一種卡介菌多糖核酸口含片的制作方法
【專利摘要】本發明提供了一種卡介菌多糖核酸為活性成分的口含片，是由卡介菌多糖核酸與藥學上可接受的輔料制成的藥物組合物，同時提供了該口含片的制備方法，該口含片主要用于預防和治療呼吸道感染、哮喘。
【專利說明】—種卡介菌多糖核酸口含片
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種卡介菌多糖核酸為活性成分的口含片及其制備方法，屬于生物【技術領域】。
[0002]
【背景技術】
[0003]支氣管哮喘(bronchial asthma)簡稱“哮喘”，是當今世界上一種最常見的慢性呼吸道疾病，發生機制復雜，現代研究認為哮喘患者體內存在著細胞免疫功能缺陷，從而引發氣道變應性炎癥，這可能是哮喘患者氣道反應性增高的重要機制之一。該病可發生于任何年齡，以I一6歲發病較多，大多在3歲以內發病。
[0004]小兒反復呼吸道感染是指在單位時間內上下呼吸道感染反復發作超過規定次數而言的一種臨床綜合征，為兒科常見疾病，它不僅影響患兒的生長和發育，同時嚴重影響患兒的身心健康。由于反復呼吸道感染導致經常應用抗生素治療，而長期反復的抗生素治療會進一步削弱機體免疫力，如此往復造成惡性循環，給社會和家庭帶來諸多的負擔和痛苦。
[0005]目前應用在小兒反復呼吸道感染及哮喘的常規用藥，起效快，療效顯著。但同時存在著毒副作用明顯，容易復發等問題。卡介菌多糖核酸在治療小兒反復呼吸道感染及哮喘開辟了免疫治療的新方向，通過調節機體內的細胞免疫、體液免疫、刺激網狀內皮系統，激活單核一巨噬細胞功能，增 強自然殺傷細胞功能來增強機體抗病能力；通過穩定肥大細胞，封閉IgE功能，減少脫顆粒細胞釋放活性物質，以及具有抗乙酰膽堿所致的支氣管痙攣作用，達到抗過敏及平喘作用。在常規治療的基礎上，加用卡介菌多糖核酸，縮短療程，降低毒副作用，減輕癥狀，減少復發。
[0006]目前的市售卡介菌多糖核酸為注射劑,在臨床應用方面存在著些許不足:卡介菌多糖核酸給藥頻次高，給藥時間長，采用注射給藥需要患者到醫院治療，用藥不便。這些不足使患者不能堅持用藥，影響療效，特別是小兒患者的順應性差。
[0007]

【發明內容】

[0008]針對現有技術的不足，本發明提供一種卡介菌多糖核酸為活性成分的口含片，是由卡介菌多糖核酸與藥學上可接受的輔料制成的藥物組合物。
[0009]本發明所述卡介菌多糖核酸口含片，其特征在于，所述口含片由以下重量份的組分制成:卡介菌多糖核酸3-15份，填充劑90-120份，粘合劑3-10份，矯味劑2_6份，潤滑劑0.5-3份。
[0010]所述填充劑為可溶性輔料，包括但不限于蔗糖、木糖、乳糖、三氯蔗糖、甘露醇、木糖醇、山梨醇中的一種或幾種；所述粘合劑為聚維酮K3tl;所述矯味劑包括但不限于薄荷腦、薄荷油、乙基麥芽酚、檸檬酸、酒石酸、蘋果酸中的一種或幾種；所述潤滑劑包括但不限于硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、微粉硅膠、滑石粉、山崳酸甘油酯中的一種。[0011]本發明所述的重量份可以是y g、mg、g、kg等醫藥領域公知的質量單位。
[0012]本發明涉及的卡介菌多糖核酸ロ含片的劑量以單元劑型中存在的量計算，在単元劑型中本發明涉及的卡介菌多糖核酸含量約為3-15mg。
[0013]本發明提供的卡介菌多糖核酸ロ含片以下幾種制備方式:
原輔材料準備:卡介菌多糖核酸3-15份，填充劑90-120份，粘合劑3-10份，矯味劑2-6份，潤滑劑0.5-3份。上述原輔料過80目篩備用。
[0014]方法一:
卡介菌多糖核酸、填充劑過80目篩混勻，加入噴霧干燥制粒機；粘合剤、矯味劑溶解在50%的こ醇溶液中，噴霧干燥一歩制粒，22目篩整粒。控制顆粒水分在2%左右，顆粒加入潤滑劑混勻。壓片機壓片，控制硬度在5Kg以上。
[0015]方法二:
矯味劑混勻，依次加入卡介菌多糖核酸、粘合劑、填充劑混勻，再加入50%的こ醇制濕顆粒，濕顆粒在45-50°C鼓風干燥，22目篩整粒，控制水分在2%左右，加入潤滑劑混勻。壓片機壓片，控制硬度在5Kg以上。
[0016]方法三:
矯味劑混勻，依次加入卡介菌多糖核酸、粘合劑、填充劑混勻，最后加入潤滑劑混勻。壓片機壓片，控制硬度在5Kg以上。
[0017]本發明提供了一種·以卡介菌多糖核酸為活性成分的ロ含片，口腔黏膜作為給藥部位，避免了活性成分通過人體胃腸道和肝臟等器官時所產生的損耗。ロ含片制劑形式有利于儲存跟運輸，同時也為臨床治療和預防哮喘及反復呼吸道感染提供了新的更便利，患者依從性更好給藥途徑。
[0018]【具體實施方式】
[0019]本發明所需的卡介菌多糖核酸可通過按照2000版《中國生物制品規程》P235-239記載的制備，也可以通過實施例1的方法獲得，但本領域技術人員可以理解卡介菌多糖核酸的制備包括但并不限于這兩種方法:
實施例1
I)卡介菌的培養和收獲
1.菌體培養:將液體低溫保藏的菌種(中國卡介苗制備用卡介菌株D2PB302，中國藥品生物制品檢定所)室溫下溶解，接種于馬鈴薯蘇通培養基，37°C連續培養14-20天；或在37°C連續培養15天后轉種于改良的液體蘇通培養基，37°C連續培養14-20天。
[0020]2.菌體收集:待菌體生長至對數期時，對培養瓶逐瓶檢查后，收集菌膜，加入適量去離子蒸餾水洗滌，壓干后稱重。
[0021]2)卡介菌多糖核酸混合物的制備
1.菌體破碎和熱酚處理:將收集的菌體按10: I的比例加入純化水，以組織搗碎勻漿機(120(K)rpm/min)破碎菌體，3 min X 3次，將菌體搗碎，然后再加入破碎菌懸液0.5-2.0倍體積量的熱苯酚(30~100°C)，在低速攪拌中保溫30分鐘~I小時。
[0022]2.卡介菌多糖核酸混合物的提取:將熱酚好的混合液自然沉淀I~10天，吸取上清液，管式離心機高速離心后，上清經0.45ΜΠ1無菌濾器過濾，即為卡介菌多糖核酸混合物。
[0023]3)精制卡介菌多糖核酸提取物的制備
可通過以下兩種方法來制備卡介菌多糖核酸提取物:
1.透析法精制卡介菌多糖核酸提取物
將卡介菌多糖核酸混合物人工裝入透析袋(截流分子量>5000道爾頓)中在100倍體積的純化水中透析7~10天，每天更換透析池中純化水，每天從透析袋中抽樣檢測苯酚殘留量。將透析好的卡介菌多糖核酸混合物中加入適量乙醇使含醇量60~85%，自然沉淀I~10天后，沉淀物用無水乙醇充分攪拌均勻、離心洗滌3次。然后用乙醚洗滌離心3次后，放至干燥器干燥，干燥2~5天即為精制卡介菌多糖核酸提取物。
[0024]2.凝膠柱層析法精制卡介菌多糖核酸提取物
采用美國密里博(MILLIP0RE)公司制造的K- PRIME 40 II凝膠層析過濾系統和GH-25凝膠介質進行卡介菌多糖核酸、苯酚及卡介菌蛋白的分離。具體的制備過程如下:
(I)打開主機及監控電腦，將系統預熱20至30分鐘，并檢查管道，柱體是否暢通完好，是否存在氣泡。
[0025](2)平衡:用0.9%生理鹽水以1000mL/分鐘經柱正向流動，直至柱前柱后電導、pH一致時結束平衡過程。
[0026](3)上樣:將卡介菌多糖核酸混合物經上樣系統進行上樣，上樣速度為600mL/分鐘。
[0027](4)洗脫:上樣結 束后，用0.9%生理鹽水以SOOmL/分鐘速度進行洗脫，采用紫外分光儀(波長采用260 nm或280nm)檢測流出液，收集目的峰，將收集的目的峰通過0.45Mm無菌濾器過濾，即為精制卡介菌多糖核酸提取液。
[0028](5)清洗:洗脫后用注射用水對系統進行清洗直至柱前、柱后電導接近于零時為止。
[0029]將所收集的精制卡介菌多糖核酸提取液進行醇沉，在精制卡介菌多糖核酸提取液中加入藥用乙醇進行醇沉，含醇量為70-75%。自然沉淀4天后，收集沉淀物。沉淀物通過無水乙醇充分攪拌均勻、離心洗滌3次，然后用乙醚洗滌離心3次后，放至干燥器干燥，干燥物即為精制卡介菌多糖核酸提取物。
[0030]實施例2 處方如下:
卡介菌多糖核酸3g
鹿糖40g
甘露醇50g
聚維酮K3tl6g
薄荷腦Ig
檸檬酸Ig
硬脂酸鎂0.5g
制備方法:原輔料過80目篩備用；卡介菌多糖核酸、蔗糖、甘露醇按等量遞加法過80目篩混勻；聚維酮K3tl、薄荷腦、檸檬酸溶解在50%的乙醇溶液中，噴霧干燥一步制粒；控制顆粒水分在2%左右，22目篩整粒，加入硬脂酸鎂混勻。壓片機壓迫，硬度控制在5kg以上。雙鋁箔分包裝。
[0031]實施例3
處方如下:
卡介菌多糖核酸IOg
鹿糖80g
木糖醇40g
聚維酮K3tl3g
薄荷腦Ig
酒石酸5g
硬脂酸鎂1.5g
制備方法:原輔料過80目篩備用；卡介菌多糖核酸、蔗糖、木糖醇按等量遞加法過80目篩混勻；聚維酮K3tl、薄荷腦、酒石酸溶解在50%的こ醇溶液中，噴霧干燥一歩制粒；控制顆粒水分在2%左右，22目篩整粒，加入硬脂酸鎂混勻。壓片機壓迫，硬度控制在5kg以上。雙鋁箔分包裝。
[0032]實施例4 處方如下:
卡介菌多糖核酸15g
乳糖60g
鹿糖40g
聚維酮K3tl4g
薄荷油2g
蘋果酸4g
微粉硅膠Ig
制備方法:原輔料過80目篩備用；卡介菌多糖核酸、蔗糖、乳糖按等量遞加法過80目篩混勻；聚維酮K3tl、薄荷油、蘋果酸溶解在50%こ醇溶液中，濕法制粒；濕顆粒在45-50°C鼓風干燥，控制顆粒水分在2%左右，22目篩整粒，加入微粉硅膠混勻。壓片機壓迫，硬度控制在5kg以上。雙鋁箔分包裝。
[0033]實施例5 處方如下:
卡介菌多糖核酸5g
三氯鹿糖30g
木糖60g
聚維酮K3tl6g
薄荷油2g
檸檬酸4g
滑石粉2g
制備方法:原輔料過80目篩備用；卡介菌多糖核酸、三氯蔗糖、木糖按等量遞加法過80目篩混勻；聚維酮K3tl、薄荷油、檸檬酸溶解在50%こ醇溶液中，濕法制粒；濕顆粒在45-50°C鼓風干燥，控制顆粒水分在2%左右，22目篩整粒，加入滑石粉混勻。壓片機壓迫，硬度控制在5kg以上。雙鋁箔分包裝。
[0034]實施例6 處方如下:
卡介菌多糖核酸15g
乳糖70g
甘露醇40g
聚維酮K3tlIOg
薄荷腦3g
乙基麥芽酚3g
山崳酸甘油酯3g
制備方法:原輔料過80目篩備用；薄荷腦、乙基麥芽酚過80目篩混勻，再依次加入卡介菌多糖核酸、聚維酮K3tl、甘露醇、乳糖過80目篩混勻；最后加入已過80目篩的山箭酸甘油酷混勻。壓片機壓迫，硬度控制在5kg以上。雙鋁箔分包裝。
[0035]實施例7 處方如下:
卡介菌多糖核酸8g
乳糖60g
山梨醇40g
聚維酮K3tl8g
薄荷腦3g
酒石酸2g
硬脂酸鈣2g
制備方法:原輔料過80目篩備用；薄荷腦、酒石酸過80目篩混勻，再依次加入聚維酮K3tl、卡介菌多糖核酸、山梨醇、乳糖過80目篩混勻；最后加入已過80目篩的硬脂酸鈣混勻。壓片機壓迫，硬度控制在5kg以上。雙鋁箔分包裝。
[0036]ロ含片藥效學實驗例
致敏試驗:SD大鼠分為8組，分別為致敏組、卡介菌多糖核酸注射液組、實驗組(實施例2-7的ロ含片組)，每組10只。以卵白蛋白(OVA)首次致敏，分別在第0天、第7天、第14天OVA (0.01 % OVA ,0.2 ml/只)腹腔注射致敏，第28天、第29天、第30天OVA (0.2% OVA ,50 u I/只)麻醉后滴鼻激發，I次/ d。此為哮喘組。
[0037]試驗方法:卡介菌多糖核酸注射液組(0.35 mg* kg-1 )，均為首次致敏前7 d腹腔注射給藥。卡介菌多 糖核酸ロ含片組(I mg ? kg-1)為首次致敏前7 d 口腔給藥。在末次激發48 h后，大鼠以50 mg/ kg戊巴比妥鈉腹腔注射麻酔后，行氣管插管，以0.8 mlPBS灌洗3次，回收率在80 %以上。4 0C 1500 r/ min，離心10 min，沉淀涂片并行蘇木素-伊紅染色，連續計數200個細胞并計數其中嗜酸粒細胞(eosinop hil , E0S)數，得EOS百分比。結果見表1。
[0038]表1卡介菌多糖核酸不同給藥途徑 對支氣管哮喘大鼠氣道炎癥的影響(n=10)
【權利要求】
1.一種卡介菌多糖核酸為活性成分的ロ含片，其特征在于，所述ロ含片由以下重量份的組分制成:卡介菌多糖核酸3-15份，填充劑90-120份，粘合劑3-10份，矯味劑2-6份，潤滑劑0.5-3份。
2.根據權利要求1所述的ロ含片，其特征在于，所述的填充劑為可溶性填充劑。
3.根據權利要求1所述的ロ含片，其特征在于，所述的填充劑為蔗糖、木糖、乳糖、三氯蔗糖、甘露醇、木糖醇、山梨醇中的ー種或幾種。
4.根據權利要求1所述的ロ含片，其特征在于，所述的粘合劑為聚維酮K3(i。
5.根據權利要求1所述的ロ含片，其特征在于，所述的矯味劑為薄荷腦、薄荷油、乙基麥芽酚、檸檬酸、酒石酸、蘋果酸中的ー種或幾種。
6.根據權利要求1所述的ロ含片，其特征在于，所述的潤滑劑為硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、微粉硅膠、滑石粉、山箭酸甘油酯中的ー種。
7.根據權利要求1所述的ロ含片，其特征在于其制備方法為: (1)原輔材料準備:卡介菌多糖核酸3-15份，填充劑90-120份，粘合劑3-10份，矯味劑2-6份，潤滑劑0.5-3份，所有原輔材料過80目篩備用； (2)卡介菌多糖核酸、填充劑過80目篩混勻，加入噴霧干燥制粒機；粘合剤、矯味劑溶解在50%的こ醇溶液中，噴霧干燥一歩制粒，22目篩整粒；控制顆粒水分在2%左右，顆粒加入潤滑劑混勻；壓片機壓片，控制硬度在5Kg以上。
8.根據權利要求1所述的ロ含片，其特征在于其制備方法為: (1)原輔材料準備:卡介菌多糖核酸3-15份，填充劑90-120份，粘合劑3-10份，矯味劑2-6份，潤滑劑0.5-3份，所有原輔材料過80目篩備用； (2)矯味劑混勻，依次加入卡介菌多糖核酸、粘合劑、填充劑混勻，再加入50%的こ醇制濕顆粒，濕顆粒在45-50°C鼓風干燥，22目篩整粒，控制水分在2%左右，加入潤滑劑混勻；壓片機壓片，控制硬度在5Kg以上。
9.根據權利要求1所述的ロ含片，其特征在于其制備方法為: (1)原輔材料準備:卡介菌多糖核酸3-15份，填充劑90-120份，粘合劑3-10份，矯味劑2-6份，潤滑劑0.5-3份，所有原輔材料過80目篩備用； (2)矯味劑混勻，依次加入卡介菌多糖核酸、粘合劑、填充劑混勻，最后加入潤滑劑混勻；壓片機壓片，控制硬度在5Kg以上。
10.權利要求1所 述的ロ含片，其特征在于用于預防和治療呼吸道感染、哮喘。
【文檔編號】A61K35/74GK103585121SQ201210291759
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2012年8月16日 優先權日:2012年8月16日
【發明者】劉芳潔, 谷陟欣, 劉念, 顏冬蘭, 辛秀, 張妮瑜 申請人:九芝堂股份有限公司