專利名稱：：用于制備淫羊藿次苷Ⅱ的方法和含有淫羊藿次苷Ⅱ的化妝品組合物以及該組合物用于皮...的制作方法
技術領域：
：本發明涉及用于制備淫羊藿次苷II(icarisideII)的方法，含有淫羊藿次苷II的化妝品組合物，以及該組合物用于皮膚增白的用途，更具體地，本發明涉及用于制備由式1表示的淫羊藿次苷II的方法以及化妝品組合物和該組合物用于皮膚增白的用途，淫羊藿次苷II通過抑制a-葡糖苷酶的酶活性來抑制糖蛋白酶(酪氨酸酶)的糖基化，a-葡糖苷酶是酪氨酸酶的糖基化中的一種重要的酶其中，Rl為吡喃鼠李糖(rhamnopyranose)。
背景技術：
：決定人的皮膚顏色的因素包括多個方面，且在這些因素中，如人體內的生成黑色素的黑素細胞的活性、血管的分布、皮膚的厚度和存在或不存在色素(例如，類胡蘿卜素、膽紅素等)的因素是很重要的。其中最重要的因素是在人黑素細胞中的黑色素，所述黑色素是通過多種酶(如酪氨酸酶)的作用而生成的。所述黑色素的形成受遺傳因素、激素分泌、與應激相關的生理因素、和環境因素(如UV光輻射)的影響。在身體皮膚的黑色素細胞內生成的黑色素是具有由黑色素與蛋白質形成的絡合物的酚類聚合物。它可以阻擋太陽的紫外線以保護真皮下面的皮膚器官，同時除去在皮膚組織中生成的自由基以保護皮膚中的蛋白質和基因。然而，由皮膚中的內部應激刺激或外部應激刺激生成的黑色素是一種穩定的物質，即使當應激消失時仍然不能除去黑色素，直至通過皮膚角化而被排出。因此，當生成不必要的大量的黑色素時，會出現對美麗不利的色素沉著過度(hyperpigmentation)，如污點、雀斑和斑點。隨著休閑人口的增加，喜歡戶外活動的人已經增加了，因此防止由UV光導致的黑色素沉著的需求也增加了。為了滿足該需求，已經將抗壞血酸、曲酸、熊果苷(albutin)、對苯二酚、谷胱甘肽、或上述物質的衍生物、或具有酪氨酸酶抑制活性的物質用于化妝品或醫藥中。然而，由于增白效果不充分和將它們添加到化妝品中時產生的多方面問題，如皮膚安全、以及配方和穩定性，因此它們的使用受到了限制。酪氨酸酶(黑色素生物合成酶)是一種糖蛋白，是在體內通過糖基化過程生成的。當在所述糖基化過程中出現問題而導致酪氨酸酶的葡萄糖部分內的反常時，酪氨酸酶不能轉移到用于細胞內黑色素生物合成的黑素體中或即使酪氨酸酶轉移到黑素體中，也不會表現出酪氨酸酶活性，并因此不能生成黑素體(7TeJow"a/o/7"m^gatedZ)er/;^to/ogy(皮膚病學調研期刊)，83，196-201,1984;77^Jowwa/o/Ao/og/ca/C77e脂'W7(生物化學期刊)，272(25),15796-15803,1997)。在糖基化過程中包括許多酶，且在這些酶中，a-葡糖苷酶是一種重要的酶(T7zeJowwa/o/Bz'o/og/c"/C/zew/W^y(生物化學期刊)，272(25),15796-15803,1997)。如果能夠抑制a-葡糖苷酶的酶活性，就能夠抑制酪氨酸酶的糖基化，從而產生皮膚增白效果
發明內容因此，本發明的發明人在研究中分析了源自各種天然物質的微生物對01-葡糖苷酶的抑制活性，集中于解決上述問題，并尋找具有更優異的增白效果的原料。結果，本發明的發明人發現了淫羊藿次苷II，淫羊藿次苷n是淫羊藿(Epimedium)植物提取物的類黃酮組分，表現出抑制a-葡糖苷酶的酶活性的優異效果，并因此具有作為皮膚增白劑的優異效果，從而完成了本發明。因此，本發明的目的是提供用于制備由式1表示的淫羊藿次苷II的方法，以及含有作為活性成分的淫羊藿次苷II的皮膚增白化妝品組合物。為了實現上述目的，本發明提供了用于制備由式i表示的淫羊藿次苷n的方法，含有作為活性成分的淫羊藿次苷n的皮膚增白化妝品組合物，以及該組合物用于皮膚增白的用途.-其中，Rl為吡喃鼠李糖。下面，將進一步詳細地描述根據本發明的用于制備淫羊藿次苷n的方法。包含于根據本發明的化妝品組合物內的淫羊藿次苷n可以根據以下兩種方法制備。第一種方法，淫羊藿次苷ii可以通過直接從含有淫羊藿次苷n的植物中提純而制得。根據本發明，含有淫羊藿次苷n的植物優選為淫羊藿衍生的植物提取物，且所述植物提取物的具體的例子包括但不僅限于短角淫羊藿(EpimediumbrevicornumMaxim)的提取物、大花f垂羊藿(EpimediumgrandiflorumMorr)的提取物、朝鮮淫羊藿(EpimediumkoreanumNakai)的提取物、柔毛淫羊藿(EpimediumpubescensMaxim)的提取物、箭葉淫羊藿(EpimediumsagittatumMaxim)的提取物和巫山淫羊藿(Epimediumwushanense)的提取物。而且，在本發明中，可以使用選自由乙醇、甲醇、丁醇、醚、乙酸乙酯、氯仿所組成的組中的至少一種有機溶劑，以及它們與水的混合物。優選地，可以使用80%的乙醇。在本發明中，使用水或有機溶劑從植物中獲取淫羊藿次苷II的方法如下。即，將植物添加到約l-6倍體積(優選約3倍體積)的水中，或者選自由乙醇、甲醇、丁醇、醚、乙酸乙酯、以及氯仿所組成的組中的至少一種有機溶劑中，或者上述有機溶劑與水的混合溶劑中，其中在所述混合溶劑中所述有機溶劑的體積為10-50%(體積/體積)。通過在常溫下伴隨攪拌提取1-5次而對處于所述溶劑中的植物進行脫脂，并將脫脂的植物添加到約1-8倍體積(優選約4倍體積)的水或有機溶劑中，并在回流下提取l-5次。然后，將經過提取的植物在10-20。C下沉降(settle)1-3天。對經過沉降的物質進行過濾，并離心分離成殘渣和濾液，在減壓下對所述濾液進行濃縮。將獲得的提取物懸浮于水中，并用例如醚進行脫色。然后，用例如丁醇對水層進行1-5次萃取，并在減壓下對獲得的有機溶劑層進行濃縮。將獲得的提取物溶解于少量的甲醇等中，并向其中加入大量的乙酸乙酯等。對形成的沉淀物進行干燥，從而獲得含有淫羊藿次苷II的提取物。所述提取物用硅膠柱色譜法進行處理(氯仿甲醇=8:1-4:1)，從而獲得淫羊藿次苷II。第二種方法，淫羊藿次苷II可以通過獲取含淫羊藿苷的植物提取物并從所述植物提取物內的淫羊藿苷(icariin)中除去葡萄糖部分而制得。淫羊藿苷或含有淫羊藿苷的植物提取物可以以與上述獲取淫羊藿次苷II的方法相同的方式獲得，且除去淫羊藿苷的葡萄糖部分的方法可以使用能夠選擇性地除去葡萄糖而不與鼠李糖作用的酶來完成，或者使用產生所述酶的微生物來完成。在本發明中，所述酶或產生所述酶的微生物可以為分解葡萄糖鍵的酶或者產生所述酶的微生物。所述酶使淫羊藿次苷n可以通過選擇性地從淫羊藿苷中除去葡萄糖部分而不分解鼠李糖制得。作為所述酶，可以使用選自由淀粉酶、葡糖苷酶、阿拉伯糖苷酶(arabinosidase)、木糖苷酶(xylosidase)、纖維素酶、葡糖苷酸酶、半乳糖苷酶和淀粉葡糖苷酶所組成的組中的一種或多種。而且，作為產生所述酶的微生物可以為選自由曲霉屬(Aspergillussp.)、芽孢桿菌屬(Bacillussp.)、青霉菌屬(Penidlliumsp.)、根霉屬(Rhizopussp.)、根毛霉菌屬(Rhizomucorsp.)、藍霉屬(Talaromycessp.)、雙歧桿菌屬(Bifidobacteriumsp.)、!皮子包霉菌屬(Mortierellasp,)、隱球菌屬(Cryptococcussp.)和微桿菌屬(Microbacteriumsp.)所組成的組中的一種或多種。在使用所述酶的情況下，將淫羊藿苷或含有淫羊藿苷的植物提取物溶解于5-20倍體積(優選約20倍體積)的酸性緩沖溶液中，然后向其中加入所述酶。在約37。C下攪拌該溶液約40-55小時，優選約48小時，同時通過薄層色譜法檢測底物的消失比例。當所述底物完全消失時，反應溶液在熱水(80-100°C)中加熱5-15分鐘以終止水解反應，并收集所述反應溶液。在使用產生所述酶的微生物的情況下，將淫羊藿苷或含有淫羊藿苷的植物提取物溶解于5-10倍體積(優選約10倍體積)的離子水中，并且該溶液在約12rC下進行30分鐘的殺菌，然后冷卻至約30。C。接著，將預先培養的微生物接種于所述溶液中，基于所述溶液，所述預先培養的微生物的接種量為5-10%，并在30。C下培養2-5天，優選5天。然后，通過薄層色譜法檢測底物的消失比例，且當所述底物完全消失時，終止水解反應。在5000-10000轉/分(rpm)下對培養液進行離心，并用蒸餾水對沉淀物進行三次洗滌，并再次進行離心，收集沉淀物作為反應產物。如上所述，使用所述酶或產生所述酶的微生物進行水解，并在減壓下對得到的反應溶液進行濃縮，以除去溶劑。殘留物與醇混合，并攪拌l-5次，通過過濾除去沉淀的鹽。在減壓下對濾液進行濃縮，從而獲得粗產物。對所述粗產物用硅膠柱色譜法進行處理(氯仿甲醇二8:1-4:1)，從而獲得淫羊藿次苷II。根據本發明制得的淫羊藿次苷n具有抑制a-葡糖苷酶活性的優異效果，所述a-葡糖苷酶對酪氨酸酶的糖基化起作用，從而表現出抑制黑色素生成的優異的皮膚增白效果。另一方面，本發明提供了含有所述作為活性成分的淫羊藿次苷II的化妝品組合物，以及所述組合物用于皮膚增白的用途。根據本發明的化妝品組合物，在劑型上沒有特別的限定。例如，本發明的組合物可以配制成皮膚洗液、牛奶洗液、按摩霜、滋養霜(nourishingcream)、美容涂敷劑(packs)、凝膠或皮膚附著型化妝品產品(skinadhesivetypecosmeticproduct)。基于所述組合物的總重量，組合物內的所述淫羊藿次苷II的含量可以為0.0001-10重量％。而且，在具有各自的劑型的所述化妝品組合物中，除所述淫羊藿次苷II以外的成分可以由本領域技術人員根據組合物的配方或預期用途毫無困難地進行適當地選擇。如上所述，發現所述含有淫羊藿次苷II(使用酶或產生所述酶的微生物，從淫羊藿植物提取物中分離出的淫羊藿次苷n或由淫羊藿苷制備的淫羊藿次苷n)的化妝品組合物抑制了(x-葡糖苷酶的活性，從而干擾酪氨酸酶的正常的糖基化，由于改善了由紫外光線(uv)導致的色素沉著的效果，因此表現出皮膚增白效果。因此，根據本發明的含有淫羊藿次苷ii的組合物可以10用作皮膚增白化妝品組合物或藥物組合物。圖1表示對照組(a)、脫氧野尻霉素(deoxynojirimycin)(b)、淫羊藿苷(c)和淫羊藿次苷II(d)的電泳照片。具體實施例方式下面，將結合實施例對本發明作進一步詳細地描述。然而，應當理解的是這些實施例僅僅是示例性的，而本發明的范圍不限于此。實施例l:通過提取來制備淫羊藿次苷II將2kg干燥的朝鮮淫羊藿的葉子添加到6升己烷中，并在室溫和攪拌的條件下，提取三次。將lkg脫脂的植物葉子添加到4升甲醇中，在回流下提取三次，然后在15。C下沉降1天。之后，使經過沉降的物質通過濾布進行過濾，并離心分離成殘留物和濾液。在減壓下對所述濾液進行濃縮。將得到的提取物懸浮于水中，并用醚萃取5次以除去色素，用500mll-丁醇對水層萃取1次。在減壓下對得到的整個1-丁醇層進行濃縮以獲得1-丁醇提取物，然后將該1-丁醇提取物溶解于少量的甲醇中。將該溶液加入到大量的乙酸乙酯中，并對形成的沉淀物進行干燥，從而獲得含有淫羊藿次苷II的提取物。通過硅膠柱色譜法對所獲得的提取物進行提純(裝有500g硅膠)。在此，使用氯仿和甲醇作為展開劑，在氯仿甲醇二10:1-2:1的濃度梯度下收集餾分，并且從這些餾分中收集到i.5g淫羊藿次苷n。實施例2:使用纖維素酶來制備淫羊藿次苷II將10g淫羊藿苷溶解于500ml0.1M的乙酸鹽緩沖溶液(pH為4.5)中，ii并向其中加入0.5g纖維素酶(Sigma)。該溶液在37。C的水浴中攪拌48小時，同時通過薄層色譜法定時對其進行檢測。當淫羊藿苷完全消失時，該反應溶液在熱水(80-100°C)中加熱10分鐘以終止反應，然后在減壓下進行濃縮以除去溶劑。將殘留物添加到200ml乙醇中，將溶液攪拌三次，并過濾以除去沉淀物，在減壓下對濾液進行濃縮，從而獲得粗產物。所述粗產物通過硅膠柱色譜法進行分離(氯仿甲醇=8:1-4:1)，從而獲得7.5g淫羊藿次苷n。實施例3:使用卩-葡糖苷酶來制備淫羊藿次苷n將10g淫羊藿苷溶解于500ml0.1M的乙酸鹽緩沖溶液(pH為5.5)中，并向其中加入0.5gP-葡糖苷酶(Sigma)。該溶液在25"C的水浴中攪拌48小時，同時通過薄層色譜法定時對其進行檢測。當淫羊藿苷完全消失時，該反應溶液在熱水(80-100°C)中加熱10分鐘以終止反應，然后在減壓下進行濃縮以除去溶劑。將殘留物添加到200ml乙醇中，將溶液攪拌三次，并過濾以除去沉淀物。在減壓下對濾液進行濃縮，從而獲得粗產物。所述粗產物通過硅膠柱色譜法進行分離(氯仿甲醇二8:1-4:1)，從而獲得6.9g淫羊藿次苷II。實施例4:使用淀粉酶來制備淫羊藿次苷II將10g淫羊藿苷溶解于500ml0.1M的乙酸鹽緩沖溶液(pH為5.5)中，并向其中加入0.5g淀粉酶(Sigma)。該溶液在25°C的水浴中攪拌48小時，同時通過薄層色譜法定時對其進行檢測。當淫羊藿苷完全消失時，該反應溶液在熱水(80-100°C)中加熱10分鐘以終止反應，然后在減壓下濃縮以除去溶劑。將殘留物添加到200ml乙醇中，將溶液攪拌三次，并過濾以除去沉淀物。在減壓下對濾液進行濃縮，從而獲得粗產物。所述粗產物通過硅膠柱色譜法進行分離(氯仿甲醇=8:1-4:1)，從而獲得7.3g淫羊藿次苷II。實施例5:使用黑曲霉來制備淫羊藿次苷II將10g淫羊藿苷溶解于100ml離子水中，在12rC下殺菌30分鐘，并冷卻至3(TC。接著，將預先培養的黑曲霉KCCM11885接種于淫羊藿苷溶液中，并在3(TC下培養5天，基于淫羊藿苷溶液，所述預先培養的黑曲霉KCCM11885的接種量為5-10%。然后，通過薄層色譜法檢測淫羊藿苷的消失比例，并且當淫羊藿苷完全消失時，反應終止。在5000-10000rpm下對培養液進行離心，用蒸餾水對收集的沉淀物進行洗滌三次并離心，從而收集作為沉淀物的反應溶液。將所述沉淀物添加到200ml乙醇中，將溶液攪拌三次，過濾以除去沉淀物。在減壓下對濾液進行濃縮，從而獲得粗產物。所述粗產物通過硅膠柱色譜法進行分離(氯仿甲醇=8:1-4:1)，從而獲得6.5g淫羊藿次苷n。測試例i:淫羊藿次苷n的鑒定對實施例1-5中所獲得的產物進行鑒定(VarianGemini2000300MHz，Varian)，結果表現出以下特征。<淫羊藿次苷II的物理特征和化學特征>特征淺黃色微晶正離子的快原子轟擊質譜(positiveFAB-MS):515[M+H]&NMR:(DMSO陽d6)5:0.79(3H,d,6,Me畫5")，1.63和1.68(6H,brs，Me-ll)，3.03(1H,qd，6,9,5，H5")，3.14(1H,dd,9,9.5，H4")，大約3.4(2H陽9，與H20的信號重疊)，3.47(1H，br,H3")，3.85(3H,s,OMe-4')，3.98(1H，br,H2")，5.15(1H，brt，7,H10)，5.26(lH,d，L5，H1")，6.31(1H,s，H6),7.12(2H,13d，9，H3'、5')，7.86(2H,d,9,H2'、6')，12.52(1H,s,0H-5)13C-NMR:(DMSO-d6)5:156.2，133.8，177.1，103.6，158.1，97.8，160.9,105.4，153.8，21.0，121.7，130.3，17.6，25.2，121.8，129.7，113.5，160.5，55.2，101.4，69.7，70.0，70.2，70.8，17.3。酸水解產物淫羊藿素(icaritin)和鼠李糖測試例2:淫羊藿次苷II的效果的測試1、oi-葡糖苷酶抑制效果的測試將50U/ml的a-葡糖苷酶(Sigma)分別添加到0.01ml各自含有淫羊藿苷、實施例1-5中制備的淫羊藿次苷II和脫氧野尻霉素的輔酶溶液中，lml輔酶溶液中淫羊藿苷、實施例1-5中制備的淫羊藿次苷II和脫氧野尻霉素的含量各自為10mg/ml，然后放置5分鐘。在此，脫氧野尻霉素用作陽性的對照組。測定各個樣品在405nm處的吸光度，從而確定初始吸光度，向其中加入0.05ml5mM的對硝基苯基-a-D-吡喃葡糖苷作為底物，并在37。C下進行5分鐘的酶反應。然后，測定各個樣品在405nm處的吸光度，并根據算式1計算出各個樣品的酶活性抑制率。算式l01-葡糖苷酶活性抑制率(％)=100—(各個測試樣品的吸光度/對照組的吸光度xioo)表l<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>從上表i中可以看出，本發明的實施例i-5中制備的淫羊藿次苷n具有與脫氧野尻霉素相近的a-葡糖苷酶活性抑制率。2、對人黑素瘤細胞酪氨酸酶的糖基化的影響為了檢測淫羊藿次苷II對人黑素瘤細胞中的酪氨酸酶的糖基化的影響，進行以下測試。首先，在37。c和5xc02的條件下，在含有10%牛胚胎血清(bovinefetalserum)的極限必需培養基(minimumessentialmedium,MEM)中對人黑素瘤細胞HM3KO細胞(Y.Funasaka，Departmentofdermatology(皮膚醫學系)，Kobeuniversityschoolofmedicine(神戶大學醫學院)，5-1Kusunoki-cho7-chrome，Chuo-ku，Kobe650(神戶650)，日本)進行培養。以3><105個細胞的細胞密度將培養的細胞放置在75cm2的燒瓶中，并放置過夜，使得所述細胞粘附于燒瓶壁上。從第二天起，用分別含有0.05%的淫羊藿苷、實施例1的淫羊藿次苷II和脫氧野尻霉素的新鮮培養基替換所述培養基。在此，所述脫氧野尻霉素用作陽性的對照組。每隔l-2天，用分別含有樣品的新鮮培養基替換原來的培養基，并在燒瓶中將細胞培養至匯合(confluency)。當所述細胞達到匯合時，收集所述細胞，添加到細胞裂解緩沖劑(lysisbuffer)中(在50mM的4-羥乙基哌嗪乙磺酸(Hepes)和200mM的NaCl中的2%的CHAPS，pH為7.5，蛋白酶抑制劑)并超聲破碎。經破碎的細胞溶液在4。C和12000rpm下離心10分鐘，分離并除去未破損的細胞和黑色素，僅收集上清液。將內切糖苷酶H(125單位)添加到上清液中(蛋白質量20g)，并使所述上清液在37"C下進行1小時的酶反應。然后，根據尺寸通過電泳分離出所述上清液中的蛋白質。在通過電泳分離的蛋白質中，通過與抗體的免疫反應可以觀測酪氨酸酶。即，因為糖殘基沒有被內切糖苷酶H所酶降解，所以通常形成所述糖殘基的酪氨酸酶以約72-kD的糖蛋白出現，然而，因為葡萄糖殘基被內切糖苷酶H所水解，所以由于在糖基化過程中起作用的a-葡糖苷酶的酶活性受到抑制而不形成普通的葡萄糖殘基的酪氨酸酶以約60-kD的蛋白質出現。參照圖1，可以觀察到因為所述葡萄糖殘基沒有被內切糖苷酶所分解，所以用不含樣品的培養基的對照組(a)或用淫羊藿苷(c)處理的酪氨酸酶表現出較大的尺寸(約72kD)，然而，因為所述葡萄糖殘基完全被內切糖苷酶所分解，所以用脫氧野尻霉素(b)或淫羊藿次苷II(d)處理的黑素細胞酪氨酸酶表現出較小的尺寸(約60kD)。該結果表明淫羊藿次苷II可以抑制酪氨酸酶的糖蛋白的形成，從而抑制酪氨酸酶的酶活性。3、對人皮膚的增白效果的測試為了檢測淫羊藿次苷II對人皮膚的增白效果，進行以下測試。首先，將直徑為1.5cm的穿孔的不透明膠帶附著到12個健康男性中的每個人的上臂之上。然后，以比每個受試者的最小紅斑劑量高1.5-2倍的劑量，用紫外線(UVB)對每個受試者進行照射，從而誘發皮膚的黑色。在UV照射之后，將1%的實施例1中制得的淫羊藿次苷II的溶液(1,3-丁二醇乙醇=7:3，作為賦形劑)、1%的對苯二酚溶液、1°/。的賦形劑溶液16(陰性的對照組)分別施用于每個受試者的皮膚上。對受試者的皮膚的狀態方面的變化進行為期IO周的觀察。每隔1周用色度計(Minolta,日本)檢測皮膚的顏色。然后，根據算式2對每個樣品的施用時間點和結束施用時間點之間皮膚顏色的變化(AL*)進行計算，計算結果在下表2中示出。同時，通過對施用了每個樣品的位置與未施用每個樣品的對照位置之間的M^進行對比來評估每個樣品的增白效果，其中，AI^值大約為2說明色素沉著得到了明顯地改善，且AI/值高于約1.5說明所述樣品具有增白效果。算式2AI^二在施用結束的時間點時的1^值一在施用開始的時間點時的"值表2<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>從表2可以看出，本發明的實施例1中制得的淫羊藿次苷表現出與對苯二酚相近的皮膚顏色光亮度(lightness)。下面，將結合制劑例對本發明的組合物的配制進行說明。然而，應當理解的是這些制劑例僅僅是示例性的，而本發明的范圍不僅限于此。制劑例1:肥皂的制備<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>將純凈的水添加到以上成分中使得總量為100重量％，并制備具有上述組成的肥皂。制劑例2:洗液的制備<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>將純凈的水添加到以上成分中使得總量為100重量％，并制備具有上述組成的洗液。制劑例3:霜劑的制備<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>將純凈的水添加到以上成分中使得總量為100重量％，并制備具有上述組成的霜劑。制劑例4:美容涂敷劑的制備成分含量(重量％)淫羊藿次苷n5.00聚乙烯醇13.00左旋抗壞血酸-2-磷酸鎂1.00月桂酰羥基脯氨酸(lauroylhydroxyproline)1,00水溶性骨膠原(1%的水溶液)2.001,3-丁二醇3.00乙醇5.00將純凈的水添加到以上成分中使得總量為100重量％，并制備具有上述組成的化妝品美容涂敷劑。制劑例5:香精的制備成分含量(重量％)淫羊藿次苷n2.00羥乙烯基纖維素(2%的水溶液)12.00黃原酸膠(2%的水溶液)2.001,3-丁二醇6.00濃縮的甘油4.00透明質酸鈉(1%的水溶液)5.00將純凈的水添加到以上成分中使得總含量為100重量％，并制備具有上19述組成的香精。制劑例6:粉劑的制備<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>將以上成分相互混合，并裝入密封布中，從而制得粉劑。制劑例7:片劑的制備<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>將以上成分相互混合，然后根據傳統的方法進行壓片，從而制得片劑。制劑例8:膠囊的制備<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>根據用于制備膠囊的傳統方法，將以上成分相互混合，并裝入明膠膠囊中，從而制得膠囊。制劑例9:注射液的制備成分含量(mg)淫羊藿次苷n用于注射的無菌蒸餾水pH調節劑50適量(qs)適量(qs)根據用于制備注射液的方法，制備含有以上成分和含量的2ml的針劑。制劑例10:液體制劑的制備成分賴淫羊藿次苷n100mg異構化糖10g甘露糖醇5g純凈水適量(qs)根據用于制備液體制劑的傳統方法，將以上各個成分溶解于純凈水中，并向其中加入適量的檸檬香料。然后，使以上成分相互混合，并向其中加入純凈水以使總量達到100ml。之后，將溶液裝入褐色的瓶子中并進行殺菌，從而制得液體制劑。工業實用性如上所述，含有淫羊藿次苷n的組合物能夠抑制ct-葡糖苷酶的活性，以干擾酪氨酸酶的正常的糖基化，從而改善色素沉著。因此，該組合物可以用作皮膚增白化妝品組合物或藥物組合物。2權利要求1、一種用于制備由式1表示的淫羊藿次苷II的方法，該方法包括使用有機溶劑或所述有機溶劑與水的混合物從淫羊藿植物中提取淫羊藿次苷II式1其中，R1為吡喃鼠李糖。2、根據權利要求1所述的方法，其中，所述有機溶劑選自由乙醇、甲醇、丁醇、醚、乙酸乙酯和氯仿所組成的組中。3、根據權利要求1所述的方法，其中，所述淫羊藿植物選自由短角淫羊藿、大花淫羊藿、朝鮮淫羊藿、柔毛淫羊藿、箭葉淫羊藿和巫山淫羊藿所組成的組中。4、一種用于制備由式i表示的淫羊藿次苷n的方法，該方法包括使用酶或產生所述酶的微生物從淫羊藿苷中選擇性地除去葡萄糖部分而不分解鼠李糖式1OHO其中，Rl為吡喃鼠李糖。5、根據權利要求4所述的方法，其中，所述酶為選自由葡糖苷酶、阿拉伯糖苷酶、木糖苷酶、纖維素酶、葡糖苷酸酶、半乳糖苷酶和淀粉葡萄糖苷酶所組成的組中的一種或多種。6、根據權利要求4所述的方法，其中，所述微生物為選自由曲霉屬(Aspergillussp.)、芽孢桿菌屬(Bacillussp.)、青霉菌屬(Penicilliumsp.)、根霄屬(Rhizopussp.)、根毛霧菌屬(Rhizomucorsp.)、藍霧屬(Talaromycessp.)、雙歧桿菌屬(Bifidobacteriumsp.)、被孢霉菌屬(Mortierellasp,)、隱球菌屬(Cryptococcussp.)和微桿菌屬(Microbacteriumsp.)所組成的組中的一種或多種。7、一種化妝品組合物，該化妝品組合物含有作為活性成分的由式1表示的淫羊藿次苷II:式1OHO其中，Rl為吡喃鼠李糖。8、含有作為活性成分的由式i表示的淫羊藿次苷n的化妝品組合物用于皮膚增白的用途式1<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>其中，Rl為吡喃鼠李糖。全文摘要本發明涉及用于制備淫羊藿次苷Ⅱ的方法，以及含有淫羊藿次苷Ⅱ的皮膚增白化妝品組合物。更具體地，本發明涉及用于制備由式1表示的淫羊藿次苷Ⅱ的方法，以及皮膚增白組合物，淫羊藿次苷Ⅱ通過抑制α-葡糖苷酶的酶活性來抑制糖蛋白酶(酪氨酸酶)的糖基化，α-葡糖苷酶是酪氨酸酶的糖基化中的一種重要的酶。文檔編號A61K8/49GK101516325SQ200780034447公開日2009年8月26日申請日期2007年9月19日優先權日2006年9月19日發明者盧浩植,安秀美,樸惠胤,樸葰星,金德姬申請人:株式會社太平洋