專利名稱：茅莓總皂苷的制備方法
技術領域：
本發明屬于中藥提取技術，涉及一種中藥提取物的制備方法。
背景技術：
中藥茅莓為民間常用中草藥，來源于薔薇科懸鉤子屬植物茅莓Rubus parvifolius L.的干燥全草。其性涼味苦，根、莖、葉均可入藥，具有清熱解毒、涼血止血、祛風除濕、殺蟲療瘡等功效，主治感冒發熱、咳嗽咯血、痢疾、跌打損傷、產后腹痛、崩漏、外傷出血、疥瘡等多種疾病。CN200310111034. X公開了茅莓總皂苷對腦缺血、腦血栓、腦梗塞等腦血管系統疾病有很好的治療作用，同時公開了茅莓總皂苷的制備方法將茅莓用水或濃度為60-80%的乙醇進行提取，提取物濃縮至l_3g/ml，上大孔樹脂，用10-50%的乙醇洗脫，洗脫物減壓或常壓濃縮、干燥，所得物即茅莓總皂苷，純度大于50%。都述虎等(中成藥，2003，25(3): 185-188)對DlOl型大孔吸附樹脂富集、純化茅莓總皂苷的工藝條件及參數進行了研究，結果發現，茅莓提取液上大孔吸附樹脂柱，用水、50%乙醇依次洗脫，茅莓總皂苷富集于50%乙醇洗脫液部分，洗脫率在79. 2%以上，總固物中茅莓總皂苷含量可達55. 3% ；其中茅莓提取液的制備方法為將茅莓用70%乙醇回流提取得浸膏，水浴蒸發至無醇味，加水適量，冰箱放置M小時后抽濾，即得茅莓總皂苷提取液。此外，文獻(任凌燕等.茅莓總皂苷的含量測定.重慶醫科大學學報，2005，30(6): 854-856)還報道了采用不同溶劑(甲醇、70%乙醇)及不同提取方法(回流提取、索氏提取、超聲提取)制得的茅莓提取液中總皂苷的含量， 結果發現，以70%乙醇回流提取所得的總皂苷含量最高。在上述方法基礎上，發明人對茅莓總皂苷的提取工藝和大孔吸附樹脂純化工藝均進行了優化，結果發現，制得的茅莓總皂苷中總皂苷含量最高只能達到67. 4%，含雜質較多，顏色較深，不利于制劑成型并影響制劑的外觀。因此，研究一種產品純度更高的茅莓總皂苷制備方法具有重要的意義。

發明內容
有鑒于此，本發明的目的在于提供一種產品純度更高的茅莓總皂苷制備方法。為達到上述目的，本發明提供如下技術方案 茅莓總皂苷的制備方法，包括如下步驟
a.取茅莓藥材，加堿水I提取2 3次，再加水提取廣2次，合并提取液，濃縮，加乙醇沉淀，過濾，濾液濃縮，調節PH至5飛，5 15°C放置12 48小時，過濾，收集沉淀；所述堿水I為質量百分濃度為0. 03、. 15%的碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉或碳酸氫鉀溶液；
b.將步驟a所得沉淀用堿水II溶解，溶解液上大孔型堿性陰離子交換樹脂，依次用堿水III、水沖洗，棄去沖洗液，再用體積百分濃度為60、0%的乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮， 5 15°C放置12 48小時，過濾，收集沉淀，干燥，即得茅莓總皂苷；所述堿水II為質量百分濃度為0. 5^2%的碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉或碳酸氫鉀溶液；所述堿水III為質量百分濃度為廣3%的氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉或碳酸氫鉀溶液；所述大孔型堿性陰離子交換柱為大孔型弱堿性陰離子交換樹脂D382、D380、D371、D392或大孔型強堿性陰離子交換樹脂D201。優選的，所述步驟a是取茅莓藥材，加堿水I提取2 3次，再加水提取廣2次，合并提取液，濃縮至藥材量的2倍體積，加乙醇至含醇量為65、5%，靜置M 48小時，過濾，濾液濃縮至含醇量為15 25%，調節pH至5飛，5 15°C放置12 48小時，過濾，收集沉淀。優選的，所述步驟b是將步驟a所得沉淀用堿水II溶解，溶解液上大孔型堿性陰離子交換樹脂，先用廣3倍樹脂床體積的堿水III沖洗，再用3飛倍樹脂床體積的水沖洗， 棄去沖洗液，再用7 10倍樹脂床體積的體積百分濃度為65、5%的乙醇洗脫，收集洗脫液， 濃縮至含醇量為15 25%，5 15°C放置12 48小時，過濾，收集沉淀，干燥，即得茅莓總皂苷。更優選的，所述制備方法包括如下步驟
a.取茅莓藥材，加入6 10倍藥材量的堿水I提取2次，再加入6、倍藥材量的水提取 1次，合并提取液，濃縮至藥材量的2倍體積，加乙醇至含醇量為65 75%，靜置M小時，過濾，濾液濃縮至含醇量為15 20%，調節pH至5飛，10°C放置M小時，過濾，收集沉淀；所述堿水I為質量百分濃度為0. 03、. 15%的碳酸氫鈉或碳酸鈉溶液；
b.將步驟a所得沉淀用堿水II溶解，溶解液上大孔型堿性陰離子交換樹脂，先用1.5^2 倍樹脂床體積的堿水III沖洗，再用4倍樹脂床體積的水沖洗，棄去沖洗液，再用8、倍樹脂床體積的體積百分濃度為65、0%的乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮至含醇量為15 20%， 5 10°C放置M小時，過濾，收集沉淀，干燥，即得茅莓總皂苷；所述堿水II為質量百分濃度為0. 5^2%的碳酸氫鈉或碳酸鈉溶液；所述堿水III為質量百分濃度為H 5%的氫氧化鈉溶液。按照文獻(任凌燕等.茅莓總皂苷的含量測定.重慶醫科大學學報，2005， 30(6) 854-856)方法測定本發明方法制得的茅莓總皂苷中的總皂苷含量，結果顯示，按照本發明方法制得的茅莓總皂苷中總皂苷含量達到95%以上，雜質少，色澤佳。所制得的茅莓總皂苷可以按照藥物制劑學的常規方法制成適合于臨床治療需要的各種制劑，包括但不限于注射劑、片劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑、滴丸劑以及緩釋、控釋制劑等，優選劑型為咀嚼片、 膠囊劑和注射用無菌粉末。本發明的有益效果在于本發明公開了一種茅莓總皂苷的制備方法，與現有技術相比，該方法能夠顯著提高茅莓總皂苷中的總皂苷含量，所得產品雜質少、色澤佳，利于制劑成型和改善制劑外觀，此外，該方法操作簡單，重復性好，產品質量穩定，適用于工業化大規模生產。
具體實施例方式為了使本發明的目的、技術方案和優點更加清楚，下面對本發明的優選實施例進行詳細的描述。實施例1、茅莓總皂苷的制備
a.取茅莓藥材，粉碎成粗粉，超聲提取3次，第一次加入10倍藥材量的質量百分濃度為0. 08%的碳酸氫鈉溶液，第二次加入8倍藥材量的質量百分濃度為0. 05%的碳酸氫鈉溶液，第三次加入8倍藥材量的水提取1次，每次1小時，合并三次提取液，濃縮至藥材量的2 倍體積，加乙醇至含醇量為75%，靜置M小時，過濾，濾液減壓回收乙醇至含醇量為20%，用鹽酸調節PH至6，10°C放置M小時，過濾，收集沉淀；
b.將步驟a所得沉淀用質量百分濃度為1. 5%的碳酸氫鈉溶液溶解，溶解液上大孔型強堿性陰離子交換樹脂D201，先用1. 5倍樹脂床體積的質量百分濃度為2. 5%的氫氧化鈉溶液沖洗，再用4倍樹脂床體積的水沖洗，棄去沖洗液，再用8倍樹脂床體積的體積百分濃度為80%的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇至含醇量為15%，10°C放置M小時，過濾，收集沉淀，干燥，即得茅莓總皂苷，經測定總皂苷含量為98. 3%。實施例2、茅莓總皂苷的制備
a.取茅莓藥材，粉碎成粗粉，煎煮提取3次，第一次加入10倍藥材量的質量百分濃度為0. 07%的碳酸氫鈉溶液，第二次加入8倍藥材量的質量百分濃度為0. 03%的碳酸氫鈉溶液，第三次加入8倍藥材量的水提取1次，每次1小時，合并三次提取液，濃縮至藥材量的2 倍體積，加乙醇至含醇量為70%，靜置M小時，過濾，濾液減壓回收乙醇至含醇量為15%，用鹽酸調節PH至5，10°C放置M小時，過濾，收集沉淀；
b.將步驟a所得沉淀用質量百分濃度為1的碳酸鈉溶液溶解，溶解液上大孔型弱堿性陰離子交換樹脂D382，先用2倍樹脂床體積的質量百分濃度為洲的氫氧化鈉溶液沖洗， 再用4倍樹脂床體積的水沖洗，棄去沖洗液，再用9倍樹脂床體積的體積百分濃度為70%的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇至含醇量為20%，10°C放置M小時，過濾，收集沉淀， 干燥，即得茅莓總皂苷，經測定總皂苷含量為96. 9%。實施例3、茅莓總皂苷的制備
a.取茅莓藥材，粉碎成粗粉，煎煮提取3次，第一次加入8倍藥材量的質量百分濃度為 0. 09%的碳酸氫鈉溶液，第二次加入6倍藥材量的質量百分濃度為0. 05%的碳酸氫鈉溶液， 第三次加入6倍藥材量的水提取1次，每次1小時，合并三次提取液，濃縮至藥材量的2倍體積，加乙醇至含醇量為70%，靜置M小時，過濾，濾液減壓回收乙醇至含醇量為18%，用鹽酸調節pH至6，10°C放置M小時，過濾，收集沉淀；
b.將步驟a所得沉淀用質量百分濃度為0.5%的碳酸氫鈉溶液溶解，溶解液上大孔型弱堿性陰離子交換樹脂D392，先用2倍樹脂床體積的質量百分濃度為m的氫氧化鈉溶液沖洗，再用4倍樹脂床體積的水沖洗，棄去沖洗液，再用9倍樹脂床體積的體積百分濃度為 70%的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇至含醇量為19%，5°C放置M小時，過濾，收集沉淀，干燥，即得茅莓總皂苷，經測定總皂苷含量為95. 3%。實施例4、茅莓總皂苷的制備
a.取茅莓藥材，粉碎成粗粉，煎煮提取3次，第一次加入8倍藥材量的質量百分濃度為 0. 15%的碳酸鈉溶液，第二次加入6倍藥材量的質量百分濃度為0. 08%的碳酸鈉溶液，第三次加入6倍藥材量的水提取1次，每次1小時，合并三次提取液，濃縮至藥材量的2倍體積， 加乙醇至含醇量為65%，靜置24小時，過濾，濾液減壓回收乙醇至含醇量為20%，用鹽酸調節 pH至5，10°C放置M小時，過濾，收集沉淀；
b.將步驟a所得沉淀用質量百分濃度為0.5%的碳酸氫鈉溶液溶解，溶解液上大孔型弱堿性陰離子交換樹脂D380，先用1. 5倍樹脂床體積的質量百分濃度為2. 5%的氫氧化鈉溶液沖洗，再用4倍樹脂床體積的水沖洗，棄去沖洗液，再用9倍樹脂床體積的體積百分濃度為65%的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇至含醇量為15%，10°C放置M小時，過濾，收集沉淀，干燥，即得茅莓總皂苷，經測定總皂苷含量為97. 4%。
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實施例5、茅莓總皂苷注射用無菌粉末的制備
分別取實施例廣4制得的茅莓總皂苷，加入適量無菌注射用水，調節pH至6. 5^7. 0，攪拌加熱使溶解，再加入適量注射用甘露醇，混勻，用無菌抽濾漏斗濾過，再用滅菌的(^6垂熔玻璃漏斗精濾，濾液分裝于2ml安瓿中，冷凍干燥，無菌熔封，即得茅莓總皂苷注射用無菌粉末。實施例6、茅莓總皂苷膠囊劑的制備
分別取實施例廣4制得的茅莓總皂苷，以淀粉和糊精為填充劑，以質量百分濃度為3% 的淀粉漿為粘合劑制軟材，2號篩制粒，60°C干燥，2號篩整粒，加入適量硬脂酸鎂混勻，分裝于空膠囊中，即得茅莓總皂苷膠囊劑。實施例7、茅莓總皂苷咀嚼片的制備
分別取實施例廣4制得的茅莓總皂苷，加入適量淀粉、蔗糖、糊精、甘露醇和薄荷香精混勻，濕法制粒，60°C干燥，整粒，加入適量硬脂酸鎂混勻，壓片，即得茅莓總皂苷咀嚼片。最后說明的是，以上實施例僅用于說明本發明的技術方案，并不構成對本發明內容的限制。盡管通過上述實施例已經對本發明做了較為詳細的例舉，但本領域技術人員仍然可以根據發明內容部分和實施例部分所描述的技術內容，在形式上和細節上對其作出各種各樣的改變，而不偏離所附權利要求書所限定的本發明的精神和范圍。
權利要求
1.茅莓總皂苷的制備方法，其特征在于，包括如下步驟a.取茅莓藥材，加堿水I提取2 3次，再加水提取廣2次，合并提取液，濃縮，加乙醇沉淀，過濾，濾液濃縮，調節PH至5飛，5 15°C放置12 48小時，過濾，收集沉淀；所述堿水I為質量百分濃度為0. 03、. 15%的碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉或碳酸氫鉀溶液；b.將步驟a所得沉淀用堿水II溶解，溶解液上大孔型堿性陰離子交換樹脂，依次用堿水III、水沖洗，棄去沖洗液，再用體積百分濃度為60、0%的乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮， 5 15°C放置12 48小時，過濾，收集沉淀，干燥，即得茅莓總皂苷；所述堿水II為質量百分濃度為0. 5^2%的碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉或碳酸氫鉀溶液；所述堿水III為質量百分濃度為廣3%的氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉或碳酸氫鉀溶液；所述大孔型堿性陰離子交換柱為大孔型弱堿性陰離子交換樹脂D382、D380、D371、D392或大孔型強堿性陰離子交換樹脂D201。
2.根據權利要求1所述的茅莓總皂苷的制備方法，其特征在于，所述步驟a是取茅莓藥材，加堿水I提取2 3次，再加水提取廣2次，合并提取液，濃縮至藥材量的2倍體積，加乙醇至含醇量為65、5%，靜置M 48小時，過濾，濾液濃縮至含醇量為15 25%，調節pH至5 6， 5 15°C放置12 48小時，過濾，收集沉淀。
3.根據權利要求1所述的茅莓總皂苷的制備方法，其特征在于，所述步驟b是將步驟a 所得沉淀用堿水II溶解，溶解液上大孔型堿性陰離子交換樹脂，先用廣3倍樹脂床體積的堿水III沖洗，再用3飛倍樹脂床體積的水沖洗，棄去沖洗液，再用7 10倍樹脂床體積的體積百分濃度為65、5%的乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮至含醇量為15 25%，5 15°C放置12、8 小時，過濾，收集沉淀，干燥，即得茅莓總皂苷。
4.根據權利要求1或2或3所述的茅莓總皂苷的制備方法，其特征在于，包括如下步驟a.取茅莓藥材，加入6 10倍藥材量的堿水I提取2次，再加入6、倍藥材量的水提取 1次，合并提取液，濃縮至藥材量的2倍體積，加乙醇至含醇量為65 75%，靜置M小時，過濾，濾液濃縮至含醇量為15 20%，調節pH至5飛，10°C放置M小時，過濾，收集沉淀；所述堿水I為質量百分濃度為0. 03、. 15%的碳酸氫鈉或碳酸鈉溶液；b.將步驟a所得沉淀用堿水II溶解，溶解液上大孔型堿性陰離子交換樹脂，先用1.5^2 倍樹脂床體積的堿水III沖洗，再用4倍樹脂床體積的水沖洗，棄去沖洗液，再用8、倍樹脂床體積的體積百分濃度為65、0%的乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮至含醇量為15 20%， 5 10°C放置M小時，過濾，收集沉淀，干燥，即得茅莓總皂苷；所述堿水II為質量百分濃度為0. 5^2%的碳酸氫鈉或碳酸鈉溶液；所述堿水III為質量百分濃度為H 5%的氫氧化鈉溶液。
5.采用權利要求1至4任一項所述制備方法制得的茅莓總皂苷。
6.含有權利要求5所述茅莓總皂苷的藥物制劑。
全文摘要
本發明公開了一種茅莓總皂苷的制備方法，是將茅莓藥材先用堿水提取，再用水提取，提取液濃縮，醇沉，再濃縮，調節pH至5~6，靜置，過濾，所得沉淀用堿水溶解后上大孔型堿性陰離子交換樹脂，依次用堿水、水沖洗，棄去沖洗液，再用含水乙醇洗脫，洗脫液濃縮，靜置，過濾，所得沉淀即為茅莓總皂苷；與現有技術相比，本發明方法能夠顯著提高茅莓總皂苷中的總皂苷含量，所得產品雜質少、色澤佳，利于制劑成型和改善制劑外觀，此外，該方法操作簡單，重復性好，產品質量穩定，適用于工業化大規模生產。
文檔編號A61K36/73GK102488764SQ201110450510
公開日2012年6月13日 申請日期2011年12月29日 優先權日2011年12月29日
發明者夏培元, 張宏偉, 王顯鳳, 胡小剛, 陳劍鴻, 黃明春 申請人:中國人民解放軍第三軍醫大學第一附屬醫院