一種腫瘤靶向納米制劑及其制備方法
【專利摘要】本發明涉及一種腫瘤靶向納米制劑及其制備方法，其是由以下成分所制成：活性藥物、脂溶性乳化劑、油相基質、水溶性蛋白、聚乙二醇材料和腫瘤靶向短肽和交聯劑。內核油相可顯著地提高難溶性活性藥物的溶解度，提高制劑的載藥能力；水溶性蛋白外殼經過交聯可顯著的提高制劑的穩定性并獲得較好的緩釋效果；制劑經腫瘤靶向短肽修飾后可顯著提高腫瘤靶向能力。本發明的特點是載藥量高，穩定性較常規納米乳好，生物相容性高，具有腫瘤靶向性，可提高藥物的療效。
【專利說明】一種腫瘤靶向納米制劑及其制備方法
[0001]【技術領域】:本發明涉及一種新型具有殼核結構的以納米乳為模板的納米遞藥載體，具有腫瘤靶向特性，屬于新型納米靶向藥物制劑領域研究。
[0002]【背景技術】:目前，眾多種類的納米遞藥系統被開發，其優點包括:⑴增加難溶性藥物的溶解度；(2)提高藥物透過細胞生物膜能力，改善吸收并提高生物利用度；(3)控制藥物釋放和提高藥物穩定性；⑷靶向定位給藥，提高療效，降低藥物的毒副作用；(5)可以改變藥物藥動學性質和在各器官或組織的分布等。這類納米載體包括脂質體、納米粒、聚合物膠束等，雖然這些載體從某些方面解決了藥物應用存在的問題，但都存在一定的缺點，包括穩定性差、載 藥量低等。例如實心納米粒只能在表面載藥，這極大的限制了載藥量并且降低了藥物的穩定性，也不能靈活的釋放藥物。一般納米粒和脂質體的載藥量不會超過10%，為了達到治療效果，必定需要增加給藥劑量或給藥次數，不僅給病患帶來痛苦，由于更多輔料的攝取，勢必增加了制劑的系統毒性，帶來用藥風險。相比之下微乳、納米乳制劑可以獲得較高的載藥量，不過大量表面活性劑、助表面活性劑的使用，增加了制劑潛在的毒性，與此同時其穩定性相對較差容易破乳、聚集。
[0003]相比之下，具有殼核結構的納米載體正在被開發利用以解決過往載體載藥量低的缺點，一般這些載體都是通過用各種材料包裹膠體微粒或者液滴等形成的。受此啟發，本研究擬開發的是一種以納米乳為基礎，具有殼核結構的新型納米載體，將藥物溶解在油相中，形成納米微粒即載藥內核，實現高載藥量；利用蛋白包覆表面形成親水性保護囊殼，同時卵磷脂輔助穩定油相，并用堿土金屬離子交聯蛋白，實現高穩定性。由于交聯劑的加入，表面形成堅固囊殼，該納米載體的緩釋性能也大大提，而且作為囊殼材料的蛋白也具有很好的生物相容性，表面蛋白大量的氨基和羧基也提供了更多的修飾位點。將腫瘤靶向性的短肽修飾至表面蛋白所具有的的位點上，從而使納米載體具有腫瘤靶向的活性，提高載體在腫瘤部位的蓄積量，從而提高治療腫瘤的效果。
[0004]
【發明內容】
:本發明目的是提供一種利用蛋白作為穩定劑具有殼核結構的通過iRGD介導靶向腫瘤組織的納米制劑及其制備方法。該制劑的給藥途徑為靜脈注射，用于抗腫瘤治療。
[0005]本發明的技術方案如下:
[0006]本發明提供了一種腫瘤靶向納米制劑，它的主要組分以及各組分的重量份數比為:活性藥物I份、脂溶性乳化劑2-4份、油相基質100-150份、水溶性蛋白20-30份、聚乙二醇材料份0.3-0.6份、腫瘤靶向短肽0.1-0.4份、交聯劑0.004份，其中優選的主要組分的重量份數比為:活性藥物I份、脂溶性乳化劑3.5份、油相基質135份、水溶性蛋白20-30份、聚乙二醇材料0.45份、腫瘤靶向短肽0.25份、交聯劑0.004份。
[0007]所述油相基質可選自大豆油、玉米油、氫化玉米油、大豆油、花生油、橄欖油、油酸聚乙二醇甘油酯、亞油酸聚乙二醇甘油酯、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、乙氧基化飽和甘油酯、辛酸癸酸甘油三酯、中鏈甘油三脂的一種或幾種，其中優選的油相基質為油酸聚乙二醇甘油酯和大豆油。
[0008]所述的活性藥物可選自紫杉醇、多西紫杉醇、伊立替康、5-氟尿嘧啶、卡莫司汀、阿霉素、苯芥膽留醇、哌泊舒凡、他莫昔芬、洛莫司汀、藤黃酸、冬凌草甲素、鬼白毒素的一種或幾種，其中優選的活性藥物為紫杉醇。
[0009]所述的交聯劑為二價或三價金屬離子，其中優選的交聯劑為氯化鈣。
[0010]所述的脂溶性乳化劑為蛋黃卵磷脂、大豆卵磷脂、吐溫85、司盤60、司盤80、雙硬脂酸乙酯基羥乙基甲基硫酸甲酯銨、油溶性羊毛脂的一種，其中優選的脂溶性乳化劑為蛋黃卵磷脂。
[0011]所述的水溶性蛋白可選自大豆分離蛋白、乳清分離蛋白、￠-乳球蛋白、丙種球蛋白、牛血清蛋白、a -乳白蛋白、Ils大豆球蛋白、b_伴球蛋白、人血清蛋白中的一種或幾種，其中優選的水溶性蛋白為￠-乳球蛋白、大豆分離蛋白和乳清分離蛋白。
[0012]所述的聚乙二醇材料為馬來酰亞胺-聚乙二醇-琥珀酰亞胺(MAL-PEG-NHS)。
[0013]所述的短肽可選自iRGD (氨基酸序列為CRGDKGTOC)、F3 (氨基酸序列為CKDEPQRRSARLSAKPAPPKPEPKPKKAPAKK) ,Angiopep-2 (氨基酸序列為 TFFYGGSRGKRNNFKTEEY)中的一種，其中優選的腫瘤靶向短肽為iRGD肽。
[0014]本發明還提供了所述腫瘤靶向納米制劑的制備方法，它是由以下步驟所制成:
[0015](I)利用超聲將藥物、交聯劑和脂溶性乳化劑溶解于油相基質形成油相待用；
[0016](2)將水溶性蛋白溶解于純凈水中，沸水浴變性后冷卻調節pH值至6.0-11.0，形成水相待用；
[0017](3)將上述油相 、水相混合后，高速分散并高壓均質，加入羥乙基哌嗪乙硫磺酸緩沖鹽，得到反應液一；
[0018](4)將iRGD和NHS-PEG-MAL溶解于羥乙基哌嗪乙硫磺酸緩沖液中，調節pH值至
7.0在4°C氮氣環境中攪拌反應12小時得到反應液二 ；
[0019](5)再將反應液二加入到反應液一中，調節pH值至8.5，在4°C條件下攪拌反應2小時。
[0020]本發明最后提供了所述腫瘤靶向納米制劑在制備抗腫瘤藥物制劑中的應用。
[0021]本發明是利用具有雙功能基團的聚乙二醇材料(NHS-PEG-MAL)將腫瘤靶向短肽與蛋白連接。雙功能基團的聚乙二醇材料的功能基團包括琥珀酰亞胺基和馬來酰亞胺基，其中馬來酰亞胺基在PH6.8-7.2的條件下與靶向短肽氨基酸序列中的巰基反應鍵合，琥珀酰亞胺基在PH8.0-9.0的條件下與水溶性蛋白氨基酸序列中的氨基反應鍵合。
[0022]有益效果:內核油相可顯著地提高難溶性活性藥物的溶解度，提高制劑的載藥能力；水溶性蛋白外殼經過交聯可顯著的提高制劑的穩定性并獲得較好的緩釋效果；制劑經腫瘤靶向短肽修飾后可顯著提高腫瘤靶向能力。
【專利附圖】

【附圖說明】:
[0023]圖1為實施例1制得腫瘤靶向納米制劑的粒徑分布圖
[0024]圖2為實施例1制得腫瘤靶向納米制劑的澤塔電位圖
[0025]圖3為實施例1制得腫瘤靶向納米制劑的掃描電鏡圖
[0026]圖4為實施例1制得腫瘤靶向納米制劑的透射電鏡圖
[0027]圖5為實施例1制得腫瘤靶向納米制劑、市售紫杉醇制劑抑制腫瘤生長的曲線圖。【具體實施方式】:
[0028]實施例1
[0029]處方:
[0030]
【權利要求】
1.一種腫瘤靶向納米制劑，其特征在于，它的主要組分以及各組分的重量份數比為:活性藥物I份、脂溶性乳化劑2-4份、油相基質100-150份、水溶性蛋白20-30份、聚乙二醇材料份0.3-0.6份、腫瘤靶向短肽0.1-0.4份、交聯劑0.004份，其中優選的主要組分的重量份數比為:活性藥物I份、脂溶性乳化劑3.5份、油相基質135份、水溶性蛋白20-30份、聚乙二醇材料0.45份，腫瘤靶向短肽0.25份，交聯劑0.004份。
2.根據權利要求1所述的腫瘤靶向納米制劑，其特征在于，所述油相基質可選自大豆油、玉米油、氫化玉米油、大豆油、花生油、橄欖油、油酸聚乙二醇甘油酯、亞油酸聚乙二醇甘油酯、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、乙氧基化飽和甘油酯、辛酸癸酸甘油三酯、中鏈甘油三脂的一種或幾種，其中優選的油相基質為油酸聚乙二醇甘油酯和大豆油。
3.根據權利要求1所述的腫瘤靶向納米制劑，其特征在于，所述的活性藥物可選自紫杉醇、多西紫杉醇、伊立替康、5-氟尿嘧啶、卡莫司汀、阿霉素、苯芥膽留醇、哌泊舒凡、他莫昔芬、洛莫司汀、藤黃酸、冬凌草甲素、鬼白毒素的一種或幾種，其中優選的活性藥物為紫杉醇。
4.根據權利要求1所述的腫瘤靶向納米制劑，其特征在于，所述的交聯劑為二價或三價金屬離子鹽，其中優選的交聯劑為氯化鈣。
5.根據權利要求1所述的腫瘤靶向納米制劑，其特征在于，所述的脂溶性乳化劑可選自蛋黃卵磷脂、大豆卵磷脂、吐溫85、司盤60、司盤80、雙硬脂酸乙酯基羥乙基甲基硫酸甲酯銨、油溶性羊毛脂的一種，其中優選的脂溶性乳化劑為蛋黃卵磷脂。
6.根據權利要求1所述的腫瘤靶向納米制劑，其特征在于，所述的水溶性蛋白可選自大豆分離蛋白、乳清分離蛋白、￠-乳球蛋白、丙種球蛋白、牛血清蛋白、a-乳白蛋白、Ils大豆球蛋白、b_伴球蛋白、人血清蛋白的一種或幾種，其中優選的水溶性蛋白為￠-乳球蛋白、大豆分離蛋白和乳清分離蛋白。
7.根據權利要求1所述的腫瘤靶向納米制劑，其特征在于，所述的聚乙二醇材料為馬來酰亞胺-聚乙二醇-琥珀酰亞胺(MAL-PEG-NHS)。
8.根據權利要求1所述的腫瘤靶向納米制劑，其特征在于，所述的腫瘤靶向短肽可選自 iRGD (氨基酸序列為 CRGDKGPDC)、F3 (氨基酸序列為 CKDEPQRRSARLSAKPAPPKPEPKPKKAPAKK)、Angiopep-2 (氨基酸序列為TFFYGGSRGKRNNFKTEEY)中的一種，其中優選的腫瘤靶向短肽為iRGD肽。
9.根據權利要求1所述腫瘤靶向納米制劑的制備方法，其特征在于，它是由以下步驟所制成: (1)利用超聲將藥物、交聯劑和脂溶性乳化劑溶解于油相基質形成油相待用； (2)將水溶性蛋白溶解于純凈水中，沸水浴變性后冷卻調節pH值至6.0-11.0，形成水相待用； (3)將上述油相、水相混合后，高速分散并高壓均質,加入羥乙基哌嗪乙硫磺酸緩沖鹽，得到反應液一； (4)將iRGD和NHS-PEG-MAL溶解于羥乙基哌嗪乙硫磺酸緩沖液中，調節pH值至7.0在4°C氮氣環境中攪拌反應12小時得到反應液二 ； (5)再將反應液二加入到反應液一中，調節pH值至8.5，在4°C條件下攪拌反應2小時。
10.根據權利要求1所述腫瘤靶向納米制劑的應用，其特征在于，所述納米制劑在制備抗腫瘤藥物制劑中的應用。`
【文檔編號】A61K45/00GK103432073SQ201310418117
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年9月11日 優先權日:2013年9月11日
【發明者】尹莉芳, 何偉, 金竹, 呂雅琪, 徐超然 申請人:中國藥科大學