藥組口腔粘膜給藥，每日2次，連續三天。第4天，各組均滴鼻感染10LD50量的流感病毒，2小時后感染前給藥組、感染后給藥組繼續給藥3天。末次給藥后12小時處死小鼠，取肺加生理鹽水勻漿，制成10％懸液做病毒滴定。
2、病毒滴定將給藥組肺懸液稀釋10-1～10-5，模型組肺懸液稀釋10-4～10-7，每個稀釋度接種4個雞胚，每胚0.2ml，用石蠟封口，放37℃培養72小時，做血凝判定。
實驗結果一、雞胚培養法抗病毒試驗結果表1 α2b含片對流感病毒的抑制作用(x±s，n＝5)

與對照組比較***P＜0.001由表1可知，對照組血凝效價為1∶456，α2b含片組血凝效價為1∶174，說明α2b含片對流感病毒有明顯的抑制作用。
二、抗小鼠流感肺炎試驗表2 α2b含片抗小鼠流感肺炎試驗EID50測定結果(x±s，n＝5)

與對照組比較***P＜0.001由表2可知，α2b含片感染前給藥組及感染后給藥組與模型組比較均有明顯的抗病毒作用。
結論重組人干擾素α2b含片對體內、體外病毒均有明顯的抑制作用。
試驗實施例2 重組人干擾素α2b含片急性毒性試驗實驗目的觀察重組人干擾素α2b含片一次性于口腔粘膜給藥后，由于粘膜吸收所產生的毒性反應和死亡情況。
實驗材料1、藥品重組人干擾素α2b含片，1500000IU/片，由深圳海王英特龍生物公司提供。
2動物Wistar大鼠20只雌雄各半，體重250-300g，由吉林省藥品檢驗所動物室提供，合格證編號10--1009。
實驗方法1、劑量選擇重組人干擾素α2b含片臨床每日擬用劑量為15000IU/人，在預試的基礎上，選高于臨床劑量100倍量。
2、分組、給藥及觀察上述大鼠均分為賦形劑組和重組人干擾素α2b含片組。用紗布條將藥片包好縫緊，吊系在口腔中，1片/只，1次給藥，即刻觀察動物狀態、毛發、食欲、四肢活動、精神狀態、死亡情況及體重變化，連續14日。
實驗結果1、給藥7日之內，賦形劑組及重組人干擾素α2b含片組動物毛發、食欲、四肢活動、精神狀態均無異常，無一死亡，體重亦無明顯差別，見下表。
表重組人干擾素α2b含片及賦形劑組急毒試驗體重變化(x±s，n＝10)

2、重組人干擾素α2b含片臨床擬用量為每日150000IU/人，若人體重按60kg計算，即2500IU/kg；而急毒試驗證明，給藥量1500000IU/只，未出現毒性反應，若大鼠體重按0.27kg計算，即5600000IU/kg相當于臨床劑量的22000倍，所以臨床用藥非常安全。
權利要求
1.一種重組人干擾素α2b含片，其中包含作為有效成份的重組人干擾素α2b，以及藥學上認可的輔料，包括乳糖、糖粉、淀粉、羥丙甲纖維素、微粉硅膠。
2.根據權利要求1所述的一種重組人干擾素α2b含片，含片的重組人干擾素α2b含量為每片100IU～1000IU。
3.根據權利要求1所述的一種重組人干擾素α2b含片，含片的重組人干擾素α2b含量為每片10000IU～100000IU。
4.根據權利要求1、2、3所述的一種重組人干擾素α2b含片，所述輔料的重量配比是乳糖40％～75％，糖粉10％～40％，羥丙甲纖維素2％～15％，淀粉2％～12％，微粉硅膠2％～10％。
5.根據權利要求1的一種重組人干擾素α2b含片的制法，它包括(1)將乳糖、糖粉、羥丙甲纖維素、按倍比稀釋法進行混合，過80目篩；(2)將淀粉制成20％的淀粉漿，加入上述混合粉中；(3)將重組人干擾素α2b制成一定濃度的溶液，噴霧的方式加入上述粉末中；(4)充分混合，過14目篩，制成濕顆粒；(5)30～50℃的溫度烘干3～8小時；(6)干顆粒中再加入少量硬脂酸鎂，混合均勻；(7)壓片，得干擾素含片。
6.根據權利要求1的一種重組人干擾素α2b含片的制法，它包括(1)乳糖、糖粉、羥丙甲纖維素、按倍比稀釋法進行混合，過80目篩；(2)將淀粉制成20％的淀粉漿；(3)將重組人干擾素α2b加入淀粉漿中，然后將淀粉漿加入上述混合粉中；(4)充分混合，過14目篩，制成濕顆粒；(5)30～50℃的溫度烘干3～8小時；(6)干顆粒中再加入少量硬脂酸鎂，混合均勻；(7)壓片，得干擾素含片。
全文摘要
本發明涉及重組人干擾素α2b含片及其制法，其中藥用重組人干擾素α2b含量在100－10萬IU/片，賦形劑包括乳糖、糖粉、羥丙甲纖維素、淀粉、微粉硅膠等，上述組份經充分混合、過篩、制成濕顆粒后，再干燥、壓片成形。該含片具有更有效的治療和預防嚴重急性呼吸道綜合癥(SARS)、流感、乙肝、丙肝、病毒性心肌炎、多發性硬化癥等疾病的作用。
文檔編號A61K38/21GK1443572SQ03114320
公開日2003年9月24日 申請日期2003年4月28日 優先權日2003年4月28日
發明者王妍, 柴向東, 蔣為民, 李云富 申請人:深圳市海王英特龍生物技術股份有限公司