一種絞股藍皂苷a的檢測方法及其應用的制作方法
【專利摘要】本發明提供了一種絞股藍皂苷A的檢測方法，該方法包括以下步驟：（1）待測品溶液的制備：將絞股藍待測品粉碎，稱取0.3~0.5g，加入20~30ml甲醇溶解，稱定質量，超聲處理20~40min，放冷，再次稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻、濾過，取續濾液，即為待測品溶液；（2）對照品溶液的制備：稱取絞股藍皂苷A對照品適量，加甲醇溶液，制成每1ml含有0.1~0.3mg絞股藍皂苷A的溶液，即為對照品溶液；（3）測定含量：量取同樣體積的1~15μl的待測品溶液和對照品溶液，分別在相同的色譜條件下采用HPLC-ELSD聯用技術測定峰面積，對比計算待測品溶液中絞股藍皂苷A的含量，然后計算得到絞股藍待測品中絞股藍皂苷A的含量。
【專利說明】一種絞股藍皂苷A的檢測方法及其應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種絞股藍化學成分的檢測方法，具體涉及一種絞股藍皂苷A的檢測方法及其應用。
【背景技術】
[0002]絞股藍為葫蘆科植物絞股藍Gynostemma pentaphyIIum (Thunb.) Makino及長梗絞股藍G.Longipes的全草，又名七葉膽、小苦藥等，具有清熱解毒、止咳祛痰、益氣養陰、降低血脂、延緩衰老等作用，是中國藥典中未收藏的品種。
[0003]絞股藍的化學成分較為復雜，主要含皂苷類、黃酮類、多糖類、維生素、氨基酸等多種生理活性物質,其中的皂苷類是主要活性成分。
[0004]然而，目前鮮見對絞股藍中藥材或藥物組合物制劑中單一成分的檢測方法。例如，絞股藍總苷片是一種由絞股藍加工制成的片劑，具有養心健脾、益氣活血、除痰化瘀、降血脂的功效，常用于高血脂癥，見有心悸氣短，胸悶肢麻，眩暈頭痛，健忘耳鳴，自汗乏力或脘腹脹滿等心脾氣虛，痰阻血瘀者，有研究認為絞股藍總苷片治療高脂血癥的療效及安全性優于西藥，是一種安全有效耐受性良好的調脂藥物。雖然使用廣泛，但現有的檢測絞股藍總苷片的標準仍為1994年的衛生部部頒標準，其含量測定項下采用紫外分光光度法，專屬性不強，線性差，準確度不高，并且還用到了高氯酸等有強腐蝕性的毒性試劑，不利于對絞股藍中藥材或藥物組合物及其制劑進行快速、有效、安全的測定，也不利于進行質量標準控制。
[0005]因此，目前還需要尋找一種更加安全、準確的絞股藍成分測定方法。

【發明內容】

[0006]因此，本發明的目的在于彌補現有技術中對絞股藍中藥材或藥物組合物或其制劑的檢測方法的欠缺，提供了一種專屬性強、準確度高、操作安全的絞股藍皂苷A的檢測方法，以及該檢測方法在檢測絞股藍中藥材或含有絞股藍的藥物組合物或其制劑中的應用，特別是在用于控制絞股藍總苷片的質量中的應用。
[0007]發明人發現，目前對絞股藍進行單一成分的檢測方法較為少見。因此，發明人針對現行的衛生部部頒標準中的有關檢測方法加以大幅改進，通過采用HPLC-ELSD聯用技術對絞股藍皂苷A進行定性定量檢測，從而可用于檢測絞股藍中藥材或藥物組合物或其制劑，以及可特別適用于控制絞股藍總皂苷片的質量。
[0008]本發明提供了一種絞股藍皂苷A的檢測方法，該方法包括以下步驟:
[0009](I)待測品溶液的制備:將絞股藍待測品粉碎，稱取0.3^0.5g，可優選為0.4g，加入2(T30ml甲醇溶解 ，稱定質量，超聲處理2(T40min，放冷，再次稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻、濾過，取續濾液，即為待測品溶液；
[0010](2)對照品溶液的制備:稱取絞股藍皂苷A對照品適量，加甲醇溶液，制成每1ml含有0.1~0.3mg絞股藍皂苷A的溶液，即為對照品溶液；[0011](3)測定含量:量取同樣體積的f 15μ 1，可優選為10μ I的待測品溶液和對照品溶液，分別在相同的色譜條件下采用HPLC-ELSD聯用技術測定峰面積，對比計算待測品溶液中絞股藍皂苷A的含量，然后計算得到絞股藍待測品中絞股藍皂苷A的含量。
[0012]由于絞股藍皂苷A的紫外吸收性較差，如仍按照現有的衛生部部頒標準進行檢測，則干擾較大，結果準確度可能難以滿足當前的藥物質量控制需求，效果不甚理想。通過采用HPLC-ELSD聯用，不僅克服了 UV檢測不準確的問題，還大大提高了定量檢測的準確度，同時可避免使用高氯酸等腐蝕性試劑。
[0013]所述絞股藍待測品可以為絞股藍中藥材，或者含有絞股藍的藥物組合物或其制劑。作為優選，所述絞股藍待測品為絞股藍總苷片。
[0014]根據本發明的檢測方法，其中，在步驟(1)中，將所述絞股藍待測品粉碎后過60-80目篩，可以優選為過80目篩。
[0015]根據本發明的檢測方法，其中，步驟(1)中，加入25ml的甲醇溶液。作為優選，所述甲醇為10-?00νΟ1%的甲醇溶液，可以更優選為60vol%的甲醇溶液。發明人發現，如果體積分數小于10%，提取效果較差，且需要花費更多的超聲處理時間，同時還發現，當甲醇的體積分數為60%時，在超聲處理相同時間的情況下，提取效果最好。
[0016]根據本發明的檢測方法，其中，步驟(1)中，超聲處理的時間可以為30min。作為優選，超聲功率為5(Tl500W，更優選為600W。發明人發現，如果超聲處理時間短于30min，則提取效果較差，而如果長于30min，提取效果的增加量不明顯，同時又浪費了處理時間和成本，因而發明人可優選超聲處理時間為30min，提取效果即可達到最佳的水平。
[0017]根據發明人的 上述意外發現可知，本發明的檢測方法可以優選較低濃度的甲醇(如60vol%)和較短的超聲處理時間(如30min)對待測品進行提取處理，這樣不僅可獲得最佳的提取效果，還能減少或避免由于高濃度的甲醇試劑及長時間的超聲處理而導致的甲醇揮發量過多的問題，從而降低了甲醇對試驗操作人員的毒性危害，即從整體上還提升了測定方法的安全度。
[0018]根據本發明的檢測方法，其中，步驟(2)中，甲醇溶液為l(T100vol%的甲醇溶液，可以優選為60vol%的甲醇溶液。作為更優選，所述對照品溶液中每1ml含有0.2mg絞股藍皂苷A。
[0019]根據本發明的檢測方法，其中，步驟(3)中的色譜條件為:色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的反相色譜柱C18，流動相:水-乙腈，流速:lml/min，柱溫:1(T40°C，優選為25°C，檢測器:ELSD。
[0020]根據本發明的檢測方法，其中，色譜柱為Dikma C18色譜柱，梯度洗脫條件為:0~10min，乙腈:水=30:70,10~40min，乙腈:水=30:70~40:60。作為優選，ELSD的漂移管溫度可以為50°C,霧化氣體流速可以為1.5ml/min。
[0021]本發明還提供了本發明的上述檢測方法在用于檢測絞股藍中藥材或含有絞股藍的藥物組合物或其制劑中的應用。
[0022]本發明另外還提供了的本發明的上述檢測方法在用于控制絞股藍總苷片的質量中的應用。
[0023]本發明的檢測方法可以具有但不限于以下有益效果:
[0024]1.有關絞股藍皂苷A的檢測方法中，如根據現行的衛生部部頒標準，則需要用到高氯酸等強腐蝕性試劑，且采用UV檢測的結果不夠準確。而本發明的檢測方法可以克服現有技術中的以上缺陷，僅需使用甲醇、乙腈等常用試劑，并且HPLC-ELSD聯用技術排除了紫外檢測器對絞股藍皂苷A的干擾，從而檢測結果更為準確。
[0025]2.進一步地，發明人通過精密度實驗、穩定性實驗和重復性實驗等對本發明的檢測方法進行了驗證和評價，結果表明，本發明的檢測方法對絞股藍皂苷A的檢測精密度好，所制得的待測品溶液較為穩定，并且重復性和回收率良好，對絞股藍皂苷A的專屬性較強。
[0026]3.另外，由于本發明的檢測方法具有上述優勢，例如準確、安全、專屬性強等，適合作為絞股藍皂苷A的檢測方法進行推廣應用，從而有助于改善對絞股藍中藥材或藥物組合物及其制劑的檢測，進而可提高對諸如絞股藍總苷片的質量控制水平。
【具體實施方式】
[0027]下面通過具體的實施例進一步說明本發明，但是，應當理解為，這些實施例僅僅是用于更詳細具體地說明之用，而不應理解為用于以任何形式限制本發明。
[0028]本部分對本發明試驗中所使用到的材料以及試驗方法進行一般性的描述。雖然為實現本發明目的所使用的許多材料和操作方法是本領域公知的，但是本發明仍然在此作盡可能詳細描述。 本領域技術人員清楚，在上下文中，如果未特別說明，本發明所用材料和操作方法是本領域公知的。
[0029]實施例1
[0030]本實施例用于說明本發明的絞股藍皂苷A的檢測方法。
[0031]1.實驗材料
[0032]( I)儀器:
[0033]Dionex Ultimate3000 高效液相色譜系統(Dionex 公司)，Alltech3300ELSD(Alltech公司)，XffK-無油空氣泵(天津市華生分析儀器廠)，Dikma C18(4.6mmX 250mm, 5 μ m)色譜柱(Dikma 公司)，Sartorius BT214D 型電子天平(Sartorius 公司)、CP225D型電子天平(Sartorius公司)。
[0034](2)試劑
[0035]絞股藍待測品:絞股藍總苷片，購自廣州白云山和記黃埔中藥有限公司，批號分別為 B2D00U HlDOOU FlDOOl ο
[0036]絞股藍皂苷A對照品:絞股藍皂苷A，購自成都曼斯特生物科技有限公司，純度≥ 98%ο
[0037]乙腈(色譜純)，甲醇(分析純)，蒸餾水。
[0038]2.方法
[0039](I)色譜條件:
[0040]色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的反相色譜柱C18
[0041]檢測器:ELSD (蒸發光散射檢測器)，漂移管溫度50°C，霧化氣體流速1.5ml/min
[0042]流動相冰-乙腈
[0043]柱溫:10~40V，優選 25 °C。
[0044]流動相:0~IOmin乙腈:水=30:70,10~40min乙腈:水=30:70~40:60 (均為體積比)[0045]流速:lml/min。
[0046]3.待測品溶液的制備:
[0047]取絞股藍待測品每個批號10片，除去薄膜衣，研細，過80目篩，取粉末約0.4g，精密稱定，置于100mL三角瓶中，精密加入60vol%的甲醇25ml，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再次稱定質量，用60vol%的甲醇補足減失的質量，搖勻、濾過，取續濾液，作為待測品溶液。
[0048]4.對照品溶液的制備:
[0049]精密稱取絞股藍A對照品適量，加入60vol%的甲醇溶解，制成每1ml含有0.2mg絞股藍皂苷A的溶液。
[0050]5.測定含量:
[0051]量取同樣體積的待測品溶液和對照品溶液(均為10 μ 1)，分別在相同的色譜條件下采用HPLC-ELSD聯用技術進樣分析，測定峰面積，對比計算待測品溶液中絞股藍皂苷A的含量，然后據此計算得到絞股藍待測品中絞股藍皂苷A的含量。對三批絞股藍待測品的測定結果見下表1。
[0052]表1絞股藍待測品中絞股藍皂苷A的含量測定結果
[0053]
【權利要求】
1.一種絞股藍皂苷A的檢測方法，其特征在于，該方法包括以下步驟: (1)待測品溶液的制備:將絞股藍待測品粉碎，稱取0.3^0.5g，加入20~30ml甲醇溶解，稱定質量，超聲處理2(T40min，放冷，再次稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻、濾過，取續濾液，即為待測品溶液； (2)對照品溶液的制備:稱取絞股藍皂苷A對照品適量，加甲醇溶液，制成每1ml含有0.1~0.3mg絞股藍皂苷A的溶液，即為對照品溶液； (3)測定含量:量取同樣體積的1~15μ I的待測品溶液和對照品溶液，分別在相同的色譜條件下采用HPLC-ELSD聯用技術測定峰面積，對比計算待測品溶液中絞股藍皂苷A的含量，然后計算得到絞股藍待測品中絞股藍皂苷A的含量。
2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，在步驟(1)中，將所述絞股藍待測品粉碎后過60-80目篩,優選為過80目篩。
3.根據權利要求1或2所述的檢測方法，其特征在于，步驟(1)中，加入25ml的甲醇溶液；優選地，所述甲醇為l0~100VOl%的甲醇溶液，更優選為60vol%的甲醇溶液。
4.根據權利要求1至3中任一項所述的檢測方法，其特征在于，步驟(1)中，超聲處理的時間為30min ;優選地，超聲功率為50~l500W，更優選為600W。
5.根據權利要求1至4中任一項所述的檢測方法，其特征在于，步驟(2)中，甲醇溶液為10-?00νθ1%的甲 苷A。
6.根據權利要求1至5中任一項所述的檢測方法，其特征在于，步驟(3)中的色譜條件為:色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的反相色譜柱C18，流動相:水-乙腈，流速:lml/min，柱溫:10~40°C，檢測器:ELSD。
7.根據權利要求6所述的檢測方法，其特征在于，色譜柱為DikmaC18色譜柱，梯度洗脫條件為:0~1Omin,乙腈:水=30:70,10~40min,乙腈:水=30:70~40:60 ;優選地,ELSD的漂移管溫度為50°C，霧化氣體流速為1.5ml/min。
8.權利要求1至7中任一項所述的檢測方法在用于檢測絞股藍中藥材或含有絞股藍的藥物組合物或其制劑中的應用。
9.權利要求1至7中任一項所述的檢測方法在用于控制絞股藍總苷片的質量中的應用。
【文檔編號】G01N30/06GK103969351SQ201310039734
【公開日】2014年8月6日 申請日期:2013年1月31日 優先權日:2013年1月31日
【發明者】匡艷輝, 張慧曄, 李銀花, 王德勤, 李楚源 申請人:廣州白云山和記黃埔中藥有限公司