專利名稱：一種從石蓮子中提取的天然抗菌組合物及其提取方法
技術領域：
本發明涉及抗菌組合物，具體來說涉及一種從石蓮子中提取的天然抗菌組合物，同時還涉及其提取方法。
背景技術：
抗菌藥物是臨床應用最廣的一類藥物，但是目前這類藥物的應用存在著許多問題，如耐藥性、毒副反應、抗菌藥物造成的菌群失調、二重感染和院內感染以及變態反應等，尤其是細菌耐藥性的迅速上升。使得對這類菌所致的嚴重感染沒有有效的藥物可供選用，對人類健康造成極大威脅。因此，目前人們從天然資源中發展新的抗菌藥物作為抗菌藥物研究的一個重點。
石蓮子又稱為甜石蓮、蓮實、殼蓮子、帶皮蓮子。來源于睡蓮科植物蓮Nelumbo nucifera Gaertn的成熟果實。英文名NELUMBINIS LB本品為橢圓形，兩端略尖，長1.8cm左右，直徑約1.2cm。外殼灰黑色，表面平滑，一端有小圓凹點。另一端有微小短柄，殼厚約1mm內含蓮子1枚。質堅硬，不易破裂。石蓮子具有補益脾胃、祛熱毒、清心除煩的功效，可用于緩解和治療冷熱嘔吐、食物不下、淋濁等癥狀。

發明內容
本發明的目的克服上述缺點而提供的一種對金黃色葡萄球菌(staphylococcus aureus)、大腸桿菌(Escherichia coli)、糞鏈球菌(Staphylococcus faecalis)、黃曲霉(Aspergillus flavus)、綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa)、藤黃微球菌(Micrococcus luteus)有抑制作用的從石蓮子中提取的天然抗菌組合物。
本發明的另一目的是提供從石蓮子中提取的天然抗菌組合物的提取方法。
本發明的從石蓮子中提取的天然抗菌組合物，其特征在于將干燥的石蓮子粉碎過40-200目篩，按1-5g/10ml的比例加入溶劑，浸泡1-5次后，每次12-24h，置于溫度為30-40℃、轉速為180-250r/min的恒溫搖床上震蕩12-24h，抽濾得到提取液；回收溶劑后干燥，即得。
其中溶劑為水、酒精或乙酸乙酯。
從石蓮子中提取的天然抗菌組合物的提取方法，其特征在于將干燥的石蓮子粉碎過40-200目篩，按1-5g/10ml的比例加入溶劑，浸泡1-5次后，每次12-24h，置于溫度為30-40℃、轉速為180-250r/min的恒溫搖床上震蕩12-24h，抽濾得到提取液；回收溶劑后干燥，即得。
上述的從石蓮子中提取的天然抗菌組合物的提取方法，其中回收溶劑后干燥的方法為溶劑為水時，-80℃冷凍12-24h用真空冷凍干燥機干燥；溶劑為酒精時，酒精提取液40℃減壓旋轉濃縮除去酒精，-80℃冷凍12-24h用真空冷凍干燥機干燥；溶劑為乙酸乙酯時，乙酸乙酯提取液45℃減壓濃縮除去乙酸乙酯。
本發明與現有技術相比，經過實驗證明，水溶劑浸提物對藤黃微球菌有較好的效果，最低抑菌濃度均為6.25mg/ml；對金黃色葡萄球菌，黃曲霉的最低抑菌濃度均為12.5mg/ml；對大腸桿菌，綠膿桿菌的最低抑菌濃度均為25mg/ml；對糞腸球菌的最低抑菌濃度為50mg/ml。乙醇溶劑浸提物對金黃色葡萄球菌，大腸桿菌，藤黃微球菌，綠膿桿菌的抑制作用較好，最低抑菌濃度均為12.5mg/ml；對其它的供試菌的抑制效果稍差，對糞腸球菌和黃曲霉的最低抑菌濃度為25mg/ml。乙酸乙酯溶劑浸提物對黃曲霉有較好的效果，最低抑菌濃度均為6.25mg/ml；對其它的供試菌的抑制效果稍弱，對金黃色葡萄球菌，綠膿桿菌的最低抑菌濃度均為25mg/ml；對大腸桿菌，藤黃微球菌和糞腸球菌的最低抑菌濃度均為50mg/ml。說明石蓮子的不同溶劑提取物都具有抑制細菌生長的活性。為石蓮子的進一步開發利用和尋找新的天然抗菌藥物提供了基礎。
具體實施例方式
以下通過抑菌活性實驗來進一步證明本發明的有益效果實施例1將干燥的石蓮子粉碎過40目篩，稱取150g，加入1000ml的水，浸泡2次后，每次12h，置于溫度為37℃、轉速為200r/min的恒溫搖床上震蕩12h，抽濾得到提取液，-80℃冷凍12h后用真空冷凍干燥機干燥24h，得到干燥品。
取石蓮子水提取物的干燥品0.3g，分別溶于3mL DMF中作為原液，過細菌過濾器，分別以LB液體培養基倍比稀釋成1∶2，1∶4，1∶8，1∶16，1∶32，1∶64，1∶128，1∶256各8個濃度，即含原液濃度分別為50，25，2.5，6.25，3.1，1.5，0.75，0.375mg/mL，每管300ul。每個濃度設三個平行管，并分別設不含萃取液的LB液體培養基為對照管。然后在各管中加入事先制備好的菌懸液(600nm處OD值約為1.0)30uL，混勻后放于37℃的培養箱中培養24h。分別從每一試管取0.1ml液體涂布營養瓊脂平板，每梯度涂布三個平板，整個過程重復兩次，24h后確定是否有細菌生長。以藥物抑制待測菌生長的最低濃度為最小抑菌濃度(MIC)。實驗結果如下


實施例2將干燥的石蓮子粉碎過120目篩，稱取150g，加入1000ml，95％的酒精，浸泡3次后，每次18h，置于溫度為30℃、轉速為250r/min的恒溫搖床上震蕩18h，抽濾得到提取液，40℃減壓旋轉濃縮除去酒精，-80℃冷凍12h用真空冷凍干燥機干燥24h，得到干燥品。
取石蓮子95％酒精的提取物干燥品0.3g，分別溶于3mL DMF中作為原液，過細菌過濾器，分別以LB液體培養基倍比稀釋成1∶2，1∶4，1∶8，1∶16，1∶32，1∶64，1∶128，1∶256各8個濃度，即含原液濃度分別為50，25，12.5，6.25，3.1，1.5，0.75，0.375mg/mL，每管300ul。每個濃度設三個平行管，并分別設不含萃取液的LB液體培養基為對照管。然后在各管中加入事先制備好的菌懸液(600nm處OD值約為1.0)30uL，混勻后放于37℃的培養箱中培養24h。分別從每一試管取0.1ml液體涂布營養瓊脂平板，每梯度涂布三個平板，整個過程重復兩次，24h后確定是否有細菌生長。以藥物抑制待測菌生長的最低濃度為最小抑菌濃度(MIC)。實驗結果如下

實施例3將干燥的石蓮子粉碎過200目篩，稱取150g，加入1000ml的乙酸乙脂，浸泡5次后，每次24h，置于溫度為40℃、轉速為180r/min的恒溫搖床上震蕩24h，抽濾得到提取液，45℃減壓濃縮除去乙酸乙酯，得到干燥品。
取石蓮子乙酸乙酯提取物的干燥品0.3g，分別溶于3mL DMF中作為原液，過細菌過濾器，分別以LB液體培養基倍比稀釋成1∶2，1∶4，1∶8，1∶16，1∶32，1∶64，1∶128，1∶256各8個濃度，即含原液濃度分別為50，25，2.5，6.25，3.1，1.5，0.75，0.375mg/mL，每管300ul。每個濃度設三個平行管，并分別設不含萃取液的LB液體培養基為對照管。然后在各管中加入事先制備好的菌懸液(600nm處OD值約為1.0)30uL，混勻后放于37℃的培養箱中培養24h。分別從每一試管取0.1ml液體涂布營養瓊脂平板，每梯度涂布三個平板，整個過程重復兩次，24h后確定是否有細菌生長。以藥物抑制待測菌生長的最低濃度為最小抑菌濃度(MIC)。實驗結果如下

權利要求
1.一種從石蓮子中提取的天然抗菌組合物，其特征在于將干燥的石蓮子粉碎過40-200目篩，按1-5g/10ml的比例加入溶劑，浸泡1-5次后，每次12-24h，置于溫度為30-40℃、轉速為180-250r/min的恒溫搖床上震蕩12-24h，抽濾得到提取液；回收溶劑后干燥，即得。
2.如權利要求1所述的從石蓮子中提取的天然抗菌組合物，其特征在于溶劑為水、酒精或乙酸乙酯。
3.一種從石蓮子中提取的天然抗菌組合物的提取方法，其特征在于將干燥的石蓮子粉碎過40-200目篩，按1-5g/10ml的比例加入溶劑，浸泡1-5次后，每次12-24h，置于溫度為30-40℃、轉速為180-250r/min的恒溫搖床上震蕩12-24h，抽濾得到提取液；回收溶劑后干燥，即得。
4.如權利要求3所述的從石蓮子中提取的天然抗菌組合物的提取方法，其特征在于溶劑為水時，回收溶劑后干燥的方法為-80℃冷凍12-24h用真空冷凍干燥機干燥。
5.如權利要求3所述的從石蓮子中提取的天然抗菌組合物的提取方法，其特征在于溶劑為酒精時，回收溶劑后干燥的方法為酒精提取液40℃減壓旋轉濃縮除去酒精，-80℃冷凍12-24h用真空冷凍干燥機干燥。
6.如權利要求3所述的從石蓮子中提取的天然抗菌組合物的提取方法，其特征在于溶劑為乙酸乙酯時，回收溶劑后干燥的方法為乙酸乙酯提取液45℃減壓濃縮除去乙酸乙酯。
全文摘要
本發明公開了一種從石蓮子中提取的天然抗菌組合物及其提取方法，將干燥的石蓮子粉碎過40－200目篩，按1－5g/10ml的比例加入溶劑，浸泡1－5次后，每次12－24h，置于溫度為30－40℃、轉速為180－250r/min的恒溫搖床上震蕩12－24h，抽濾得到提取液；回收溶劑后干燥，即得。其中溶劑為水、95％的酒精或乙酸乙酯。本發明制得的產品對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、糞鏈球菌、黃曲霉、綠膿桿菌、藤黃微球菌均有抑制作用。
文檔編號A61P31/00GK101019931SQ20071007767
公開日2007年8月22日 申請日期2007年3月8日 優先權日2007年3月8日
發明者周英, 段震 申請人:貴州大學